2013流式细胞术临床应用的建议
流式细胞术临床应用
流式细胞术得临床应用一、在肿瘤学中得应用这就是FCM在临床医学中应用最早得一个领域。
首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞得DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA与RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到得与DNA结合得PI得荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量得多少。
由于细胞周期各时相得DNA含量不同，通常正常细胞得G1 / GO 期具有二倍体细胞得DNA含量((2 N)，而G2/ M期具有四倍体细胞得DNA含量((4 N)，而S期得DNA含量介于二倍体与四倍体之间。
因此，通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1 / GO 期，S期与G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相得百分率，DNA含量直接代表细胞得倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。
1、发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断人体正常组织发生癌变要经过一个由量变到质变得漫长过程，而癌前细胞即处于量变过程中向癌细胞转化阶段。
人体正常得体细胞均具有比较稳定得DNA二倍体含量。
当人体发生癌变或具有恶性潜能得癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量得异常改变，FCM可精确定量DNA含量得改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中得一个有价值得标志，能对癌前病变得性质及发展趋势作出估价，有助于癌变得早期诊断。
有资料证实，癌前病变得癌变发生率与细胞不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。
随着细胞不典型增生程度得加重，DNA非整倍体出现率增高，这就是癌变得一个重要标志。
2、在肿瘤得诊断、预后判断与治疗中得作用FCM在肿瘤诊断中得重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰得存在可为肿瘤诊断提供有力得依据，FCM分析病理细胞具有速度快、信息量大，敏感度高等优点，已被用在常规工作中。
肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后得判断有重要作用，异倍体肿瘤恶性病变得复发率高、转移率高、死亡率也高，而二倍体及近二倍体肿瘤得预后则较好。
流式细胞仪在临床检验中的应用
移植病人免疫抑制剂治疗指导
A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天 69例（50例没有排斥，19例发生排斥） CD4在移植后有一个缓慢的下降过程 CD4如果升高，预示发生排斥反应，需要调整免疫抑制药的治疗方案
22
老年人身体状况评估
（ Neuroimmunomodulation. 2014, 214:206-12.）
可以预计未来流式细胞仪在临床上的应用一定会有更大的发展！
9
目 录
10
1
流式细胞术的基本原理
2 流式的临床应用
3 迈瑞流式介绍
4
专家对迈瑞流式的评价
流式细胞术在临床检验中的应用
∞ 淋巴细胞亚群分析
∞ HLA-B27检测
∞ 白血病免疫分型和MRD
急性白血病、
慢性淋巴增生性疾病（CLD)
淋巴瘤
∞ 造血干细胞分析
流式细胞术+抗原抗体反 应
百分比或绝对计数 （如 %、**个/uL）； 物质的量或定性判定 （L、UI/L、 阴性、阳 pmol/m性）
测量宏观对象（细胞）上 的微观物质（抗原、看不 见、摸不到）
血球仪
生化分析仪
细胞(测量设置全部固定化） 血清
物理或化学性质（如细胞 大小、内部复杂程度、DNA 含量）
26
TBNK淋巴细胞亚群检测
CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC
27
HLA-B27检测与脊柱关节病
脊柱关节病（Spondyloarthritis, SpA）
疾病 强直性脊椎炎 Reiter’s综合症 银屑病性关节炎 急性前葡萄膜炎 溃疡性结肠炎伴关节病
流式细胞术在临床检验中的应用
流式细胞术在临床检验中的应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种可对单细胞悬液进行快速定性、定量分析和分选的技术。
它不仅可以对细胞表面抗原进行检测，也能对细胞内部的生物大分子进行检测，能够在细胞水平上对相关疾病进行诊断和病程监测。
因此在临床医学及科学研究中发挥着非常重要的作用。
随着技术水平的不断提高及完善，FCM得到了更为广泛的应用。
目前，FCM在临床检验方面主要应用于血液学、免疫学、肿瘤、等临床医学和基础医学研究领域，具有检测样品快速、准确以及灵敏度性高等特点，为临床检验提供了一种强有力的手段和全新的医学视角，是临床检验工作中重要的一种研究工具。
FCM主要由液流系统、光学系统、电子系统组成。
其主要基本原理是将待测样本染色后制成单细胞悬液放入样品管中，通过气体的压力使样品进入鞘液，鞘液与样品之间会形成一定的压力，当压力达到一定程度后，在鞘液的带动下，单细胞悬浮样品会形成单细胞柱状经过激光聚焦区，样品柱与激光束垂直，由于样品经特异性染料处理，因此在激光激发下会产生特定波长的荧光。
流式细胞仪中的光学系统收集到荧光信号后进行信号处理，再经过计算机系统对这些数字信号收集、储存，以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来，然后做出统计分析从而获得所需要的检测结果。
1．FCM在血液学中的应用FCM主要通过对外周血细胞和骨髓细胞表面抗原和DNA的检测分析对各种血液病如白血病、淋巴瘤等血液系统疾病的分型、诊断、治疗及预后判断均有重要作用。
血细胞在白细胞系、红细胞系、巨核细胞系、血小板及非造血细胞均有不同的分化抗原表达，分布在细胞质、细胞膜中。
血液肿瘤细胞的特征是丧失了正常细胞的系类专一性和分化阶段的规律性，运用FCM将具有系列特异性并涵盖不同分化阶段的单克隆体作为分子探针来检测血液肿瘤细胞的内外抗原，可以反映其本质上与正常造血细胞的差异。
由于不同的血细胞系统都有其特有的表面抗原，FCM通过采用各种血细胞表面分化抗原特异的单克隆抗体，借助于各种不同的荧光染料（FITC、PE）可同时检测一个单细胞的不同参数，根据所测的参数结果来判断出该血细胞的属性。
流式细胞术临床应用
流式细胞术的临床应用一、在肿瘤学中的应用这是FCM在临床医学中应用最早的一个领域。
首先需要把实体瘤组织解聚、分散制备成单细胞悬液，用荧光染料(碘化吡啶PI)染色后对细胞的DNA含量进行分析，PI可以与细胞内DNA和RNA结合，采用RNA抑制剂将RNA消化后，通过流式细胞术检测到的与DNA结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。
由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1 / GO期具有二倍体细胞的DNA含量((2 N)，而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量((4 N)，而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。
因此，通过流式细胞术PI 染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1 / GO 期，S期和G2/ M期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率，DNA含量直接代表细胞的倍体状态，非倍体细胞与肿瘤恶性程度有关。
1、发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断人体正常组织发生癌变要经过一个由量变到质变的漫长过程，而癌前细胞即处于量变过程中向癌细胞转化阶段。
人体正常的体细胞均具有比较稳定的DNA二倍体含量。
当人体发生癌变或具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变，FCM可精确定量DNA含量的改变，作为诊断癌前病变发展至癌变中的一个有价值的标志，能对癌前病变的性质及发展趋势作出估价，有助于癌变的早期诊断。
有资料证实，癌前病变的癌变发生率与细胞不典型增生程度有密切关系，增生程度越重，癌变发生率越高。
随着细胞不典型增生程度的加重，DNA非整倍体出现率增高，这是癌变的一个重要标志。
2、在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用FCM在肿瘤诊断中的重要作用已经被认可，DNA非整倍体细胞峰的存在可为肿瘤诊断提供有力的依据，FCM分析病理细胞具有速度快、信息量大，敏感度高等优点，已被用在常规工作中。
肿瘤细胞DNA倍体分析对病人预后的判断有重要作用，异倍体肿瘤恶性病变的复发率高、转移率高、死亡率也高，而二倍体及近二倍体肿瘤的预后则较好。
流式细胞术临床应用范围
流式细胞术临床应用范围流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的高端技术，通过流式细胞仪可以对细胞进行高通量单细胞分析。
随着技术的不断创新和发展，流式细胞术在临床应用中的范围也逐渐扩大，为疾病的诊断、治疗和预防提供了重要的支持和帮助。
一、疾病诊断流式细胞术在临床诊断中的应用范围非常广泛，可以用于各种类型的疾病的确诊和分型。
例如，在血液学领域，流式细胞术可以用于白血病和淋巴瘤等血液系统疾病的诊断与鉴别诊断；在免疫学领域，流式细胞术可以用于自身免疫性疾病的诊断和病情监测。
二、免疫细胞治疗随着免疫细胞治疗技术的不断成熟，流式细胞术在该领域的应用也越来越广泛。
通过流式细胞术可以对患者的免疫细胞进行分选、激活和扩增，用于治疗各种肿瘤和疾病。
例如，CAR-T细胞治疗就是基于流式细胞术的原理开发而来，已经在临床上取得了较好的疗效。
三、药物筛选在药物研发领域，流式细胞术被广泛应用于药物的筛选和评估。
通过流式细胞术可以快速、准确地评估药物对细胞的毒性和活性，为药物研发提供重要的数据支持。
同时，流式细胞术还可以用于研究药物的作用机制和药效评价。
四、疾病预防与流行病学研究流式细胞术在疾病预防和流行病学研究中也发挥着重要作用。
通过流式细胞术可以对疫情中的病原体进行快速检测和鉴定，为疾病的早期诊断和防控提供重要的支持。
此外，流式细胞术还可以用于研究疾病的发病机制和流行规律，为疾病的预防和控制提供科学依据。
综上所述，流式细胞术在临床应用中的范围十分广泛，涉及到疾病诊断、治疗、药物研发、疾病预防和流行病学研究等多个领域。
随着技术的不断进步和应用的深化，相信流式细胞术将在未来发挥更加重要的作用，为人类健康事业作出更大的贡献。
流式细胞术的工作原理及临床应用
流式细胞术的工作原理及临床应用引言流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，其工作原理基于细胞在液体流动环境中的特定性质。
该技术广泛用于细胞表型分析、细胞计数、细胞分类和细胞排序等领域，为研究人员和医生提供了重要的工具。
一、流式细胞术的工作原理流式细胞术利用细胞在液体中的流动来实现细胞的分析和排序。
其工作原理可以分为三个主要步骤：细胞的悬浮、细胞的单独通过和细胞的检测。
1. 细胞的悬浮：首先，需要将待分析的细胞样本进行处理，使其转化为单细胞悬浮液。
这可以通过细胞培养、组织切片或体液处理等方法获得。
继续使用细胞培养基、酶消化或机械碎解等方法，将细胞组织分散成单个细胞，并获得细胞悬浮液。
2. 细胞的单独通过：接下来，将细胞悬浮液通过微小通道，通常是称为流式细胞仪的仪器。
在流速适中的条件下，细胞会单个通过通道，并在通过过程中因其特定特征而会发生特别的反应。
3. 细胞的检测：在细胞通过过程中，流式细胞仪能够感应细胞的数量、大小、形状和表面标记物等特征。
通过使用激光器的激光束照射细胞，并测量其散射光、荧光光谱等信息，流式细胞仪能够对细胞的特征进行定量分析。
二、流式细胞术的临床应用流式细胞术作为一种高效、灵敏和准确的细胞分析方法，在临床上有着广泛的应用，以下是一些常见的临床应用：1. 免疫学研究：流式细胞术在免疫学领域的应用非常广泛。
通过对细胞表面的抗原和抗体的特异性结合，可以对免疫细胞进行表型分析，了解不同亚群细胞的比例和功能状态。
这对于研究免疫相关疾病的发生机制、免疫细胞治疗的效果评估等方面非常重要。
2. 癌症诊断和监测：流式细胞术在癌症的诊断和监测中也起着关键作用。
通过检测癌细胞的特定标记物，可以对肿瘤进行识别、分类和判断其恶性程度。
此外，流式细胞术还可以监测肿瘤的治疗反应，评估抗癌药物的疗效，并预测患者的预后。
3. 血液学检测：流式细胞术在血液学检测中也占据重要地位。
通过检测血液中的各种细胞类型和亚群细胞的比例，可以帮助诊断和监测临床上的血液疾病，如白血病、淋巴瘤等。
流式细胞术的临床应用
一、诊断性指标如图1所示，图（左）白血病细胞成为一个单一的群体，很难区分原始或病态的白血病细胞和成熟的细胞。
但是通过CD45和（SSC）设门法之后（图右），看到图（左）无法区分细胞被分成了五群。
在这五群中，成熟细胞CD45表达的荧光比较强。
A门里是淋巴细胞，B门里是单核细胞，C门里就是粒细胞群，D门里是原始细胞，一般CD45表达较弱。
一些细胞碎片、红细胞和转移来的瘤细胞，由于不表达CD45，可能位于D门、D门偏下或者E门的位置。
CD45结合侧向散射光之后能把白血病细胞找出来，减少了其它细胞的干扰。
对D门里的白血病细胞做进一步的分型，就能准确看到白血病细胞群免疫分型的表达情况。
图13.白血病的特异性标志免疫表型分析主要是根据细胞的特异表面标志，把白细胞分成T细胞、B细胞和原始细胞。
T淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD3、抗TCRαβ、抗TCRγδ、CD2、CD5、CD8、CD10和CD7；B淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cCD79a、CD22、CD19 、CD10和CD20；髓系白血病一般表达的分化抗原有胞浆内的cMPO、CD117、CD13、CD33、CD14、CD15和CD64；NK淋巴细胞白血病一般表达的分化抗原有CD16、CD56和CD57；红白血病一般表达的分化抗原有GlyA和CD36；巨核细胞白血病一般表达的分化抗原有CD41、CD42和CD61；一系列非特异标志在不同的白血病中可能都有表达，尤其是表达在早期的造血干组细胞上，一般表达的分化抗原有CD34和HLA-DR。
其中，对T淋巴细胞白血病来讲比较特异的是胞浆内的CD3，当胞浆内CD3出现阳性的时候，高度怀疑是T淋巴细胞白血病。
对于B淋巴细胞白血病来讲，胞浆内的CD79a和CD19是比较特异的，cCD79a最具特异性。
cCD3和cCD79a分别表达于早期T细胞和B细胞。
cMPO是髓系特异标志。
如图2所示为B-ALL的表达图。
流式细胞术在临床中应用
过敏性疾病（嗜酸性粒细胞炎症反应-哮喘）
√
妇科-流产 GVHD
慢性 急性
√ √
√
天然TREG细胞在免疫系统中的作用
平衡状态：
既可有效清除外来病原体， 又可避免过度的炎症反应。
缺乏调节性T细胞：
免疫反应过度，造成自身免疫病、 哮喘、过敏反应、移植排斥、流产等。
过多的调节性T细胞：
免疫反应低下，无法有效清除病 原体及肿瘤，造成感染及癌症。
CD45
SS/CD45
SS
R2 R3
R4
Fil e: Wang Yanqi ang 04.11.2.001
Regi on R1 R2 R3 R4
% Gated 100.00 6.33 86.99 1.74
APL
Thank you !
良性肿瘤
√
感染
寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病
√
等）
真菌
√
病毒感染-丙肝
√
病毒感染-HIV
√
细菌感染-结核
√
细菌感染-麻风
√
自身免疫 克隆氏病、胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、自身免疫 √
病
性甲状腺炎、多发性硬化
系统性红斑狼疮(SLE)、自身免疫性淋巴细胞增殖综
√
合征(ALPS)、自身免疫性心脏病
临床意义： • 用于临床特发性血小板减少性紫癜（ITP）的
筛查与诊断
流式在强直性脊柱炎鉴别诊断中的应用
• 14、JY强直性脊柱炎相关抗原HLA-B27检测 标本类型：静脉血（2~3ml） 原理：HLA-B27是脊柱关节病病因及发病机制的
关键已经被广泛认同，各种假说均支持患者由 于存在HLA-B27的高表达引起了体内异常的免 疫应答，从而导致了脊柱关节病的发生。 临床意义： • 用于强直性脊柱炎的辅助诊断与鉴别诊断 • 用于临床强制性脊柱炎高危人群的筛查
流式细胞术的原理及临床应用介绍
流式细胞术的原理及临床应用介绍
一、引言
流式细胞术是一种广泛应用于生物医学领域的细胞分析技术，它可以
通过对单个细胞的物理和化学特征进行检测以实现细胞的分类、计数、分析和分类。
本文将介绍流式细胞术的原理及临床应用。
二、原理
流式细胞术的原理是先将细胞溶液通过一系列的管道和阀门分别分离
和分离，然后将细胞与荧光染料或抗体等特异性标记物结合，使细胞
获得荧光性或表面标记，接着将细胞注入流式细胞仪，在流动的流体
中使细胞连续通过单一通道，荧光或标记在此过程中被依次检测。
最后，由计算机进行数据统计、分析和分类。
三、临床应用
1.癌症诊断和治疗监测
利用流式细胞术的高灵敏度和特异性，医生可以获得更准确的癌症诊
断结果，同时也可以监测病人的治疗状况和治疗进展情况，不仅可以
改善病人的生活质量，而且可以提高癌症治疗的疗效。
2.免疫学研究
流式细胞术可以用于深入了解整个免疫系统的结构和功能，包括淋巴
细胞、单核细胞和巨噬细胞等的生物学活动。
这可以帮助研究人员更
好地理解癌症等疾病的发生和发展机制，并根据这些机制来开展基于
流式细胞术的治疗方法。
3.病毒学研究
针对病毒学研究，流式细胞术已成为重要的工具。
通过仔细分析CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的活动和响应，我们可以更好地理解病毒感染的机制，也能够更好地评估疫苗效果。
四、结论
流式细胞术是一种高度灵敏和特异的细胞分析技术，在临床实践中得到了广泛的应用。
它在癌症诊断和治疗、免疫学研究和病毒学研究等领域都有很好的表现，为生物医学研究和治疗带来了巨大的进展。
流式细胞术原理及临床应用-PPT文档
FCM检测白血病微小残留病变(MRD):
MRD 是 白 血 病 复 发 的 主 要 根 源 ， FCM 的 高 特 异性和敏感性可以在患者缓解期检测是否有残 留病变细胞，早期探测MRD，以免复发
FCM在临床肿瘤学中的应用
1.血液标本的检查 ● 肿瘤患者的免疫功能检查 ● 肿瘤患者的粘附分子检查：在肿瘤的浸润与转
细胞凋亡的生物学意义
胚胎形成、肌体正常发 育、衰老和损伤细胞的清 除以及肿瘤的发生、发展 和转归等都与细胞凋亡有 关。
生物医学的研究热点
FCM在血栓性疾与止血中应用
由于活化血小板是血栓的主要
成分之一，血小板活化程度的增 高与疾病的发生发展有关。 利用 流式细胞仪可检测血小板活化指 标，了解血小板状态和活化进程 。 巨血小板 血小板无力症 网织血 小板
肿瘤细胞耐药性
MDR是由多药耐药基因编码的P糖蛋白（P-gp） 亲脂化合物，包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性 排出泵。当淋巴细胞出现MDR阳性细胞时，患者对 化疗药物开始出现耐
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序 的死亡。它涉及一系列基因的激活、表达以及调 控等的作用；是为更好地适应生存环境而主动争 取的一种死亡过程。 坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或 生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表 现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核 变化较慢，DNA 降解不充分，引起局部严重的 炎症反应
可用流式细胞仪分析的标本
外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、各种体液 （尿、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等）
单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非细胞 粒子、可溶性分子
流式细胞仪的基本功能
•细胞表型分析：包括细胞膜、胞浆内蛋白表达及核膜成份分析 •DNA含量及细胞周期分析、细胞凋亡检测 •目标细胞分选 •自身免疫性疾病相关HLA抗原分析、自身抗体的检测 •流式蛋白定量技术：血浆中各种细胞因子的含量
流式细胞术在临床检验中的应用分析
流式细胞术在临床检验中的应用分析作者：田强来源：《中国社区医师》2014年第31期摘要目的：通过了解和讨论，对流式细胞术在临床检验中的应用情况做出详细分析。
方法：通过多次严谨性实验并且真实详细记录每次实验数据，进一步分析流式细胞术在临床检验中的应用效果和可行性。
结果：经过实验数据分析，流式细胞术在检验HLA-B27抗原、淋巴细胞亚群、肿瘤标志物、白血病免疫、临床微生物等应用中有着明显的效果。
结论：流式细胞术在临床检验中可以得到很好的应用。
关键词流式细胞术；流式细胞仪；临床检验；应用流式细胞术是一种生物学技术，用流式细胞仪（FACS）对悬浮于流体中的微小颗粒进行计数和分选。
这种技术可以用来对流过光学或电子检测器的一个个细胞进行连续的多种参数分析。
流式细胞术（FCM）是对悬液中的单细胞或其他生物粒子，通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。
FCM不但快速、灵敏而且还可以同时对多个参数进行分析，FCM在临床微生物检测中的作用受到越来越多人的关注。
FCM不但可以用来检测受染细胞内的病毒抗原，而且还可以对受染细胞表面的病毒抗原进行检测。
由于FCM检测的一般只是单个细胞，因此经过FCM检测的受染细胞只适用于支气管灌洗液、血液、尿标本以及一些经酶消化过的组织细胞，同时由于FCM进行的是多参数分析。
所以FCM体外抗生素药敏试验的主要机制是，通过FCM检测病原体和染料结合在一起后所发出的不同强度的荧光。
从而间接地反映出病原体的功能状态以及活性，以达到帮助判断病原体对抗生素的反应性目的，其中用于研究抗菌效应的荧光染料主要有2大类：其中用来标记DNA和RNA的染料主要包括如溴化乙锭、碘化丙啶等；其次是用来反映代谢活性或结合蛋白的探针，其中包括异硫氰酸荧光素、膜电位敏感性染料等。
怎样选择这些物质，与这种染料本身的发射特性有关，同时抗生素的作用机制也可能关系到这些物质的选择。
近年来FCM在细菌的药敏效应的研究领域已获成功，将这些荧光染料和FCM联合运用到一起，可以判断其细菌活力与功能状态，这种方法由于有速度快等优势，临床实验室的常规药敏试验中也应用到这种方法。
流式细胞术的工作原理及其临床应用
流式细胞术的工作原理及其临床应用一、本文概述流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速检测和分析单个细胞的技术，广泛应用于生物学、医学和生物技术等众多领域。
本文将对流式细胞术的工作原理进行详细介绍，并探讨其在临床诊断和治疗中的广泛应用。
我们将概述流式细胞术的基本原理和技术特点，包括细胞染色、荧光信号检测和数据分析等方面。
然后，我们将深入探讨流式细胞术在免疫学、血液学、肿瘤学等领域中的临床应用，以及其在疾病诊断、预后评估、疗效监测等方面的重要作用。
我们将对流式细胞术的未来发展趋势进行展望，以期为读者提供全面而深入的了解。
二、流式细胞术的工作原理流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种在液流中快速定量分析和分选细胞的技术。
其工作原理主要基于流式细胞仪的精确设计和操作。
待检测的细胞经过预处理，如荧光标记、固定和破膜等，使其带有可检测的荧光染料或抗体。
这些细胞随后被导入到流式细胞仪中，通过喷嘴形成单细胞悬液，并以一定的流速通过检测区域。
在检测区域，细胞经过激光束的照射，激发出荧光信号。
这些信号被光电倍增管等光电转换器接收，并转化为电信号。
电信号经过放大、数字化处理后，由计算机系统进行记录和分析。
流式细胞仪可以同时检测多个参数，如细胞大小、内部结构、DNA 含量、蛋白质表达等。
这些参数的分析主要基于荧光信号的强度和波长，以及细胞的电学特性，如电阻抗。
流式细胞术还可以结合分选技术，将特定类型的细胞从混合细胞群体中分离出来。
这主要通过在流式细胞仪的出口处设置电磁场或静电场，对带有特定荧光信号的细胞进行偏转，从而实现细胞的分选。
流式细胞术的工作原理是将单个细胞在液流中快速通过激光束，通过检测和分析荧光信号，实现细胞的定量和定性分析，以及细胞的分选。
这种技术具有高灵敏度、高分辨率和高通量的特点，广泛应用于生物医学研究的各个领域。
三、流式细胞术的临床应用流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）作为一种高度灵敏且多功能的细胞分析技术，在临床医学领域的应用日益广泛。
流式细胞术在临床检测上的应用
流式细胞术在临床检测上的应用（一）淋巴细胞亚群分析目前主要开展的项目：1．T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD82．绝对计数3．活化淋巴细胞的检测（CD69/HLA-DR/CD71）4．CD4+Th/i 和CD8+ Ts/c进一步区分5．Naïve/Memory T细胞亚群检测6．Th1/Th2亚群的检测临床意义：•了解在不同情况下体内免疫功能状态•辅助临床疾病的诊断•探索疾病的发病机理、病程、预后•监测、指导临床治疗方案•免疫系统疾病，如SLE等•免疫缺陷病，AIDS•移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测•肿瘤病人化疗后免疫力检测推荐试剂：T/B/NK/CD4/CD8/CD4:CD8:绝对计数活化淋巴细胞检测Th1/Th2检测（二） HLA-B27的检测HLA-B27与强直性脊椎炎（ankylosin spondylitis，AS）具有高度的疾病相关性，B27的个体的该病的相对危险率达300以上，AS病人中约95%以上的个体是B27。
同时，与B27高度相关的疾病还有：莱特儿病（包括腹泻、多发性关节炎、尿道炎、结膜炎等的综合症，Reiter’disease）和急性前葡萄膜炎（acute anterior uveitis）等，最新近研究认为还和心肌炎等心脏病有关联。
BD HLA-B27 Kit检测HLA-B27，报告检测的平均荧光强度，根据界值判定，得到阴性/阳性结果。
实验的灵敏度为100%，特异性为97.5%推荐试剂：（三）血液学上的应用1．白血病和淋巴瘤免疫分型用流式来检测对下列情况有重要意义：•用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。
•形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。
•混合性白血病。
•部分髓系白血病。
目前，免疫分型对粒细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。
•慢性淋巴细胞白血病。
•微小残留白血病。
2．造血干细胞计数主要应用于•PBSC采集前CD34阳性细胞动员有效性的检测•各种造血干细胞移植物的CD34+细胞计量控制•化疗强弱的掌握•贫血的鉴别（如再障，缺铁性贫血等）•基因治疗推荐试剂：3．PNH诊断阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血。
流式细胞术的临床应用
见细胞核形态完整 ， 细胞碎 片少 ， 荧光核型与间接荧光抗体试 验（Ｆ 近似 。 Ｃ ＩＡ） Ｆ Ｍ检侧结果为 阳性 ４ 例 ， ０ 阴性 ２ 例 ， ５ 其中 ２ 例 ＩＡ阳性 的标本 Ｆ Ｍ检测结果为阴性（ １ Ｆ Ｃ 有 例是胞质 型 ） ， １ ＩＡ阴性的标本 Ｆ Ｍ检 测结果为 阳性 ， 例 Ｆ Ｃ ２种方 法具有 高
血清 的磷ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ盐 缓冲液 （ Ｂ ） Ｐ Ｓ 充分洗 涤 ， 加人 异硫氰 酸荧光 素
标记的兔抗人抗体 ，室温避光反应 ２ ｉ ，Ｂ ０ｒ ｎ Ｐ Ｓ洗涤 １ ， ａ 次 取
免疫反应后 的细胞核涂片 ， Ｏｙ ｕ－ Ｂ ５ 型荧光显微 镜 用 ｌ ｍｐ ｓ Ｘ １
Ｄ Ａ含量 ，还可根据 Ｄ Ａ分布组方 图直 观反 映细胞周期 的 Ｎ Ｎ 分布状态 ， 对癌 前病变 细胞 的增殖 能力进 行动态 观察 ， 可作
度 的 一 致性 （ ０ １ 。 火 ． ） ０
倍体分析 ， 中 ２ 其 ９例异倍体的癌前病变有 随访 结果 ，２例在 ２
随访 期 间 已 由病 理 诊 断 证 实 为 癌 变 ， 例 未 发 生 癌 变 ； 究 者 ７ 研
还对 ３ ０例二倍 体的 Ⅲ级不典 型增生病变 进行 了随访 ，在随 访期 间无 一例癌变。 由此可见 ，Ｃ 能对 癌前 病变 盼眭质和 ＦＭ 发展趋势作 出评价 ， 有助于癌 变的早期诊 断。
蛋 白反 应试验 （ Ｒ） 免疫珠 试验 （Ｂ ） 固相 酶染 色法 、 ＭＡ 、 ＩＴ 、 浅
盘 凝 集 试 验 （ Ａ 、 联 免 疫 吸 附 试 验 （ ＬＳ 法 、Ｃ 法 Ｔ Ｔ）酶 Ｅ ＩＡ） Ｆ Ｍ
邢 艳等［ ９ １ 收集经 间接免疫 荧光 法 （Ｆ 检 测 的阴性血 清 ＩＡ）
流式细胞仪基本原理和临床应用
Fluorescence Intensity
细胞凋亡检测技术
1 几个概念
2 技术和方法
1 荧光信号的面积：对荧光光通量 进行积分
2 DNA指数(DI)：相对DNA含量
3异倍体：非二倍体，包括近二倍 体，四倍体，多倍体，非整倍体
凋亡细胞的特点
➢ 在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核 膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞浆和细胞器 密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲， 但早期细胞膜的完整性未受到破坏
流式细胞仪 分选系统
488 nm laser
- Charged Plates
Single cells sorted into test tubes
FALS Sensor Fluorescence detector
+
流式细胞 仪的应用
流式细胞仪的科研应用
➢ 细胞表型分析 ➢ 胞内细胞因子的检测 ➢ 染色体分类研究 ➢ 细胞周期和DNA倍体分析 ➢ 流式标准小球定量 ➢ 分选 ➢ 细胞内钙离子测量
流式细胞仪的光学系统
流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过 聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上， 被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生 散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向 光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。 光散射信号在前向小角度进行检测，这种信 号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号 的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色 性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不 同波长的荧光信号。
号越强
流式细胞仪的电子系统
进行信号检测和分析 当细胞携带荧光素标记物, 通过激光照射区时,
受到激发, 产生不同波长的、代表细胞内不同物 质的荧光信号 荧光信号由光电接收器接收，转变为电信号，可 分析电压脉冲的高度、面积和宽度 电脉冲信号经A/D转换成数字信号 数字信号传送到计算机，进行储存、 作图、 统 计分析
流式细胞术在临床中的应用
HLA-B27检测
• HLA-B27是与强直性脊柱炎（AS）密切相关的基因。 利用流式细胞术检测HLA-B27抗原具有灵敏度高, 特异性强, 结果准确、客观等优势。
HLA-B27在强制Байду номын сангаас脊柱炎中的诊断价值
如果根据症状和体征, AS的可能超过50%, 那么实验阳性 显著增加正确诊断机会。
背痛及强直的患者, 在不伴有银屑病及炎症性小肠病变时, HLA-B27阴性可排除AS诊断。
但低于基因。 比染色体及基因分析快速。
标本要求: 单细胞悬液
标本类型 PB BM 各种体液（如尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水） 各种灌洗液 其他组织穿刺标本 液体标本采集及保存: 采集后EDTA或 肝素抗凝，室温保存，6h内送检。
流式细胞术在科研中的应用
• 细胞增殖周期测定和DNA倍体分析 • 凋亡检测 • 细胞因子的测量等
•
肿瘤
• 呼吸系统疾病: 病毒感染时，CD8+T
GPI锚定蛋白测定
• 阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）的过去常用 诊断灵敏较低, 有30%以上的患者呈阴性反应。 我们采用流式细胞术分析红细胞和白细胞膜 CD55,CD59分子的表达量和计数可以将灵敏度提 高到99%。
参考值 红细胞CD55,CD59 阳性率>95% 粒细胞CD55,CD59 阳性率>95% 临床意义 PNH诊断的金标准 可用于贫血患者的诊断和鉴别诊断 检测病情进展状况, 判断疗效
谢谢！
检测淋巴细亚群的胞临床意义
•
一般认为循环中淋巴细胞数目及比
例变化是免疫功能紊乱甚至缺陷的重要特征，
会造成很多疾病的发生发展。
• 自身免疫性疾病: 系统性红斑狼疮；1型糖尿病
流式细胞术在临床分析方面的应用
流式细胞术可以测定免疫细胞的活性、增殖和凋亡等指标， 评估免疫细胞的应答反应和免疫功能。
造血细胞分析
造血细胞类型鉴别
流式细胞术可以检测和区分不同种类的造血细胞，如红细胞、白细胞和血小 板等，有助于了解血液系统的状态和疾病。
白细胞分化与成熟
流式细胞术可以测定白细胞分化抗原的表达，评估白细胞成熟程度和分化状 态，预测免疫应答反应。
流式细胞术的实验设备比较昂贵，操作和维护成 本较高。
标准化
由于流式细胞术的实验条件和操作过程比较繁琐 ，不同实验室之间的结果可能存在差异，因此需 要建立标准化的操作规程以保证结果的可靠性。
04
流式细胞术的未来发展趋势 和研究方向
流式细胞术的未来发展趋势
技术提升
流式细胞术将不断进行技术更新和提升，提高检测灵敏度和分辨率，以满足临床分析日益 增长的需求。
流式细胞术与传统的细胞分析方法相比，具有更 快速、更灵敏、更准确的优点，并且可以进行大 规模、高通量的分析，提高了细胞分析的效率和 精度。
流式细胞术可以实现对细胞进行多参数、多角度 的分析，包括细胞形态、细胞周期、细胞表面标 志物等，为临床诊断和治疗提供更丰富的信息。
流式细胞术在临床上的应用包括免疫细胞功能分 析、血液细胞分析、肿瘤细胞耐药性分析等，为 临床提供了更深入的了解和更准确的诊断。
2
通过将单个细胞与特异性抗体结合，实现细胞 分类和定量分析。
3
流式细胞术可以对细胞进行多参数、快速、连 续、准确的分析。
流式细胞术的发展历程
01
20世纪60年代末期，流式细胞术开始出现并逐发展成为一 门重要的技术。
02
早期的流式细胞术主要采用压电晶体传感器进行检测，后来逐
[医学]流式细胞术的临床应用
![[医学]流式细胞术的临床应用](https://img.taocdn.com/s3/m/df4acc0b77232f60ddcca17b.png)
数据分析
设门（gating）：
根据某些特性将分析细胞群 圈起来。
淋巴细胞：FSC/SSC CD45++/SSCdim
T淋巴细胞：CD3+/SSCdim
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
直方图
单参数分析 横坐标：信号强度 纵坐标：细胞数量
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
散点图
双参数分析 横、纵坐标代表的均是信号强度 UL: cd3-cd4+ UR: cd3+cd4+ LL: cd3-cd4- LR: cd3+cd4-
TH2，蠕虫感染 环境变应原的应答 IL-4、IL-5、IL-10等 介导体液免疫
实验诊断科 分子诊断组
其他临床应用
TH1/TH2细胞检测
● 细胞内细胞因子表达 IFN-γ和IL-4 ● 检测前需要刺激活化（PMA + Lonomycin） ● Golgistop，含有莫能霉素（Monensin） ● 设门策略：CD3+CD8-
计算机分析 实验诊断科 分子诊断组
BD FACSCalibur 双光源，488nm和633nm 可同时检测四种抗原 可分选（理论上）
实验诊断科 分子诊断组
流式细胞仪检测什么信号？
散射光信号
前向散射光（forward scatter light, fsc ） 反映细胞大小
侧向散射光（side scatter light, ssc） 反映细胞内部颗粒、核膜等
实验诊断科 分子诊断组
FCM的临床应用
标本染色的一般方法 已开展的临床项目 其他临床应用
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
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2013流式细胞术临床应用的建议2013年流式细胞术（flow cytometry）在临床应用中发挥着越来越重要的作用。
流式细胞术是一种广泛应用于生物医学研究和临床诊断的技术，通过激光器束照射细胞悬液，利用免疫荧光标记物对细胞进行快速、准确的分析和分类。
它不仅可以用于细胞分型、表面标记物检测和定量分析，还可以用于DNA含量测定、细胞周期分析和细胞凋亡等许多细胞生物学实验。
在医学领域，流式细胞术已经广泛应用于恶性肿瘤诊断和疗效监测、免疫学分析、血液疾病筛查等方面。
以下是关于2013年流式细胞术临床应用的一些建议。
1.提高流式细胞术的操作技术
流式细胞术是一项复杂的实验技术，需要操作者具备专业的知识和技能。
建议临床实验室加强对操作者的培训和质量控制，确保流式细胞术的准确性和可靠性。
此外，鼓励实验室与相关学科领域开展合作，促进多学科融合和交流，从而提高流式细胞术的应用水平。
2.加强流式细胞术在临床诊断中的应用
流式细胞术在肿瘤诊断和治疗方面具有很大的潜力。
建议医务人员积极推广并依托流式细胞术在肿瘤早期诊断、预后评估和治疗监测中的应用。
此外，还可以探索流式细胞术在其他疾病诊断、临床分型和病理分析中的应用，为患者提供更准确和个体化的医疗服务。
3.引入新的标记物和技术进一步丰富流式细胞术应用
流式细胞术的应用受限于标记物的选择和技术的局限性。
建议临床实验室引入新的标记物和技术，如多色流式细胞术、质谱流式细胞术等，进一步提高流式细胞术的分辨率和检测灵敏度。
同时，开展相关研究，探索新的流式细胞术应用领域，如循环肿瘤细胞检测、微小残留病灶鉴定等，为临床诊断和治疗提供更多选择和可能性。
4.优化流式细胞术数据分析和结果解读
流式细胞术生成的数据量大，分析复杂，结果解读需要结合临床病情和临床判断。
建议建立标准化的数据分析和结果解读流程，并加强质量控制和质量保证。
此外，推动多中心数据共享和多中心交叉验证，提高流式细胞术的可重复性和可靠性。
5.加强与其他技术的结合和协同应用
流式细胞术与其他分子生物学和细胞生物学技术的结合，可以进一步拓展其临床应用领域。
建议临床实验室与其他技术领域开展协作研究，如基因测序技术、单细胞测序技术等，发掘新的疾病标记物和治疗靶点，为临床诊断和治疗提供更多有效和个体化的策略。
总之，2013年的流式细胞术在临床应用方面具有广阔的前景和潜力。
通过加强操作技术、扩大临床应用、引入新技术和标记物、优化数据分析和结果解读、加强与其他技术的结合，可以进一步提高流式细胞术的应用水平，为患者提供更精准、个体化的医疗服务。