细胞培养技术实用篇PPT课件
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细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
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严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
倒 置 显 微 镜
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
液 氮 罐
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
细胞培养技术精品PPT课件
The polymerization and
depolymerization of F-actin
are essential for cell motility.
To assess whether the
observed arrangements of
the actin cytoskeleton could
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（2）上皮型细胞
扁平不规则多角形， 中有圆形核，细胞紧 密相连成单层膜。其 生长特点为细胞紧密 相连，呈“铺路石” 状
消化管外皮细胞、肝 、胰、肺泡上皮、血 管内皮等
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（3）其他贴附型细胞
①游走型细胞
在支持物上散在生 长，一般不连接成 片。细胞质经常伸 出伪足或突起，呈 活跃的游走或变形 运动，速度快而且 不规则
affect the migration of
shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells, we
examined cellular actin
structure with phalloidine
staining. The F-actin源自positive membrane
2.培养瓶、培养板、吸管、加样器等。
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
五、细胞生长条件
（一）营养物质 细胞生长所需的营养物质包括氨基酸、维生素、碳水
化合物、无机离子以及各种促生长因子等。血清中含有多 种细胞生长所需的营养物质。
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
四、细胞培养所需仪器设备及用品
（一）无菌操作环境 1.无菌操作区：只限于细胞培养，独立的区域或与外界隔离，
depolymerization of F-actin
are essential for cell motility.
To assess whether the
observed arrangements of
the actin cytoskeleton could
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（2）上皮型细胞
扁平不规则多角形， 中有圆形核，细胞紧 密相连成单层膜。其 生长特点为细胞紧密 相连，呈“铺路石” 状
消化管外皮细胞、肝 、胰、肺泡上皮、血 管内皮等
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
（3）其他贴附型细胞
①游走型细胞
在支持物上散在生 长，一般不连接成 片。细胞质经常伸 出伪足或突起，呈 活跃的游走或变形 运动，速度快而且 不规则
affect the migration of
shETS2- or lenti-
196b-treated AGS cells, we
examined cellular actin
structure with phalloidine
staining. The F-actin源自positive membrane
2.培养瓶、培养板、吸管、加样器等。
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
五、细胞生长条件
（一）营养物质 细胞生长所需的营养物质包括氨基酸、维生素、碳水
化合物、无机离子以及各种促生长因子等。血清中含有多 种细胞生长所需的营养物质。
哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心
四、细胞培养所需仪器设备及用品
（一）无菌操作环境 1.无菌操作区：只限于细胞培养，独立的区域或与外界隔离，
细胞培养实验课件(共16张PPT)
用柱形图预测A、B、C三组细胞增殖情况（至 少表示3次检测结果）。
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
《细胞培养技术》课件
《细胞培养技术》PPT课 件
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，通过将细胞生长在适宜的培养基中， 实现细胞的体外培养和繁殖，为研究细胞和开发生物制品提供了重要手段。
什么是细胞培养技术
1 定义
2 历史
细胞培养技术指的是将细胞从生物体中取出， 在适宜的培养基中进行体外培养的技术。
细胞培养技术起源于20世纪初，随着科学技 术的进步，逐渐成为生物学和医学领域的重 要工具。
常用的细胞培养方法
传统细胞培养方法
通过将细胞放置在培养皿中，利用培养基中的营 养物质供养细胞并促进其生长和繁殖。
三维细胞培养技术
通过构建具有三维结构的培养环境，模拟生物体 内的细胞生长环境，促进细胞在体外的功能表达。
动物细胞培养技术
主要应用于医学研究和生物制药领域，常用于人 类或动物细胞的培养和研究。
环保领域
细胞培养技术有助于环境修复和污染物降解，如 污水处理等。
细胞培养技术的挑战和发展趋势
1 挑战
细胞培养技术面临着细胞变异、细胞老化、 污染等问题，需要不断解决和改进。
2 发展趋势
随着科技的不断发展，细胞培养技术将越来 越趋向自动化、高通量和个性化。
结语
1 总结
细胞培养技术是一项重要的生物学技术，推 动了许多领域的发展和进步。
2 展望
未来，细胞培养技术将继续发展，为人类的 健康和社会发展做出更大贡献。
细胞培养基础知识
1 细胞的分类
2 培养基的种类
3 细胞培养条件
细胞可以根据形态、功能、 组织来源等进行分类，不 同类型的细胞需要不同的 培养条件。
培养基可以根据成分和用 途进行分类，常见的有无 血清培养基、无动物成分 培养基等。
细胞的培养需要一定的温 度、湿度、二氧化碳浓度 等环境条件，以及适当的 营养物质供给。
《细胞培养技术》课件
《细胞培养技术》ppt课 件
contents
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本原理 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养技术的应用实例 • 细胞培养技术的发展前景与挑战
01
细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指在体外模拟体 内环境，用于培养细胞的技术。
该技术通过提供适宜的营养、气 体和生长因子等条件，使细胞在
目前细胞培养技术面临的挑战
细胞来源
目前细胞培养的细胞来源有限，主要来源于肿瘤细胞和胚 胎干细胞，需要寻找更为安全、可靠的细胞来源。
培养环境
细胞在体外培养过程中需要模拟体内的生理环境，如温度 、湿度、pH值等，如何维持这些环境参数的稳定是当前 面临的重要挑战。
免疫排斥
在组织工程和器官移植等领域，免疫排斥反应是影响治疗 效果的重要因素之一，如何降低免疫排斥反应也是当前研 究的重点。
将细胞从旧的培养液中分 离出来，并接种到新的培 养液中。
细胞冻存
将细胞保存于低温或冷冻 状态，以便长期保存或未 来使用。
细胞培养中的注意事项
严格无菌操作
避免微生物污染，保证细胞的 健康生长。
适宜的细胞密度
确保细胞获得足够的营养和空 间，促进其生长和分裂。
定期更换培养液
清除代谢废物，提供新鲜的营 养物质。
01
02
03
04
生物医学研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等过程，以及探索 疾病的发生机制和治疗方法。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，以及研究药物的细
胞作用机制。
再生医学
用于组织工程和干细胞治疗等 领域，为损伤修复和疾病治疗
提供新的手段。
contents
目录
• 细胞培养技术简介 • 细胞培养的基本原理 • 细胞培养的实验操作 • 细胞培养技术的应用实例 • 细胞培养技术的发展前景与挑战
01
细胞培养技术简介
细胞培养技术的定义
细胞培养技术是指在体外模拟体 内环境，用于培养细胞的技术。
该技术通过提供适宜的营养、气 体和生长因子等条件，使细胞在
目前细胞培养技术面临的挑战
细胞来源
目前细胞培养的细胞来源有限，主要来源于肿瘤细胞和胚 胎干细胞，需要寻找更为安全、可靠的细胞来源。
培养环境
细胞在体外培养过程中需要模拟体内的生理环境，如温度 、湿度、pH值等，如何维持这些环境参数的稳定是当前 面临的重要挑战。
免疫排斥
在组织工程和器官移植等领域，免疫排斥反应是影响治疗 效果的重要因素之一，如何降低免疫排斥反应也是当前研 究的重点。
将细胞从旧的培养液中分 离出来，并接种到新的培 养液中。
细胞冻存
将细胞保存于低温或冷冻 状态，以便长期保存或未 来使用。
细胞培养中的注意事项
严格无菌操作
避免微生物污染，保证细胞的 健康生长。
适宜的细胞密度
确保细胞获得足够的营养和空 间，促进其生长和分裂。
定期更换培养液
清除代谢废物，提供新鲜的营 养物质。
01
02
03
04
生物医学研究
用于研究细胞的生长、发育、 分化、凋亡等过程，以及探索 疾病的发生机制和治疗方法。
药物研发
用于筛选和验证药物的有效性 和安全性，以及研究药物的细
胞作用机制。
再生医学
用于组织工程和干细胞治疗等 领域，为损伤修复和疾病治疗
提供新的手段。
细胞培养技术课件-PPT
贴壁期（细胞平均在10分钟－4小时贴壁，底物：胶原、玻 璃、塑料、其它细胞等）
潜伏期（有生长活动，而无细胞分裂，一般为6～24小时 对数生长期（细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳。
最适合进行实验研究） 停止期（平台期）（细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不
再分裂。机制：接触抑制、密度依赖性）
（悬浮细胞没有贴壁过程）
注意： 开放式操作，小心谨慎、谨防污染！
细胞冻存（慢冻）
1 细胞冻存液（1ml/管） 基础培养基70％ 胎牛血清20％ DMSO 10％ （二甲基亚砜，一种渗透性保护剂，可迅
速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓 冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞 外形成冰晶，减少胞内冰晶对细胞的损伤。）
（2）用培养液稀释后低速离心10分钟。 （3）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 （4）隔天换液，但贴壁细胞若未贴壁则勿需处理。 复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶而损伤细胞。
细胞传代
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上 饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数 量扩大，就必须进行传代（再培养）。
其他实验所需的试剂： 药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、细胞因子 （如SCF）等
试剂标注规范
试剂名称 配制浓度 配制人 配制日期
NaCl 0.5 mM 张三
耗材
培养皿、瓶、孔板 离心管、移液管 枪尖 其他
小结二 试剂及耗材的分类及用途
培养基（成分、分类）
耗材（分类、用途）
生物安全柜
无菌培养瓶、吸管、离心管的准备 主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理（蛋白凝固）（不能擦拭有机玻璃）
细胞生长过程，细胞来源
湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min，破坏微生物孢子、蛋白变性。
潜伏期（有生长活动，而无细胞分裂，一般为6～24小时 对数生长期（细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳。
最适合进行实验研究） 停止期（平台期）（细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不
再分裂。机制：接触抑制、密度依赖性）
（悬浮细胞没有贴壁过程）
注意： 开放式操作，小心谨慎、谨防污染！
细胞冻存（慢冻）
1 细胞冻存液（1ml/管） 基础培养基70％ 胎牛血清20％ DMSO 10％ （二甲基亚砜，一种渗透性保护剂，可迅
速透入细胞，提高胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓 冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞 外形成冰晶，减少胞内冰晶对细胞的损伤。）
（2）用培养液稀释后低速离心10分钟。 （3）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。 （4）隔天换液，但贴壁细胞若未贴壁则勿需处理。 复苏过程应快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶而损伤细胞。
细胞传代
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上 饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数 量扩大，就必须进行传代（再培养）。
其他实验所需的试剂： 药物（如ATRA）、检测试剂（如MTT）、细胞因子 （如SCF）等
试剂标注规范
试剂名称 配制浓度 配制人 配制日期
NaCl 0.5 mM 张三
耗材
培养皿、瓶、孔板 离心管、移液管 枪尖 其他
小结二 试剂及耗材的分类及用途
培养基（成分、分类）
耗材（分类、用途）
生物安全柜
无菌培养瓶、吸管、离心管的准备 主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理（蛋白凝固）（不能擦拭有机玻璃）
细胞生长过程，细胞来源
湿热（高压蒸气灭菌法）：121℃，20min，破坏微生物孢子、蛋白变性。
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火焰消毒
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先 要点燃酒精灯。
按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近 处并经过烧灼进行。
如实验用品需火焰灭菌，冷却后接触培养细胞， 以防烧死细胞。
12
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操作
进行培养时，动作要准确敏捷 不能太快，否则空气流动增加污染机会。 不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要
产品有Ⅳ Ⅶ Ⅸ等型，分别适用于分离肝细胞、 胰岛、脂肪细胞及纤维组织。
钙镁离子和血清不影响活性，PH6.5-7 常用剂量为200U/ml
18
. 19
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EDTA法
▪ EDTA能与细胞上的钙、镁离子结合形成整合 物，利用结合后的机械力使细胞变圆而分散细 胞或使贴壁细胞从瓶壁上脱离。
▪ 缺点是细胞易裂解或贴壁细胞从瓶壁上脱离时 呈片状，有团块，常不单独使用，可与胰蛋白 酶混合使用(1：1或2：1)，既利于细胞脱壁又 利于细胞分散。可降低胰酶的用量和毒性作用。
肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。 而对含结缔组织较丰富的组织，如乳腺、滑膜、 子宫、纤维肉瘤、肿瘤组织等无效．但若与胶原 酶合用能增加其对组织的分离作用 。 钙镁离子和血清抑制其活性。 常用剂量为0.25%，PH8，温度37℃
17
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胶原酶法（collagenase）
水解结缔组织中胶原蛋白成分，对上皮细胞影 响不大。
.
细胞生物学技术
第三章 细胞培养基本技术
王云 动脉粥样硬化研究所
1
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细胞培养的优点
活细胞：长时间、直接观察、研究活细胞的形 态、结构和生命活动
可控制：
选择特定的细胞种类、性质、阶段 可控制调节条件：物理、化学、生物等 可采用各种研究技术、记录方法
样品均一性：来源于同一组织同一种细胞 经济、规模6.细胞培养中 Nhomakorabea常用术语
细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法 从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标 志的培养物称细胞株。
汇合（confluent）：细胞相互连接成片占据所有底 物面积。
接触抑制（contact inhibition）：细胞汇合相互 接触后失去运动的现象
用火焰烧灼消毒或取备品更换。
13
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组织细胞取材及培养的基本要求
取材的组织用培养液浸泡，4℃运送，24h内尽快培养。 取材时应严格无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量
去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链 霉素和制霉菌素漂洗。 原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的 培养液。 一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养;分化低 的较分化高的组织容易生长;肿瘤组织较正常组织容易 培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。 为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养 与原组织的差异性，原代取材同时保留组织学和电镜标 本，对供体来源、部位及一般情况做记录。
5
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细胞培养中的常用术语
原代培养（primary culture）：从体内取出细 胞或组织的第一次培养。
传代（passage）也称再培养。无论是否稀释， 将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶 即称为传代或传代培养。也称再培养。
细胞系（cell line）：原代培养物经首次传代 成功后即为细胞系
14
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组织材料的分离
机械法：适于较柔软的组织，如脑、脾、淋巴结、 胸腺等。剪切组织为1mm3碎块后，置于组织匀浆 器研磨或用注射器针芯挤压后过不锈钢筛网。
化学法：胰蛋白酶、胶原酶、EDTA法 细胞悬液的分离方法：低速离心法、密度梯度离
心法
15
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细胞悬液的分离方法
低速离心法： 血液和体液等细胞悬液5001000rpm离心5-10min。离心速度过大、时间过 长，会造成细胞损伤和死亡。
染机会。
9
.
消毒
地面每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布 要专用)，紫外线照射消毒30-50min
超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然 后紫外线消毒30min。
消毒时工作台面上用品布局合理，不要过多或重叠 放置，否则会遮挡射线降低消毒效果。
一些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架 等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。
10
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洗手和着装
原则上和外科手术相同。 仅做观察不做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外
线照射30min的清洁工作服 在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着
长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消 毒手。 进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。 专用鞋或带鞋套
11
密度梯度离心法： 用离心法将细胞分到不同 密度的梯度介质中，再分别吸出各层细胞。适 于分离密度不等的细胞。常用介质有Ficoll 400，Percoll，泛影葡胺等。
16
.
胰蛋白酶（Trypsin）
对细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。 消化效果与PH值、温度、酶浓度和组织块大小与
硬度有关。 适于消化细胞间质较少的软组织，能有效地分离
7
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一、细胞培养基本操作技术
由于体外培养的 细胞没有抗感染能力， 因此防污染是决定培 养成功的首要条件。 一切操作需要保证 无菌和有条不紊。
8
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培养前准备
制定好实验计划和操作程序 有关数据的计算要事先做好。 准备各种所需器材和物品，清点无误后将其放置
在操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。 避免开始实验后，因物品不全往返拿取而增加污
4
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细胞培养中的常用术语
组织培养(Tissue Culture)： 指的是从体内取 出组织，模拟体内生理环境，使之生存和生长并 维持其结构和功能的方法。
器官培养（Organ Culture）： 培养的是器官的 原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生 存、生长和保持一定功能的方法。
细胞培养(Cell Culture)： 培养物是单个细胞 和细胞群。
2
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局限性
人工模拟的条件和体内实际情况仍不完全相同 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和
细胞相互间的影响 体外培养的细胞生活在缺乏动态平衡的环境环
境中，必然发生变化。
3
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本章主要内容
细胞培养的基本操作技术 原代培养(primary culture) 传代培养(subculture) 体外培养细胞的影响因素 细胞培养污染及对策 培养细胞的生长测定方法 细胞冻存和复苏