乙肝表面抗原确证实验作业指导书
乙肝病毒表面抗原诊断操作规程
乙肝病毒表面抗原诊断操作规程
一、操作步骤：
1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。
2、将标本对应微孔按顺序编号。
3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照
各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。
4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）
充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。
5、手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，
静置5秒，甩干，重复5次后拍干。
洗板机洗板：选择洗涤5次程序后拍干。
6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，
封板，置37度孵育15分钟。
7、每孔加终止液1滴，混匀。
8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双
波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。
二、结果判断：
样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。
阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。
三、注意事项：
1、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。
2、封片不能重复使用。
3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。
4、不同批号的试剂不可混用。
5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。
6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。
三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs)的浓度，能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。
肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥100mIU/ml为宜。
四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。
抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
14HBsAg临床检验标准操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量测定试剂盒（化学发光法）临床检验标准操作规程项目名称：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定量测定试剂盒（化学发光法）操作规程文件号：KM-SOP-CLIA-014第1版第 1 页共 4 页2008年1月1日起实施，2010年9月1日修订起草人：起草日期：2007-12-14复核人：复核日期：批准人：批准日期：分发部门或个人：1.实验原理：本试剂盒采用双抗体夹心法测定血清中HBsAg水平，用抗体包被微孔板制成固相抗体，用酶标记抗体制成酶标抗体。
在包被板微孔中先加入HBsAg校准品或待测血清，再加入酶标记物，温育后即形成固相抗体—抗原—酶标抗体复合物，充分洗涤后，加入化学发光底物液，然后测定其发光强度（RLU），根据校准曲线即可算出样品中HBsAg 的含量，样品的RLU值随HBsAg浓度的增加而升高。
2.临床应用：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）是乙型肝炎病毒的外膜蛋白，是血清中首先出现的HBV标志物。
在急性肝炎时它很快消失，若6个月以后仍不消失者，可成为慢性肝炎（CH）或HBsAg携带者，并可持续几年或几十年。
HBsAg的检测对于乙型肝炎的诊断和鉴别、流行病学的调查、献血员的筛选、预后判断及治疗效果的考察和药物的筛选具有重要的意义。
3.标本采集及处理：检测标本种类要求：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本。
溶血、脂血、黄疸血不宜使用，如需使用，应在报告单上注明“标本溶血/脂血/黄疸”。
受检者准备：受检者无需做特殊准备；标本采集及处理：采用正确医用技术收集全血标本，离心分离后提取血清用于检测。
使用抗凝剂（浓度为21.8mmol/L枸橼酸钠，5mmol/L EDTA-Na，15IU/mL肝素，10mmol/L 草酸钠）不影响检测结果。
分离血清应彻底，不含纤维蛋白；标本保存：待测血清如在24小时之内使用，可于2-8℃保存，若需长期存放应保存在-20℃以下，并避免反复冻融。
乙肝表面抗原试剂条操作说明书
乙肝表面抗原试剂条操作说明书操作步骤：1. 准备工作在操作前，请确保以下物品已准备妥当：- 乙肝表面抗原试剂条- 试剂条开封器- 试剂条操作台- 样本采集针- 乙肝表面抗原检测所需的标本（血液样本）- 记录表格2. 使用前准备将乙肝表面抗原试剂条和试剂条开封器放置在干燥而洁净的操作平台上。
确保操作平台没有任何杂质。
3. 样本采集使用样本采集针采集需要检测的血液样本。
确保采样过程中要按照卫生规范进行，避免交叉感染。
4. 操作步骤a) 取出一条试剂条，同时确保试剂条上的标识未损坏或模糊不清。
b) 将采集的血液样本滴于试剂条指定位置。
注意滴液量不得少于标记线，也不能超过标记线。
c) 在试剂条上滴加适量（约2-3滴）的检测缓冲液。
d) 将试剂条放置在水平表面上，等待反应发生。
反应时间约为10-15分钟。
e) 操作时间结束后，观察试剂条上的结果。
5. 结果解读a) 阅读结果应在15分钟内进行，不应延迟。
b) 结果判断应基于试剂条上显示的线条颜色。
- 若试剂条上出现两条线（测试线和对照线）显示红色或粉色，表明该血样中包含乙肝表面抗原。
- 若试剂条上仅有对照线出现，而测试线没有出现或颜色较浅，表明该血样中不含乙肝表面抗原。
- 若试剂条上的任何线条未显示，或显示结果不清晰，应重新进行测试。
6. 结果记录将结果记录在预先准备的记录表格上。
记录时应包括样本编号、操作时间、结果判断等信息。
7. 清理与处理操作结束后，将已使用的试剂条和其他废弃物放入指定的废弃物容器中。
同时，清洁操作平台和周围区域，确保卫生与安全。
注意事项：- 本试剂条仅用于乙肝表面抗原检测，其他用途请勿使用。
- 请在产品有效期内使用，过期产品可能导致结果不准确。
- 请遵循正确的操作步骤，以获得准确的检测结果。
- 请妥善保存并存放本试剂条，避免受潮或受到阳光直射。
- 如对操作步骤或结果解读有任何疑问，请咨询相关专业人员。
本操作说明书仅供参考，请确保在操作前详细阅读并理解本书上的信息。
1乙肝表面抗原检测操作规程
1.1乙肝表面抗原检测操作规程-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
2试剂：试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司包装规格：96Test/Kit试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T 缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器全自动酶免分析仪新鲜蒸馏水或去离子水酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）微量移液器37℃恒温箱或水浴箱洗板机或洗瓶5检验方法平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
稀释：每孔加入20ul样品稀释液。
加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
温育：置37℃温育60min。
加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
乙型肝炎病毒标志物表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒(胶体金法)
血清乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc检测作业指导书1.目的：建立乙型肝炎病毒HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc定性检测标准操作规程，确保检测结果的准确。
2.范围：适用于检验科免疫实验室。
3.规程：3.1标本的收集与准备：3.2用未加抗凝剂的真空抽血管抽取静脉血2ml。
3.3标本完全凝固后才能离心，并分离血清。
3.4如试验8小时内不能完成，血清标本放2~8℃保存。
3..5标本拒收标准：严重脂血、溶血、黄疸。
4、测定原理：本试剂盒采用胶体金标记免疫层析技术，将HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc单项胶体金标记免疫层析检测条组装成联合检测卡。
样品加到检测卡各项加样孔后,再借助毛细作用移行至层析区,于检测区和对照区,胶体金标记颗粒由于抗原抗体反应形成富聚,形成或不形成肉眼可见的胶体金颗粒反应带,从而实现对HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc的检测，并作出存在与否的判定。
HBsAg用双抗体夹心法检测，胶体金标记抗HBs(鼠单抗)与样品中的HBsAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的抗HBs(鼠单抗)形成“Au-抗HBs(鼠单抗)-HBsAg-抗HBs(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。
游离胶体金标记抗HBs(鼠单抗)则在对照线处与羊抗鼠IgG抗体结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色。
结果于30分钟内判定。
抗HBs用双抗原夹心法检测胶体金标记HBsAg与样品中的抗HBs结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行,与检测线区预包被的HBsAg形成“Au-HBsAg-抗HBs-HBsAg-固相材料”夹心物而凝聚显色。
游离胶体金标记HBsAg则在对照线处与羊抗HBs结合而富集显色。
阴性标本则仅在对照线处显色。
结果于30分钟内判定。
HBeAg用双抗体夹心法检测胶体金标记抗HBe(鼠单抗)与样品中的HBeAg结合形成复合物,再借助毛细作用复合物沿层析条向前移行，与检测线区预包被的抗HBe(鼠单抗)形成“Au-抗HBe(鼠单抗)-HBeAg-抗HBe(鼠单抗)-固相材料”夹心物而凝聚显色。
乙肝表面抗原标准操作规程
乙肝表面抗原标准操作规程一。
1.1 乙肝表面抗原是啥。
咱先来说说这乙肝表面抗原到底是个啥。
简单讲，它就是能反映一个人是不是可能感染了乙肝病毒的一个重要指标。
就好比是一个“小信号”，告诉咱们身体里可能有“敌人”入侵啦。
1.2 为啥要检测它。
这可太重要啦！检测乙肝表面抗原能让咱早早知道是不是被乙肝病毒给盯上了。
早发现就能早治疗，免得病情加重，那可就麻烦大了。
而且，知道了结果，也能让咱心里有个底，该注意啥，该咋预防，都能做到心里有数。
二。
2.1 检测前的准备。
要做这个检测，也有一些要准备的。
比如说，检测前得好好休息，别熬夜，要不然可能会影响结果。
还有啊，别吃那些太油腻、太刺激的东西，让身体保持一个比较“清爽”的状态。
2.2 检测的过程。
检测的时候呢，别紧张。
一般就是抽点血，送到实验室让专业的医生和仪器去分析。
这过程就像一场“侦察行动”，医生们通过各种手段找出那些可能存在的“敌人”线索。
2.3 检测结果咋看。
等结果出来了，要是显示阳性，那可就得小心了，可能是感染了乙肝。
要是阴性，也别大意，还得继续保持好的生活习惯，预防着点。
三。
3.1 阳性结果咋办。
要是真不幸是阳性，也别慌。
赶紧找医生，听听专业的意见。
可能需要进一步检查，看看病情到底咋样。
然后按照医生说的，该吃药吃药，该治疗治疗，要有信心打败这个“小病魔”。
3.2 阴性结果也不能放松。
阴性结果虽然是个好消息，但也不能掉以轻心。
还是要注意个人卫生，别和别人共用牙刷、剃须刀这些可能会传播病毒的东西。
打乙肝疫苗也是个好办法，给自己加一层“保护罩”。
这乙肝表面抗原检测是个很重要的事儿，大家都得重视起来，保护好自己的身体，健健康康的才好！。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测作业指导书（ELISA）1. 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2. 标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3. 标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4. 标本运输：密封，室温运输。
5. 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
剂试6.6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb 阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。
7. 仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST3608. 操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
应体晶有如（匀摇分充前制配液涤洗缩浓：液配8.2充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50?l于相应孔中。
8.5 加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50?l，轻拍混匀。
8.6 温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8 显色：每孔加入底物A、B各50?l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
实验三 乙型肝炎病毒表面抗原检测
实验三乙型肝炎病毒表面抗原检测一、目的掌握ELISA原理和方法二、实验原理采用EIA双抗原夹心法检测人血清或血浆中的抗-HBs。
并采用HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，进行孵育，当标本中存有抗-HBs 时，该抗-HBs与包被的HBsAg结合并与酶结合形成酶结合物HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物，洗去反应物，加入显色剂后，将有明显的颜色变化；当标本中没有抗-HBs时，加入底物后没有或只有很轻微颜色变化。
三、试剂与器材1.试剂酶结合物、抗-HBs阳性对照，浓缩洗涤液、显色剂A、显色剂B、终止液（2mol/L H2SO4）、7号待测样品、8号待测样品2.器材预包被反应板（9孔）、封板胶条、移液枪、摇床四、操作步骤1.取7号待测样品分别填装到4孔中，每孔50μL。
同样取8号待测样品分别填装到4孔中，每孔50μL。
剩余一孔装填50μL抗-HBs阳性对照。
2.加酶结合物，每孔50μL，并充分混匀，贴上标签纸，置于37℃孵育30min。
3.手工洗板：弃去孔中液体，在吸水纸上拍干，用洗涤液350μL灌注每孔，静置5-10秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复五次。
4.加显色剂：先加显色剂A，每孔50μL；再加显色剂B，每孔50μL；充分混匀，放置37℃避光孵育15,min。
5.终止反应：每孔加入终止液50μL，混匀。
6.观察颜色变化。
五、实验结果分析从实验结果看出7、8号待测样品皆无明显的颜色变化，但是阳性对照组再加入显色剂A、B后立即显现蓝色，再加入终止液后立即显现黄色。
表明7、8号待测样品皆无抗-HBs。
而反应显色原因为底物过氧化氢脲溶液和TMB，在HRP酶的作用下，产生蓝色的阳离子根；加入终止液后，一方面，硫酸破坏了HRP酶的活性，使酶的催化功能丧失，另一方面，pH降低，即可使蓝色的阳离子根转变为黄色的联苯醌。
但本实验并未用上酶标仪，故测定联苯醌的消光系数也无法进行。
乙肝表面抗原试剂条操作说明书
乙肝表面抗原试剂条操作说明书Serum one step HBsAg test! 快速一步法定性检测人体血清或血浆中的HBsAg! 供专业人员体外诊断检测使用[用途范围]：-----乙肝表面抗原（HBsAg）胶体金法检测试剂条应用快速免疫层析技术，以定性的方式测定血清或血浆中的乙肝表面抗原，作为诊断乙肝病毒携带情况的辅助手段。
[总论]：滤过性病毒引起一系列的肝炎疾病。
常见的有甲肝、乙肝和丙肝。
在HBV病毒表面发现的复合抗原叫乙肝表面抗原（HBsAg），以前又叫澳大利亚抗原。
血清或血浆中的乙肝表抗（HBsAg）存在表明被检测个体感染HB活病毒，表现为急性或慢性病征。
典型的HBV感染过程中，在ALT水平异常之前2~3周，或病征、黄疸出现之前的3~5周，都能检测到乙肝表抗（HBsAg）的存在。
乙肝表抗目前发现主要有4种亚型：ADW，AYW，ADR和AYR；10种血清型。
——本公司生产的乙肝表面抗原（HBsAg）胶体金法检测试剂条以定性的方法快速检测血清或血浆标本中的乙肝表面抗原，灵敏度为2ng/ml。
[测定原理]：——HBsAg胶体金法检测试剂条采用两点夹心固相免疫层析法定性检测血清或血浆中的HBsAg。
在试剂条的检测区包被有抗HbsAg单克隆或多克隆抗体，质控区包被有抗鼠IgG抗体。
检测时，血清或血浆中的HBsAg与试剂条上事先包被的胶体金标记抗HBsAg单克隆抗体结合成结合物，该结合物随着膜的毛细管作用向上迁移到达检测区，与膜上的抗HBsAg抗体起反应，出现一条红色条带。
无论标本中是否存在HBsAg，当液面继续迁移至固定羊抗鼠IgG区带时，质控区必定会出现一条红色条带。
如果检测区(T)出现红色条带，则提示阳性结果，表明被测者已经感染HBV；只有质控区（C）出现红色条带，则提示阴性结果，表明被测者没有感染HBV；质控区（C）红色条带同时作为试剂的内控标准，有助于判定样本量是否足够或层析过程是否正常。
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原测定(绝对定量)标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：乙型肝炎病毒表面抗原测定(HBsAg II quant)；组合项目申请：乙肝病毒项目组合。
临床医生根据乙肝患者抗病毒疗效监测需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，置含分离胶的真空采血管（黄盖管）。
2.1.2采用电子检验申请单，血标本试管粘贴附患者信息的条形码。
2.1.3标本采集后，通过LIS及标本条形码管理系统记录标本采集时间。
2.1.4标本采集后及时运送至实验诊断中心。
由标本处理中心负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.3其他如标识涂改、标本试管破裂等。
注：严重溶血或脂浊的标本,应在检验报告中标注标本状况，并建议复查；并在工作日志中记录。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（20℃～25℃）下可稳定一周，普通冰箱中（2℃～8℃）7天，-20℃3个月。
样本可以冻存5次。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2℃～8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛状态。
2.3.2不建议采集抗凝血标本，如果必须使用血浆，推荐的抗凝剂是肝素。
3 方法原理用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的针对乙肝病毒表面抗原。
采用双抗体夹心法原理，①第一次孵育：将含有样本，两种生物素化的anti-HBsAg单克隆抗体与钌复合体标记的一种anti-HBsAg单克隆抗体和anti-HBsAg多克隆抗体形成一种夹心复合体；②第二次孵育：加入链霉亲合素包被的微粒后抗原，该复合体通过生物素与链霉亲合素的相互作用与结合；③将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面，未与磁珠结合的物质通过Procell被去除。
乙肝表面抗原确证实验作业指导书
· 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本
100μl标本+100μl证实试剂
100μl标本+100μl对照试剂 或·
对于COI>30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。
100μl稀释的标本+100μl证实试剂
100μl稀释的标本+100μl对照试剂
平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对：
180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂
180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂
充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。
ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。
2.标本要求
Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg>200IU/l，人血清。含
防腐剂。
瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg<3IU/l。含防
· 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
1.1乙肝表面抗原检测操作规程
乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。
2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg 酶标抗体（含HRP标记HbsAb）, HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。
2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。
3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如长期保存需置于-15至-20℃冻存，并避免样本反复冻融。
高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。
4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.5 37℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。
5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。
5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。
5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。
5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。
5.6温育：置37℃温育60min。
5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。
乙肝表面抗原作业指导书
5.2样本检测程序：
单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素钠、EDTA-K3或枸橼酸钠抗凝。不要使用肝素锂抗凝血浆。标本在2－8度可稳定5天，-20oC可稳定3个月。标本可冻融6次。有沉淀的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。
标本、定标液和质控品在测定前应预温到室温。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
Elecsys HBsAg测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断
11.结果解释
标本的Cutoff指数<1.0判断为HBsAg无反应性，可判定该标本HBsAg阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数≥1.0判断为HBsAg有反应性。所有呈现有反应性的标本必须重新测定一次，并且每份标本做二次测定。如果二次均为无反应性，标本可确认为HBsAg阴性。如果二次重复测定中有一次为有反应性，则该标本确认为重复有反应性。重复有反应性的标本必须用中和试验(ElecsysHBsAg证实试验)进行测定。如中和试验阳性,标本判定为HBsAg阳性。
根据目前所知，所有HBsAg测定方法均不能够检测出全部被感染的标本和病人。因此，阴性结果不能绝对排除HBV接触或感染的可能性。有HBV接触史的人，HBsAg阴性可能是因其体内HBsAg含量低于检测下限或抗原对所用抗体无反应性的缘故。
实验五：ELISA法检查乙肝表面抗原(HBsAg)参考文档
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酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
1.简介
酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay）,简称ELISA，它 是实验室最常用的检测方法，用酶标记抗原 或抗体检测液体（血液、细胞液）中未知抗 体或抗原。 ELISA具有准确性高、检测时间 短、价格低廉、判断结果有客观标准、结果 便于记录和保存等优点，适合于大批标本的 检测，广泛应用于食品安全检测、医疗检测 以及免疫实验分析等领域。
实验五：ELISA法检测乙肝表面 抗原（HBsAg）
主讲人：季煜华 2014年11月
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免疫标记技术
1.定义：
将抗原-抗体反应与标记技术相结合，用放射性 同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原，通过 检测标记物，间接测定未知的抗原或抗体。
2.分类：
✓ 放射免疫测定法：131I，32P ✓ 免疫荧光技术：FITC，PE ✓ 免疫酶测定法：HRP，AP
•定量标准曲 线计算样品抗原的浓度。
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预期结果
• 阳性：显色为黄色 • 阴性：无色
1 23 4
阴性 阴性 阳性 阳性
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ELISA注意事项
• 加样应加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅 出，避免产生气泡并迅速完成；一个人操作时，一次不宜多 于两块板同时测定。
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4、ELISA类别
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体，根据试剂 的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不 同类型的检测方法，主要类型有
双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法等。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)实验操作规程(吉比爱)
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。
用特异性抗-HBs抗体包被酶标板，待检血清或血浆中的 HBsAg可与包被抗体反应，再与酶标抗—HBs抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。
加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据吸光值（A值）判定有无HBsAg的存在。
4.1.2.实验所需设备和材料：酶标分析仪、洗板机、50ul加样器、100ul加样器、37℃恒温孵育箱，一次性加样吸头、试剂槽、过程记录单等。
4.1.3.实验室环境条件：实验检测的室温应保持在18℃-25℃之间。
4.1.4.实验流程：标本接收核对→编制加样顺序的布局图→设置条孔→加样→加酶标记物→温育→洗板→加显色剂→温育→加终止液→酶标仪读数→结果判断→结果报告4.2.实验操作步骤：4.2.1.准备：自2-8℃试剂冰箱中取出试剂盒，在室温中平衡30分钟；包被板平衡至室温后才可打开外包装，以防止板条吸收空气中的水蒸气；将20倍浓缩洗涤液用纯化水20倍稀释后备用。
剩下的试剂及时封存于2℃-8℃冰箱中，以备后用。
4.2.2.设定：将待测样品按需排列设定加样顺序。
每板实验设空白对照1孔（若用双波长检测，可不设空白对照孔），阴性对照3孔，阳性对照2孔。
4.2.3.加样：将所需数量的板条固定于板架。
除空白对照孔外，在相应孔中加入阴性阳性对照和待检样品各100ul.4.2.4.温育第一次：贴上封口胶，置37℃温育60分钟。
4.2.5.加酶：小心撕去封口胶，除空白孔外，每孔加入酶工作液100ul.4.2.6.温育第二次：贴上封口胶，置37℃温育30分钟洗涤：小心撕去封口胶。
乙肝病毒表面抗原测定操作规程010
乙型肝炎病毒表面抗原测定操作规程文件号：WH-MY-010版本：第1版共：3页2009年3月1日起实施本规程每2年复审一次复审日期：2010年2月27日复审人：雷凤珠规程编写者：王莉红审批者：王金成批准日期：2010年2月28日检验科主任：雷凤珠1、检验目的：乙肝表面抗原测定2、检测原理：本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标抗体（HBsAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用双抗体夹心法法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝表面抗原（HBsAg）.3、试剂和仪器：3.1试剂：上海科华生物有限公司3.23.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。
3.4仪器：3.4.1 TE-B型定时微量振荡器3.4.2 37℃水浴箱（上海山连）4、标本：4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。
4.2样品后收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。
4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。
4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。
4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。
5、操作5.1操作步骤：5.1.配液：将20ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。
5..2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同），5. 3加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。
5.4加酶：每孔加入酶标试剂1滴（50ul）,轻轻振荡混匀。
5.5温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟。
5.6洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干。
5.7显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴(50ul),,轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10分钟。
(2024版)乙肝SOP
可编辑修改精选全文完整版【标本的采取和保存】采静脉血2ml,分离血清备用。
也可以使用血浆标本进行检测。
标本宜新鲜，无污染，避免溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐【检验原理】乙肝五项检测卡（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗HBsAg单抗（AU-SAbI）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗HBsAg单抗（sAb2）和羊抗鼠IgG。
检测阳性样本时，样本中HBsAg与胶体全标记抗体结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成"Au-sAbl-HBsAg-sAb2"夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠I g G结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBsAb金标试条利用双抗原夹心法原理，在玻璃纤维纸上预包被金标表面抗原（重组抗原）（Au-SAg）,在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被（重组抗原）HBsAg和羊抗HBsAg。
检测阳性样本时，样本中HBsAb 与胶体全标记表面抗原结合形成复合物,在层析作用下复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包破的表面抗原结合形成"Au-sAg-HBsAb-sAg"夹心物而凝聚显色，游离金标抗原则在对照线处与羊抗HBsAg结合而富集显色。
阴性样本则仅在对照线处显色。
HBeAg金标试条利用双抗体夹心法原理，在玻璃纤雄素膜上预包被金标鼠抗HBeAg单抗(Au-eAbl),在硝酸纤维素膜上的检测线和对照线处分别包被鼠抗e单抗(eAb2)和羊抗鼠IgG。
检测时，样本中的eAg可与胶体金标记抗体结合形成免疫复合物，在层析作用下复台物沿膜带移动，经过检测线时与预包被的抗体形成&Ab2-eAg-eAbl-Au”夹心物而凝聚显色;阴性样本仅在对照线处显色。
2014年乙肝表面抗原实验室间质评作业指导书
2014年江门市助产机构乙肝表面抗原室间质评作业指导书欢迎参加2014年实验室间比对活动。
本次实验室间比对试验是根据江门市卫生和计划生育局《2014年江门市预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播项目纳入民生实事实施方案》（江卫〔2014〕145号）的要求，由江门市疾病预防控制中心组织，对全市各级助产机构开展的一次乙肝检测实验室质量考核活动，为了使本次比对顺利进行，请在安排试验前细读以下提示。
1、样品编号本次实验室间比对试验发放一套考核样，每套考核样共有5个样品，依次为：1号、2号、3号、4号、5号。
2、比对项目及相关要求2.1本次比对项目为乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，要求各参评单位参照《乙型病毒性肝炎诊断标准》（WS299-2008）及《全国临床检验操作规程》等检验技术规范进行检验，报告检验结果。
2.2 本次实验室间比对试验的目的是评价我市乙肝检测实验室的实际检测水平，原则上要求县市级以上助产机构应不得采用免疫层析等快速方法进行检测，乡镇基层医疗卫生机构可以按实验室实际采用的检测方法进行检测。
3、注意事项3.1 参加比对的单位都有一个代码，此代码出现在比对样包装封面，属保密资料。
请各单位在报告上填写实验室代码，比对组织单位将采用代码回报评定结果，目的是为参加单位保密。
3.2 各单位领取比对样品后，应按本单位质量文件规定的样品接收程序进行交接，尽快安排到相关实验室进行检验，检验完毕后，按报告附件要求进行填写。
3.3请各单位保存样品检验原始记及检验报告复印件等资料备查。
3.4 本次考核样品为人血清配制品，已经过56℃30分钟灭活处理，但由于潜在的传染因素，请注意按传染性样品对待。
3.5 检验报告最迟于2014年11月30日寄送。
4、未详尽之有关事项由组织单位负责解释或说明。
联系人：黄妙琳、冯敏超、潘钊文电话：0750-3288571、3288559邮件寄送地址：江门市星河路10号，江门市疾病预防控制中心病原微生物检验科。
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2.标本要求
Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg>200IU/l，人血清。含
防腐剂。
瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg<3IU/l。含防
腐剂。
校准品：
质ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ品：
Elecsys HBsAg质控品1和2 （PreciControl）货号11876309
其他所需材料：
HBsAg试验：
· 第1步：二种经预处理的标本、生物素化的抗HBsAg单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗HBsAg单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
· 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
11.结果解释
试验有效性的核对评估开始以前，必需核对试验的有效性。除了满足HBsAg试验所要求的条件外，还必须满足以下几条标准：
· PreciControl HBs Ag 2与证实试剂反应的COI同PreciControl HBsAg2与对照试剂反应的COI之比必须小50%（<50%）。如>50%，必须检查试验的条件，有必要的话，用新鲜的试剂重新测定标本。
定标：定标次数和校正方法与Elecsys HBsAg试剂相同。
6.质量控制
必须与标本同时平行测定Elecsys PreciControl HBs Ag 2。根据用户需要进行校正。对于Elecsys HBs Ag试验，质控按相应的说明书进行。
7.计算方法
对每一个标本，仪器会自动根据HBsAg定标液cal1和cal2的测定结果计算出cutoff值。报告结果，分有反应性或无反应性以及cutoff指数（COI）=标本信号值/cutoff等几种形式。证实试验中所加的标本体积需参考COI。
180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂
180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂
充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。
ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。
5.操作方法
标本的预处理：
标本加样体积的选择取决于相应标本在ElecsysHBsAg试验中所得的COI值的高低。以下是各种不同体积的标本分别加入Elecsys 标本杯中：
· 对于COI<7.0的有反应性标本
180μL标本+20μl证实试剂
180μL标本+20μl对照试剂 或
· 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本
1.分析原理
标本先用证实试剂和对照试剂预处理，随后再用HBsAg试验检测。HBsAg阳性质控品2同时平行测定以核对操作。
标本的预处理：
· ElecsysHBsAg试验重复呈现有反应性的标本，用证实试剂和对照试剂平行处理，混匀，温育。证实试剂中过量的抗HBsAg抗体中和标本中的HBsAg。在随后进行的ElecsysHBsAg试验中，标本的Cutoff-指数（COI）将比原值降低。
8.参考范围
9.分析性能
10.干扰因素
由于钩状效应，HBsAg浓度高于1mg/ml或550000IU/ml时，Elecsys HBsAg试验的cutoff 指数将<30。这是因为在给定的加样体积下，证实试剂未能充分中和掉标本中的抗原，因而造成假阴性。由于稀释的缘故，这些标本
与对照试剂反应的COI值高于原来ElecsysHBsAg试验测出的COI值。从这一点可以鉴别有钩状效应的标本。这些标本必须在更高的稀释度（1：100）下重新检测。干扰因素与Elecsys HBsAg试验说明书中“干扰因素”一节相同。Elecsys HBsAg检测结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
12.临床意义
13．参考文献
编写： 审核： 批准：
批准日期： 年 月 日
100μl标本+100μl证实试剂
100μl标本+100μl对照试剂 或·
对于COI>30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。
100μl稀释的标本+100μl证实试剂
100μl稀释的标本+100μl对照试剂
平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对：
· 评价标本测定有效性的指标是：标本与对照试剂反应的COI必须>=1.0；COI<1.0提示稀释度太高，需用不稀释或降低稀释度稀释的标本重做。标本检测结果的解释和评估。为了证实标本的阳性结果，标本与证实试剂反应的COI同标本与对照试剂反应的COI之比必须小50%（<50%），其中标本与对照试剂反应的COI必须>=1.0。
· 11820532，100人份的Elecsys HBsAg试剂盒
· Elecsys通用稀释液 货号03183971
· Elecsys1010或2010分析仪
· Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号11662988
· Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号11662970
· Elecsys 清洗添加剂（SysWash）货号11930346
· Elecsys 系统清洗剂（SysClean）货号11298500
4.仪器和校准
使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪
仪器校准：定标次数和校正方法与Elecsys HBsAg试剂相同