噬菌体载体word版

第三章噬菌体载体

一、填空题

1．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是—-----------—；二是----------——。

2．第一个报道的全测序的单链DNA噬菌体是ФX174，DNA长5386个碱基对，共一个基因，为一环状DNA分子，基因组的最大特点是—----------—。

3．λ噬菌体的基因组DNA为———————kb，有——多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按—-----—复制，成熟包装(晚期复制)则是按—--------—复制。它有一个复制起点，进行—-------—向复制。λ噬菌体的DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个——个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做——————位点。

4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为————kb，插入的外源片段最大不超过——————kb。

5．野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是————和--------------—。

6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自——、COS位点序列来自—--------—，最大的克隆片段达到—----------—kb。

7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为——个，取代型为——个。

8．野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因是：(1)---------------——(2)——————————(3)—---------------------—。

9． M13单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1)————————(2)—-------------—，

(3)———————————。

10．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA共同构成的，其中来自质粒的主要结构是—-----—，而来自噬菌体的主要结构是—-------------------—。

11．M13单链噬菌体基因2和基因4之间的IG区有三个最重要的功能，即(1)—————(2)—------------—(3)—-------------—。

12．野生型的M13有10个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：——------------------和——-----------------。

13．以丸噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA的长度是不同的，前者为—----—

kb，后者为————kb。

14．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的—---------------—的范围内。

二、判断题

1．取代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在λDNA中具有两个切点。外源D NA通过取代这两个切点问的片段被克隆。

2.现在最常用的pUC载体是pUCl8，它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链DNA．。

3．噬菌粒(phagemid)pUCll8／pUCll9载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA,又能合成双链DNA。

4．λ噬菌体DNA和M13单链噬菌体DNA在成熟前的DNA复制都是用滚环模型。

5． M13噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100个子代噬菌体。

6．以黏粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量是相同的。

三、选择题(单选或多选)

1．限制性内切核酸酶EcoRI在野生型的丸噬菌体DNA中有5个切点、HindⅢ有7个切点，BamHI也有5个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过( )

(a)体内突变 (b)完全酶切后连接

(c)部分酶切 (d)先用甲基化酶修饰后再酶切

2． pBluescriptMl3载体在多克隆位点的两侧引入了T7和T3两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，如：

(a)可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析

(b)利用这两个启动子的通用引物进行PCR扩增

(c)利用通用引物进行序列分析

(d)利用这两个启动子进行定点突变

上述四种功能中哪一种是不正确的?( )

3．下面关于细菌人工染色体(BAC)的特征描述，除了( )外都是正确的。

(a)通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10～100倍

(b)BAC载体在细菌中以环型超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易

(c)BAC载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝

(d)克隆到BAC载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列

4．以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会大小不一、生长速度不一的现象，其原因是( )

(a)营养成分不足

(b)重组后的质粒复制不稳定

(c)重组后的黏粒整合到宿主染色体上

(d)重组体中插入片段的大小不同

5． M13K07是一种辅助噬菌体DNA,可用它帮助噬菌粒制备单链DNA,这是因为( )

(a)M13K07能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA

(b)M13K07能够提供成熟包装的蛋白

(c)M13K07提供了成熟包装所需的信号

(d)M13K07的10个基因都是正常的

6．黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )

(a)它具有COS位点，因而可进行体外包装

(b)它具有质粒DNA的复制特性

(c)进入受体细胞后，可引起裂解反应

(d)进入受体细胞后，可引起溶源化反应

7． Mu噬菌体也是一种转座元件，这种转座元件( )

(a)可引起寄主的突变

(b)可用于细胞内的基因工程

(c)具有转座酶基因

(d)以上说法都正确

8. 关于M13的IG区，下列说法中哪一项不妥当?( )

(a)具有正负链的复制起点

(b)具有噬菌体DNA被包装的信号

(c)具有150个碱基的AT富集区

(d)具有八个回文序列，可形成五个发夹环

9． M13噬菌体基因组编码10个基因，在它的成熟过程中起调节作用的蛋白是( )

(a)gp2蛋白 (b)gp5蛋白 (c)gp7蛋白 (d)gp9蛋白

四、简答题