2010版无菌检查法
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2010版药典无菌检查法的 主要增修订情况
黑龙江省食品药品检验检测所
杨利红
增、修订涉及范围
前言部分 培养基部分 灵敏度检查 稀释液、冲洗液 方法验证 薄膜过滤法 培养及观察 结果判断 表1、表2和表3
前言部分
1、新增规定：“ 防止污染的措施不得 影响供试品中微生物的检出。” 2、新增规定：“ 日常检验还需要对环 境进行监控。” 3、新增规定：“ 无菌检查人员必须具 备微生物专业知识，并经过无菌技术的 培训。
供试品的的无菌检查部分
薄膜过滤法： 1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸 附的滤器及滤膜 2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不 得过1000ml 3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同 验证试验
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的
检验方法 新增规定：冰室的温度应至少为-20℃， 增加：开启容器后 “将供试品转移至无菌容 器中”的操作步骤。
培养基部分
1、删除：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 后 括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说 明 2、删除：2. 改良马丁培养基 后括号 （用于培养真菌）的说明
3、删除：3. 选择性培养基 项下 “ 如对氨基 苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80 （用于非水溶性供试品）或β -内酰胺酶（用 于β -内酰胺类供试品）”等说明。 修订为： 在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、 灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。
亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 卵磷脂 聚山梨酯 硫代硫酸盐 镁或钙离子 对氨基苯甲酸 ß-内酰胺酶
培养基部分
4、按顺序排列归类培养基1.～4. 均为
直接用于无菌检查的液体培养基。
培养基灵敏度检查部分
1、修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法 删除了“用管口带有薄的无菌棉花或纱布
能过滤菌丝的无菌毛细吸管 吸出孢子悬液的
供试品的无菌检查部分
1、阳性对照用量： 原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支 （或瓶）作阳性对照用。” 修订为 ：若采用直接接种法，应增加供试品无菌 检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照 用。 ——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是 固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应 按验证的方法确定。
供试品的无菌检查部分
培养及观察 对于培养14天后，不能从外观上判断有无 微生物源自文库长时，删除了：“或划线接种于 斜面培养基上” 的规定。 同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判 断的规定。
结果判断部分
新增订阳性对照管和阴性对照管的实
验结果对于整体实验结果判断的作用：
“ 阳性对照管应生长良好，阴性对
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·5、增、修订：装有药物的注射器供试
品的检验方法 删除 “装上无菌针头（非包装中所配带 的）” 修订为 “取规定量，排出注射器中的内 容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的 溶剂溶解，直接过滤”
供试品的无菌检查部分
直接接种法
·原直接接种法中删除ß-内酰胺类或
磺胺类供试品
增加 表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法
表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法
干扰物
戊二醛 酚类、乙醇、吸附物 醛类 季铵类化合物（QACs）、 对羟基苯甲酸酯 汞类制剂 双胍类化合物 碘酒、洗必泰类 卤化物 乙二胺四乙酸（EDTA） 磺胺类 ß-内酰胺类抗生素
可选用的中和剂或灭活方法
亚硫酸氢纳 稀释法 稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐 卵磷脂、聚山梨酯
表3
固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少
检验数量
备注中对供试品容器装量不够接种两种培养
基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。
谢 谢！
操作方法”
2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条
件和保存期限：
“ 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时 内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使 用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验 证过的贮存期内使用。”
稀释液、冲洗液及其制备方法部分
2005版： 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 2010版新增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的 适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。”
方法验证试验部分
1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基
灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假
单胞菌，增订了大肠埃希菌。
2、验证试验中样品用量
修订为： 薄膜过滤法验证试验样品量： “ 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜 过滤法过滤。” 直接接种法验证试验样品量： “…其中1管接入每支培养基规定量的供试品量， “ —— 明确了验证试验所需样品量是供试品的 检验量而不是供试品的检验数量。
照管不得有菌生长。否则，试验无
效。”
表1、表2和表3部分
表1
接种每种培养基所需的最少检验数量”
备注中对供试品容器装量不够接种两种培养
基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。
表2
液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少 检验数量
· 备注中对供试品容器装量不够接种两种培养 基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。
黑龙江省食品药品检验检测所
杨利红
增、修订涉及范围
前言部分 培养基部分 灵敏度检查 稀释液、冲洗液 方法验证 薄膜过滤法 培养及观察 结果判断 表1、表2和表3
前言部分
1、新增规定：“ 防止污染的措施不得 影响供试品中微生物的检出。” 2、新增规定：“ 日常检验还需要对环 境进行监控。” 3、新增规定：“ 无菌检查人员必须具 备微生物专业知识，并经过无菌技术的 培训。
供试品的的无菌检查部分
薄膜过滤法： 1、新增规定：抗生素供试品应选择低吸 附的滤器及滤膜 2、新增规定：对每片滤膜的总冲洗量不 得过1000ml 3、新增规定：所用冲洗量、冲洗方法同 验证试验
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·4、增、修订无菌气（喷）雾剂供试品的
检验方法 新增规定：冰室的温度应至少为-20℃， 增加：开启容器后 “将供试品转移至无菌容 器中”的操作步骤。
培养基部分
1、删除：1. 硫乙醇酸盐流体培养基 后 括号（用于培养好氧菌、厌氧菌）的说 明 2、删除：2. 改良马丁培养基 后括号 （用于培养真菌）的说明
3、删除：3. 选择性培养基 项下 “ 如对氨基 苯甲酸（用于磺胺类供试品）、聚山梨酯80 （用于非水溶性供试品）或β -内酰胺酶（用 于β -内酰胺类供试品）”等说明。 修订为： 在培养基灭菌或使用前加入适宜的中和剂、 灭活剂或表面活性剂，其用量同验证试验。
亚硫酸氢纳、巯基乙酸盐、硫代硫酸盐 卵磷脂 聚山梨酯 硫代硫酸盐 镁或钙离子 对氨基苯甲酸 ß-内酰胺酶
培养基部分
4、按顺序排列归类培养基1.～4. 均为
直接用于无菌检查的液体培养基。
培养基灵敏度检查部分
1、修订了黑曲霉的孢子悬液制备方法 删除了“用管口带有薄的无菌棉花或纱布
能过滤菌丝的无菌毛细吸管 吸出孢子悬液的
供试品的无菌检查部分
1、阳性对照用量： 原：“若采用直接接种法，应增加供试品1支 （或瓶）作阳性对照用。” 修订为 ：若采用直接接种法，应增加供试品无菌 检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照 用。 ——因若是液体制剂，应该采用薄膜过滤法，若是 固体制剂每管接种量可能不止1支（或瓶），应 按验证的方法确定。
供试品的无菌检查部分
培养及观察 对于培养14天后，不能从外观上判断有无 微生物源自文库长时，删除了：“或划线接种于 斜面培养基上” 的规定。 同时删除了可根据斜面是否有菌生长而判 断的规定。
结果判断部分
新增订阳性对照管和阴性对照管的实
验结果对于整体实验结果判断的作用：
“ 阳性对照管应生长良好，阴性对
供试品的无菌检查部分
薄膜过滤法
·5、增、修订：装有药物的注射器供试
品的检验方法 删除 “装上无菌针头（非包装中所配带 的）” 修订为 “取规定量，排出注射器中的内 容物，若需要可吸入稀释液或标签所示的 溶剂溶解，直接过滤”
供试品的无菌检查部分
直接接种法
·原直接接种法中删除ß-内酰胺类或
磺胺类供试品
增加 表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法
表1 常见干扰物的中和剂或灭活方法
干扰物
戊二醛 酚类、乙醇、吸附物 醛类 季铵类化合物（QACs）、 对羟基苯甲酸酯 汞类制剂 双胍类化合物 碘酒、洗必泰类 卤化物 乙二胺四乙酸（EDTA） 磺胺类 ß-内酰胺类抗生素
可选用的中和剂或灭活方法
亚硫酸氢纳 稀释法 稀释法、甘氨酸、硫代硫酸盐 卵磷脂、聚山梨酯
表3
固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少
检验数量
备注中对供试品容器装量不够接种两种培养
基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。
谢 谢！
操作方法”
2、新增加稀释后的工作用菌液的保存条
件和保存期限：
“ 菌液制备后若在室温下放置，应在2小时 内使用，若保存在2～8℃，可在24小时内使 用。黑曲霉孢子悬液可保存在2℃～8℃，在验 证过的贮存期内使用。”
稀释液、冲洗液及其制备方法部分
2005版： 1. 0.1%蛋白胨水溶液 2. pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 2010版新增加： “可根据供试品的特性，选用其他经验证的 适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。”
方法验证试验部分
1、验证试验用菌种及菌液制备在培养基
灵敏度所用菌种的基础上，删除了铜绿假
单胞菌，增订了大肠埃希菌。
2、验证试验中样品用量
修订为： 薄膜过滤法验证试验样品量： “ 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜 过滤法过滤。” 直接接种法验证试验样品量： “…其中1管接入每支培养基规定量的供试品量， “ —— 明确了验证试验所需样品量是供试品的 检验量而不是供试品的检验数量。
照管不得有菌生长。否则，试验无
效。”
表1、表2和表3部分
表1
接种每种培养基所需的最少检验数量”
备注中对供试品容器装量不够接种两种培养
基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。
表2
液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少 检验数量
· 备注中对供试品容器装量不够接种两种培养 基的情况，明确规定最少检验数量应加倍。