常见内参基因
关于内参基因的选择
关于内参基因的选择展开全文关于内参基因的选择实验内参，即是在检测细胞内分子表达变化时选择的参照物，其在细胞内的表达相对恒定，在处理因素作用条件下不会发生表达改变的基因。
内参同样可以校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
1、管家基因最普通的内参是内源性参照基因，也就是管家基因（持家基因，house keeping gene）。
管家基因是一类始终保持着低水平的甲基化并且一直处于活性转录状态的基因，高度保守并且在大多数情况下持续表达。
其表达水平受环境因素影响较小，而且是在个体各个生长阶段的大多数，或几乎全部组织中持续表达，或变化很小，因此常存在于生物细胞核的常染色质中。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因维持细胞最低限度功能所不可少的基因, 如编码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基因、糖酵解酶的基因等。
这类基因在所有类型的细胞中都进行表达，因为这些基因的产物对于维持细胞的基本结构和代谢功能是必不可少的。
部分人类管家基因列表2、内参基因选择的条件1、不存在假基因，以免基因组DNA的扩增；2、高度或中度表达，避免太高或太低的丰度；3、稳定表达于不同类型的细胞和组织中，表达量无明显差异；4、表达水平与细胞周期、活化等无关；5、不受外源性或内源性因素的影响。
3、不同管家基因在选择管家基因作为内参时，首先要按不同类型的分子选择正确的内参。
曾看到有人用检测miRNA时选择了GAPDH作为内参呢。
a、检测mRNA时的内参通常使用的是GAPDH、beta-actin、tubulin•GAPHDGAPDHGAPDH是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。
该酶基因为管家（house keeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
转基因植物常见外源基因及内参基因
NPTⅡ：（大肠杆菌，Escherichia coli，strain K12）新霉素-3’-磷酸转移酶。[neomycin-3’-phosphotransferase]
PAT：草丁膦乙酰转移酶。[phosphinothricin acetyltransferase]
李德安转基因植物常见外源基因及内参基因内参基因
转基因植物常见外源基因及内参基因
内参基因：
Gos：（大米，Oryza sativa）
Ivr：（玉米，Zea mays）转化酶1。[invertase 1]
Lectin：（大豆，Glycine max）植物血凝素。
Patatin：（马铃薯，Solanum tuberosum）块茎贮藏蛋白。
NOSterminator：（根瘤农杆菌，Agrobacterium tumefaciens）烟酰碱合成酶基因终止子。[nopaline synthase]
外源基因：
ACCD：1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶。[1-aminocyclopropane-1-carbox1A(b/c)：（苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种，Bacillus thuringiensissubsp. Kurstaki，strainHD-1 and HD-73）杀虫晶体蛋白b和c的融合蛋白，对鳞翅目昆虫尤其有效。
Cry3A：（苏云金芽孢杆菌拟步行甲亚种，Bacillus thuringiensissubsp. Tenebrionis，strain BⅠ256-82）杀虫晶体蛋白，对科罗拉多马铃薯甲虫（Colorado patato beetle）的幼虫尤其有效。
Pg：（蕃茄，Lycopersicon esculentum）多聚半乳糖醛酸酶[polygalacturonase]
内参基因
何为内参基因1、我记得常用的就是[color=magenta]GAPDH[/color]（3-磷酸甘油醛脱氢酶）和actin，至于什么是内参，可以打个比方，比如我们要比较两个不一样大的西瓜的含糖量，不好直接比较，那就找他们都有的东西来比较，就拿西瓜子嘛，假设西瓜子是均匀分布的，而且随着西瓜的变大，糖分的增多，西瓜子也变多，那么这个西瓜子就可以作为内参了！不知比方准确否，请高手指教，共同进步！2、内参基因一般会选管家基因，是维持细胞基本代谢活动所必须的基因，在各组织和细胞中的表达相对恒定，如：GAPDH、Actin、18S rRNA等3、内参基因,表达稳定，通常用的有GAPDH,beta-actin，18s rRNA等内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时使用绝对标准品，也可以使用相对标准品，而且相对标准品在实验操作上更为简便易行。
相对标准品是只知道样品中DNA或RNA的稀释比例而不需要知道其分子数目的标准品，典型的做法是将一个已知pg数的样品做一系列梯度稀释。
CT值比较法是利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分比，其计算公式是绝对定量的数据易于理解，但是绝对标准品的制备和测定其DNA含量比较困难。
有许多商业性的标准品试剂盒供选购，可以解决这种困难。
相对定量的标准品容易在实验室里自己制备，但是数据处理比较麻烦，对实验数据的解释有一定难度。
定量PCR问题--标准曲线法相对定量的数据应该怎么处理？假设实验的目标是研究药物处理后0、24、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化，所用的内对照是18S RNA基因。
IL-2和18S RNA的测定结果都是总RNA的pg数，数据的处理方法见下表：定量PCR问题--什么是CT值比较法？数据怎么处理？CT值与起始DNA浓度的对数成反比：如果(1)不同管之间的PCR反应效率相同；(2)这些PCR的反应效率接近100%，可以从上面的公式推出相对含量(X01/X02) = 2 -ΔΔCT假设实验的目标是研究药物处理后0、24、48小时IL-2基因在某种组织中的表达量的变化，所用内对照是18S RNA基因。
内参基因的概念
内参基因的概念 Revised by Chen Zhen in 2021内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
PCR内参：选还是不选？,PCR内参,RT
PCR内参：选还是不选？,PCR内参,RT生物帮> 专题> 实验技术> 分子> PCR内参：选还是不选？导读：内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。
本专题就PCR实验中遇见的有关于内参的一些问题作出总结，以供读者参考。
PCR内参基因介绍GAPDH简介内参基因β-Actin简介实时荧光定量PCR 中内参基因的选择内参基因的概念和作用PCR内参基因介绍基因表达转录分析中内参基因的选择目前基因表达的转录分析多采用单一看家基因作为内参来校正目标基因的表达量.实验中以人肝癌BEL-7402细胞为研究对象，应用[详细]海带配子体18S rRNA 基因作为内参基因的应用通过基因克隆和序列测定,获得了海带( Laminaria japonica) 配子体的18S rRNA 基因序列,其长度为1 716bp ,GenBank 登录号为EU293553。
以蓝[详细]白纹伊蚊β2肌动蛋白基因片段作为基因表达内参目的获取白纹伊蚊β2肌动蛋白基因序列并探讨其作为基因表达内参照的作用。
方法根据昆虫β2肌动蛋白核苷酸序列[详细]常用的内参基因及其使用范围包括GAPDH 、β- actin(BETA-actin) 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等。
[详细]常用的β-actin 引物序列常用的β-actin 引物序列[详细]RT-PCR常用引物序列引物应该用TE稀释。
oligo在酸性条件下是不稳定的，容易降解，如果用水溶解引物，无法保证pH值，如果合成引物纯化不好，造[详细]PCR内参常见问题汇总内参能跑出来但为何我的cDNA总是不稳定？我要做荧光定量试验，师姐做的定性，我能共用RT-PCR电泳照片有问题qPCR 目的基因与内参是不是要在同样体系里扩增斑马鱼的内参基因组怎么选择啊绝对定量需要用到内参基因吗选择内参基因的原则PCR内参常见问题汇总RT-PCR内参基因选择：除了β-actin还能用什么？实时定量PCR试验中，内参对于实验具有重要意义。
鼠李糖乳杆菌内参基因
鼠李糖乳杆菌内参基因
鼠李糖乳杆菌内参基因是一种常用的内参基因，它在基因表达研究中具有重要的作用。
内参基因是指在实验中不受处理影响，表达稳定的基因，用于标准化实验结果，以消除实验误差。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性。
鼠李糖乳杆菌是一种革兰氏阳性菌，广泛存在于自然界中。
它是一种重要的乳酸菌，可以用于制作酸奶、酸乳等乳制品。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性。
研究表明，鼠李糖乳杆菌内参基因gyrB、rpoB、recA、atpD、ldh等在不同条件下表达稳定，可以作为内参基因使用。
在基因表达研究中，内参基因的选择非常重要。
如果选择不当，会导致实验结果的误差，影响实验的可靠性和准确性。
因此，在选择内参基因时，需要考虑多个因素，如基因表达稳定性、表达水平、特异性等。
鼠李糖乳杆菌内参基因的选择是基于其在不同条件下表达稳定的特性，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
总之，鼠李糖乳杆菌内参基因是一种常用的内参基因，具有表达稳定的特性，在基因表达研究中具有重要的作用。
在选择内参基因时，需要考虑多个因素，以保证实验结果的准确性和可靠性。
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因
小鼠常用内参基因是进行实验研究时非常重要的工具，内参基因是一种用于标准化实验结果的参照基因，用于减少实验中因样本差异和反应效率的影响。
在小鼠实验中，常用的内参基因包括GAPDH、β-actin和18S rRNA等。
GAPDH（糖酵解酶）是一种广泛存在于细胞中的酶，参与细胞内的糖酵解代谢过程，同时也是常用的内参基因。
在小鼠实验中，GAPDH 的mRNA水平是相对稳定的，因此可以作为实验中的内参基因使用。
另一个常用的内参基因是β-actin（β-肌动蛋白），β-actin
是构成细胞骨架的主要成分之一，也是一种常用的内参基因。
在小鼠实验中，β-actin的mRNA水平也是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
18S rRNA是小鼠细胞中的核糖体RNA，也是常用的内参基因之一。
18S rRNA的mRNA水平在细胞中是相对稳定的，因此可以用来进行实验结果的标准化。
除了上述几种常用的内参基因外，还有许多其他的内参基因可以用于小鼠实验中。
但无论选择哪种内参基因，都需要进行验证，确保其在实验条件下的稳定性和可靠性。
只有选择合适的内参基因，才能保证实验结果的准确性和可靠性。
- 1 -。
【实验资源】qPCR 内参基因选择
➢内参基因使用总结
RT-PCR和qPCR
Western blot
GAPDH Actin Tubulin
涉及代谢及ATP合成和消耗，在组织下如 缺氧，骨骼肌（肌肉组织）等情况GAPDH 不适合作mRNA为内参
涉及代谢及ATP合成和消耗，在组织下如缺氧，B细 胞和T细胞，血浆，组织液及部分肿瘤中不用作内 参。膜蛋白，多组织和多细胞水平western ，适 合选择GAPDH作为内参
➢内参基因18S rRNA
rRNA的合成是由RNA聚合酶I合成，而mRNA是由RNA聚合酶II合成，因此 18S和28S rRNA合成的调节独立于mRNA，在影响mRNA表达的各种条件下， 18S和28S rRNA水平很少发生变化，常用作内参基因。
➢内参基因18S rRNA
18S rRNA内参基因的应用和注意事项
➢内参基因Actin
内参基因Actin选择和注意事项
1).研究模型是心肌，骨骼肌或者平滑肌 (这些组织有特异的actin) 2).肌肉组织 (由于肌肉组织中β-actin分布很少，不易检测) 3).在缺氧条件（哮喘）下，β-actin表达不稳定 4).某些特殊组织（T和B淋巴细胞，血液），β-actin不适合作内参
不用做western内参
其他
细胞核内蛋白或转录因子，可用组蛋白H3和组蛋白 H2A为内参，此外还有Lamin，K70， K80等
本节内容结束
涉及代谢及ATP合成和消耗，GAPDH一般不能用，此外在特定环境及组织下 如缺氧，骨骼肌（肌肉组织）等GAPDH 不适合作mRNA为内参。
➢内参基因Actin
Actin 是是横纹肌肌纤维中的一种主要的蛋白成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主 要成分，存在于所有的真核细胞中并且高度保守。Actin基因具有组织特异性。
tert基因内参基因
tert基因内参基因内参基因的特性内参基因是用于归一化基因表达水平的稳定基因，在不同实验条件下其表达水平保持相对恒定。
理想的内参基因应具备以下特性：表达稳定性：在不同的组织、发育阶段、实验条件和处理下，表达水平始终保持稳定。
物种保守性：在不同物种中具有相似的序列和功能，以确保跨物种比较的准确性。
检测范围：具有足够的检测范围，以量化不同样品中的基因表达水平。
扩增效率：与目标基因具有相似的扩增效率，以避免引入偏差。
tert基因作为内参基因tert基因（端粒酶逆转录酶）编码端粒酶催化亚基，负责维持真核细胞端粒的长度。
它被广泛用作内参基因，因为它具有以下优点：表达稳定性： tert基因在多种细胞类型和实验条件下表现出稳定的表达，使其成为可靠的内参。
物种保守性： tert基因在不同的哺乳动物物种中高度保守，这使其适用于跨物种研究。
检测范围： tert基因的表达水平在不同样品中通常处于中等范围，使其在各种实验中都适用。
扩增效率： tert基因的扩增效率通常与典型目标基因相似，这有助于确保定量分析的准确性。
其他可用内参基因除了tert基因，还有其他常用内参基因，包括：GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）：一种在糖酵解中起作用的家政基因，具有稳定的表达水平。
ACTB（β-肌动蛋白）：一种参与细胞骨架形成的结构蛋白，在多种细胞类型中具有可靠的表达。
18S rRNA：一种核糖体RNA，其表达在不同组织和条件下通常保持稳定。
内参基因选择选择合适的内参基因至关重要，以确保基因表达分析的准确性和可靠性。
以下准则是内参基因选择的考虑因素：实验的具体要求和目标基因的特性。
组织类型和实验条件。
文献中已确定的可靠内参基因。
结论tert基因是常用的内参基因，具有表达稳定性、物种保守性、检测范围和扩增效率等优点。
它对于归一化不同实验条件下基因表达水平的分析至关重要。
然而，在选择内参基因时，应根据实验的具体要求和目标基因的特性进行仔细考虑。
RT-PCR的内参基因
RT-PCR的内参基因RT-PCR（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）是一种常用于检测RNA 分子的技术方法。
在进行RT-PCR实验时，为了准确测量目标基因的表达水平，通常需要选择一个合适的内参基因作为参照。
内参基因是在不同条件下表达稳定的基因，其表达水平相对不会受到实验条件和样本差异的影响，因此可以作为一个相对稳定的标准来校正目标基因的表达水平。
内参基因的选择是RT-PCR实验中一个非常关键的步骤。
一般来说，内参基因应满足以下几个条件：1.广泛表达：内参基因应在所研究的样本中广泛表达，以确保其在不同条件下的表达水平相对稳定。
此外，内参基因的表达水平还应适中，不过高也不过低，以便在实验中能够得到可靠的PCR信号。
2.稳定表达：内参基因的表达水平不应受到实验条件和样本差异的影响。
可以通过文献综述和实验验证来确定内参基因的稳定性。
常用的内参基因包括GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）、β-actin、18S rRNA等。
3.没有相关性：内参基因与目标基因之间应尽量没有相关性，以避免内参基因的表达水平受到目标基因表达的影响。
为了评估目标基因和内参基因之间的相关性，可以使用统计学方法分析它们的表达水平之间的关系。
在选择内参基因时，还应避免使用过多的内参基因。
过多的内参基因可能会增加实验的复杂性，并且在数据分析中会带来更多的变量。
一般来说，使用2-3个合适的内参基因就可以获得较为可靠的结果。
此外，为了验证所选择的内参基因在实验条件下的稳定性，还应进行合适的实验控制。
例如，可以比较不同处理组的内参基因表达水平，或者在同一组样品中进行RT-PCR 实验的重复。
通过这些控制实验，可以评估内参基因的表达水平是否受到实验条件的影响。
总之，选择合适的内参基因是进行RT-PCR实验中一个至关重要的步骤。
内参基因的概念
内参基因的概念 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参即是内部参照
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等正向引物（上游引物）是沿着负链进行不间断延长的反向引物（下游引物）是沿着正链进行一段段延长的正链是含有目的基因的那条链。
RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。
逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。
原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。
RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。
（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。
常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus,AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia vrius,MMLV）反转录酶。
RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。
为了与逆转录PCR相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。
荧光定量pcr内参基因
荧光定量pcr内参基因
荧光定量PCR是一种常用的分子生物学技术，常用于测量目标
DNA的含量。
在PCR反应中使用内参基因来标准化目标基因的表达是
很重要的，因为它可以消除反应的效率差异和不同样品之间的差异性。
内参基因也被称为参比基因或标准基因，它们是稳定表达的基因，其
表达量在各个细胞和组织中基本不变。
通过选择一个稳定的内参基因，可以确保PCR反应的可靠性和准确性。
以下是一些常用的荧光定量PCR内参基因：
1. GAPDH：糖酵解途径中的酶，参与氧化糖分解过程，在多个细胞和
组织中表达水平稳定。
2. β-actin：负责细胞的细胞骨架形态维持，在多个细胞和组织中表达水平稳定。
3. 18S rRNA：核糖体组成部分之一，在不同种类的细胞和组织中表达
水平相对稳定。
4. HPRT：鸟嘌呤磷酸核苷酸转移酶，参与细胞DNA合成，在多个细
胞和组织中表达水平稳定。
5. Cyclophilin A：负责细胞免疫应答和蛋白质折叠，在不同种类的细胞
和组织中表达水平相对稳定。
选择合适的内参基因并进行相关实验前，需要充分了解目标基因和研究细胞/组织的特点。
同时，还要确定一个高质量的RNA样品并进行RNA纯化和浓度测定等步骤。
只有这样，荧光定量PCR才能提供可靠准确的分析结果。
常见内参基因
β-A c t i nActin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。
同时Actin在细胞分泌、吞噬、β-Actin移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。
Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscleactin。
不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。
β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。
具有收缩功能，分布广泛。
β-Actin用途β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。
染色质免疫共沉淀 内参基因
染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是一种常用的分子生物学技术，用于研究特定蛋白质与染色质的相互作用。
在ChIP实验中，通常需要使用一个内参基因（Internal Control Gene）来进行标准化和相对定量分析。
内参基因是一个在实验条件下稳定表达的基因，其表达水平不受实验条件影响，通常被用作实验的比较基准。
选择合适的内参基因对ChIP实验的准确性和可靠性至关重要。
以下是一些常用的内参基因，可以在ChIP实验中进行使用：
1. GAPDH（糖酵解途径的磷酸化酶酶）：GAPDH是一个常用的内参基因，参与糖酵解途径，在许多条件下都表达稳定。
2. ACTB（β-actin）：β-actin是细胞骨架中的重要蛋白质，也是常用的内参基因。
3. 18S rRNA（18S核糖体RNA）：18S rRNA是核糖体RNA的一部分，其表达水平相对稳定，可用作内参基因。
4. TBP（TATA-box结合蛋白）：TBP是转录起始点附近的一个常见结合蛋白，其表达水平在一些条件下相对稳定。
5. RNAPolII（RNA聚合酶II亚单位）：RNA聚合酶II是参与基因转录的主要酶，其亚单位在ChIP实验中常被用作内参基因。
在进行ChIP实验时，研究者通常会验证选定的内参基因是否在实验条件下保持稳定表达，并使用合适的实验对照组来进行比较。
选择合适的内参基因可以帮助消除实验误差，提高数据的可靠性和解释性。
常见内参基因
常见内参基因 Revised by Petrel at 2021β-A c t i nActin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。
同时Actin在细胞分泌、吞噬、β-Actin移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。
Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和γ-non-muscleactin。
不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。
β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。
具有收缩功能，分布广泛。
β-Actin用途β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH （glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
内参基因的概念
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录PCR也和传统的mRNA定量方法如Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因的概念
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
β-A c t i n
Actin即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。
同时Actin在细胞分泌、吞噬、
β-Actin
移动、胞质流动和胞质分离等过程中起重要作用。
Actin在不同物种之间高度保守，以至于很难获得较好的针对actin的抗血清。
Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，包括α-skeletalmuscleactin，α-cardiacmuscleactin，α-smoothmuscleactin，和
γ-smoothmuscleactin；其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin(β-non-muscle)和
γ-non-muscleactin。
不同的actin之间同源性大于90%，但在N-terminal同源性仅50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。
β-Actin是横纹肌肌纤维中的一种主要蛋白质成分，也是肌肉细丝及细胞骨架微丝的主要成分。
具有收缩功能，分布广泛。
β-Actin用途
β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是WesternBlot很好的内参指数。
内参即是内部参照（InternalControl），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白。
它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的蛋白质内参有细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin和GAPDH
（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）等。
因此β-Actin抗体、β-Tubulin抗体以及GAPDH抗体成为最常见的三个动物细胞内参抗体。
β-Actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富。
Beta-actin 由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。
β-actin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western时上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微丝结构。
在用作Western的参照时，Actin抗体和Tubulin抗体的主要不同之处在于两者所识别蛋白的分子量不同，这样可以选择合适的参照在同一块胶同一张膜上实现同时检测目标蛋白和参照蛋白。
GAPDH
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶
（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase）的英文缩写。
该酶是糖酵解反应中的一个酶，由4个30－40kDa的亚基组成，分子量146kDa。
该酶基因为管家（housekeeping）基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定，故被广泛用作抽提totalRNA，poly(A)+RNA，Westernblot等实验操作的标准化的内参。
GAPDH结构图
常用的内参有，ACTB（β-actin、β-肌动蛋白）、GAPDH或18S等。
目的是在于避免RNA 定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误差、这些都是管家基因，在各个组织中的表达量相对稳定，其中18S同整个基因谱有关（负责装配），它在总RNA中占的比例最高。
转染了GAPDHsiRNA.jpg
转染了GAPDHsiRNA的Hela细胞
转染了GAPDH相关siRNA的HeLa细胞在转染后48小时后不断增殖。
红：被标记的siRNA；蓝：被染色的细胞核；绿色：GAPDH蛋白；（这些siRNA锐博生物均可提供）阴性对照（scrambledsiRNA）的导入（左）对GAPDH蛋白的表达没有影响，不过若转入一个以GAPDH（右）为靶标的siRNA，则会导致GAPDH蛋白表达水平的急剧下降。
GAPDH作为内参
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。
GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Westernblot蛋白质标准化的内参。
因为GAPDH作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。
GAPDH的分子量约为37ku.。