(完整版)第十四章特异性抗体的制备技术

第十四章特异性抗体的制备技术

Chapter 14 Preparation of Specific Antibody

第一部分教学内容和要求

一、目的要求

·掌握：特异性抗体的类型、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本原理；熟悉：常用颗粒性和蛋白质抗原制备的方法、多克隆抗体制备的的影响因素，常用佐剂种类；了解：抗血清的鉴定，基因工程抗体的类型。

二、教学内容

1．常见免疫原的种类和制备及佐剂。

2．免疫血清的制备，抗血清的鉴定与保存。

3．单克隆抗体制备技术。

4．基因工程抗体技术。

第二部分测试题

一、选择题

（一）单项选择题（A型题）

1.配制绵羊红细胞免疫原一般细胞浓度为

A.102 /ml

B.104 /ml

C.105 /ml

D.106 /ml

E.108/ml

2．细菌鞭毛免疫原常规的制备方法

A．0.5%甲醛处理B．100℃加温2h处理C．1%氯化钙处理 D. 75%乙醇处理 E.2%氯肪处理

3. 细菌的菌体免疫原常规的制备方法

A. 75%乙醇处理

B. 100℃加温2h处理

C. 0.5%甲醛处理

D.1%氯化钙处理

E.2%氯肪处理

4.要从组织和细胞匀浆中粗提某种蛋白抗原，最常用又简便的分离方法

A. 盐析法

B. 凝胶过滤法

C. 离子交换层析法

D.免疫亲和层析法

E. 免疫电泳法

5.制备人工抗原时，最常用于偶联半抗原的载体

A. 免疫球蛋白

B. 人甲状腺球蛋白

C .人血清白蛋白 D. 牛血清白蛋白

E. 葡萄球菌A蛋白

6.蛋白质抗原首次免疫接种后，最好间隔多长时间再进行第二次免疫

A . 7~10天 B. 10~20天 C. 20~30天 D. 30~60天 E. 三个月

7.鉴定抗体的效价，最好采用下列哪一种方法

A.间接凝集试验

B.单向免疫扩散法

C.双向免疫扩散法

D.免疫亲和层析法

E.聚丙烯酰胺凝胶电泳法

8.纯化特异性抗体时，可采用下列哪种方法除去杂抗体

A.盐析法

B.凝胶过滤法

C. 离子交换层析法

D.免疫亲和层析法

E.免疫电泳法

9.根据抗原分子所带电荷不同进行分离纯化的方法称为

A.盐析法

B.凝胶过滤法

C.离子交换层析法

D.免疫亲和层析法

E.免疫电泳法

10。单克隆抗体目前效果较好的纯化方法

A。亲和层析法B。凝胶过滤法C。离子交换层析法D。超速离心法E。盐析法

11.完全佐剂的组成

A.液体石蜡+羊毛脂

B.羊毛脂+氢氧化铝

C. 液体石蜡+卡介苗+氢氧化铝

D.卡介苗+氢氧化铝+羊毛脂

E. 卡介苗+液体石蜡+羊毛脂

12.要使半抗原与载体结合具有免疫原性、半抗原分子的数目数至少要达到

A.10个以上

B.15个以上

C.20个以上

D.50个以上

E.100个以上

13．颗粒性抗原免疫接种方法一般采用

A．淋巴结注射B．静脉注射C．皮内注射D．皮下注射E．肌肉内注射14。免疫小鼠采血通常采用

A．心脏采血或断尾法 B．颈动脉放血或断尾法 C．颈静脉或摘除眼球采血

D．摘除眼球或断尾法 E．耳静脉采血或摘除眼球

15．较长时间(4~5年)保存抗体，通常采用

A．4℃保存 B．-10℃保存 C．-20℃保存 D．-30℃保存 E．真空干燥保存

16．在HA T选择培养基中可长期存活者是

A．细胞多聚体B．融合的脾细胞与瘤细胞

C．融合的瘤细胞与瘤细胞D．未融合的瘤细胞

E.未融合的脾细胞

17。单克隆抗体目前效果较好的纯化方法

A。亲和层析法B。凝胶过滤法C。离子交换层析法D。超速离心法E。盐析法

（二）多项选择题（X型题）

1．从组织细胞中提纯某可溶性抗原，一般需经过下列哪些步骤

A. 破碎细胞

B. 选择性沉淀

C. 亲和层析

D. 与载体偶联

E. 纯度鉴定

2．可用于破碎组织细胞制备可溶性抗原的方法有

A. 超声破碎法

B. 冻融法

C. 超速离心法

D.酶处理法

E. 表面活性剂处理法

3．提取蛋白质免疫原所用的沉淀法包括

A.盐析法

B.高分子聚合物沉淀法

C.有机溶剂沉淀法

D.核酸沉淀法

E.醋酸沉淀法

4．提取蛋白质免疫原的技术有

A.选择性沉淀

B.超速离心

C.凝胶层析

D.离子交换层析

E.亲和层析

5．免疫血清制备的过程

A．选择免疫动物 B．免疫方法 C．动物采血 D．免疫血清的纯化

E．抗血清的鉴定

6．单克隆抗体纯化的方法

A。亲和层析法 B．凝胶过滤法 C．离子交换层析法 D．超速离心法 E．盐析法

7．单克隆抗体制备的流程

A．抗原的免疫和细胞融合 B．抗体初筛与克隆化 C．杂交瘤细胞的冻存与复苏

D．单克隆抗体的批量生产 E．单克隆抗体的纯化与鉴定

8．用于抗血清的免疫球蛋白片段的主要制备方法

A．分离非共价键法 B．分离共价键法 C．溴化氰裂解法 D．酶裂解法 E．乙醇裂解法

9．目前认为佐剂增强免疫应答的机理

A.增加抗原的表面积和改变抗原构型

B.佐剂与抗原结合改变抗原的物理性状

C.增强巨噬细胞的吞噬作用

D.佐剂与抗原结后直接激活NK细胞发挥效应

E.直接激活B细胞产生抗体

二、填空题

1．.根据抗体制备的技术方法不同进行区分，人工制备的抗体可分为＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿三大类型。

2．抗血清鉴定的主要内容包括＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿等四个方面。3．制备特异性免疫血清时，常用＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿两种方法去除杂抗体。

4．HAT培养基中三种关键成分是＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿＿。

5。单克隆抗体的批量生产方法主要有两种＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿。

三、名词解释

1．单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)

2．佐剂(adjuvant)

3．基因工程抗体(genetic engineering antibody)

4。嵌合抗体（chimeric antibody）

5。改形抗体（reshaped antibody，RAb）

6。双特异性抗体（bispecific antibody，BsAb）

四、问答题

1．简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。

2．试述免疫血清应如何进行纯化。

3．叙述杂交瘤技术的基本原理

第三部分参考答案与题解