【精品课件】生化大实验双向琼脂免疫扩散
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1.用琼脂浇培养皿时，培养皿必须保持水平位置。
2.每个孔的加样量应保持一致，既使每个孔都被 加满，又必须不使样品溢出孔外。
3.打孔时注意不要将孔弄破。
六 复习题
1.什么是抗原？ 2.什么是抗体？ 3.双向免疫扩散的原理及应用。
双向免疫扩散试验
一实验目的
学习双向免疫扩散实验原理 掌握双向免疫扩散实验操作方法
基本概念
抗原：抗原（antigenicity）是指能够刺激机体 产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答 产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生 免疫效应（特异性反应）的物质。
抗体：抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗 原刺激下，由B淋巴细胞分化成的浆细胞所产 生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的 免疫球蛋白。
（3）抗原或抗体相对分子量的估计
双向免疫扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排 孔型、梅花孔型（见图1）
○○ ○
○○
三孔型
○○ ○○
Leabharlann Baidu
双孔型
○ ○○○
○
双排孔型
梅花孔型
图1 双向免疫琼脂扩散孔型
三 试剂与器材
1.缓冲液：4.65gTris加水溶解，加115ml 0.1 M HCl，最后补水至1000ml，pH为8.2。
2.凝胶液：5g琼脂糖加500ml上述缓冲液， 微波炉加热煮沸溶解。注意用中小火， 以免暴沸。
3.待测样品：I号峰、II号峰、III号峰
4.羊抗人IgG抗体、羊抗人LDL抗体、羊抗 人apoA-I抗体。
5.生化培养箱、微波炉、刻度吸管、培养 皿、下口径2mm滴管等
四 操作步骤
1.制板：用移液管吸取热琼脂20ml，平铺 于直径9cm培养皿中。
二 实验原理
双向免疫扩散是一种定性试验。将抗原、抗体分 别加入琼脂板相对应的小孔中，使两者互相扩散， 在比例适当处形成可见的沉淀线。观察沉淀线的 位置、数量、形状，以及对比关系，可对抗原或 抗体进行定性分析，常用于:
（1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行 初步估算。
（2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗 体）
2.打孔：待琼脂凝固后，按图1梅花孔型打 孔，孔径2mm,孔与孔距离3-4mm。用针 挑去孔内琼脂。
3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体、羊抗人 LDL抗体及羊抗人apoA-I抗体各5-10ul加 入周边孔中，中间孔加不同峰的液体。
4.将培养皿置于生化培养箱内，于37℃温 育，隔天观察结果。
五 注意事项
2.每个孔的加样量应保持一致，既使每个孔都被 加满，又必须不使样品溢出孔外。
3.打孔时注意不要将孔弄破。
六 复习题
1.什么是抗原？ 2.什么是抗体？ 3.双向免疫扩散的原理及应用。
双向免疫扩散试验
一实验目的
学习双向免疫扩散实验原理 掌握双向免疫扩散实验操作方法
基本概念
抗原：抗原（antigenicity）是指能够刺激机体 产生（特异性）免疫应答，并能与免疫应答 产物抗体和致敏淋巴细胞在体外结合，发生 免疫效应（特异性反应）的物质。
抗体：抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗 原刺激下，由B淋巴细胞分化成的浆细胞所产 生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的 免疫球蛋白。
（3）抗原或抗体相对分子量的估计
双向免疫扩散常见孔型有三孔型、双孔型、双排 孔型、梅花孔型（见图1）
○○ ○
○○
三孔型
○○ ○○
Leabharlann Baidu
双孔型
○ ○○○
○
双排孔型
梅花孔型
图1 双向免疫琼脂扩散孔型
三 试剂与器材
1.缓冲液：4.65gTris加水溶解，加115ml 0.1 M HCl，最后补水至1000ml，pH为8.2。
2.凝胶液：5g琼脂糖加500ml上述缓冲液， 微波炉加热煮沸溶解。注意用中小火， 以免暴沸。
3.待测样品：I号峰、II号峰、III号峰
4.羊抗人IgG抗体、羊抗人LDL抗体、羊抗 人apoA-I抗体。
5.生化培养箱、微波炉、刻度吸管、培养 皿、下口径2mm滴管等
四 操作步骤
1.制板：用移液管吸取热琼脂20ml，平铺 于直径9cm培养皿中。
二 实验原理
双向免疫扩散是一种定性试验。将抗原、抗体分 别加入琼脂板相对应的小孔中，使两者互相扩散， 在比例适当处形成可见的沉淀线。观察沉淀线的 位置、数量、形状，以及对比关系，可对抗原或 抗体进行定性分析，常用于:
（1）抗原或抗体的纯度鉴定。也可对抗体效价进行 初步估算。
（2）用已知抗血清（或抗原）检测未知抗原（或抗 体）
2.打孔：待琼脂凝固后，按图1梅花孔型打 孔，孔径2mm,孔与孔距离3-4mm。用针 挑去孔内琼脂。
3.用微量加样器将羊抗人IgG抗体、羊抗人 LDL抗体及羊抗人apoA-I抗体各5-10ul加 入周边孔中，中间孔加不同峰的液体。
4.将培养皿置于生化培养箱内，于37℃温 育，隔天观察结果。
五 注意事项