类黄酮测定方法
黄酮含量的测定方法
黄酮含量的测定方法1、对照法1）①对照品制备：精密称取芦丁对照品20.8mg，置于100ml容量瓶中，加70%乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
②样品溶液制备精密称取样品0.50g，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70%乙醇补足减失重量，即得。
③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml比色管中，加70%乙醇10ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加1mol/L 氢氧化钠溶液10ml，加70%乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。
各取10ml 置于50ml容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度。
在510nm的波长下测定吸光度。
2）①样品溶液的制备：分别精确称取80℃恒温干燥的样品用50%甲醇回流提取，料液比1：15,提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30%甲醇定容至50ml 容量瓶中。
从其中取出12ml溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100ml 容量瓶中取出1.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ⅰa和Ⅱa。
②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ⅰa、Ⅱa及芦丁标准品的吸收曲线，均在350 nm 处有一强吸收，因此选择350 nm为测定波长。
③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品10.3mg，用少量30%乙醇溶解后，转移至50ml容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。
分别精密量取2ml、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100ml 容量瓶中，于350 nm 波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示在4.12～12.36mg／103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。
④含量测定结果：分别吸取2．2．1中Ⅰa和Ⅱa待测样品液各适量于石英比色池中，按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm 波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。
黄酮常用的鉴定方法
黄酮常用的鉴定方法黄酮是一类天然存在于植物中的化合物，广泛应用于药物、保健品和食品等领域。
为了确保黄酮的质量和纯度，在鉴定黄酮时需要使用一系列常用的分析方法。
本文将介绍其中常用的几种鉴定方法。
首先，色谱分析是一种常见的鉴定黄酮的方法。
色谱分析是利用不同物质在固定相上的分配作用和吸附作用的差异，将混合物中的化合物分离和定量的方法。
在黄酮的鉴定中，常用的色谱分析方法有高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
高效液相色谱通过将样品溶解在流动相中，利用不同化合物在固定相上的分配系数差异，实现黄酮的分离和定量分析。
气相色谱则是将样品蒸发成气体，通过在固定相上的分配系数和描记质谱数据的基础上，确定黄酮的组成。
其次，质谱分析是鉴定黄酮的另一种重要方法。
质谱分析是利用化合物在质谱仪中的质量和荷电量差异，通过质量光谱图谱进行鉴定的方法。
在黄酮的鉴定中，常用的质谱分析方法有质谱仪和质谱联用仪等。
质谱仪是通过将样品蒸发成气态，然后在电场中进行加速和扫描，最后通过检测离子流来测定黄酮的质量。
而质谱联用仪则将质谱和色谱等分离方法相结合，可以实现对复杂样品中黄酮含量和成分的高效分析。
此外，红外光谱分析是一种辅助鉴定黄酮的重要方法。
红外光谱分析利用化合物分子的振动和旋转引起的能级差异，通过对样品吸收、散射和透射红外光的测定，来确定样品的分子结构和化学键的信息。
在黄酮的鉴定中，红外光谱分析可以通过检测黄酮所特有的红外光吸收峰，来确定黄酮的存在和结构。
最后，核磁共振谱分析也是一种常用的鉴定黄酮的方法。
核磁共振谱分析是利用核自旋和外磁场间相互作用的原理进行的。
在黄酮的鉴定中，核磁共振谱分析可以通过检测黄酮分子中特定原子核的信号，来确定黄酮的结构和组成。
综上所述，黄酮的鉴定方法包括色谱分析、质谱分析、红外光谱分析和核磁共振谱分析等。
这些方法在鉴定黄酮的结构、组成和纯度时起到了重要的作用。
通过合理运用这些鉴定方法，可以提高黄酮的质量和纯度，确保其在医药和食品等领域的应用效果。
黄酮类化合物的含量测定方法
黄酮类化合物的含量测定方法该文综述了近年黄酮类化合物含量测定时常见的方法，分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法，分析了各种方法的优缺点，并介绍了一些应用比较少的方法。
标签：黄酮类化合物；含量；测定；方法黄酮类化合物是广泛分布于自然界中的一类化合物，生活中常见的食品茶叶、豆类、蔬菜、蜂蜜等都含有大量的黄酮类化合物。
黄酮类化合物具有C6-C3-C6的基本骨架，是许多植物成分的活性化合物，具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。
该文综述了近年黄酮类化合物分析中主要应用的方法，为广大同行提供一些参考。
1 分光光度法分光光度法主要适用于总黄酮的测定，具有操作简便、快速、准确度及精密度较好的特点。
目前黄酮类化合物测定法有直接测定法和比色法。
直接测定法直接以黄酮类化合物为对照物测定样品中的此成分的含量，比色法是将化合物加入显色剂后测定吸光度再进行换算测定，其中常用的显色剂有Al（NO3）3和AlCl3。
直接测定法和比色法的选择要综合考虑，样品中成分是否会与显色剂发生沉淀反应、样品成分的复杂性等都会影响结果的准确性，在NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 体系中，碱性条件经常会影响结果的准确性和稳定性，只有物质中含有邻二酚羟基，并且邻二酚羟基的邻位没有取代时，Al（NO3）3比色法才在510 nm 左右有最大吸收[1]。
王东升等[2]、李春红等[3]采用紫外分光光度法分别测定了淫羊藿、黄芪中总黄酮的含量。
吕凛等[4]比较了直接测定法和NaNO2-Al（NO3）3-NaOH显色法测定桔皮中总黄酮含量，结果表明显色法检测，会出现浑浊现象；直接法检测，操作简便，结果准确，重现性好。
时维静等[5]研究直接测定法和NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法测定中药复方总黄酮含量，结果表明NaNO2-Al（NO3）3-NaOH法测定中药复方总黄酮含量稳定可靠，快速准确。
徐灵源等[6]采用AlCl3-HAc-NaAc （pH 5.5）为显色剂，建立一种青天葵药材中总黄酮检测的方法，并考察14批青天葵药材中总黄酮的含量。
黄酮检测方法
310 nm 紫外分光光度法
【原理】
黄酮类化合物结构中的肉桂酰环和苯甲酰环具有特定的紫外吸收带，因此含黄酮类化合物的原料经一定的提取纯化后，可直接于最大吸收波长处测定其吸收度，以芦丁为对照品计算其含量。
【吸收波长的选择】
用紫外可见光度吸收扫描仪对芦丁对照品溶液和黄酮类化合物提取液进行190~360 nm
范围的吸光值扫描，寻找最佳吸收峰。
【对照品溶液的制备】
精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品（纯度为95%）0.1117 g，用无水乙醇定容至100 m L，再稀释至5 倍备用，浓度为212.2 mg/L。
【标准曲线的制作】
准确吸取芦丁对照品溶液1.00 m L、2.00 m L、3.00 m L、4.00 m L、5.00 m L、6.00 m L，分别置25 m L 容量瓶中，加无水乙醇定容，，以空白溶液为参比在波长310 nm 处测吸光度A，得回归方程。
参考文献：
[1]吕凛，陶宁萍.紫外分光光度法检测桔皮中总黄酮含量的方法研究[J].现代食品科技,2009,25(2):217-219。
天然药物化学-黄酮类鉴定
羟基橙酮的UV谱 例:4'-羟基橙酮的 谱 羟基橙酮的
255, 338(sh), 397, 405(sh) ,
O C H O OH
二 ,诊断试剂在黄酮类化合物取代方式推断中的作用
1, 甲醇钠:甲醇钠碱性较强,可使黄酮类化合物母核上所有酚羟基解 , 甲醇钠:甲醇钠碱性较强, 离,导致相应吸收带向红位移. 导致相应吸收带向红位移. (1) 如带 向红位移40~65nm,强度不变或增强,则示有 如带I向红位移 向红位移 ,强度不变或增强,则示有4'-OH. . (2) 如带I向红位移 如带 向红位移50~60nm,强度减弱,则示有3-OH,但无4'-OH. 强度减弱,则示有 ,但无 . 向红位移 强度减弱 (3) 7-OH如果游离,则一般应在320~330nm处有吸收.如果结合成 如果游离,则一般应在 处有吸收. 如果游离 处有吸收 苷,则该吸收即消失. 则该吸收即消失. (4) 含有 含有3,4'二羟基或 二羟基或3,3',4',-三羟基黄酮醇类,在甲醇钠碱性下容易 三羟基黄酮醇类, 二羟基或 三羟基黄酮醇类 被氧化分解,故吸收带随测定时间延长而衰退.此外,含有 被氧化分解,故吸收带随测定时间延长而衰退.此外,含有5,6,7三羟基黄酮也对甲醇钠敏感. 或5,7,8-或5,3',4'—三羟基黄酮也对甲醇钠敏感. 或 三羟基黄酮也对甲醇钠敏感
3-或5-位引入羟基,因能与 位C=O形成氢键缔合,前 或 位引入羟基 因能与4 位引入羟基, 形成氢键缔合, = 形成氢键缔合 者使带I向红位移 后者使带I, 向红位移, 者使带 向红位移,后者使带 ,带II均向红位移. 均向红位移
黄酮
5-羟基黄酮 羟基黄酮
B环上的含氧取代基逐渐增加时 带I向红位移值 环上的渐增加时 向红位移值 增加,但不能使带II产生位移.(书192页表 增加,但不能使带 产生位移. 书 页表5-7) 产生位移 页表
植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒说明书
货号：MS1506 规格：100管/96样植物类黄酮（Flavonoid）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。
测定原理：在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器：天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：60%乙醇，自备。
试剂一：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂二：液体1mL×1管，4℃保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
类黄酮提取：将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。
测定操作表：1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
类黄酮含量计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02×V样÷(V样÷V样总×W)第1页，共2页= 0.398×（ΔA -0.0007）÷WV样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.108mL； W：样品质量，g b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51×V样÷(V样÷V样总×W)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷WV样总：加入提取液体积，2mL；V样：反应中样品体积，0.108mL；W：样品质量，g最低检出限为10µg/g。
黄酮类含量测定方法
黄酮类含量测定方法
黄酮类是一种常见的植物次生代谢产物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
因此，测定黄酮类的含量对于研究植物的生物活性和药用价值具有重要意义。
以下是测定植物中黄酮类含量的常用方法：
1. 酸水解法
通过酸水解将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法（UV）或高效液相色谱法（HPLC）等方法测定莽草中黄酮类的总含量。
但是，该方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构、消耗大量的试剂和时间。
2. 高效液相色谱法（HPLC）法
由于黄酮类化合物的分子结构复杂，所以HPLC法是测定黄酮类含量的有效方法之一。
通过将样品在特定条件下分离、纯化，利用紫外或荧光探测器分析检测出样品中的黄酮类含量并计算。
该法具有分离效率高、检测灵敏度、可靠度高等优点。
3. 毛细管电泳法（CE）法
毛细管电泳法是利用毛细管对混合物进行分离，将混合物分离为单独的组分的方法，实现其含量分析。
该方法抗干扰性强、检测速度快，适用于对样品含量分析较低且复杂的情况。
综上所述，不同的样品或应用领域需要不同的黄酮类含量测定方法，研究者可以
根据自己的需要选用不同的方法进行研究。
植物类黄酮检测试剂盒(比色法)
植物类黄酮检测试剂盒(比色法)简介：类黄酮(Flavonoids)是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中。
Leagene 植物类黄酮检测试剂盒(比色法)检测原理是类黄酮溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类黄酮，根据提取液的吸收光谱特性，可利用分光光度计在特定波长(325nm)处测定其吸光度，通过与标准曲线比较，计算出类黄酮含量，主要用于植物组织或果实中类黄酮的提取以及定量检测类黄酮含量。
该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织2、 研钵或匀浆器3、 离心管4、 滤纸或纱布5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 类黄酮提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于4℃预冷的研钵或匀浆器。
②加入4℃预冷的 Flavonoids Assay buffer ，充分研磨或匀浆后转入10ml 离心管中。
用Flavonoids Assay buffer 冲洗研钵或匀浆器并转移至离心管中，补加Flavonoids Assay buffer 至。
③4℃避光静置，期间摇动2~3次，然后过滤至离心管中，滤液即为类黄酮粗提液。
2、 稀释Flavonoids 标准溶液：取适量的Flavonoids 标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：编号 名称TP1113 50T Storage试剂(A): Flavonoids 标准(1mg/ml) 5ml 4℃ 避光 试剂(B): Flavonoids Assay buffer 500mlRT 避光 使用说明书1份加入物(ml) 1 2 3 4 5 6 Flavonoids标准(1mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1蒸馏水0.9 0.8 0.6 0.6 0.50 Flavonoids浓度(mg/ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 1 3、加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。
黄酮含量的测定方法
黄酮含量的测定方法黄酮是一类天然产物，常见于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗癌等多种生物活性。
在药学和食品工业中，测定黄酮含量的方法非常重要，因为它可以评估原料的质量和产品的纯度。
目前常用的测定方法包括光谱法、色谱法和化学法等。
光谱法是测定黄酮含量最常用的方法之一。
常见的光谱法包括紫外-可见吸收光谱法（UV-Vis）和高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UV）。
紫外-可见吸收光谱法通过测定黄酮在特定波长下的吸光度，从而反应其含量。
这种方法操作简单，快速，但需要参考品的标准曲线进行定量分析。
相比之下，HPLC-UV法需要使用高效液相色谱仪，可以通过分离样品中的黄酮类化合物，再通过紫外检测器进行定量分析。
这种方法准确性高，分离效果好，但需要耗费较多的时间和资源。
除了光谱法，色谱法也是测定黄酮含量的常用方法之一。
目前常用的色谱法包括气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。
气相色谱法通过将黄酮类化合物转化为易挥发的衍生化合物，再通过气相色谱仪进行分离和定量。
这种方法对于易挥发的黄酮类化合物特别有效，但对于不易挥发的化合物则不适用。
液相色谱法分为高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法（UHPLC），通过使用不同的色谱柱和移动相来实现黄酮类化合物的分离和定量。
这种方法具有分离效果好，灵敏度高，且适用范围广的优点。
化学法是一种相对简单的测定黄酮含量的方法。
常见的化学法包括显色反应法、比色反应法和化学滴定法等。
显色反应法通过将黄酮化合物与特定试剂反应产生有色产物，再通过测定产物的吸光度进行定量分析。
这种方法快速简便，但对于不同的黄酮类化合物，可能需要不同的试剂进行定量。
比色反应法通过与金属离子或有机碱反应，产生有色络合物，从而测定黄酮含量。
相比之下，化学滴定法需要使用标准溶液进行滴定，通过滴定的体积或浓度差计算黄酮含量。
这种方法操作简单，但限制较大，只适用于某些特定化合物的测定。
总结起来，测定黄酮含量的方法有光谱法、色谱法和化学法等。
检识黄酮类化合物的常用化学方法
黄酮类化合物是一类在天然植物中广泛存在的化合物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。
其分离纯化和结构表征具有重要意义。
针对黄酮类化合物的检测与分析，常用的化学方法有以下几种：1. 薄层色谱法薄层色谱法是一种简单、快速、有效的化学方法，适用于黄酮类化合物的分离和检测。
其原理是利用物质在固定相和流动相之间的分配和吸附作用，通过不同物质在固定相和流动相中的迁移速度差异，实现物质的分离和检测。
薄层色谱法具有样品用量小、操作简便、分离效果好等优点，是检测黄酮类化合物的常用方法之一。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种高分辨率、高灵敏度、高效率的分离和检测方法，适用于黄酮类化合物的分离和定量分析。
其原理是利用样品在流动相和固定相之间的分配系数和吸附作用，通过不同物质在固定相和流动相中的迁移速度差异，实现物质的分离和检测。
高效液相色谱法具有分离效果好、检测灵敏度高、操作简便等优点，是检测黄酮类化合物的常用方法之一。
3. 气相色谱法气相色谱法是一种高分辨率、高选择性、高灵敏度的分离和检测方法，适用于黄酮类化合物的分离和定量分析。
其原理是利用样品在气相和液相之间的分配系数和吸附作用，通过不同物质在气相和液相中的迁移速度差异，实现物质的分离和检测。
气相色谱法具有检测灵敏度高、分离效果好、操作简便等优点，是检测黄酮类化合物的常用方法之一。
4. 质谱法质谱法是一种高灵敏度、高特异性、高准确性的分析方法，适用于黄酮类化合物的结构表征和定量分析。
其原理是利用物质在质谱仪中的分子离子生成、离子荧光和质谱检测，通过离子质荷比的比较和分析，实现物质的分离和检测。
质谱法具有结构表征准确、检测灵敏度高、分析速度快等优点，是检测黄酮类化合物的常用方法之一。
以上列举了几种常用的化学方法，用于检测和分析黄酮类化合物。
这些方法各有优缺点，可以根据实际情况和需求选择合适的方法进行分析。
在实际应用中，也可根据具体情况采用多种方法相结合，以提高分析的准确性和可靠性。
类黄酮代谢组检测分析解读
2021年2月，湖南农业大学生物科学技术学院田云老师团队在International Journal of Molecular Sciences上发表了名为“Integrated Metabolome and Transcriptome Analysis Unveils Novel Pathway Involved in the Formation of Yellow Peel in Cucumber”的论文。
由迈维代谢提供了类黄酮代谢组检测分析相关的内容。
果皮颜色不仅是一个重要的质量标准，也是影响新鲜水果产品的适销性和消费者接受度的关键参数。
不同地区的消费者对黄瓜皮颜色有不同的偏好，因此，结合黄瓜的市场需求，通过完善果皮色泽来提高经济价值是一个重要的育种目标。
然而，有关黄瓜黄皮形成的信号通路的研究进展尚不明确。
在黄瓜品种选育和种植过程中，我们注意到部分黄瓜品种的果皮呈淡黄色或黄色。
这种黄色的外观可能被消费者认为是不新鲜的或劣质的水果，使其无法销售。
本研究利用代谢组学和转录组学的联合分析，有效地探索了影响黄瓜皮黄变的候选基因，为研究黄瓜皮中黄酮类化合物积累的分子机制提供了新的思路，并强调了多组学研究在阐明这一过程中的重要性。
研究思路：样本：颜色突变体L19(绿白果皮)和近等基因系L14(黄果皮)的幼果皮（10 - 14dpp）和老果皮（35 - 40dpp）（用蔬菜削皮机将黄瓜削皮）。
共4组样品：YL14 (L14幼果皮绿白)、OL14 (L14老果皮黄)、YL19 (L19幼果皮绿白)、OL19 (L19老果皮白)，n=3。
研究结果：1.表型分析-颜色观察、类胡萝卜素和类黄酮含量测定（试剂盒）-OL14果皮黄变可能是黄酮积累所致在黄瓜成熟前期L14和L19的幼果皮都呈绿白色，其中L14的果皮嵌着浅黄色；在黄瓜成熟后期，L14果皮呈黄色，而L19果皮呈白色(图1A)。
四个比较组合中，YL14 vs. OL14和OL14 vs. OL19是果皮具有明显的黄色差异，而YL14 vs. YL19和YL19 vs. OL19的黄色差异不显著。
柚子中果胶和生物类黄酮提取分离工艺及测定研究
柚子中果胶和生物类黄酮提取分离工艺及测定研究一、本文概述本文旨在深入研究柚子中果胶和生物类黄酮的提取分离工艺及测定方法。
柚子作为一种营养丰富的水果，含有丰富的果胶和生物类黄酮，这些成分对人体健康具有重要的保健功能。
然而，目前关于柚子中果胶和生物类黄酮的提取分离工艺及测定研究尚不够充分，因此本文的研究具有重要的理论和实践意义。
本文将首先介绍柚子的营养价值和果胶、生物类黄酮的生理功能，阐述研究柚子中果胶和生物类黄酮的重要性。
接着，本文将详细介绍柚子中果胶和生物类黄酮的提取分离工艺，包括原料处理、提取方法、分离纯化等步骤，并对不同工艺参数进行优化，以提高提取效率和纯度。
在测定研究方面，本文将建立准确可靠的测定方法，对提取得到的果胶和生物类黄酮进行定量分析。
通过对比不同测定方法的优缺点，选择最适合柚子中果胶和生物类黄酮的测定方法，并对其进行验证和优化。
本文将对柚子中果胶和生物类黄酮提取分离工艺及测定研究的结果进行总结，并探讨其在食品、医药等领域的应用前景。
通过本文的研究，旨在为柚子资源的综合利用和产品开发提供理论依据和技术支持。
二、材料与方法本研究所用柚子采自当地果园，选取成熟度适中、无病虫害、外观完好的果实。
实验中所用化学试剂均为分析纯，购自国内知名试剂供应商。
实验设备包括旋转蒸发器、超声波提取器、高效液相色谱仪、紫外可见分光光度计等。
柚子果实洗净后，去除果皮和籽，将果肉切碎。
采用酸法提取果胶，具体步骤为：将果肉与适量稀酸溶液混合，加热至一定温度并保持一段时间，使果胶充分溶解。
然后，通过离心分离得到果胶提取液，再用旋转蒸发器浓缩至一定体积，最后得到果胶粗品。
生物类黄酮的提取采用乙醇回流法。
将洗净的柚子果肉与乙醇溶液混合，置于水浴锅中加热回流一定时间，使生物类黄酮充分溶解于乙醇中。
然后，通过过滤得到生物类黄酮提取液，再用旋转蒸发器回收乙醇，得到生物类黄酮粗品。
对果胶粗品和生物类黄酮粗品进行分离纯化。
果胶的纯化采用离子交换法，去除杂质离子；生物类黄酮的纯化则采用硅胶柱层析法，根据不同组分在硅胶上的吸附性能差异进行分离。
金黄芒果废弃物中总类黄酮含量的测定
Ａ ｄｂ ｅｅ ｐ ｒ ｎ ｆ ｅ ｕｒｎ ｅ。ｒｃａ ｔ ｎｒｔ ｎ ｔｂｌｙ ｔｅｃｅ ｉｉｔ ｆｄ ｔｒ ｎｎ ｎ ｇ ｆ ｌｔｔ ａ ｏ ｏｄ ｎ ｙｔ ｘ ｅｉ ｔ ｃ ｒｅ ｃ ｈ ｍｅ ｏ ｒ ｅ ｌｍａ ｏ ａｉ ａ ｄ ｓａ ｉｔ， ｈ ｒｄｂｌｙｏ ｅｅｍｉｉｇｍａ ｏｏ ａ ｏａ ｆ ｖ ｎ ｉ ｉ ｏ ｉ ｉ ｌｌ
１ 原料 仪 器和试 剂
热 回流提取一冷却一定 容一过滤一取滤液测 吸光值 。
２ 分析条件 的确立 ． ２
２２１ 最 大吸收 波长 的选择 ． ．
吸取浓度 为 ６ ｇ Ｌ的芦丁标液 １ Ｌ ４ ／ ｍ ，置 于 ｍ
１ Ｌ ０ｍ 试管中，加入 ０ ０ｍ ｌ ． ｏＬ的 Ｎ Ｎ ２ ５ ／ ａ Ｏ 溶液 ０ Ｌ ．ｍ ， ３ 摇 匀 ；加入 ０３ ｏＬ的 ＡＣ３ 液 ０ Ｌ ． ｍｌ ０ ／ ＩＩ 溶 ． ｍ ，摇匀 ， ７ 静嚣 ５ｍｎ ｉ；加入 １ｍ ｌ ｏＬ的 Ｎ Ｏ ／ ａ Ｈ溶液 ５ｍ ，用体 Ｌ 积 分数 为 ３ ％的 乙 醇定 容 至 刻 度 ，混 匀 ，静 置 ０ １ｍｎ 以 ０号 管 未 加 样 液 的显 色 液 为 对 照 ，在 ｉ， ４ ０ ７０ｎ ０ ０ ｍ扫描 ，芦丁标准曲线扫描结果见图 １ 。 由图 １ 曲线 可 知 ，芦 丁标 准溶 液在 波长 ４ ０ ０— ７ ０ｎ ０ ｍ有较强的吸收峰 ，最 大吸收波长为 ５ ６ｎ ０ ｍ， 在 此 位 置 有 比较 明 显 的 峰形 ，因 此 本 方 法 采 用 ５ ６ ｍ测定波长 。 ０ ｎ
０ 引言
芒果是具有代表性的热带亚热带水果 ， 具有丰富 的营养【 １ １ 。由于芒果不耐贮藏 ，所 以除部分用于短期 ２ 实验方 法 鲜销外 ， 大部分在当地加工。加工过程 中产生了大量 ２１ 工艺路线 ． 的下脚料 ，主要有果皮和果核，其中果皮约 占 １％。 ５ 金黄芒果废弃物一 干燥一粉碎一过筛一称 取样 品一水浴加 充分利用这些废弃物不仅可 以提高芒果加工的附加
液相色谱法测定柑橘果实中类黄酮的方法研究
液相色谱法测定柑橘果实中类黄酮的方法研究付陈梅;吴桂苹;苏学素;焦必宁【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2008(034)002【摘要】文中以柑橘中常见的、含量丰富的柚皮素-7-a-芸香糖苷等10种类黄酮为研究对象,建立了同时测定柑橘中黄烷酮和多甲氧基黄酮含量的高效液相色谱分析方法.采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5ìm),流动相为0.2%乙酸水溶液和乙腈,梯度洗脱,二极营阵列检测器,检测波长为287 nm和330 nm,柱温25℃,流速1.0 Ml/min.外标法定量,柚皮素-7a-芸香糖苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草苷、柚皮素、橙皮素、甜橙黄酮、川皮苷和桔黄酮等10种类黄酮的线性范围为0.01～27.00 mg/L(r≥0.99),检出限为0.01～0.02 mg/L.果汁的平均加标回收率为在94.20%～106.58%之间,相对标准偏差为1.15%～5.41%;果皮的平均加标回收率为95.15%～101.19%,相对标准偏差为1.47%～3.78%.【总页数】5页(P121-125)【作者】付陈梅;吴桂苹;苏学素;焦必宁【作者单位】西南大学食品学院,重庆,400715;中国农业科学院柑橘研究所,重庆,400712;西南大学食品学院,重庆,400715;西南大学化学化工学院,重庆,400715;西南大学食品学院,重庆,400715;中国农业科学院柑橘研究所,重庆,400712【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮的含量 [J], 张元梅;周志钦;孙玉敬;沈妍;钟烈洲;乔丽萍;叶兴乾2.固相萃取-高效液相色谱法测定杜鹃中的几类黄酮 [J], 董学畅;刘丽;韩勇;侯霞3.高效液相色谱法测定不同品种石榴皮中5种类黄酮的含量 [J], 孟新涛; 魏健; 许铭强; 李德华; 谭归; 朱丽娜; 邵文志; 潘俨4.枳实提取物中类黄酮的高效液相色谱法测定及其抗氧化作用研究 [J], 焦士蓉;黄承钰5.快速液相色谱法测定柑橘中6种类黄酮化合物含量 [J], 张玉;吴慧明;白丽萍;刘晓春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
类黄酮测定方法
3.4 类黄酮的测定
3.4.1 测定方法依据 以芦丁为对照品测定样品中类黄酮的含量，加入铝离子试剂，使类黄酮化合物与铝盐形成稳定的络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
3.4.2 波长的选择 取样品液适量，在0.50 mL 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm 波长范围扫描，测得络合物最大吸光度为502 nm ，如图2，故测定时选用此波长。
450500550600
650700-0.025
0.000
0.025
0.050
0.075
0.100
0.1250.1500.175
0.200
0.225
502
A b s o r b a n c e Wavenumbers(cm -1)
图2 类黄酮在420～700 nm 波长下的吸光度
3.4.3 标准曲线的绘制
分别精密吸取芦丁对照液(0.10 mg/ mL) 0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL 于10.00 mL 容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.50 mL ，摇匀，静置6 min ，再加10%硝酸铝溶液0.50 mL ，摇匀,静置6 min ；再加4%氢氧化钠溶液4.00 mL ，用60%乙醇定容，摇匀，静置12 min ，以试剂作空白参比液，于502 nm 处测吸光度。
测定结果如图3：
图3 类黄酮标准曲线。
黄酮类化合物的检识与结构测定
HO
OH
AlCl3
OH O O Al O
3+
HCl/H2O
O O Al3+
形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二 酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇 5-OH 在酸性条件下不与 AlCl3络合； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。 4）二者相减可检测邻二酚羟基。
２）聚酰胺层析
适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。 常用展开系统：乙醇：水（3：2）；丙酮：水（1：1） 等。 显色剂：紫外光； 2% 三氯化铝甲醇液； 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。 1%FeCl3 /
二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用
可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含
有羟基。 一般程序： ①测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型； ②在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测 UV谱 和可见光谱以了解3, 5, 7, 3’, 4’有无羟基及邻二酚 羟基；
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH
+NaOMe 或 +NaOH
带 I ， II 随 加 NaOMe 时间延长，逐渐衰减 320-330 nm有小峰
有 3, 4’-OH 或 3, 3’, 4’OH（衰减更快）
7-OH
+NaOAc (未熔溶)
5-20
有 3-OH, 4’OH 也 发 生 红移，但意 义不大
若上述条件不成立，则H-2’, 6’分别为二重峰 （J=2Hz）
（三） C环质子
1. 黄酮类