总黄酮测定
总黄酮含量测定
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
总黄酮含量测定-比色法
总黄酮（Flavonoid）含量(铝盐显色法酶标仪96样)（一）检测原理：总黄酮，即黄酮类化合物，包括黄酮，黄酮醇，黄烷酮，橙酮，异黄酮，黄烷醇，花青素等，是植物重要的一类次生代谢产物，具有有较强的抗氧化活性，可捕捉活性氧自由基，降低氧化伤害，在果实中影响其色泽和风味；对植物的抗逆性（比如抗紫外）和抗病虫害方面有重要作用。
实验采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法测定黄酮总含量，即在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值，即可计算样品中总黄酮含量。
（二）试剂组分与配制：试剂名称规格保存要求备注试剂一液体1.6m L×1支4℃保存试剂二液体3m L×1瓶4℃保存试剂三液体12m L×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存做标曲，则用到该试剂（三）所需的仪器和用品：酶标仪、96孔板、粉碎仪、筛子、60%乙醇、离心机、蒸馏水。
（四）总黄酮测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g新鲜样本(若水分充足，可增加样本取样质量)；或者称取约0.03g烘干样本（将样本在105℃下杀青3min，然后60℃烘干至恒重，粉碎，过40-60目筛，得到烘干样本），加入1.5mL的60%乙醇（若鲜样需研磨均质），60℃振荡提取2h（若蒸发用60%乙醇定容至1.5mL），25℃×12000rpm，离心10min，取上清待测。
【注】：若样本量较少，可同比例缩减样本量，如取0.02g干样，加入1mL60%乙醇，60℃振荡提取2h。
25℃×12000rpm，离心10min，取上清，用60%乙醇定容至1mL待测。
②液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测：①酶标仪预热30min，调节波长至510nm。
总黄酮测定含量
1 各批次药材含量测定使用已经确定的总黄酮含量检测方法分别进行5个批次原料含量的测定总黄酮含量测定：分别精密称取药材粗粉0.5g，置100ml锥形瓶中，加70%乙醇50ml，称定重量，超声60分钟，放冷，称定，加入70%乙醇补足减失重量，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。
精密量取供试品溶液5ml，置10ml比色管中，加 5％亚硝酸钠溶液0.4ml，使混匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.4ml，摇匀，放置6 分钟，加2mol/L氢氧化钠溶液3ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法（《中国药典》2010版一部附录Ⅴ B），在504nm 的波长处测定吸收度。
表1 不同批次药材总黄酮含量测定结果批号含量（%）1 2 3 X±S20140516 0.16350.16480.17010.1661±0.003520140516紫外扫描色谱图2 药材总黄酮转移率研究2.1 单个药材转移率研究2.1.1 单个药材的转移率测定同一批次的各药材，分别按照产品生产工艺提取得单个药材的总黄酮浓缩液样品，进行总黄酮含量检测，与“1”项下同批药材的总黄酮含量相比得出单个药材的转移率（如下式），分别进行5批次药材测定。
黄芪、桑叶、黄精、山茱萸：分别取黄芪、桑叶、黄精、山茱萸各100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水12倍量，煎煮2.0h，过滤；第二次加水10倍量，煎煮1.0h，过滤，合并滤液浓缩至100ml，备用。
黄芪不同浓缩程度的考查：取黄芪100g，加水煎煮两次（回流），第一次加水20倍量，煎煮2.5h，过滤；第二次加水20倍量，煎煮2.0h，过滤，合并滤液，重复试验三次，分别浓缩至50ml、100ml、200ml，备用。
精密量取上述溶液5ml，加乙醇15ml，摇匀，过滤，弃去粗滤液，精密量取续滤液10.0ml上聚酰胺树脂，待充分吸附后，用乙醇进行洗脱，至流出液基本无色，以洗脱液定容至25ml量瓶中，备用。
总黄酮含量测定标准曲线
总黄酮含量测定标准曲线总黄酮含量是衡量植物中抗氧化活性的重要指标，也是评价植物药材质量的重要参数之一。
因此，建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线对于保证植物药材质量的稳定性和可靠性具有重要意义。
本文将介绍总黄酮含量测定标准曲线的建立方法及相关注意事项。
首先，建立总黄酮含量测定标准曲线需要准备一定浓度范围内的标准溶液。
通常可以选择相对纯净的总黄酮标准品，按照一定的比例配制成不同浓度的标准溶液。
在配制标准溶液的过程中，需要注意溶解度、稳定性等因素，以确保标准溶液的准确性和可靠性。
其次，建立总黄酮含量测定标准曲线需要选择合适的测定方法。
常用的方法包括分光光度法、高效液相色谱法等。
在选择测定方法时，需要考虑样品的特性、仪器设备的可用性、实验操作的便捷性等因素，以确保测定结果的准确性和可靠性。
在进行总黄酮含量测定标准曲线的建立过程中，需要注意以下几点：1. 标准曲线的线性范围，需要选择合适的标准溶液浓度范围，确保在该范围内标准曲线呈现良好的线性关系。
2. 标准曲线的斜率和截距，通过线性回归分析，计算标准曲线的斜率和截距，以确定总黄酮含量与测定数值之间的关系。
3. 标准曲线的相关系数，通过计算标准曲线的相关系数，评估标准曲线的拟合度，以确保标准曲线的可靠性和准确性。
4. 标准曲线的验证，建立标准曲线后，需要进行验证实验，验证标准曲线的准确性和可靠性，以确保标准曲线的适用性和稳定性。
总之，建立总黄酮含量测定标准曲线是保证植物药材质量稳定性和可靠性的重要步骤。
在建立标准曲线的过程中，需要选择合适的标准溶液、测定方法，注意标准曲线的线性范围、斜率和截距、相关系数等参数，以确保标准曲线的准确性和可靠性。
建立准确可靠的总黄酮含量测定标准曲线，对于推动植物药材质量控制和质量评价具有重要意义。
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法
总黄酮的含量测定方法主要包括以下几种：
1. 酸性条件下的比色法：将样品与酸反应生成有色化合物，测定其吸光度。
如盐酸或硫酸与总黄酮反应生成有色化合物，可通过紫外可见光谱测定吸光度，进而计算总黄酮的含量。
2. 高效液相色谱法(HPLC)：使用高效液相色谱仪进行分离和测定。
通过采用特定的色谱柱和流动相，分离出总黄酮，并通过检测器测定其峰面积或峰高值，并与已知标准品进行比较，计算样品中总黄酮的含量。
3. 薄层色谱法：将总黄酮的样品与色谱载体共同涂布在薄层板上，通过色谱柱法进行有效分离。
然后，利用染色剂，如硼酸或铝酸盐等，在紫外或可见光下观察或测定样品斑点的强度，从而计算总黄酮的含量。
4. 毛细管电泳法：通过毛细管电泳仪将总黄酮进行分离，并通过测定峰面积或峰高值，配合已知标准曲线，计算总黄酮的含量。
需要注意的是，不同样品中总黄酮的化学结构和含量可能存在差异，因此在选择测定方法时应根据具体的样品特性和仪器设备的可用性做出选择。
总黄酮测定方法
总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。
分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。
从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。
式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。
样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。
紫外可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点
紫外可见分光光度法测定总黄酮含量的方法学考察要点一、本文概述紫外可见分光光度法是一种基于物质对紫外和可见光的吸收特性进行定量分析的方法。
在生物化学和药物分析中，这种方法被广泛应用于测定各类化合物的含量，其中包括黄酮类化合物。
黄酮类化合物，也称为黄酮或黄碱素，是一类具有广泛生物活性的天然产物，它们广泛存在于植物中，并具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，对黄酮类化合物进行准确、快速的定量分析具有重要意义。
本文旨在探讨紫外可见分光光度法在测定总黄酮含量中的应用，并对其方法学进行考察。
我们将详细介绍紫外可见分光光度法的基本原理、实验操作步骤，以及影响测定结果的各种因素。
我们还将讨论该方法的优点和局限性，以及在实际应用中可能遇到的问题和解决方案。
通过对这些内容的全面探讨，我们希望能够为相关领域的研究人员和技术人员提供有益的参考和指导，推动紫外可见分光光度法在黄酮类化合物分析中的应用和发展。
二、紫外可见分光光度法的基本原理紫外可见分光光度法（UV-Vis spectrophotometry）是一种基于物质对紫外和可见光区域内特定波长光的吸收特性进行定量分析的方法。
该方法基于朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），即溶液对光的吸收与溶液的浓度成正比，与光通过溶液的路径长度也成正比。
在紫外可见分光光度法中，当一束单色光通过被测溶液时，部分光能会被溶液中的吸光物质吸收，导致光强减弱。
吸光度（A）与吸光物质的浓度（c）和光程长度（l）之间的关系可以表示为 A = εlc，其中ε为摩尔吸光系数，它表示单位浓度、单位光程长度下的吸光度。
对于总黄酮含量的测定，黄酮类化合物在紫外可见光区域内有特定的吸收峰，通过测量这些吸收峰处的吸光度，并结合标准品的工作曲线，可以实现对总黄酮含量的定量分析。
紫外可见分光光度法还具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在黄酮类化合物含量测定中得到了广泛应用。
需要注意的是，紫外可见分光光度法只能测定那些具有吸光特性的物质，且受到溶液的颜色、浊度以及其它共存物质的影响。
总黄酮含量测定
附录A（标准的附录）总黄酮含量的测定（分光光度比色法）1 试剂所用试剂均为分析纯，水为去离子水或蒸馏水。
1.1无水乙醇；1.2硝酸铝溶液（100g/L)：称取AL(NO3)3•9H2O 17.6g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.3 醋酸钾溶液（9.8g/L)：称取KCOOH 9.814g，加水溶解，定容于100mL容量瓶中，摇匀备用。
1.4 芦丁标准溶液：1.4.1芦丁对照品储备液（1.0g/L)：精密称取芦丁标准物质50.000mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释定容至50mL。
1.4.2 芦丁对照品工作溶液（0.2g/L)：精密吸取芦丁对照品储备液（1.4.1）10mL,置于50mL容量瓶中，加无水乙醇（1.1）至刻度，摇匀备用。
2 仪器全波长光度计；分析天平（0.000g）；容量瓶等玻璃仪器。
3 分析步骤3.1 标准曲线3.1.1精密吸取芦丁对照品工作液（1.4.2）1mL，2 mL，3mL,4mL，5mL，6mL分别置于50mL容量瓶中。
3.1.2加无水乙醇（1.1）至15mL，然后依次加入硝酸铝溶液（1.2）1.0mL，醋酸钾溶液（1.3）1.0mL，摇匀，加水至刻度，摇匀，静止1hr。
3.1.3 用1cm比色杯于415nm处，以30%乙醇（V/V）溶液为空白，测定吸光度。
3.1.4 以50mL溶液中芦丁质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，用线性回归法做标准曲线，（线性范围0.0mg ~1.2mg（以50mL计）。
3.2 空白对照精密吸取待测试样4.0mL，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇14mL,加水稀释至刻度，摇匀。
静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为样品的空白对照。
3.3样品测定3.3.1精密吸取待测样液4.0mL，置于50mL容量瓶中，按3.1.2进行操作。
静止1hr，用ø=0.22μ的过滤膜过滤，滤液作为测定液。
食品中总黄酮的测定
实验九食品中总黄酮的测定（－）目的意义黄酮类化合物（flavonoids）是广泛存在于植物界的一大类多酚化合物，多以苷类形式存在。
其分析方法有多种，对于黄酮类化合物的相互分离以及单一成分的定量分析，常采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）；而对于总黄酮含量的测定，则主要采用分光光度法。
通过本方法的学习，可以掌握食物中总黄酮的测定方法。
（二）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液。
3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
总黄酮化学成分测定
总黄酮化学成分测定
《总黄酮化学成分测定》
总黄酮化学成分测定是一项用于分析植物抽提物中总黄酮含量的方法。
总黄酮是一类具有丰富的生物活性的化合物，广泛存在于植物中，具有多种生理活性和药理学特性，如抗氧化、抗肿瘤、抗炎等。
总黄酮包括类黄酮、异黄酮和花色素等多种类别，每个类别都包含了众多的化合物。
因此，为了准确评估总黄酮的含量，需要使用一种更加全面的测定方法，能够同时分析多种不同类型的黄酮成分。
目前，常用的总黄酮化学成分测定方法主要有色谱法、光谱法和化学试剂法等。
其中，色谱法是较为常见和可靠的分析方法之一。
通过高效液相色谱 (HPLC) 技术，可以对植物样品中的黄酮化合物进行分离和定量。
该方法可以根据黄酮成分在特定条件下的保留时间和峰面积，计算出各黄酮成分的含量。
另一种常用的方法是光谱法。
它使用紫外可见分光光度计根据各类黄酮化合物在特定波长下的吸收特性，定量测定其含量。
光谱法具有操作简单、成本低廉的优点，但相对于色谱法来说，对于多种不同类型的黄酮成分的分析能力较弱。
此外，化学试剂法也被广泛应用于总黄酮化学成分测定中。
这种方法利用化学试剂与黄酮成分之间的反应产生颜色或荧光，通过测定颜色或荧光的强度来定量黄酮含量。
化学试剂法具有简单快速的特点，但其准确性和选择性较色谱法和光谱法稍逊。
总的来说，总黄酮化学成分测定是一项重要的分析方法，可以用于评估植物样品中总黄酮的含量。
通过色谱法、光谱法和化学试剂法等方法，我们可以得到不同类型黄酮成分的含量数据，从而更好地了解植物的药理学和生物活性特性。
这为药物开发和植物资源利用提供了科学依据和理论基础。
总黄酮的测定方法
总黄酮的测定方法黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类天然产物,种类繁多, 大多数黄酮类化合物与葡萄糖或鼠李糖结合成苷,部分为游离态或与鞣质结合存在。
黄酮化合物系色原烷或色原酮的2-或3-苯基衍生物, 一般具有C6-C3-C6的基本骨架结构。
近年来, 黄酮类化合物以其广谱的药理作用倍受青睐, 人们对含有黄酮的化合物进行大量研究, 以期获得黄酮含量较高的中草药。
因此黄酮的含量测定成为研究的关键步骤。
一、方法（一）高效液相色谱法1. 原理植物类样品用石油醚脱脂后，经甲醇加热回流提取，以高效液相色谱法分离，在紫外检测器360nm条件下，以保留时间定性、峰面积定量。
2．仪器和试剂（1）高效液相色谱仪（2）紫外检测器（3）层析柱（4）超声波清洗仪（5）索氏提取器（6）微孔过滤器（滤膜0.45um）（7）甲醇（色谱纯）（8）芦丁标准品（9）石油醚，盐酸，磷酸（分析纯）。
（10）去离子水（11）芦丁标准溶液：精确称取经105℃干燥恒重的芦丁标谁品15.0mg，加甲醇溶解并定容至100ml，配成150ug／ml的芦丁标准溶液3. 操作步骤（1）样品处理1）固体样品：称取2.0g干燥的固体样品，研细，置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）提取脂肪等脂溶性成分，弃去石油醚提取液，剩余物挥去石油醚，加人甲醇50ml和25％HC1 5ml，80℃水浴回流水解1h，取出后快速冷却至室温，转移至50ml容量瓶中，甲醇定容，经0.45um滤膜过滤，供分析用。
2）液体样品：准确吸取样品2.0ml，直接以石油醚萃取脱脂，挥去石油醚后，以甲醇溶解并定容，经微孔滤膜（0.45um）滤过后供测定用。
（2）色谱分离条件色谱柱：CLC－ODS，6mm×150mm，5um;流动相：0.3％磷酸水溶液：甲醇（V:V）＝40:80，临用前用超声波脱气；流速：lml／min；柱温：40℃；检测波长：360nm；灵敏度：0.02AUFS；进样量：20ul。
总黄酮测定
1.总黄酮含量测定（回流）对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。
精密量取20ml，置50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液Iml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照紫外一可见分光光度法，在500nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取样品细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品贮备液。
取供试品贮备液，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6ml”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。
本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁(C27H3006)计，不得少于7.0%。
2.总黄酮含量测定（天南星）对照品溶液的制备取芹菜素对照品适量，精密称定，加60%乙醇制成每1ml含12ug的溶液，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶中，各加60%乙醇至5ml，加1%三乙胺溶液至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光光度法，在400nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法取本品粉末（过四号筛）约0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。
总黄酮的测定方法
总黄酮的测定方法总黄酮是指一种天然的化合物，属于类黄酮类物质。
总黄酮是一类化合物的总和，包括黄酮，异黄酮和类黄酮等。
这些化合物广泛分布于植物中，并具有许多生理功能，如抗氧化性、抗癌性、降血脂、心脑血管保护等。
因此，对总黄酮的测定方法很重要，能够为药理研究和食品营养分析提供支持。
总黄酮的测定方法多种多样，根据不同的化学性质、测量目的和样品的性质，采用不同的测定方法。
下面介绍一些常见的总黄酮测定方法。
1. 酸碱比色法酸碱比色法是总黄酮测定的一种常用方法。
它是根据总黄酮具有酸碱变色性质，利用酸碱指示剂变色的原理进行测定。
具体实验流程如下：（1）取一定量的样品，加入稀盐酸，使样品酸化。
（2）加入稀氨水，使RH值在6.5～7.0之间。
（3）加入酚酞指示剂，观察样品溶液颜色变化，从而计算出总黄酮含量。
这种测定方法操作简便、快速，但由于酸碱条件的控制较为严格，且无法区分具体的黄酮类化合物，所以在某些情况下需要结合其他方法进行测定。
2. 溶解性法溶解性法是另一种常用的总黄酮测定方法。
它是通过将样品与有机溶剂混合，将总黄酮从样品中提取出来，然后用紫外光谱或比色法进行测定。
具体实验流程如下：（1）取一定量的样品，加入适量的有机溶剂（如甲醇、乙醇等），在恒温水浴中振荡提取一定时间。
（2）离心沉淀，取上清液用紫外光谱或比色法进行测定。
这种测定方法能够将总黄酮从样品中提取出来，并且可区分不同种类的黄酮化合物。
但由于实验中需用到有机溶剂，因此分析结果存在一定的误差。
3. 高效液相色谱法高效液相色谱法是对总黄酮测定的一种较为精确的方法。
该方法是利用高效液相色谱仪对总黄酮进行分离和定量。
具体实验流程如下：（1）取一定量的样品，经过萃取、分离和净化处理后，进行高效液相色谱分析。
（2）色谱分离后，对不同种类的黄酮进行检测和定量。
该方法具有分离效果好、灵敏度高、稳定可靠等优点，是总黄酮测定的可靠方法。
总的来说，总黄酮的测定方法有很多，根据实验条件、样品性质和分析目的不同，可以选择不同的方法。
三种对照品总黄酮测定方法
芦丁作对照测定总黄酮（360nm）标准液的制备称取芦丁标准品1.5mg，加甲醇溶解定容至25mL，即得60μg/mL芦丁标准液。
标准曲线的制备吸取芦丁标准液0.0mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于10 mL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，以甲醇为空白，在360nm波长处比色，求回归方程，制备标准曲线。
样品处理取样品2.5g，精密称定，加乙醇定容至25mL，摇匀后，60℃下超声提取30min，静止20min。
另称取聚酰胺粉2g于蒸发皿中，加入超声后上清液2.0mL，于水浴上挥去乙醇，转入层析柱。
先用20 mL甲苯洗脱，弃去苯液；再用甲醇洗脱至无色，定容至75 mL。
在波长360nm处比色，测定吸光度，据回归方程计算总黄酮含量。
槲皮素作对照测定总黄酮（207nm）标准液的制备精密称取槲皮素对照品1.53mg，加95%乙醇定容至50mL，即得槲皮素标准液30.6μg/mL。
标准曲线的制备吸取槲皮素标准液0.0mL、0.05 mL、0.1 mL、0.2mL、0.3 mL、0.4 mL于10 mL比色管中，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白，在207nm波长处比色，求回归方程，制备标准曲线。
样品处理取样品2.5g，精密称定，加乙醇超声溶解，减压过滤。
收集滤液用乙醇定容至25mL。
另称取聚酰胺粉1.5g于蒸发皿中，加入超声后上清液2.0mL，于水浴上挥去乙醇，转入层析柱。
用95%乙醇洗脱，收集洗脱液，加乙醇定容至100mL。
在波长207nm处比色，测定吸光度，据回归方程计算总黄酮含量。
槲皮素作对照测定总黄酮（257nm）标准液的制备精密称取槲皮素对照品1.53mg，加95%乙醇定容至50mL，即得槲皮素标准液30.6μg/mL。
标准曲线的制备吸取槲皮素标准液0.0mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL于10 mL比色管中，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白，在257nm波长处比色，求回归方程，制备标准曲线。
药典中总黄酮测定方法
药典中总黄酮测定方法
总黄酮是一类具有类黄酮结构和作用的化合物，广泛存在于植物中。
药典中常用的总黄酮测定方法包括以下几种：
1. 显色法：将含总黄酮样品与乙醇-水混合溶液及磷酸钠溶液混合后，加入硼酸试液，产生紫色或蓝色显色反应，通过比色法测定总黄酮含量。
2. 二苯基丙烯酸法：将含总黄酮样品与二苯基丙烯酸溶液混合后，利用紫外可见光谱法测定吸光度，通过标准曲线计算总黄酮含量。
3. 铝试剂法：将含总黄酮样品与铝试剂溶液混合后，加入氢氧化钠溶液，经酸化处理后用紫外可见光谱法测定吸光度，计算总黄酮含量。
4. 比色法：将含总黄酮样品与乙醇-氢氧化钾溶液混合后加入稀硫酸溶液，以黄烷酮为对照品，经比色法测定吸光度，计算总黄酮含量。
以上是比较常用的药典中总黄酮测定方法，选择不同的方法需考虑到样品类型、检测精度等实际问题。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定呀，有几种常见方法呢。
紫外- 可见分光光度法。
先得把样品处理好，就像给食材做前期准备一样。
把含有总黄酮的样品进行提取，提取液要纯净呀，不能有太多杂质干扰，杂质多了就像炒菜的时候锅没洗干净，那肯定做不出好菜。
然后在特定波长下测定吸光度，这个波长就像一把专门开总黄酮这把锁的钥匙，得找对喽。
这方法安全性挺高的，只要按照正常操作流程，不会有啥危险情况，稳定性也不错呢，只要仪器正常工作，数据偏差不会太大。
在食品、药品检测领域应用可广泛了，能快速知道产品里总黄酮的大概含量。
我知道一家小型制药厂，想检测新研发的药品里总黄酮含量，就用这个方法，快速得到结果，他们高兴得不得了，就像挖到宝藏一样。
还有高效液相色谱法。
这得把样品制成合适的溶液，溶液就像一支整齐有序的队伍，不能乱哄哄的。
然后注入色谱仪，色谱仪就像一个超级严格的裁判，把不同成分分得清清楚楚。
测定过程中要保证仪器的清洁和稳定，这可不能马虎呀，不然数据就乱套了。
这个方法安全性也还好，就是操作要细心些。
在科研中用得很多，能精确测定总黄酮含量，优势就是精准度高呀。
有个科研团队研究植物中的总黄酮含量，用这个方法得到准确数据，他们兴奋地说这简直是找到了解开谜团的密码。
我觉得这些总黄酮含量测定方法各有各的好，在合适的场景下都能发挥大作用，就像不同的工具在不同的工作里都能大显身手。
总黄酮含量测定方法
总黄酮含量测定方法总黄酮是指一类在植物中广泛存在的天然化合物，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗菌、抗炎等作用。
因此，总黄酮含量的测定方法对于评估植物中潜在的药用价值具有重要意义。
以下是一种常用的总黄酮含量测定方法。
一、试剂与设备准备：1. 酸性乙醇溶液：加入浓盐酸（HCl）和乙醇（C2H5OH）（体积比为1:95）。
2. 铝试管。
3. DNA分光光度计或分光光度计。
4. 普鲁士蓝试液。
二、样品处理：1. 将待测样品（如草药材）洗净并晾干。
2. 将样品研磨成细粉末，通过筛网过筛以去除杂质。
3. 取一定质量的样品，加入酸性乙醇溶液中，浸泡4-6小时，以增加黄酮化合物的浸提效果。
4. 使用离心机离心加速提取，收取上清液并保存备用。
三、测定操作：1. 取适量的上清液，放入铝试管中。
2. 加入1 mL的酸性乙醇溶液，并摇匀，待样品溶解。
3. 将铝试管放入水浴中加热，加热温度为80C，保持10分钟。
4. 待样品冷却后，加入3 mL的普鲁士蓝试液，摇匀。
5. 使用DNA分光光度计或普通分光光度计，设置波长为595 nm，测定吸光度值。
四、数据处理与计算：1. 使用酸性乙醇溶液作为空白试剂进行校正。
2. 通过空白试剂的吸光度值，减去样品吸光度值，获得净吸光度值。
3. 根据普鲁士蓝的吸光度与黄酮的浓度之间的线性关系，计算样品中黄酮的含量。
以上就是一种常用的总黄酮含量测定方法，通过酸性乙醇提取样品中的黄酮化合物，并使用普鲁士蓝试液测定吸光度值，可以获得样品中总黄酮的含量。
为了提高测定结果的准确性，可以多次重复实验，并计算平均值。
此外，还可以使用其他方法进行总黄酮的测定，如高效液相色谱（HPLC）法和分光光度法等，根据实际需求选择合适的方法进行测定。
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目录
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仪器与试光光度仪，水浴锅，索氏提取器 槐米，芦丁对照品 甲醇，亚硝酸钠溶液，硝酸铝溶液，氢 氧化钠试液，乙醚，试剂均为分析纯
2.溶液的制备
（1）对照品溶液的制备
取芦丁对照品50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加 甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度， 摇匀。精密量取 10ml ，置100ml 量瓶中，加水至刻度， 摇匀，即得(每1ml中含芦丁0.2mg)
（3）测定法
取本品粗粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚 适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲 醇90ml，加热回流至提取液无色，移置100ml量瓶中，用甲 醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀。精密量取10ml，置100ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀 。精密量取 3ml ，置 25ml 量瓶中，加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml ，混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6 分钟，加氢氧化钠试液 10ml ，再加水至刻度，摇匀，放置 15分钟，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中 芦丁的重量(μ g)，计算，即得。
（2）标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 1ml 、 2ml 、 3ml 、 4ml 、 5ml与6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml， 加 5% 亚硝酸钠溶液 1ml ，混匀，放置 6 分钟，加 10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化 钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟， 以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在 500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓 度为横坐标，绘制标准曲线。
采用紫外分光光度法测定槐米总黄酮的含量 , 比通过显色反应测定总黄酮含量简便 , 提高了实 验的效率。本法简便、 快速、 选择性好、 线性 范围宽、 重现性好、 能全面反映样品中槐米总 黄酮的含量, 适用于槐米的质量检测和总黄酮测 定, 尤其是生产过程的质量控制。
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