气相色谱与液相色谱

一、：

1.气相：是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间（）的微小差异，当两相作时，这些物质在两相间进行反复多次的分配，使原来只有微小的性质差异产生很大的效果，而使不同组分得到分离。

2.液相：是在经典的基础上，引用了的理论，在技术上，改为高压输送（最高输送压力可达4.9′107Pa）;是以特殊的方法用小粒径的填充而成，从而使柱效大大高于经典（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的，可对进行连续检测。

二、应用范围：

1.气相：具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或差的物质都难于应用进行分析。一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或法。

2.液相：，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、差、相对大（大于400 以上）的（些物质几乎占总数的75% ～80% ）原则上都可应用来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用的约占20%，而能用分析的约占70～80%。

三、仪器构造：

1.气相：由载气源、进样部分、、柱温箱、和组成。进样部分、和的温度均在控制状态。

1.1 柱箱：色谱柱是的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离，从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。

由于色谱柱的两端分别连接和检测器，因此和检测器的下端（接头）均插入柱箱。

柱箱能够安装各种和柱，并且操作方便。

色谱柱（样品）需要在一定的温度条件下工作，因此采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的很小。

对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。

1.2 ：

进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其，因此采用微机对进样器进行温度控制。

根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供

选择：

1.进样器

2.器附件

3.分流进样器附件

4.毛细管分流/器

5.六通阀气体进样器

1.3检测器:

检测器的作用是将样品的化学信号转化为（）。

检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作，因此采用微机对检测器进行温度控制。

根据各种样品的特性，共有五种检测器可供选择：

1.(FID)

2.(TCD)

3.(ECD)

4.(NPD)

5.(FPD)

1.4

该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

2.液相：主要有、输液系统、分离系统、检测系统和组成。

2.1

一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的是有益的。

2.2 输液系统

该系统包括、贮存器和仪三部分。的一般压强为l．47～4．4X107Pa，流速可调且稳定，当高压通过时，可降低样品在柱中的，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和仪，可使流动相随和样品的性质而改变，包括改变的极性、、PH值，或改用或等。这就可使各种物质（即使仅有一个的差别或是）都能获得有效分离。

3.3 分离系统

该系统包括色谱柱、连接管和等。色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），为2～5mm，由"优质或厚壁玻璃管或等材料制成，住内装有直径为5～10μm的（由和构成）．中的是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有（如硅胶表面的基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000?）和大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与中固定相的制备一样），或者用化学法各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、、氨基或各种长度碳链的等）或的。

因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。例如，在多孔性硅胶表面豌豆（PSA）后，就可以把中的一种分离出来。另外，固定相粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低效应。基度小，浅，样品在区内短。这些对缩小、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基度小，数N就越大。这也进一步证明基度小，会提高分辨率的道理。

再者，的可使温度从室温调到60C，通过改善速度，缩短分析时间，就可增加的效率。

2.4 检测系统

常用的检测器有、和三种。

（1）

该检测器适用于对（或）有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如蛋白质、、、、、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g／ml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液的样品。

（2）

凡具有与流动相不同的样品组分，均可使用检测。，糖类化合物的检测使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但灵敏度低（检测下限为10-7g／ml），流动相的变化会引起的变化，因此，它既不适用于，也不适用于样品的检测。

（3）

凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的（如、、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g／ml），和作品的检测均可采用。

2.5 系统

该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。

光度定义

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区(2)400～760nm的区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或）、红外分光光度计或。为保证测量的和，所有仪器应按照国家或本附录，定期进行校正检定。

仪器组成

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白

定量以及细菌生长浓度的定量。

仪器主要由光源、单色器、、检测器、信号处理器和显示与组成。

光谱范围

包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.

钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱光通过三折射后,可得到由红橙,黄绿,蓝靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源.

氢灯（或氘灯）的发射光谱:氢灯能发出185～400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源.

物质的吸收光谱(1)

如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.

不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质.

物质的吸收光谱(2)

当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液.

= 反射光+ 分散光+ 吸收光+ 透过光

如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失则:

入射光= 吸收光十透过光

2原理

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：