3M细菌总数测试片操作以及判读
3M环境李斯特菌测试片操作以及判读
3M环境李斯特菌测试片操作以及判读3M 环境李斯特菌测试片操作以及判读一、测试环境李斯特菌数操作方法1.将未开封的测试片贮藏在<=8o C (46oF)的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。
在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。
2.已开封的测试片，将开口反折，用胶带封好。
3.为防止暴露于潮湿的环境中，请不要冷藏已开封的测试片。
将胶带封好的测试片贮藏在低温干燥的地方，保持时间不超过1个月。
请勿将测试片放在温度>25oC (77oF)和(或)相对湿度>50%的环境中。
4.用涂抹棒、海棉或其它采样设备收集环境样本。
湿润采样设备的液体应<=10mL。
湿润剂可以是无菌水、缓冲蛋白胨水(Buffered Peptone Water,BPW)，或中和缓冲液，如Letheen 肉汤或Dey/Engley (DE)中和肉汤。
5.在无菌环境下在收集的样品中添加5mL，20-30oC，灭过菌的缓冲蛋白胨水(BPW)溶液。
不要将Petrifilm EL 测试片与Vermont 培养基(UVM)、Fraser 肉汤、李斯特菌增菌培养基(LE B)或缓冲李斯特菌增菌培养基(BLEB)共用。
6.混合，蠕动或旋转样品与BPW 的混合液将近一分钟。
将样品置于室温(20-30oC)1h，最久不超过1.5h，以修复损伤的李斯特菌。
7.将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8.用3M TM电子移液枪或其它移液器垂直滴加3mL 样品到下层膜的中央。
9.将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。
10.轻轻地将塑料压板放在位于接种区上层膜上。
不要压，扭转或滑动压板。
提起压板。
等至少10分钟，以使胶体凝固。
11.将测试片透明面朝上，可叠放至10片，在35o C±1o C或37o C±1o C下培养28h±2h。
12.Petrifilm EL测试片能够用标准的菌落计数器或其它光学放大器计数或判读。
3M PetrifilmTM 肠杆菌科测试片法
Microbiology
3M PetrfilmTM 肠杆菌科测试片法
检样 25g(ml)样品＋225ml 稀释液
10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，接种Petrifilm测试片
371°C, 24 2h
菌落计数
Copyright 3M China Ltd.
结果报告
Microbiology
好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌
氧化酶阴性
氧化酶阳性
肠杆菌科
乳糖发酵
非乳糖发酵
埃希氏菌 克雷伯氏菌 柠檬酸杆菌 等
Copyright 3M China Ltd.
沙门氏菌 志贺氏杆菌 耶尔森氏菌 普罗威登斯菌等
Microbiology
什么是肠杆菌科？
革兰氏阴性 无芽孢杆菌 氧化酶阴性 发酵葡萄糖产酸或产酸产气 习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜 在干燥环境中存活性差 对热敏感 部分对人体有致病性
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
操作时的注意点
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
食品与环境中 肠杆菌科和大肠菌群检测的对比试验
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
Microbiology
3MTM PetrifilmTM 霉菌酵母测试片
标准培养基 抗生素抑制细菌生长 叠放片数小于20片 磷酸酶指示剂 3-5天，21-25°C AOAC官方方法
997.02
Copyright 3M China Ltd.
Microbiology
3M大肠菌群的测定
实验目的
学习并掌握国标GB/T 4789.38—2008标准中 规定食品中大肠菌群的测定方法。
大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气。需氧 和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源 于人畜粪便，故此作为粪便污染指标来评价食品的卫 生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了食品是否 被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌 污染的可能性。
计数菌落数大于150个的测试片时，可计数一 个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成 单个方格内的菌落数后乘以20即为测试片上估算的 菌落数（圆形生长面积为20 cm2）。食品中最终菌 落浓度的单位以“cfu/g (mL)”表示，表面上菌落数以 “cfu/cm2”表示。
3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片
• 含有改良的VRB培养基 • 目标菌落为红色带气泡 • 35±1°C, 24 ±2 h培 养 • AOAC Offical Method 991.14
3M PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片
样品制备
样品制备
接种
接种
接种
培养
解释
3. 接种 将PetrifilmTM大肠菌群测试片或PetrifilmTM 大肠杆菌/大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开 上层膜，用吸管吸取1 mL样液垂直滴加在测试片的 中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜 直接落下，把压板（平面底朝下）放置在上层膜中 央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面 积上。拿起压板，静置至少1 min以使培养基凝固。
在PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片上， 蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌。蓝色有气泡 和红色有气泡的菌落数之和为大肠菌群数。培养 圆形面积边缘上及边缘以外的菌落不做计数。出 现大量气泡形成、不明显的小菌落，培养区呈蓝 色或暗红时，进一步稀释样品可获得准确的读数。
MPetrifilm酵母菌与霉菌快检片判读手册
Estimated Yeast Count ~TNTC (actual count >104) 圖 4 顯示 Petrifilm YM (TNTC 數量太多 而無法計算)，可以發現在培養區邊緣 有許多小的藍色菌落(上方方框)，
Estimated Mold Count~64 圖 5 測試片上的菌落彼此推擠覆蓋，可由 菌落的邊緣或中心焦點計數。亦可將測試 片分成幾個區域計算，本例分成 4 個小區 域，計算右下角區塊可得 16 個黴菌菌落 數。
3M
Petrifilm Yeast and Mold Count Plate
酵母菌及黴菌快速檢驗測試片 判讀手冊 3M Petrifilm Yeast and Mold Count Plate (YM)，內含培養基、水溶膠、和方便判讀的呈色 劑。
Total Count =20 Yeast Count =16 Mold Count =4 Petrifilm YM 可以同時培養酵母菌及黴菌
。大形菌落 。菌落有擴散的邊緣 。各種顏色(棕色、米黃色、橙色、藍綠色) 。菌落為平面狀 。菌落中心顏色較深(亦可能不同顏色)
圖 11.揭起上層膜並從培養基 中挑起菌落，進一步鑑定。
圖 12.將菌落移到滴上無菌水 的載片上，蓋上蓋玻片並以 顯微鏡觀察。
圖 13.酵母菌為卵圓形或有出 芽生殖現象。
圖 14.黴菌為有分枝或成串的 菌絲。
3M Petrifilm Yeast and Mold Count Plate
Yeast and Mold Count =0 圖 2 顯示 Petrifilm YM 測試片上沒有酵母 菌及黴菌生長。
Estimated Total Count~500 Estimated Yeast Count~480 Mold Count =21 微生物培養圓形區域面積為 30cm²，若菌落數超 過 150 可使用估計方法，先計算數個 1cm²菌落 求其平均數，然後乘以 30。 酵母菌顏色為粉棕 色至藍綠色。
项目实训手册-项目9-方便面菌落总数快速检验-3M试纸片概要
《食品微生物检验技术》课程实训指导手册项目九方便面菌落总数快速检验-3M试纸片（依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片操作说明书）一、实训目的以3M试纸片进行样品中菌落总数计数，熟练使用各类3M试纸片进行检验操作，明确常用微生物快速检验方法的原理与优缺点与注意事项。
二、实训原理Petrifilm TM是3M公司专利发明，将传统的琼脂平板或试管的培养方法浓缩在小小的一张测试片上，现阶段共有十余种测试片，比较常用的有：菌落总数测试片、大肠菌群计数测试片、快速大肠菌群计数测试片、高灵敏度大肠菌群计数测试片、大肠杆菌/大肠菌群计数测试片、肠杆菌科测试片、霉菌和酵母菌计数测试片、快速金黄色葡萄球菌计数测试片、环境李斯特菌测试片三、实训要求本项目3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验依据SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法与3M试纸片说明书进行检验操作，标准与操作说明书规定了3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验的基本要求、操作程序和结果判定。
本项目全面考察学生依据标准与操作说明进行微生物快速检验的能力。
本项目实施过程可分为样品准备、接种、培养、计数4个步骤。
本项目按2人/组为单位进行操作，要求在实验室完整使用3M试纸片进行样品中菌落总数计数快速检验。
四、实验材料和设备1试剂和溶液无菌生理盐水、75%乙醇。
2 仪器和设备除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料包括冰箱、天平、剪刀、镊子、移液管、锥形瓶、试管、恒温培养箱、均质器及耗材、达到精度要求的pH计，超净工作台或百级洁净实验室。
五、实训任务（包含结果计算）1、样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。
如有包装，用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。
a）固体和半固体样品：无菌操作，称取25 g样品置盛225 mL生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
3M检测纸片与国标方法相关性实验观察
３Ｍ检测纸片与国标方法相关性实验观察赵君周媛媛(本文字数：2798)《中国食品工业》2005年第8期字号：【大中小】传统的微生物学检测方法是概率理论与实验设计方法在细菌测定上的实际应用，被定为国标法；3M公司生产的细菌总数及大肠菌群检测纸片，含有VRB(Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁（tetrazolium）指示剂，可增强菌落计数效果，其表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体。
美国3M的细菌总数及大肠菌群检测纸片，目前尚未在国内实验室普遍应用。
为进一步了解其与目前实行的国标法之间的相关性，同时使用国标法和3M纸片法，对随机抽取的252件食品样本，进行了1:1配对实验比较和计数资料结果的统计分析，现将结果报告如下。
材料及方法1 样本所辖19家宾馆、招待所随机抽取的252件冷荤凉菜，其中熟肉制品71份，豆制品45份，冷食菜136份，采样方法见GB 4789.1-94,冷链箱保存，4小时内检测。
2培养基及制备2.1 营养琼脂培养基2.2 磷酸盐缓冲稀释液2.3 生理盐水2.4 75%乙醇2.5 乳糖胆盐发酵管2.6 伊红美蓝琼脂平板2.7 EC肉汤2.8 革兰氏染色液2.9 3M公司的细菌总数及大肠菌群快速检验测试片3方法3.1 实验设计按1:1配对设计。
所有样品均以国标法(细菌总数为平皿法，大肠菌群为9管发酵法)、3M 纸片法同时进行试验。
3.2 试验方法国标法3M 纸片3.3 SPSS统计软件，进行1:1配对资料的χ２检验，计算双侧精确概率（P）、相关系数（r），观察显著性和相关性；进行Kappa检验, 计算系数（k），观察吻合度。
4结果判定传统国标法熟肉制品：细菌总数≤80000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/100g视为阴性。
豆制品、冷食类：细菌总数≤ 5000cfu/g视为阴性，大肠菌群≤150个/ 100g视为阴性。
纸片法：见细菌总数快速检验测试片判读手册，大肠菌群及大肠杆菌快速检验测试片判读手册。
沙门氏菌
改
记
录
修改标记
处数
修改人室
作业指导书
文件编号
LC/CEC-07
版本/修订
A/0
页码
共4页第4页
标题：沙门氏菌检测3MPetrifilmTM测试片法
4.16.加入终止液.酶标仪进行判定结果
5.判读结果.使用酶标仪
使用酶标仪在414±10nm处读取样品的吸光度值。如果使用单波长酶标仪，可用盛有200ul水的微孔板做空白.如果使用双波长，以空气做空白，参比波长为490±40nm
4.9.封好微孔后，将微孔板置于培养箱内36℃±1℃孵育30min
4.10.取出微孔板，冲洗微孔3次
4.11分别添加200ul结合物到每个微孔内。
4.12.封好微孔后，将微孔板置于培养箱内，36℃±1℃孵育30min
4.13.取出微孔板，冲洗微孔4次。
4.14.分别添加200ul底物到每个微孔内。
4.15.置于室温下放置10min后即可参照比色卡用肉眼判读颜色。。
。吸光度值大于等于0.3的样品为阳性。注意阳性对照液的酶标仪读数至少达到1.0，并且阴性对照液的酶标仪读数小于0.2.此试验结果有效。
修
改
记
录
修改标记
处数
修改人/日期
批准人/日期
A/0
页码
共4第3页
标题：沙门氏菌检测3MPetrifilmTM测试片法
4.操作步骤.
4.1取25g样品..
4.2充分均质.
4.3.前增菌：将均质好的样品.→无菌锥形瓶盛有225ml前增菌（乳糖肉汤）36℃±1℃培养18h～22h.
4.4选择性增菌：移取0.1ml前增菌液到9.9ml RV{R10}中培养.42℃±1℃. 16ｈ～20h
测菌片的使用方法
测菌片使用方法
1、取冷却液的工作液一烧杯，拧开测菌片，把测试片放入
工作液中，使测试片的两面都完全接触工作液，取出测试片，拧紧盖子，放入温度为27－30℃的环境中。
2、放置24－48小时后，观察细菌面（即浅色面）的情况，
与对比表对比，得出细菌值。
3、放置3－4天或4－7天后，观察真菌面（即深色面）的
情况，与对比表对比，得出真菌值。
注意：
1、未使用的测菌片必须保存在15－25℃的环境中，否则易
变质。
2、接触工作液时，请避开工作液表面的浮油，以免影响测
试结果。
3、在未得到结果时，不要随意拧开测试片。
3M 微生物检测方法
V3 MPN P(%) 0.01 100ml(g) 0 90 31.916132 1 140 1.118955 2 200 0.019208 3 260 0.000148 0 150 11.956167 1 200 0.631537 2 270 0.015038 3 340 0.000153 0 210 2.317562 1 280 0.170437 2 350 0.005383 3 420 0.000070 0 290 0.215558 1 360 0.021153 2 440 0.000862 3 530 0.000014 0 230 34.097556 1 390 3.098145 2 640 0.157771 3 950 0.004305 0 430 37.431791 1 750 6.578776 2 1200 0.647049 3 1600 0.031547 0 930 32.816431 1 1500 12.506472 2 2100 2.468265 3 2900 0.235151 0 2400 36.593489 1 4600 42.766144 2 11000 44.442153 >24000 3 #VALUE!
) (e
−0.1λ 3− p2
)
) (e
− 0.01λ 3− p3
)
接种量为 0.1,0.01,0.001 ml(g)时的概率：
P = C (1 − e
p1 3
−0.1λ p1
) (e
−0.1λ 3− p1
)
+ C (1 − e
p2 3
−0.01λ p2
) (e
−0.01λ 3− p2
)
+ C (1 − e
Microbiology
美国3M生物阅读器操作说明
美国3M 快速生物阅读器操作说明自动阅读器3M ™ Attest ™自动阅读器阅读由阳性的快速生物指示剂1291和1292产生的荧光以提示灭菌过程失败。
操作方便 勿需校正 自动阅读结果 有报警功能 轻松保养生物监测系统的一部分 担保担保：：自动阅读器一年自动阅读器一年，，阅读灯两年阅读灯两年。
3M™ Attest™ 290 自动阅读机图解:①孔盖②培养/阅读孔③压碎孔④红灯亮阳性⑤黄灯亮指示剂检测中⑥绿灯亮指示剂阴性⑦警告蜂鸣器开/关按钮⑧数字显示面板⑨剩余时间按钮适用范围3M™Attest™ 290是专为自动阅读由3M™ Attset™ 1291(蓝色帽) 和3M™ Attset™ 1292(棕色帽)两种快速生物指示剂产生荧光呈阳性而设计的，可避免人为干扰。
发现荧光表明灭菌过程失败。
其他生物指示剂与本设备不匹配也不能使用。
此机器仅为3M™公司设计、测试并仅能在由3M™公司指定和支持的电源下使用。
使用说明 电源操作连接合适的接地的交流电源，启动机器。
在将生物指示剂放进培养孔前需30分钟的预热时间。
推荐将机器保持此种状态以消除预热过程，当然，如果预知长期不用，则关闭电源。
读取过程警告警告！！始终在操作生物指示剂前将其冷却到室温！每次阅读请按下列步骤：－1、在戴好防护眼镜后，按压以关闭生物指示剂帽。
－2、在压碎孔挤破含培养基的玻璃安瓿。
－3、捏住生物指示剂帽端，在桌面上轻敲小瓶底部，使 培养基湿润在小瓶底部的芽孢片。
为了您的安全为了您的安全，，请注意以下警告：在冷却前压碎或者过多的处理生物指示剂可能会引起玻璃安瓿爆破。
当从灭菌器取出生物指示剂时要戴防护眼镜及手套。
当压碎生物指示剂时要戴防护眼镜。
捏住帽端挤碎和轻敲生物指示剂。
不要用你的手指来压碎生物指示剂，不要在手指间滚动来湿润芽孢片，因为这样可能会导致手指割伤。
－4、将生物指示剂放进合适的培养/阅读孔。
阅读孔有和每一种生物指示剂帽相匹配的颜色代码：就是1291生物指示剂有蓝色的帽子和蓝色的阅读孔匹配，1292生物指示剂有棕色的帽子和棕色的阅读孔匹配。
3M快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以及判读
3M 快速金黄色葡萄球菌数测试片操作以及判读一、测试金黄色葡萄球菌数操作方法1、未拆封包请冷藏于≤8℃，并在保存期限内使用完。
在高温度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
2-3、已开封时，将封口已胶带封紧，存放于25℃/湿度50%以下,并于一个月内使用完. 请勿将已开封包冷藏于冰箱4、使用无菌的容器置入样品，已备将样品作10倍或更大倍数的稀释。
5、加入适量的无菌稀释液:Butterfield s phosphate buffer(IDF phosphate buffer,0.0425g/L of KH2PO4 adjusted to pH 7.2),0.1%peptone water ,people saltdiluent (ISO method 6887),saline solution (0.85-0.90%),bisulfite-free letheen broth,或无菌蒸馏水。
不可用buffered peptone water 或buffered 含有citrate ,bisul fite,or thiosulfate ;它们可能抑止菌生长。
6、搅拌或均质样品。
调整样品稀释液的pH值至6.5－7.5。
请以1N NaOH调整酸性产品pH值，以1N HCI调整碱性产品。
7、将测试片放置在平坦的外表面，揭起上层膜。
使用吸管将1ml样品垂直低在测试片的中央处。
8、小心卷会上层膜，避免气泡进入。
不要让上层膜直接盖回。
9、使用压板放置在上层膜中央处。
轻轻的压下，是样品液均匀覆盖于圆形的培养面积上。
且勿扭转或滑动亚板。
拿起亚板，静置1分钟以使培养基凝固。
10、测试片的透明膜朝上可堆叠至10片，培养于35℃＋1℃或37℃＋1℃下，24＋2小时。
11、培养之后，菌落可能生长，但在检测片上看不到，因为指示剂是含在金黄色葡萄球菌检测反应片上。
12、检测片移至36℃＋2℃培养箱，培养1－4小时。
微生物测试片操作使用方法步骤(详细图解)
微生物检测片由轻便防水纸质材料做支撑，其上覆盖干燥培养基层（营养物质、凝固剂、选择抑制剂、显色剂）和透明隔水膜，经辐照灭菌；培养基层可吸收1mL 样液形成凝胶层，微生物生长代谢产生酶水解显色剂从而使菌落显色。
微生物检测片一般包含卫生指示菌和致病菌检测片，可广泛用于食品、饮料等微生物检测，涵盖生产原料、终产品和生产环境中卫生指示菌（菌落总数、霉菌酵母、大肠菌群计数）和致病菌（沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌等）检测。
1. 掀开透明薄膜，加入 1mL 样液接种在接种区中央，盖上薄膜。
2. 培养（根据相应条件行培养）3. 判读（肉眼直接计算典型特征菌落，也可借助放大镜或菌落计数器等）【定性划线法】与【定量计数法】操作图解（以金黄色葡萄球菌测试片为例）：定性划线法定量计数法1；用剪刀沿虚线剪开，取出测试片盒。
1；用剪刀沿虚线剪开，取出测试片盒。
2；将测试片放在水平台面上，揭开覆膜，用 1μl 接种环取增菌液在纸片上划线分离。
2；将测试片放在水平台面上，揭开覆膜，将 1mL 样品液滴加在纸片中心。
3；加入 1mL 无菌水或无菌生理盐水。
3；缓慢盖上覆膜，静置 3-5 分钟。
4；盖上上膜，静置3-5min。
4；将测试片正面朝上，放置于恒温培养箱中，36±1℃培养 18～24h。
测试片堆叠不应超过 20 张。
5；将测试片正面朝上，放置于恒温培养箱中，36±1℃培养 18～24h，测试片堆叠不得超过 20 张。
5；根据判读手册判读测试片上是否有目标菌生长，或对菌落进行计数。
6；培养后的判读，根据判读手册判读测试片上是否有目标菌的生长。
肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片
大肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片1.样品的前处理：（建议用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为检测样品）（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mLLB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品垂直滴加到纸片中央，轻轻晃荡纸片，使检测样品液覆盖整个检测圈，然后再将上层膜缓慢盖下（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
最新3m测试片操作手册资料
细菌总数测试片该手册能指导你熟练掌握3M TM Petrifilm Aerobie Count Plants的使用，你可与3M微生物产品代理接洽会得到更多的信息。
[贮藏]1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。
2、已开封的，将封口以胶带封紧。
3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和温度<50％，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。
[样品制备]4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，0称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag 或者其他灭菌容器内.5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptonephopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheenbroth或蒸馏水.6、搅拌或均质样品。
[接种]7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8、使用吸管将1mL样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。
10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
[培养][解释]13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。
14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上判读卡Aerobic bacteria count=152测试片中含有一种红色指示染剂可使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之).Count=0在petrifilm AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长.Count=16图3示有不多的菌落.Count=143Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25-250,见图4Count=560测试片面积约为20cm2,当菌落数超过250个,如图5所示,为了估计菌落数,可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数,再乘以20可得到整个测试片上的菌落数.Count=tntc(estimated count=103)图6所示petrifilm AC测试片上菌落太多而无法计数(tntc)count=tntc(Estimated count=105)有很多高数量菌落,使整个生长区变粉色,如图7所示,你仅可在生长区边缘现观察到单个菌落,应计录为菌落太多无法计数(TNTC)count=tntc(Estimated count=103)有时菌落分布出现不均衡,如图8所示,这也记录为TNTC.Count=tntc(Estimated count=107)在图9中petrifilm AC测试片上的菌落,最先粗略一看是可计数的,然而,你密切注意到生长区边缘,能看到高密度的菌落,应记录为TNTC Estimated count=160很少数菌种会液化petrifilm AC测试片上的培养基,如图10所示.若有这种现象发生,可选择没有液化区的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.Count=83因为在petrifilm AC测试片上菌落是红色的,你会和不透明的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆圈1和2.。
3M细菌总数测试片操作以及判读
3M细菌总数测试片操作以及判读操作步骤：1.准备工作：在使用测试片之前，首先要确保手部清洁，并戴上一次性手套。
同时，检查测试片是否完整，没有破损或过期。
2.开包：将测试片从包装袋中取出，注意不要触碰测试片的表面，以免污染。
3.布置位置：选择测试位置，并根据需要，将测试片放置于垂直或水平方向。
4.暴露时间：测试片需要在待测空气中进行一定时间的接触，一般建议暴露时间为15-60分钟。
在这段时间内，确保测试片不被遮挡或污染。
5. 收集测试片：在暴露时间结束后，用清洁的镊子或 forceps 夹住测试片，避免直接接触。
6.封闭：将测试片放回包装袋中，并尽可能迅速地将其封闭以避免空气中其他细菌的污染。
7.孵育：将已收集到的测试片放置于一个温度适宜、湿度适当的孵育箱中。
一般来说，细菌总数测试一般以37°C孵育48小时。
在这其中，细菌会生长和繁殖。
8.看板读数：在孵育时间结束后，将测试片取出并放在封闭的检测平台上。
使用3M细菌总数读板器来进行计数。
读板器会自动分析和计算细菌水平，并提供相应的结果。
判读：根据读板器提供的结果，我们可以判断细菌总数的水平。
一般情况下，细菌总数测试片会有一个分界点，一般为100个菌落形成单位（CFU）。
如果读板器显示的结果低于或等于100CFU，说明待测空气中的细菌水平较低，可以认为环境较为清洁。
然而，如果读板器显示的结果超过100CFU，那么待测空气中的细菌水平被认为是较高的，需要进一步采取措施来减少菌落的数量。
同时，根据分析结果可以确定细菌的种类，从而有针对性地采取措施来控制细菌的传播和繁殖。
需要注意的是，细菌总数测试片只能提供细菌总数的信息，并不能确定具体细菌的种类。
因此，在判读结果之后，还需要进一步的检测和分析来确定导致高水平细菌存在的原因以及采取相关措施。
总结：。
细菌三型的观察和油镜使用
精品课件
9
3，实验材料
1.细菌的三型永久装片。 2.细菌等培养物。 显微镜、载玻片、接种环等。
精品课件
10
精品课件
11
三、实验材料
真菌培养物
1. 黑曲霉培养物。 2. 各种真菌示范片。
显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、 酒精灯、镊子等。
乳酸石炭酸棉兰染液、碘液、酒精、蒸馏水等
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以 保证光洁度
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最 后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油 镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片 或损伤镜面。
4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座， 不可单手拿，更不可倾斜拿。
5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉 菌而腐蚀镜片。
实验二
细菌三形、真菌观察、及油镜的使 用
精品课件
1
一 油镜的使用
实验目的：
学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜 的使用技术及维护的基本知识
初步认识细菌的基本形态
精品课件
2
精品课件
3
D=λ/2NA NA=n · sinα
精品课件
4
精品课件
5
显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
精品课件
12
用解剖针挑取少量曲霉菌块（适当带一 点培养基）放在载玻片的一侧,在菌块上 滴50％乙醇一滴,轻轻拨动、洗涤菌块， 在同一玻片的另一侧加一滴蒸馏水，将 洗去分生孢子的菌块置于蒸馏水中，用 解剖针将菌丝尽量分散，盖上盖玻片， 用橡皮或塑料请轻轻敲击，10x ,40x观 察菌丝、足细胞、分生孢子梗、顶囊。
什么意义? (4) 影响显微镜分辨率的因素有哪些? (5) 根据你的实验体会，谈谈应如何根据所观察微
3M细菌总数测试片操作及判读
count=t ntc(Esti mated c ount=10 3) 有时菌落 分布出现 不均衡,如 图 8 所示, 这也记录
Count=
Estimate
tntc(Es
d count
timated
=160
count
很少数菌
=107)
种会液化
在图 9 中
petrifilm
petrifil
AC 测试
m AC
的。
13、测试片的透明 面朝上，可堆叠至 20 片，对有一定 湿度养箱能保持最 少份损失是需要
15、可以分离菌落 作进一步鉴定，即 掀起上层膜，由培 养胶上挑取单个菌 落。
二、测试细菌总数 判读方法
Aerobic bacter ia coun t=152 测试片 中含有 一种红 色指示 染剂可 使菌落 着色,计算所有红色菌落(不论其大小 和颜色深浅均计算之).
片上的培
测试片
养基,如图
上的菌
10 所示.
落,最先粗略一看是可计数的,然而,你 若有这种现象发生,可选择没有液化区
密切注意到生长区边缘,能看到高密度 的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),
的菌落,应记录为 TNTC
计算平均菌落数.不要计数液化区内的
红点.
Count= 83 因为在 p
etrifilm AC 测 试片上 菌落是 红色的, 你会和 不透明 的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆 圈 1 和 2.
Count= 16 图 3 示有 不多的 菌落.
12、拿起压板，静 置至少 1 分钟以使 培养基凝固。
14、可目视及用标 准菌落计数器或其 它的照明放大镜计 数，并可参考判读卡 计算菌落数。
Count=0 在 petrifil m AC 测 试片上,很 容易解释, 图 2 测试 片上没有 任何菌落 生长.
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
3M 细菌总数测试片操作以及判读一、测试细菌总数操作方法
1、未开封时，冷
藏于≤8℃（≤46
℉），并在保存期
内用完，高温度时，
凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。
2、已开封的，将封口以胶带封紧。
3、保存再封的袋
于≤25℃（≤77
℉）和温度<5
0％，不要冷藏已
开启的包装袋，并于一个月内使用完。
4、制备1：10和更
大稀释的食物样品
稀释液，0称取或吸
取食物样品，置入适
宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.
5、加入适量的无
菌稀释液,包括Bu
ffered peptone
Buffer(IDF pho
psphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.
2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法68 87) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579)、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite -free letheen broth或蒸馏水.
不可使用含有枸橼酸盐、酸性亚硫酸盐或硫代硫酸盐的缓冲液. 因为它们能抑止菌生长。
6、搅拌或均质样品。
样品的稀释液调PH
6.5－
7.2
对酸性样品的稀释
液用IN NaOH
对碱性样品用IN HCL调PH
7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。
8、使用吸管将1mL 样液垂直滴加在测试片的中央处。
9、允许使用上层膜直接落下，切勿向下滚动上层膜。
10、使用压板隆起面底朝下，放置在上层膜中央处。
11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。
12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。
13、测试片的透明
面朝上，可堆叠至
20片，对有一定
湿度养箱能保持最
少份损失是需要的。
14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。
15、可以分离菌落
作进一步鉴定，即
掀起上层膜，由培
养胶上挑取单个菌
落。
二、测试细菌总数判读方法
Aerobic
bacter
ia coun
t=152
测试片
中含有
一种红
色指示
染剂可
使菌落着色,计算所有红色菌落(不论其大小和颜色深浅均计算之). Count=0 在petrifil m AC测试片上,很容易解释,图2测试片上没有任何菌落生长.
Count= 16
图3示有不多的菌落. Count=1 43 Petrifilm AC测试片菌落数适宜计数范围是25 -250,见图4
Count=
560
测试片
面积约
为20cm
2,当菌
落数超
过250
个,如图
5所示,为了估计菌落数,可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数,再乘以20可得到整个测试片上的菌落数
Count=t
ntc(esti
mated c
ount=10
3)
图6所示
petrifilm
AC测试
片上菌落
太多而无法计数(tntc)
count=
tntc(Es
timated
count
=105)
有很多
高数量
菌落,使
整个生
长区变粉色,如图7所示,你仅可在生长区边缘现观察到单个菌落,应计录为菌落太多无法计数(TNTC)
count=t
ntc(Esti
mated c
ount=10
3)
有时菌落
分布出现
不均衡,如
图8所示,
这也记录为TNTC.
Count=
tntc(Es
timated
count
=107)
在图9中
petrifil
m AC
测试片
上的菌落,最先粗略一看是可计数的,然而,你密切注意到生长区边缘,能看到高密度的菌落,应记录为TNTC
Estimate
d count
=160
很少数菌
种会液化
petrifilm
AC测试
片上的培
养基,如图
10所示.若有这种现象发生,可选择没有液化区的几个有代表性菌落的小方格(1cm2),计算平均菌落数.不要计数液化区内的红点.
Count=
83
因为在p
etrifilm
AC测
试片上
菌落是
红色的,
你会和
不透明的不规则形状的事物颗粒区分开,见圆圈1和2.。