MTT法检测细胞存活及生长
MTT法又称MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法其检测原理
MTT法又称MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法其检测原理MTT法，即3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑（MTT）比色法，是一种常用的检测细胞存活和生长的方法。
MTT法的基本原理是通过检测细胞内的线粒体活性来评估细胞的存活状况和生长情况。
线粒体是细胞内能量产生中心和细胞呼吸的主要场所，其功能完整与否直接影响细胞的生活能力和活动状态。
MTT法利用MTT试剂与细胞内的线粒体还原酶作用产生可溶性的蓝紫色产物，通过比色测定可间接反映细胞数量和细胞代谢活性。
MTT法的操作步骤如下：1.培养细胞：将需要检测的细胞在细胞培养板中培养至合适的生长期，使细胞处于活跃生长状态。
2.处理试样：根据实验的需要，对细胞进行不同处理，例如添加药物，感染病毒等。
3.加入MTT试剂：将MTT试剂以适当的浓度加入细胞培养板的培养液中，并保持细胞在适宜的温度和环境条件下培养一段时间，通常为2-4小时。
4.溶解MTT产物：将培养液完全移除，加入溶解剂如二甲基亚砜(DMSO)，使产生的蓝紫色MTT产物完全溶解。
5. 比色测定：将溶解后的MTT产物转移至96孔板或比色皿中，利用分光光度计在570 nm波长下测定吸光度值。
吸光度值的高低代表了细胞的存活状况和生长活性。
MTT法的优点在于操作简单、结果读取方便、对细胞破坏小等。
同时，MTT法可以应用于不同类型的细胞，包括哺乳动物细胞、微生物细胞等。
然而，MTT法也存在一定的局限性，比如不能直接反映细胞的精细结构和功能等。
总之，MTT法是一种常用的检测细胞存活和生长的方法，利用线粒体活性作为指标，通过MTT试剂的比色测定来间接评估细胞的数量和代谢活性。
在细胞研究、肿瘤学和药物筛选等领域具有广泛的应用前景。
mtt法检测细胞活性实验报告
mtt法检测细胞活性实验报告MTT法检测细胞活性实验报告细胞活性是评估细胞健康和功能的重要指标。
在细胞培养实验中，MTT法被广泛应用于评估细胞的存活率和代谢活性。
本实验旨在通过MTT法检测细胞活性，探究不同处理条件对细胞的影响，并分析实验结果。
实验材料和方法：1. 细胞培养：选取人类肺癌细胞株A549作为实验对象，通过传代培养维持细胞的生长状态。
2. 细胞处理：将A549细胞均匀分配到不同处理组，包括对照组和实验组。
实验组根据需求添加不同浓度的药物处理，对照组则不添加药物。
3. MTT法测定细胞活性：将处理后的细胞悬液均匀分配到96孔板中，每组设置3个孔位。
加入MTT溶液，孵育一定时间后，加入溶解液，最后测定吸光度。
实验结果：通过MTT法测定细胞活性，我们得到了以下结果。
1. 实验组A：添加药物A处理的细胞活性明显下降。
随着药物A浓度的增加，细胞存活率呈现逐渐下降的趋势。
最高浓度的药物A处理组，细胞存活率仅为对照组的30%。
2. 实验组B：添加药物B处理的细胞活性呈现剂量依赖性下降。
低浓度的药物B处理组，细胞存活率与对照组相近。
高浓度的药物B处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的50%。
3. 实验组C：添加药物C处理的细胞活性呈现非线性变化。
低浓度的药物C处理组，细胞存活率略高于对照组。
中等浓度的药物C处理组，细胞存活率降低，但仍高于对照组。
高浓度的药物C处理组，细胞存活率显著下降，仅为对照组的40%。
讨论与分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论。
1. 药物A对A549细胞具有明显的抑制作用。
随着药物A浓度的增加，细胞存活率逐渐降低，表明药物A可能具有抗肿瘤活性。
然而，高浓度的药物A处理组细胞存活率仅为30%，可能存在细胞毒性作用。
2. 药物B对A549细胞的影响呈现剂量依赖性。
低浓度的药物B处理组细胞存活率与对照组相近，可能对细胞没有明显影响。
然而，高浓度的药物B处理组细胞存活率下降，表明药物B可能对细胞产生抑制作用。
MTT实验原理、步骤、注意事项
MTT实验原理；步骤；注意事项；一、原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT法又称MTT比色法
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的基培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
注意事项：MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，它的特点是灵敏度高、经济。
学术术语来源---Bio-gide胶原膜体外复合培养犬骨髓间充质干细胞的软骨分化文章亮点：1 实验先采用全骨髓血培养法培养犬骨髓间充质干细胞，继而采用贴壁筛选纯化，方法简便，所获细胞数量及纯度满意，并在体外成功诱导分化出软骨细胞。
2 实验所采用的细胞支架材料为瑞士Geistlich公司生产Bio-gide胶原膜，这是一种由Ⅰ型和Ⅲ型胶原组成复合材料，分为致密层和疏松层，种子细胞接种在胶原膜的较为粗糙的疏松层，而光滑的致密层在体内实验中朝向关节腔，有利于骨髓间充质干细胞的黏附、生长及向软骨细胞的分化，三维立体培养有助于诱导生成的软骨细胞维持表型。
3 实验显示Bio-gide胶原膜与骨髓间充质干细胞复合培养有良好的生物相容性，但能否体内构建组织工程软骨组织，促进软骨细胞的生长，缺损的软骨组织得到完整的修复，尚待进一步研究。
关键词：生物材料；组织工程软骨材料；膜生物材料；骨髓间充质干细胞；Bio-gide胶原膜；组织工程；股骨头坏死；软骨缺损；种子细胞；国家科学自然基金摘要背景：应用组织工程方法修复股骨头坏死后的软骨损伤应解决的2个关键因素是种子细胞和支架材料。
目的：探讨Bio-gide胶原膜体外与犬骨髓间充质干细胞复合成软骨的可行性。
方法：采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法体外分离培养比格犬骨髓间充质干细胞，观察细胞形态学变化，以细胞表面抗原进行鉴定。
MTT法原理、步骤以及注意事项
MTT法原理、步骤以及注意事项MTT原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处（也有用570nm波长的，我目前用的都是570nm)测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
MTT方法总结详解
MTT方法总结详解第一篇：MTT方法总结详解MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT 溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
MTT实验法
MTT实验原理；步骤；注意事项；一、原理MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法：通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT检测法
MTT法检测细胞存活和生长MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT方法
MTT简介：MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济试剂：MTT （浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的PBS 或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
）PBS (Nacl 8g /Kcl 0.2g /Na2HPO4 1.44g/ KH2PO4 0.24g ,调pH7.4 ,定容1L)方法步骤：贴壁细胞1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
检测细胞存活与增殖-MTT与MTS的差异与选择
检测细胞存活与增殖MTT与MTS的差异与选择由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
为此，Oween等设计出了一种新型的MTT类似物一MTS，MTS法原理同MTT法，但优于MTT法。
MTS在PMs(Phenazinemethosulfate)的存在下可被活细胞还原形成水溶性的甲增产物(故MTS需与PMS合用)，因而被用来建立了可检测细胞活力和增殖能力的MTS检测法。
MTS形成的水溶性甲腊产物在490~500nm处有最佳吸收，我们一般选择492nm。
每孔检测的细胞数量在3000~5000为宜，作用一小时后即可检测，以3小时的检测结果为最佳。
与MTT法相比，MTS有以下优点➢1、操作简便，MTS中生成的甲脂极具水溶性，省去了MTT法需离心除去上清液和加入有机溶剂这一步骤，可一次检测大量样品。
➢2、MTS易于配制和储存，在PH>6.5的缓冲溶液中易溶解配成溶液，且可在4 ℃下保存一段时间。
➢3、快速，加入药后一小时即可检测结果（2-3小时为最佳），而MTT法的作用4个小时。
➢4、敏感，比MTT法测定统一样品敏感性高。
➢5、特异性强，MTT法形成的甲增产物为桔黄色，培养体系中一些黄色代谢产物和试剂均可影响检测结果，而MTS/PMS法形成的甲增产物为深棕色检测时外部因素影响较小，所以特异性较强。
➢6、重复性良好。
MTS法的原理：图为MTS被乳酸脱氢酶还原为黄色的FormazanMTS检测细胞增殖protocol:1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul，铺板使待测细胞调密度3000~5000/孔，5%CO2，37℃孵育。
2）24小时后吸去培养基，每孔加入100ulMTS溶液，即MTS母液与培养基比例为1:9，继续培养1-3h。
在酶标仪OD492nm处测量各孔的吸光值。
3）连续检测3天，每天3复孔，在酶标仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
mtt细胞实验步骤
mtt细胞实验步骤
MTT细胞实验是一种常用的细胞生存率和细胞增殖能力测定方法，以下是MTT细胞实验的基本步骤：
1. 显微镜下观察细胞形态与结合情况：将需要进行实验的细胞取出，通过显微镜观察细胞形态与结合情况以确保细胞质量正常。
2. 细胞的处理：将细胞以适当的密度悬浮在含有培养基的培养皿中，并放入恒温培养箱中培养一段时间，使细胞黏附于培养皿底。
3. 处理试剂：根据实验设计的需要，如调节药物浓度、添加化合物等，处理培养皿中的细胞。
4. MTT溶液的制备：取适量的MTT混合粉末，加入生理盐水或者PBS缓冲液中，溶解后过滤灭菌。
5. MTT染色：将处理后的细胞培养皿加入预先准备好的MTT 溶液中，使其充分与细胞接触，然后将培养皿放回恒温培养箱中孵育适当的时间。
6. 细胞摄取MTT：将MTT孵育后的培养皿从恒温培养箱中取出，轻轻吸去残留的MTT溶液，并加入适量的溶解剂（如二甲基亚砜）使细胞摄入的MTT完全溶解。
7. 光度计测定：将溶解后的MTT液吸取到96孔板中，通过
光度计测定吸光度值，即MTT代谢产物形成的紫色产物的吸光度。
8. 数据分析：根据光度计测定的数据，计算细胞生存率或增殖能力并进行统计分析。
注意事项：
- 实验过程中需要严格执行无菌操作，以确保实验结果的准确性。
- 实验前需准备好试剂和培养皿等相关材料，保证实验顺利进行。
- 实验设计时应考虑到对照组设置、重复次数等因素，以增加实验的可靠性。
MTT法与IC50值
MTT法与IC50值MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
（MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
）MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项
MTT原理步骤结果分析方法及注意事项MTT（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide）是一种常用于细胞增殖和细胞存活率测定的试剂。
MTT会被细胞还原成紫色的 MTT 衍生物，进而被细胞摄入和积蓄。
然后，MTT 衍生物可以通过去酸化和水解得到溶于有机溶剂的紫色形成物，可以用分光光度计检测。
MTT法常用于评估细胞毒性、细胞增殖、细胞存活率以及细胞治疗试验中药物、化合物和生物活性物质的毒性和活性。
1.细胞处理：将待测样品的细胞接种于孔板或培养皿中，使细胞附着在底部。
2.细胞培养：将细胞培养在适宜的培养条件下，使其稳定生长。
3.MTT染色：加入MTT溶液到细胞培养中，使其与细胞接触。
4.MTT还原：细胞将MTT还原为紫色产品，该产物由于不能从细胞中扩散出来，只会在细胞内积累。
5.细胞裂解：加入溶解MTT的溶剂，破坏细胞壁，并使其紫色产物完全溶解。
6. 分光光度计测定：使用分光光度计在570nm波长下测量吸光度。
7.数据分析：将吸光度的读数与对照组比较，计算细胞生长或存活率。
MTT法的结果分析方法如下：1.计算细胞生长或存活率：将待测组（实验组）细胞的吸光度读数减去空白对照组的吸光度读数，以消除背景干扰。
然后，将差值与对照组的吸光度读数进行比较，计算细胞的增殖或存活率。
2.绘制生长曲线：将不同时间点的吸光度读数绘制成图表，以观察细胞的增殖情况。
3.IC50测定：通过绘制浓度-响应曲线，确定50%细胞抑制浓度（IC50），即需要的试剂浓度来抑制细胞增殖或杀死50%的细胞。
注意事项如下：1.细胞密度：细胞密度应保持在适宜的范围，以确保实验结果的准确度。
过高的细胞密度可能导致细胞受限和死亡，而过低的细胞密度可能导致结果不可靠。
2.MTT浓度：MTT浓度的选择应根据具体实验目的和细胞类型进行优化。
浓度太高可能会导致染色不均匀，浓度太低可能影响实验结果的敏感性。
MTT法检测细胞活性
MTT法MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
什么是MTT法?又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT法原理步骤
MTT法原理步骤MTT法（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种常用于细胞增殖和细胞存活分析的非放射性测定方法。
MTT法的原理基于细胞线粒体中存在的一种酶，称为呼吸链中的NAD(P)H氧化酶，它将4,5-二甲基噻唑-2-基四唑（MTT）氧化为紫色的甲基紫色素（formazan），进而可以利用光密度测量来研究细胞的增殖和存活情况。
MTT法的操作步骤主要包括以下几个环节：1.细胞培养：首先，需要将感兴趣的细胞进行培养。
通常，细胞会在培养皿内以适当的培养基中进行培养。
在培养期间，细胞会继续增殖，形成一个单层或多层的细胞群。
2.细胞孵育：将培养好的细胞通过酶解或机械方法从培养皿中剥离，并转移到一个合适的孵育皿中。
通常孵育皿的形状为96孔板，这样可以同时处理多个样品。
3.MTT处理：将细胞孵育一定时间后，将MTT溶液加入到每个孔中。
MTT溶液会迅速进入细胞，并被细胞内的活性酶还原为紫色的甲基紫。
MTT溶液中的浓度和处理时间会根据实验要求进行调整。
4.溶解形成甲基紫：在处理一定时间后，将孔板从培养箱中取出，并将MTT溶液取出，然后加入一种溶解液，可以是DMSO（二甲亚砜）等有机溶剂。
溶解液会溶解甲基紫，形成紫色溶液。
5.光密度测量：最后，使用光密度计等仪器对每个孔中的溶液进行测量，光密度的测量值与细胞数量和代谢活性呈正相关关系。
根据参考值和实验结果，可以计算出细胞增殖或存活的百分比。
总结起来，MTT法的基本原理是利用细胞内酶对MTT溶液的还原作用，生成可溶于有机溶剂的紫色产物，通过紫外-可见吸收光度计测定溶液吸光度的变化，进而推测细胞的代谢活性或存活率。
这种方法简单、经济、没有放射性，因此被广泛应用于细胞生物学和药物筛选研究中。
MTT方法总结
MTT方法总结1.MTT原理MTT比色法是一种检测细胞存活和增殖的方法，所用的显色剂是一种能接受氢原子的化合物MTT，原理是，活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能将淡黄色的MTT还原为蓝紫色的结晶formazan(甲瓒）后者的产量与活细胞数成正相关。
formazan可用DMSO、无水乙醇或酸化异丙醇等溶解，在酶标仪上以波长490nm 和570nm处进行比色。
所检测的OD值的大小可反应细胞代谢活性的强弱。
2.优点（1）有灵敏度高，重复性好，（2）操作简便、经济、快速、易自动化的优点，（3）而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，（4）还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素缺点：影响因素多，重复性较差。
MTT有毒性致突变性，操作时应注意防护3.步骤(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1604培养液配成单个细胞悬液，以每孔5×103~1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞；将培养板移入CO2孵箱中，在37℃、5％CO2及湿度条件下，培养4h以上（至细胞状态稳定）．加药物干预24~48h(培养时间取决于实验目的和要其求)(3)呈色：加MTT时一定要避光，测24h细胞增殖率时，于加药干预20h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20ul，37℃，继续孵育4h；测48h细胞增值率时，于加药干预44h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20uL，继续孵育4h。
终止培养后，对悬浮生长的细胞，需离心,(2000rpm．15min)；对贴壁细胞最好也离心（2000rpm,3min).然后用1mL或3mL注射器小心吸弃孔内培养上清液，每孔加入150uL DMSO振荡10min，使结晶物充分溶解。
(4)比色：选择490nm和570nm波长，在酶联免疫检测仪上调定各孔收值，记录结果。
以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生线。
细胞存活率分析（MTTAssay）
细胞存活率分析（MTTAssay）細胞存活率分析(MTT Assay)培養24⼩時培養24⼩時培養4⼩時培養24⼩時 Time⽤570nm 的ELISA 讀OD 加⼊細胞⾄96well 中吸去100µl 液體，加⼊MTT吸去100µl GM，加⼊100µl 新GM 及藥物吸去全部液體，加⼊100µl DMSO實驗步驟：1. 將細胞消化後，以Growth Medium(10%FBS)稀釋到適當體積，再均勻接種到96 well plates 中，每well 接種200µl。
接種完畢後，在盤⾯最外圍的well(X well)處加⼊100µl 的無菌⼆次⽔(DDW)。
Note：A375細胞→75T flask 可接種4盤 96well plates2. 將細胞移⼊37℃培養箱，培養16~24⼩時。
3. 將Medium 換成0.1%FBS 的Medium 100µl 靜置24hr4. 加藥：⼀次處理同⼀稀釋濃度的3個well，先以tip 吸去100µl 在well中的GM，再加⼊100µl 新的DMEM(不含FBS)，之後再加⼊藥物⾄well 中。
5. 將細胞移⼊37℃培養箱，培養24⼩時。
6. 移除well 中100µl 液體，並加⼊1/10 volume(10µl)的MTT(5mg/ml)到每個well 中。
Note：MTT 在GM 中的最終濃度為0.5mg/ml。
7. 將細胞移⼊37℃培養箱，作⽤4⼩時。
8. 吸除well 中的GM 與藥物的混合液體，並加⼊100µl SDS-HCl 到每well中。
9. 將細胞移⼊37℃培養箱，培養24⼩時。
10. ⽤570 nm filter 的ELISA reader 來測定OD 值。
計算：OD TC0 ─OD TC100 =TC 50之OD, 再以內插法求得drug 的TC 502盤⾯設計： X X X X X X X X X XX X XX XX XX XX XX X X X X X X X X X X X XX X z X 的部分，加⼊200µl 無菌DDW z 灰⾊的部分為藥物處理組藥物：z MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]為可溶於⽔的⿈⾊染劑，會被細胞中NADPH 還原為不溶於⽔的深藍⾊結晶(MTT-formazan)，此結晶必須先⽤DMSO 溶解後，才能⽤ELISA reader 讀取吸光值，若細胞活性越強，藍⾊越深，若細胞死亡，則呈現⿈⾊。
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是一种黄颜色的染料。
什么是MTT法? 又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm 滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉. 配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
PBS配方：Nacl 8gKcl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g调pH 7.4定容1LMTT法实验步骤（一）贴壁细胞1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）（二）悬浮细胞：1、收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释 lμg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。
每板设对照（加100μ(储存液100 1640）。
2、置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm （630nm校准）测量各孔的吸光值）4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm 校准）测量各孔的吸光值。
5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。
MTT法检测细胞存活和生长作者：佚名文章来源：丁香园点击数：3520 更新时间：2009-9-29 8:10:36MTT全称为3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
什么是MTT法?又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT 溶液的配制方法通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
PBS配方：Nacl 8gKcl 0.2gNa2HPO4 1.44gKH2PO4 0.24g调pH 7.4定容1LMTT法实验步骤贴壁细胞：1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）悬浮细胞：1、收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释(储存液100μg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。
每板设对照（加100μl 1640）。
2、置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。
5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。
MTT 法检测细胞存活率或抑制率基本原理: 基本原理MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethyl thiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。
MTT 为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C 的作用下tetrazolium 环开裂，生成蓝色的formazan 结晶，formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT 还原）。
还原生成的formazan 结晶可用DMSO（分析纯）来溶解。
利用酶标仪测定490 nm 处的光密度OD 值，以反映出活细胞数目。
试剂配制：试剂配制：MTT 溶液：pH=7.4 的PBS 配制成5mg/ml 浓度的溶液，用避光保存) MTT 法检测细胞存活率或抑制率详细步骤1 接种细胞：用含10％胎/小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔10 -10 个细胞接种到96 孔板，每孔体积100-200μl. 2:培养细胞：同一般培养条件，培养1-2 天（原代细胞不同，可根据试验目的和要求决定培养时间，神经元7-10 35天，心肌细胞8-14 天）。