蛋白纯化总结
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总结
一、要求：活性、纯度、规模、经济性（工艺）
二、菌种: 原核、真核、胞内、胞外、变性、复性
三、蛋白性质：等电点、分子量、稳定性（PH/safl）等
四、纯度检测方法：SDS、HPLC
五、活性检测方法：
六、纯化
1、粗纯：硫酸铵（天然）等20%-40%-60%-80%，（不易加过快硫酸铵）
2、Ni-NTA、Ni-IDA ①PH值越大，柱子结合率越弱②不能有螯合剂的缓冲液③His标签未暴露，4-8M脲，4-6M盐酸胍变性④沉淀没有洗脱下，减少上样量，添加去污剂+氯化钠+尿素⑤杂蛋白去不掉，超声过程中添加2%Triton/2%Tween-20,加甘油⑥解离过程沉淀，降低上样量，添加精氨酸/表面活性剂（Triton，2%Tween-20）/尿素/甘油。