注射液无菌检查的方法学验证方案
无菌检查微生物限度检查方法学验证实例
供试液制备：取样品10瓶分别加0.1%蛋
白胨溶液30 ml溶解后，过滤。
7.活菌计数
活菌计数结果见表1。
10－4稀释
10－5稀释
10－7稀释
试验次数
1
2
1
21Βιβλιοθήκη 2金黄色葡萄球菌56
60
枯草芽孢杆菌
77
79
白色念珠菌
86
70
黑曲霉菌
80
76
铜绿假单胞菌
47
50
方法验证
直接接种法：取样品12支，分别接种8支硫乙醇酸盐和4支霉菌液体培养基2ml/支后，再按要求加入相应的阳性菌液（30-100个/ml），置规定温度培养3-5天，逐日观察结果。
仪器和滤器：HTY-2000A集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器（批号20050105）北京牛牛基因有限公司。
01
方法：中国药典2005年版无菌检查的验证实验
02
操作方法 菌液制备： 取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基中, 生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中, 32.5±2.5℃培养18～24小时；
培养：硫乙醇酸盐流体培养基桶30-35℃培养；真菌培养基桶23-28℃培养。观察结果。
结果 细菌和真菌数计数结果分别见表1和表2。
表1 细菌数计数 表2 真菌数计数结果
*
菌 种
大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
铜绿假单胞菌
生孢梭菌
计数(CFU)
22
26
36
39
62
66
58
54
45、 23
128、108
甲硝唑注射液无菌检查方法学验证研究
ｚｌ ｉｊ ｔ ｎａ ｄ ｍ ｋ ｅｔ ｔ ｂｅ ｔ ｇｏ ｔ ｌｙ ａ ｄａ ｆ ｉ ｓ ａ ｓ ｏｉｖ ｏ ｔ ｌ ｕ ｅ ｅｅ ｌ ｈ ｒｗ ｈ ｏ ｍ — ｏ ｎ ｃｉ ｎ ａ ｅ ｔ ｓ ｏ ｊｃ ｒｗ ｉ ｓ ｒ ｉ ， ｎ ｌ ｏ ｘ ｔ ｉ ｓ ｉ ｃｎｒ ｂ ｓｒｖ ａ ｔｅｇｏ ｔ ｆ ｉ ｅ ｅ ｏ ｈ ｅ ｓ ｎ ｅ ｔ ｉ ｌ ｓ ｒ ｎ ｐ ｔｅ ｏｔ
分别取 经 ３ ４±１℃温度条件 培养 ｌ ２ ８～ ４ｈ的金黄 色葡萄
埃 粒 子 数 ≥０ ５ ｍ ４ ３ ． ８Ｏ ７ 沉 降菌 数 Ｏ
２５ ６ ０
２ ３ ６２ ３ ０
ｌ５ ４ ０
洁净级别
１ ０ ０００级
１０ ０ 级
ｌ ０ ０ ０级 ０
１０ ０ 级
【 作者简介 】 （９８ ） 李玲 １６一 ，女 ， 本科 ，现任广西 南宁百会 药业集 团有限公 司质监部部 长。
２２
球菌 、铜绿假单 孢菌 、枯 草芽孢 杆菌 的营养 肉汤培养 物 ，用 Ｏ ％无菌氯化钠溶液稀释成小于 １０ ｆ／ ｌ ． ９ ０ ｕｍ 的菌液备用 。 ｃ 取经 ３ １ｏ温度 条件培养 １ ～２ ４３ Ｃ － ８ ４ｈ的生孢梭菌 硫 乙醇 酸盐流体培养基 培养物 ，用 ０９ ．％氯 化钠溶液 稀释成 小于 １０ ０
应用技术
Ａ ｐ ｅ ｅｈｏ ｇ ｐ ｌ ｄＴｃ ｎｌ ｙ ｉ ｏ
企业 科 技与发 展
Ｅｎ ｅ ｐ ｉｅ Ｓ ｉｎ ｅ Ａｎ ｃ ｎ ｌ ｇ ＆ Ｄｅ ｅｏ ｍ ｅ ｔ ｔｒ ｒｓ ｃｅ ｃ ｄ Ｔｅ ｈ ｏ ｏ ｙ ｖ ｌｐ ｎ
２１ 年第 ３ 总第 ２７ ） ０１ 期（ ９期
的菌 液 备 用 。
注射用头孢匹胺钠无菌检查方法的验证
基 △ 盆 璺
文◎ ｌ 赵海英 ２ 赵海 霞 （ ． １ 哈尔滨誉衡药业股份有 限公司 ； ２ 哈 尔 滨 誉 衡 药 业 股 份 有 限 公 司 黑龙 江 哈 尔滨 ） ．
童
涯射 用头 孢 匹胺钠 无 茵检 查方 法的验 证
摘要 ： 目的 ：建立 注射 用 头孢 匹胺钠 无 斜 面 培 养 物 ，加 入 ３ ｌ ． ％ 氯 化 钠 溶 液 ， ｒ ０ ９ 的 ｎ 菌检 查方法 。方法 ：参照 中 国药典》 ２ ｏ 洗 下 孢 子 转 移 至 另 一 试 管 ， 取 １ 加 入 ９ １ ｏ５ ｍｌ ｍ
赉４ ２ 小时和 ４ 小时观察细菌厦真菌结呆 ４ ８
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查 用） 。
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提供 。 １３ 培 养 基 ．
ａ彝 培ｄ养 培ｄ ２ 养 培ｄ 培ｄ ａ ４ ５
＋ 一 ＋ 一 一 十 一
关 键 词 ： 注 射 用 头 孢 匹胺 钠 ； 无 菌 检
厌氧培养箱 中培 养） 。分别取 上述 两种真菌菌 液 ｌ ＬＪ入 培 养 皿 ， 每 种 菌 液 做 平 行 ２］。 注 ｍ） Ｄ １ ］ １
洗液 ，冲洗量 为５ ０ ｌ ０ ｍ ，并 以青霉索 酶为中和 剂 ， 即 可 消 除 样 品对 各菌 株 的抗 菌 活 性 ［］ ２。
参 考 文 献
［］ １ 国家药典委 员会编 １ 中华人 民共 和国 药典 ［ ］１ ０ ５ 年版二部 ， 北京 ：化 学工 ｓ ２ ０
业 出版 社 ， ２ ０ ０５
对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨
对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨对注射剂无菌检查及方法学验证共性问题的一些探讨审评四部刘宁注射剂作为药品的一种重要剂型被广泛地应用于临床，由于其直接注入人体体内，发挥疗效，因此其安全性显得更为重要。
现在对于注射剂的质量越来越受到高度关注，其中注射剂的灭菌是关系到药品质量、保证用药安全的重要工艺步骤之一，选择合适的灭菌方法，做到既杀灭除去微生物，达到灭菌目的，又保持药物稳定。
无菌检查是体现灭菌效果的主要手段，也是注射剂质量控制的一个重要指标。
在这里，结合审评实践，对注射剂在研发和药学审评中存在的一些无菌检查及方法学验证方面的共性问题进行探讨。
无菌检查是检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。
符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。
2005年版中国药典无菌检查要求更加严格，修订了培养时间，把无菌检查的培养时间增加至14天（而2000年版的培养时间仅为7天），与国外药典完全一致，并新增了无菌检查方法学验证试验，以保证无菌检验结果的准确性和可靠性。
无菌检查法一般分为两种方法：直接接种法和薄膜过滤法。
直接接种法即每支（或瓶）供试品按规定量分别接入含培养细菌及真菌培养基的容器中。
薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器，也可用一般薄膜过滤器。
无菌检查用的滤膜孔径为0.45μm，直径约为50mm。
根据供试品及溶剂的特性选择滤膜的材质。
如抑菌性供试品采用具有疏水性边缘及低吸附性的滤膜。
滤器及滤膜采用适宜的方法灭菌；使用时，要保证滤膜的完整性；水溶性供试品，先用少量冲洗液湿润滤膜。
油类供试品，滤膜和滤器，在使用前应充分干燥，备用。
过滤时，保持供试液及冲洗液覆盖整个滤膜表面；冲洗滤膜时，每张滤膜每次冲洗量为100ml，冲洗液、冲洗量及冲洗方法与方法验证相同。
2005年版中国药典都较详细地各提供了8种供试品的处理方式，在实际检验中可参考执行。
直接接种无菌检查法验证方案及报告
贵州金玖生物有限责任公司验证方案及报告验证方案名称：直接接种无菌检查方法验证验证方案编号：验证完成日期：有效期：验证方案申请人: 日期: 年月日验证方案审核人: 日期: 年月日验证方案审批人: 日期: 年月日1 概述无菌检查法是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的检查法，是作为批准无菌产品放行的检验或监督部门对无菌产品质量监督中的一个重要项目。
它是根据用于实验的培养基中是否有微生物生长来判定样品的无菌性，液体培养基变浑浊一般表明样品受微生物的污染。
基于微生物污染的不均匀性，使无菌检查法结果的可信度受许多因素制约，如抑菌因素、检查法、检验量、检查用的培养基质量、操作环境、无菌技术等。
检验方法的验证是现代质量保证体系中关系到质控技术、方法、手段的科学性、准确性的重要组成部分，是保证检验结果的公正、科学、准确的基础。
2 验证目的对本公司所采用的直接接种无菌检查法进行分析验证，以证明所采用的方法适合于本公司产品的无菌检查。
3 实验原理直接接种法是通过加入一定的抑菌中和剂，以方便而快捷地中和抑菌剂，消除抑菌作用，从而消除抑菌作用对无菌检查的影响。
本实验通过设计对照试验对直接接种法所加入的抑菌剂的中和效果进行验证，从而得出直接接种法无菌检验的有效性。
4 验证范围实用于本公司所采用的直接接种法进行的无菌检验过程验证。
56 职责7 验证内容建立样品组、对照组及菌种活性检查组，接种菌株到指定培养基，培养24~72小时，比较观察菌落的生长状况，得出结论。
8 验证指示物本实验所用菌种为购于贵州食品药品监督管理局标准菌株:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念球菌及生孢梭菌。
9 实验过程（1）培养基的配制用于大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养基用于白色念球菌的改良马丁培养基用于生孢梭菌的流体硫乙醇酸盐培养基（2）供试品的制备术泰舒TM生物多糖冲洗胶液供试品：直接取成品10ml，加pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为供试品。
注射用万古霉素无菌检查方法学验证
试验样品处理
试验步骤
按照无菌检查方法学的要求，对试验样品进行处理，包括稀释、加 药、培养等步骤。
操作规范
在处理试验样品的过程中，需要严格遵守无菌操作规范，避免样品 中的微生物污染实验环境。
数据记录
记录每个试验样品的无菌检查结果，包括微生物种类、数量等。
03
方法学验证实验
样品准备
取注射用பைடு நூலகம்古霉素样品，用无菌方法将样品分别装入无菌容器中。
注射用万古霉素无菌检查方 法学验证
汇报人：
日期:
• 引言 • 方法学验证方案 • 方法学验证实验 • 方法学验证结果分析 • 注射用万古霉素无菌检查方法学验
证总结
01
引言
目的和背景
目的
确保注射用万古霉素的无菌检查方法具有可靠性、准确性和可重复性，为产品质量控制提供有力支持 。
背景
注射用万古霉素是一种广泛应用于临床治疗的抗生素药物，其无菌质量对于保障患者安全具有重要意 义。因此，对无菌检查方法进行验证是保证药物安全性的关键环节。
参考标准
《中国药典》2020年版
规定了注射用万古霉素的无菌检查方法和要 求。
《无菌检查法》国家药品标 准
提供了无菌检查方法学的通用指导原则。
《微生物限度检查法》国 家药品标准
提供了微生物限度检查的方法学指导原则。
定义与术语
无菌检查
01
指对药物中是否含有微生物的检查方法，是确保药物
无菌的重要手段。
实验设计
根据无菌检查方法学验证指导原则，设计实验方案，包括实验组和对照组。
实验操作
按照实验设计方案，分别对实验组和对照组进行无菌检查实验。
培养与观察
将实验组和对照组的培养皿放入无菌培养箱中培养 ，每天观察并记录培养结果。
曲克芦丁注射液无菌检查法方法学研究
151BIOTECHWORLD 生物技术世界曲克芦丁系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮化合物,具有抑制红细胞和血小板凝聚作用, 有防止血栓形成的作用,同时能增加血中氧的含量,改善微循环,促进新血管生成以增进侧支循环。
它对内皮细胞有保护作用,同时能对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤, 增加毛细血管抵抗力, 降低毛细血管通透性, 防止血管通透性升高引起的水肿。
曲克芦丁注射液具有治疗闭塞性综合征血栓性静脉炎毛细血管出血等症 按照中国药典规定注射类制剂需进行无菌检查[1]并要求进行无菌检查法验证, 因此,对曲克芦丁注射液无菌检查方法进行了研究。
1 材料与方法1.1 材料(1)培养基与试药。
曲克芦丁注射液,规格2ml:100mg,批号110101,110102,110103,由江苏康缘药业股份有限公司生产。
硫乙醇酸盐流体培养基,批号20100918;改良马丁培养基,批号20100601,营养肉汤培养基20100708,改良马丁琼脂培养基,批号20100602。
营养琼脂培养基,批号091220(由宜兴市永信生物有限公司生产)。
(2)仪器与设备仪器。
HTY-2000A型集菌仪(由杭州泰林生物技术设备有限公司生产)、一次性使用全封闭集菌培养器(由杭州泰林生物技术设备有限公司生产)。
双人净化工作台(型号:YJT,由靖江市磊鑫机械厂生产);生物安全柜(由苏州市华宇净化设备有限公司生产);脉动真空灭菌器(型号:DMG-0.28,由连云港千樱公司生产)。
(3)菌种。
枯草杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、生孢梭菌CMCC(B)64941、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003。
以上均来源于江苏省药品检验所。
6株工作用菌种代数均为第五代。
1.2 方法(1)菌液制备方法[2-3]。
①取经33.0℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌肉汤新鲜的液体培养物1ml 加入9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中,10倍稀释至10-5～10-7,制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液,备用。
盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌检查方法学验证
盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌检查方法学验证作者：吴羽岚嵇海澄来源：《中国医药科学》2013年第13期[摘要] 目的对盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查方法进行探讨，建立其无菌检查方法。
方法按《中国药典》（2010年版）附录ⅪH无菌检查方法进行。
结果在验证条件下，该方法能消除对微生物生长的抑制作用。
结论可以采用此法对本品的无菌进行检查。
[关键词] 盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液；无菌检查方法；薄膜过滤法[中图分类号] R-331 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）13-95-02Study of sterile examination method of levofloxacin hydrochloride and sodium chloride injection WU Yulan JI HaichengJiangsu Hansoh Pharmaceutical Co.Ltd.，Lianyungang 222000，China[Abstract] Objective To discuss and establish the sterile examination method of levofloxacin hydrochloride and sodium chloride injection. Methods The test were done according to appendix XIH-sterile examination method in"Chinese Pharmacopeia"（2010 edition）. Results The method could eliminate the inhibition of microbe growth under the validation condition. Conclusion This method can be used for the sterile examination of levofloxacin hydrochloride and sodium chloride injection.[Key words] Levofloxacin hydrochloride and sodium chloride injection；Sterile examination method；Membrane-filter procedure盐酸左氧氟沙星（Levofloxacin Hydrochloride）化学名称：（S）-9-氟-2，3-二氢-3-甲基-10-（4-甲基-1-哌嗪基）-7-氧代-7H-吡啶并[1，2，3-de]-[1，4]苯并嗪-6-羧酸盐酸盐的水合物，属第三代喹诺酮类抗菌药。
注射用盐酸万古霉素无菌检查方法学验证
规定实验过程中使用的技术方法、技术要求、技术指标等。
仪器和试剂使用规范
规定实验过程中使用的仪器和试剂的种类、规格、使用方法等。
相关文献和参考资料
1 2
国内外相关法规和标准
包括国内外药品注册法规、药品检验标准等。
国内外相关文献和资料
包括国内外关于注射用盐酸万古霉素无菌检查方 法学验证的研究文献、技术资料等。
02
阳性对照菌：用于验证 无菌检查方法的可靠性 。
03
阴性对照菌：用于排除 杂菌干扰。
04
培养基：用于培养微生 物。
实验环境
无菌操作间
进行无菌操作的场所，需保持清 洁和无菌状态。
实验室
进行实验的场所，需保持整洁和 适宜的温度和湿度。
03
实验操作过程
样品制备
01
02
03
样品来源
选择符合质量标准的注射 用盐酸万古霉素作为样品 。
文件整理与归档
对验证过程中的文件进行整理和归档，以便后续参考和 追溯。
02
实验准备
实验设备
01
02
03
04
无菌操作台
用于无菌操作的设备，需定期 进行灭菌处理。
培养箱
用于培养微生物，需控制温度 和湿度。
显微镜
用于观察微生物形态。
注射器
用于抽取注射用盐酸万古霉素 样品。
实验材料
01
注射用盐酸万古霉素样 品：需要进行无菌检查 的药品。
阳性对照菌计数
通过对阳性对照菌计数，可确认培养 基斜面的菌落数量符合预期，表明培 养基的质量和实验操作正确。
阴性对照结果分析
阴性对照结果判断
在阴性对照实验中，应无菌落生长，以证明实验操作过程中 无污染。
乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查方法学研究
用。
实验对 象选择 了接种后的葡萄球菌、加单细胞菌 以及枯草芽孢杆菌等 培养物， 在实际实验 时， 实验人员将含有以上细菌的培养物放到了 一份营养 肉汤中，然 后将 内部含有接种生包梭 菌的实验培养物放到 了乙醇酸盐的培 养基巾 ， 将温度控制在３ ０ － ３ ５ ￣ （ ２ 之间 ， 培养时间尽量不超 过２ ４ ｈ ， 按照实验实 际情 况， 将培养物 的培养时 间合理控制在１ ８ — ２ ４ ｈ 之 间。 接下来， 接种 白色念珠菌 的新鲜培养物至 改 良马 丁琼脂 培养基 中， ２ ３ — ２ ８ ｅ 培 养２ ４ － ４ ８ ｈ ，上述 培 养 物 用０ １ ９ ％无 菌氯 化 钠 溶液 制 成 含 菌数 小于 １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ＃ ｍＬ 一 １ 的菌悬液，接 种黑曲霉的新 鲜培 养物至改 良马了 琼脂 培养基 斜 面【 ｝ 】 ， ２ ３ ￣ ２ ８ ｅ 培养５ ￣ ７ ｄ ， 加入３ ￣ ５ ｍＬ ０ １ ９ ％无菌氯化钠溶液 ， 将孢 子洗 脱。洗 脱液用０ １ ９ ％尢菌氯化钠溶液制成含孢子数小于１ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ＃ ｍＬ 一 １ 的孢子悬液。 ２ ． ２ 培 养基灵敏度检查 灵敏度检查时 ， 具体操作步骤 为： 先选取 ９ 支 内部装有硫 乙醇酸盐流体 的培养基， 将９ 支培养基 的装量都控制为１ ２ ｍｌ ， 然后给９ 支培养基接种上小于 １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ 的葡 萄 球 菌 ， 颜 色为金黄色； 假单胞菌， 颜色为铜绿色； 枯 草 芽孢 杆 菌
注射液无菌检查的方法学验证方案
注射液无菌检查的方法学验证方案注射液的无菌性是医疗领域中最为重要的质量指标之一。
为了确保注射液的无菌性，需要进行方法学验证方案。
本文将介绍一种常见的注射液无菌检查方法学验证方案，确保验证结果准确可靠。
一、验证目的本验证方案旨在验证注射液无菌性检查的方法学准确性和可靠性。
通过验证，可以确保注射液无菌性检查的结果符合预期，并为其他类似检查提供参考。
二、验证对象本验证方案适用于各类注射液无菌性检查方法，包括但不限于常规培养法、膜过滤法、试管法等。
三、验证步骤1. 制定验证计划：明确验证的目标、方法和时间安排等。
2. 准备样品和试剂：收集需要验证的样品和所需试剂，并确认其质量符合要求。
3. 合理布局实验室：确保实验室环境符合无菌实验要求，避免干扰因素的存在。
4. 实验操作：a) 样品准备：按照标准操作程序，制备样品，确保操作无菌。
b) 检测方法操作：按照所选的检测方法，依次进行实验，确保操作无误。
c) 平行实验：为了验证结果的可重复性，进行平行实验，确保结果一致。
5. 结果分析：根据实验结果进行数据统计和分析，得出结论。
6. 结果确认：将验证结果与预期目标进行比较，确认验证是否合格。
7. 编写验证报告：将整个验证过程、操作方法和结果总结编写成验证报告。
四、验证要求1. 严格遵守无菌技术操作规范。
2. 注射液样品的选择应具有代表性和典型性。
3. 实验室环境应符合无菌要求，避免外界干扰。
4. 检测方法的选择应根据实际情况和需求进行。
5. 实验操作过程要规范、准确，确保每个步骤符合方法要求。
6. 结果分析要科学、客观，数据统计要准确无误。
7. 结果确认应根据验证目标和标准进行判断。
8. 验证报告要详细、完整，包括验证目的、方法、结果和结论等。
五、验证结果分析根据实验结果的分析，可以判断注射液无菌性检查方法是否准确可靠。
如果验证结果符合要求并且与预期目标一致，则说明所选的检查方法具有可靠性和精准性。
如果验证结果与预期目标不一致，则需要进一步分析原因，寻找解决方案。
注射用甲磺酸左氧氟沙星无菌检查方法学验证
注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)无菌检查方法学验证方案1. 概述：公司根据市场发展需要拟计划规模化生产冻干粉针剂注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)产品，生产车间的洁净度等级与无菌操作、无菌保障等剂型产品的工艺验证、阶段性的无菌灌装试验过程验证等已经完成。
根据中国药典2005版要求，我司生产的注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)产品需做无菌等控制的检查，需对无菌检查方法学进行验证，以确保检验方法的准确可靠。
2. 项目名称：注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)无菌检查方法学验证。
3. 验证编号：VAL-JY-032(00)4. 验证形式：同步验证。
5. 验证目的：根据中国药典2005版要求，我司生产的注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)产品需做无菌等控制的检查，需对检验方法学进行验证，以确保检验方法的准确可靠。
6. 验证参加人员：根据验证项目，我们设立质控部注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)无菌检查方法学验证小组，明确各自责任与分工，具体如下表：质控部注射用甲磺酸左氧氟沙星(0.2g)无菌检查方法学验证小组各自责任与分工姓名部门小组职务责任与分工负责组织验证方案的起草，验证报告的编制，并组织实施负责验证方案和验证报告的审核负责验证方案和验证报告的审核负责验证方案和验证报告的审核负责验证方案和验证报告的校核负责在设备维修与校验方面提供支持和服务负责按相关标准检验其符合性实施验证负责按相关标准对生产过程与取样的监控管理7．文件依据：7.1．检验通用标准操作规程。
7.2．生测室用工器具清洁灭菌标准操作规程。
7.3．《中国药典》2005年版二部附录、通用检验操作规程和记录7.5．《药品生产质量管理规范实施指南》（2001版）。
7.6．《药品生产验证指南》（2003版）。
7.7．其它有关文件和记录。
8．验证条件：8.1．空气净化等级：生测室空气净化等级一万级，超净台空气净化等级一百级。
8.2检查用工器具已按清洁规程洗涤、干燥和灭菌。
硫酸卡那霉素注射液无菌检查试验及方法学验证
周 艳
（ 黑龙江 江世 药业有限公 司， 黑龙江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ ０ ） 摘 要： 本 实验对硫酸卡 那霉素注射液无茵检 查进行试验并对其方法学进行验证 。实验结果表 明硫酸卡那霉素注射 液无 茵检查方法 可靠 ， － ＊ ｑ ＂ ／ ￣ ｌ 于硫 酸卡 那霉 素注射液无 菌检查 。 表１ 关键词 ： 硫 酸卡 那霉素 注射液 ； 检查； 验证 硫 酸卡那霉 素注射液 主要组成成份 为硫 酸卡那霉 素， 是氨基糖苷类抗生素。硫酸卡那霉素注射液主要用 于治疗大肠埃 希菌 克 雷伯菌属 变形 杆菌属 产 气肠 杆菌等 引起 的感染 无菌检查法系指检查药 品、敷料 、 缝合线 、无菌器具及适用 于药典要求无 菌检 查的其他 品种是 否无菌 的一种方法 。药 品是任何程序 、生产过 程、 设备、 物料、 活动或系统确实 能达到预 期结果 的有 文件证 明的一 系列活动 。本实验对硫酸 卡那 霉素注射 液无菌检查进行试验并对其方法学进行验证 。
１实验 环 境 与 仪 器 １ ． １ 实验环境 无菌检查试验在 Ａ级下进行 。 １ ． １ ． １ 压差： 洁净 区与非洁净 区之 间 、 不 同等级 洁净
代， 稀释级 为 １ ０ ， 菌落 数为 ８ ９ ｅ ｆ ｕ ／ ｍｌ ； 大肠 埃希 菌为 ４代， 稀 释级 为 区之间 的压差应不低 于 １ ０ Ｐ ａ ， 相同洁净度等级不 同功能的操作间之 １ ０ 菌 落数 为 ７ ８ ｅ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ ； 生孢 梭菌 为 ４代 ， 稀 释级 为 １ ０ 菌 落数 为 间应保持适 当的压差梯度 。 ６ ７ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ ； 黑曲霉菌为 ４ 代， 稀释级 为 １ ０ ■菌落数为 ４ ０ ｅ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ 。 １ ． １ － ２ 悬浮粒子ｆ 见表 １ ） 。 将 等量 的试 验菌直接 加人到液体 硫 乙醇 酸盐培 养基或 改 良马 １ ． １ ． ４风 速 ： Ａ级 风速 ０ ． ３ ６ — ０ ． ５ ４ （ ｍ ／ ｓ ） 。 丁液体培养基管 中， 在相应 的温度 下培养 。液体硫 乙醇 酸盐培养基 １ ． ２仪器与材料 管在三十至三十五摄 氏度下培养； 改 良马丁液体培养基 管在二十三 电热恒 温培养箱 （ 上 海科恒 实业发展 有限公 司） ； 多用 生化培 养 至二十八摄 氏度下培养 １ ４天。观察记录 。 箱（ 沈阳市伟 明医疗 设备厂） ； 蒸 汽灭 菌器（ 上海隆拓仪 器设备有 限公 ３ ． ４阴性 对 照 司） ； ｗＪ － ６ 无菌检查仪（ 上海沪粤明科 学仪器有 限公 司） 。 生理盐水 、 硫 将 灭菌 的液 体硫 乙醇酸盐培养 基或改 良马丁液 体培养 基管直 乙醇酸盐液体培养基 、 改 良马丁液体 培养基 、 营养 琼脂培养基 、 金黄 接放在相应 的温度下培养 。 液体硫 乙醇酸盐培养基管在三十至三 十 色葡 萄球 菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、枯 草 芽孢 杆 菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、铜绿 假单 胞 菌 五摄氏度下培养； 改 良马丁液 体培养基管在二 十三 至二十八摄 氏度 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 孢梭菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 白色念珠 菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ）、 黑 曲霉（ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ｄ ｕ ） 。 下培养 １ ４天。观察记录。 ２培 养 基 微 生 物 性 能 实 验 ３ ． ５样品（ 薄膜过滤法） 取３ ０个装有 ５ ｍｌ 培养基 的已灭 菌的培养皿 ， 其 中 ５支不接种 将供试 品外表面用 ７ ５ ％酒精全 面消 毒，然后将样品 中转移至试 作为空 白对照 、 ５支接种金黄 色葡萄球菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 ５支接种枯 草芽 管 中注入 １ ． ０ ｍ ｌ ０ ． １ ％的蛋 白胨灭菌溶液， 用Ｏ ． １ ％的蛋 白胨灭菌溶液 孢 杆菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 ５支接种 铜绿假单 胞菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 ５支接种 生孢梭 稀 释至 １ ０ ０ ｍ ｌ ， 按薄 膜过滤法 过滤， 取 出滤膜 ， 将其 分为 ３等份， 分别 菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 ５支 接种 白色 念珠菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） ， ５支接种 曲霉菌 ， 金黄 色 置于含硫 乙醇酸盐流体培养基及改 良马丁培养基 的容器 中培养【 。 ｌ 葡萄球菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、枯 草 芽 孢 杆 菌 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、铜 绿 假 单 胞 菌 ３ ． ６验 证 （ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 生孢 梭菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 在 三十至 三十五摄 氏度下培 养七 十二 每种实验菌取 ｌ ０支， 注入 １ ． ０ ｍ ｌ ０ ． １ ％的蛋 白胨灭菌溶液， 用０ ． １ ％ 小时， 白色 念珠 菌（ ＜ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 、 曲霉 菌在二 十三 至二 十八摄 氏度培 养 的蛋白胨灭菌溶液稀释至 １ ０ ０ ｍ ｌ ， 按薄膜过滤法过滤， 取出滤膜 ， 将其 １ ４天，空 白试验分别 在在三十至三十 五摄 氏度下培养 七十二小 时 分为 ３ 等份 ， 分别置于含硫 乙醇酸盐流体 培养基及改 良马丁培养基 和二 十三 至二 十八摄 氏度培养 １ ４天， 培养时间 内观察并记录 。培养 的容 器 中培 养 ，其 中一 份 作 为 阳性 对 照 用 。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 基微 生物性能试验 ： 阴性实验中应无菌生长， 接种的 阳性对照实验应 （ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ￣ ｆ ｕ ） 、 枯草 芽孢杆 菌（ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ ） 、 铜绿 假单 胞菌（ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ ） 、 生孢 梭 有菌 生产 。 菌（ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ ） 在 三十至三十五摄 氏度 下培养七 十 － － ＇ ｔ ｌ ， 时， 白色念珠 菌 ３检 查 ｆ ＜ ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ ） 、 曲霉菌在二十三至二十八摄 氏度培养 １ ４ 天， 空白试验分 ３ ． １ 菌液制备 别 在在三十至三 十五摄 氏度下培养七 十二小时 和二十三至 二十八 取新 鲜的 白色念珠菌 的培养 物至改 良马丁培养基 中， 经二 十至 摄 氏度培养 ｌ ４天。 培养时间内观察并记 录。 二 十五摄氏度培养 四十／ ｋ ｄ ， 时， 用Ｏ ． ９ ％无菌氯 化钠溶液制成 每 ｌ ｍ ｌ ４结 果 含 菌少于 １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ （ 菌落行程单位） 的菌悬液 ， 做 活菌计数 备用； 取新鲜 实验结果表明硫酸卡那霉素注射液无菌检查方法可靠，可用于 的黑 曲霉 培养物接种至改 良马丁琼脂 斜面培养基 ， 经二 十五至三十 硫酸卡那霉素注射液无菌检查 。 摄 氏度培养一周， 加入 ５ ｍ １ ０ ． ９ ％无菌氯化钠溶液， 将孢子 洗脱， 再 同上 参考文献 制成 每 ｍ ｌ 含菌小 于 １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ的菌悬液， 做活菌计数 备用； 取 新鲜 的枯 ｆ １ ］ Ａ － Ｊ ＋芬． 盐酸左氧 氟沙星氯化钠 注射液无 茵检 查法方法学研 究【 Ｊ ］ ． 草 芽孢杆 菌 Ｃ ＭＣ Ｃ （ Ｂ ） ６ ３ ５ ０ １ 、 大肠埃 希菌 Ｃ ＭＣ Ｃ （ Ｂ ） ４ ４ １ ０ ２ 、 枯草 芽孢 中国药事， ２ ０ ０ ６ ， ９ ． 杆菌 的培养物至营养琼脂培养 基中， 经三 十至三十五摄 氏度培养二 『 ２ １ 方玲 芬， 徐 洪． 注射 用奥 美拉 唑钠 无菌检查法 方法学研 究［ Ｊ 】 ． 中国 十四小时 ， 用０ ． ９ ％无 菌氯化 钠溶 液制成 每 ｌ ｍ ｌ 含 菌少 于 １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ （ 菌 药 品标 准， ２ ０ ０ ６ ， ４ ． 落行程单位） 的菌悬液， 做活菌计数备用 。 ［ ３ 】 陈晓平， 盛 静． 注射 用桔 丙酯细 菌内毒 素检查 法的建 立［ Ｊ ］ ． 医药导 ３ ． ２菌悬液制备计数结果 报， ２ ０ ０ ６ ， １ １ ． 枯草芽孢杆菌为 ４代， 稀释级为 １ ， 菌落数 为 ６ １ ｃ ｆ ｕ ／ ｍｌ ； 白色念 ｜ ４ 】 符春 娜． 硫酸庆大霉素注射液无 茵检查方 法学验证【 Ｊ 】 ． 企业科技 与 珠菌 为 ４代， 稀释级 为 １ Ｏ ， 菌 落数为 ８ ３ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ ； 金 黄色葡 萄球 菌为 ４
盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌方法学确认
盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌方法学确认摘要：目的：建立盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液实验室转移的无菌方法学确认。
方法：采用《中国药典》2020年版四部无菌检查法-薄膜过滤法。
结果：按该方法进行试验，样品的检验量在该检验条件下无抑菌作用。
结论：盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液在实验室转移后，按此方法进行无菌检查是可行的。
关键词：盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液；无菌检查法；薄膜过滤法一、目的根据《盐酸左氧氟沙星氯化钠注射液》质量标准【无菌】检查项下规定，进行实验室转移的无菌方法学确认，经确认的方法进行试验，确定样品的检验量在该检验条件下无抑菌作用，建立其无菌检查方法。
二、实验仪器与样品1、仪器和试药：立式压力蒸汽灭菌器、ZW集菌仪、三联集菌培养器、接种棒、试管、培养皿、生化培养箱、无菌生理盐水、硫乙醇酸盐流体培养基（北京三药科技开发公司）、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基（均广东环凯微生物科技有限公司）、3批样品（规格：250ml:左氧氟沙星0.5g与氯化钠2.25g）。
2、试验用菌种：均由中国食品药品研究院提供金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭菌[CMCC(B)64941]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]、黑曲霉[CMCC(F)98003]。
三、实验操作及结果1、菌液的制备：1.1分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至胰酪大豆胨液体培养基中，生孢梭菌的新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35C°培养18～24h。
取经培养24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml，0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于100cfu的菌悬液。
取经培养24h的生孢梭菌的硫乙醇酸盐流体培养物1ml，0.9%无菌氯化钠溶液10倍量逐级稀释至含菌数小于100cfu的菌悬液。
葡萄糖氯化钠注射液无菌检查方法学验证
葡萄糖氯化钠注射液无菌检查方法学验证【摘要】对葡萄糖氯化钠注射液的无菌检查方法进行验证试验，确认无菌检查所采用的方法适合于该药品的无菌检查。
【Abstract】The certification tesls ofglucose injecion asepsis check mean ,confirm that this mean adopted is fit for glucose and sodium chloride injecion asepsis check.【Key words】Glucose and sodium chloride injecion Asepsis check Means certification1 无菌检查法取葡萄糖氯化钠注射液30瓶（规格100ml：葡萄糖5g与氯化钠0.9g），注入三罐体密闭式无菌试验过滤器，过滤，滤完，注入硫乙醇酸盐流体培养基200 ml﹙100 ml/罐﹚于两罐中，其中一罐作为阳性对照，加入1ml金黄色葡萄球菌10-100cfu/ml；改良马丁培养基100 ml﹙100 ml/罐﹚于另一罐中，按规定温度培养，每天观察并记录。
2 无菌检查方法学验证2.1 仪器与试药2.1.1 样品：葡萄糖氯化钠注射液规格：100ml：葡萄糖5g与氯化钠0.9g2.1.2 验证用培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠培养基等（以上培养基均由中检所提供）。
2.1.3 验证用试验用菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌。
2.1.4 仪器：集菌仪、密闭式无菌试验过滤器。
2.1.5 试验温度：22℃试验湿度：51 ％2.2 方法：《中国药典2010年版二部》无菌检查方法验证试验。
3 试验过程3.1 菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30—35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23—28℃培养24-48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
托拉塞米注射液无菌方法学验证_0
托拉塞米注射液无菌方法学验证目的：建立托拉塞米注射液无菌检查法。
方法：采用薄膜过滤法，探索此药物的无菌检查法。
结果：在该实验条件下6种菌株均能够正常生长。
结论：本品可采用薄膜过滤法进行无菌检验且结果准确可靠。
标签：托拉塞米注射液；无菌检查法；方法学验证托拉塞米为磺酰脲吡啶类利尿药，其作用于亨利氏髓袢升支粗段，抑制Na+/K+/2Cl-载体系统，使尿中Na+/K+/2Cl-和水的排泄增加，但对肾小球滤过率，肾血浆流量或体内酸碱平衡无显著影响。
当建立药品的无菌检查时应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。
1 材料与仪器1.1 试验样品托拉塞米注射液（规格：2ml：10mg，批号：20110212，数量：160支/批，浙江诚意药业有限公司）1.2试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC （F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]，以上均由中检所提供。
1.3试验用培养基营养琼脂培养基（批号120503）、玫瑰红钠琼脂（批号120412）、硫乙醇酸盐硫体培养基（批号1202222）、改良马丁培养基（批号120131），0.1%蛋白胨水溶液（批号120118），以上培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
1.4仪器SW-CJ-1CU型洁净工作台（苏州泰安空气技术有限公司）、HTY-2000A型智能集菌仪（杭州泰林生物技术设备有限公司）、一次性全封闭集菌培养器（杭州泰林生物技术设备有限公司）、301-1型电热培养箱（上海浦东跃欣科学仪器有限公司）、MJ-180B型霉菌培养箱（上海跃进医疗器械厂）、SPX-150B型生化培养箱（上海跃进医疗器械厂）。
2方法2.1菌液制备取经30～35℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌液体培养物各1ml分别加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，依次10倍稀释，金黄色葡萄球菌至10-6，大肠埃希菌至10-7，枯草芽孢杆菌至10-5，生孢梭菌至10-7。
5%葡萄糖注射液无菌方法验证方案
卷内目录1. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证计划2. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证小组名单3. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证方案4. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证检测记录5. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证验证报告6. 5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证验证合格证5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证计划应公司验证委员会要求，对我公司生产的各品种进行无菌检查方法验证。
“5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证”项目验证工作计划如下：一．2008年11月1日至11月3日：制定验证方案，由注射剂无菌检查方法验证小组组长负责起草。
二．2008年11月4日至11月8日：验证方案讨论、修改、审批及培训。
三．2008年 11月9 日至11月23日：验证工作实施，主要工作内容是根据验证方案及要求完成资料准备与核查、样品准备、检验、后期的培养、观察及相关记录的填写。
四.2008年11月24日至11月26日：根据验证情况与记录，书写验证报告。
五．2008年11月27日至11月29日：验证报告审核批准，合格证书发放。
无菌检查方法验证小组2008年11月1日5%葡萄糖注射液无菌检查方法验证小组名单组长：XX成员：XXX XXX XXX1.概述我公司主要生产大容量注射剂，属于最终灭菌的无菌制剂，按照《中华人民共和国药典》（2005版）等法规要求成品必须进行无菌检查。
无菌检查对操作环境、检测用器材（器具、试管、平皿、镊子等）、培养基、设备设施要求高，检测和处理过程必须严格控制才可能得到稳定、可靠、真实的结果。
根据样品特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行药品的无菌检查;若不符合，重新建立制定检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
2.验证目的通过验证确认所采用的检验方法适合于5%葡萄糖注射液的无菌检查。
3. 验证依据3.1《药品生产验证指南》（2003版）（国家食品药品监督管理局）3.2《药品生产质量管理指南》（1998修订版）3.3《中华人民共和国药典》（2005年版二部）4.验证4.1试验前的准备a）检验环境的确认无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部100级的单向流洁净区内进行。
氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证
10.3.6.1 试验目的：对氧氟沙星葡萄糖注射液的无菌检查进行方法学验证及对供试品进行无菌检查。
10.3.6.2 试验仪器及药品：10.3.6.2.1 试验仪器：HT-1300超净工作台净集团安泰空气技术生化培养箱医疗器械厂HTY-Ⅲ智能集菌器高得医疗器械KSF集菌培养器高得医疗器械10.3.6.2.2 供试品和试剂：10.3.6.2.2.1培养基：硫乙醇酸盐流体培养基（用于好氧菌和厌氧菌）、改良马丁培养基（用于真菌）、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基（均由中国生物制品检定所提供）10.3.6.2.2.2菌种：均由中国生物制品检定所提供菌种名称菌株编号对应培养基金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus CMCC( 26 003 硫乙醇酸盐流体培养基铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa CMCC( 10 104 硫乙醇酸盐流体培养基枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CMCC( 63 501 硫乙醇酸盐流体培养基生孢梭菌Clostridium sporogenes CMCC( 64 961 硫乙醇酸盐流体培养基白色念珠菌Candida albicans CMCC(F) 98 001 改良马丁培养基黑曲霉菌Aspergillus niger CMCC(F) 98 003 改良马丁培养基10.3.6.2.2.3 供试品：氧氟沙星葡萄糖注射液（本公司自制）规格：100ml：0.2g，批号：0502011、0502021、050203110.3.6.2.2.4 稀释液、冲洗液及溶解液的制备：0.1%蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
0.9%无菌氯化钠注射液取0.9%氯化钠注射液（500ml/瓶）1瓶，灭菌保存。
10.3.6.3培养基的系统适用性检查10.3.6.3.1 无菌性检查每批培养基随机取6瓶，在各自条件下培养14天，逐日观察，结果均无好氧菌、厌氧菌和真菌生长，符合无菌要求。
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注射液无菌检查方法（中国药典2010版）验证方案验证方案编号：2010•MEF•041•05•004
起草单位(Composed by)：质检部(QC Department)
起草人(Composer)：日期(Date)：
审核人(Reviewed by QC)：日期(Date)：
审核人(Reviewed by QA)：日期(Date)：
批准人(Approved by)：日期(Date)：
目录
1. 验证目的
2. 验证人员
3. 验证依据及参考文件
4. 仪器与设备
5. 验证过程
5.1 培养基及稀释液5.2 菌液的培养与制备
5.3 方法验证试验
6. 验证总结
1. 验证目的：
本试验是注射液的抑细菌、抑真菌活性及所用的无菌检查方法的可靠性进行验证，以确认该产品在该检验量、该检验条件下无抑菌活性或其抑菌活性已被充分消除至可以忽略。
即：保证所用的无菌检验方法能对该产品进行准确、可靠的检验。
2. 验证人员：
验证小组组长：刘长宏
验证小组副组长：宋芳良
验证小组成员：曲晓燕、常西胜
3. 验证依据及参考文件：
验证依据：中华人民共和国药典2010版二部
参考文件：2010年版中国药典无菌检查方法、验证操作学习班讲稿汇编（中国药品检验所）
4. 仪器与设备
XG1.DM-0.36B型机动门脉冲真空灭菌器
细菌培养箱
霉菌培养箱
净化工作台
5. 验证过程：
5.1 培养基及稀释液
5.1.1 培养基及稀释液的配制
按“中国药典2010版二部附录Ⅺ H无菌检查法”中，有关规定配制本验证所需培养基:
5.1.2培养基的适用性检验
5.1.2.1 培养基无菌性检查
从以上培养基及稀释液中，每批随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。
结果记录：
结论：
5.1.2.2 培养基灵敏度检查
取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天，逐日观察结果。
取每支装量为9ml的改良马丁培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天，逐日观察结果。
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则可判该培养基的灵敏度检查符合规定。
较差记为“差”。
记为“差”。
结论：
5.2 菌液的培养与制备
5.2.1 菌种
5.2.2菌液制备
接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时。
用0.9％无菌NaCl溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
取肉汤培养物1ml＋9ml0.9％无菌NaCl溶液，十倍稀释至10－5～10－7稀释级可得约为50～100cfu/ml的菌悬液。
用营养琼脂培养基做活菌计数备用。
接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时。
用0.9％无菌NaCl溶液稀释至10－5～10－7稀释级制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23~28℃培养24~48小时。
用0.9％无菌NaCl溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
取改良马丁培养物1ml＋9ml0.9％无菌NaCl溶液，十倍稀释至10－5～10－7稀释级可得约为50～100cfu/ml的菌悬液。
用改良马丁琼脂培养基做活菌计数备用。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基斜面培养基中，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌NaCl溶液，将孢子洗脱。
然后，吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌NaCl溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。
取培养物1ml＋9ml0.9％无菌NaCl溶液（含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80）十倍稀释至10－4稀释级可得约为50～100cfu/ml的孢子悬液。
用改良马丁琼脂培养基做活菌计数备用。
菌液制备后在常温下放置，并在2小时内使用。
若保存在2-8℃，可在24小时使用。
结论：
5.3 方法验证试验
按中国药典2010版二部规定，根据下表中预定检验方案，将规定量的注射液供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中分别加入小于100cfu 的试验菌之一，过滤。
取出滤膜接种至相应培养基中（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基中；白色念珠菌、黑曲霉接种于改良马丁培养基中）。
另取一装有同体积培养基的容器，加入等量的相应试验菌，作为对照。
按规定温度培养3～5天，观察各试验管生长情况。
各试验菌同法操作。
与对照管（只加阳性菌）相比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则该供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，可以照此检查法进行该产品的日常无菌检查。
如含供试品的任一容器中微生物生长微弱、缓慢或不生长，则该供试品的该检验量在该试验条件下有抑菌作用，可逐一采用以下方法消除或减小该供试品的抑菌性并重新进行方法验证：
（1）增加冲洗量
（2）增加培养基的用量
（3）使用中和剂或灭活剂
（4）更换滤膜品种
同法每个注射液产品至少平行测定三次。
结论：6. 验证总结：。