《细胞化学成分显》PPT课件

在一定生理条件下：
整个蛋白质所带的负电荷多（-COO-），就为酸性蛋白； 其主要分布在细胞质中。
整个蛋白质所带的正电荷多（NH3+），就为碱性蛋白， 其主要分布在细胞核内。
标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的固绿 染液分别染色，使细胞内的碱性蛋白与酸性蛋白质显示 出来。
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步骤：
处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。
滴水冲洗
盖片、
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DNA, RNA
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洋葱内表皮细胞甲基绿-哌罗宁染色
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DNA被甲基绿染成绿色 RNA被哌罗宁染成红色
1.细胞组织化学法：在保持细胞结构的基础上，利用某些 化学试剂与细胞内的一些物质发生化学反应，从而在细 胞局部形成有色沉淀在通过显微镜对细胞内的化学成分 进行定位定性的检测方法。
-COOH
-NH2
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Methyl green-pyronin
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个人观点供参考，欢迎讨论！
两张 70%乙醇固定6min
90℃、5%三氯醋酸、15min
冲
洗 一张酸性固绿5-10min、另一张碱性固绿30-40min 冲洗晾干、
观察
血涂片，70%乙醇固定6min 晾干 甲基绿-派罗宁滴染20min 冲洗，吸干 丙酮分色（沾2-3次）晾干观察
一小块洋葱表皮 观察
甲基绿-哌罗宁滴染30-40min
两张 70%乙醇固定6min
90℃、5%三
氯醋酸、15min 冲洗 一张酸性固绿5-
10min、另一张碱性固绿30-40min 冲洗晾干、
观察
酸性蛋白：细胞质、核仁区域内的蛋白 碱性蛋白：细胞核内组蛋白
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处死蟾蜍的方法：
左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着 掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在 头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)， 右手持解剖针直插入此凹陷约2 mm，将针尖转 向头侧插入颅腔捣毁脑组织。将解剖针向尾侧刺 入脊椎管内捣毁其脊髓。直至其四肢伸直、肌肉 松驰为止。
2.三氯醋酸的作用：抽提DNA 、RNA，使蛋白质与DNA 、 RNA分开。
3.固定：将细胞杀死，使其仍然保持原来的结构和形态。
4.甲基绿-哌罗宁染色原理：核酸是强性酸，甲基绿-哌罗 宁是碱性染料，具有亲和力，这两种碱性染料有选择的 特异染色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染成 红色。
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Fast green
细胞化学成分显示
酸性蛋白质、碱性蛋白质的显示 DNA、RNA的显示
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实验目的：
1.了解细胞化学反应基本原理 2.了解细胞内酸性蛋白和碱性蛋白、DNA
和RNA分布状况 3.熟练血涂片技术
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实验准备
1、材料 蟾蜍 洋葱 2、仪器和器材 光学显微镜 解剖器械
载玻片 染色缸 水浴箱 3、试剂 70%乙醇
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将推片自血滴左 侧向右移动 当血滴均匀地附着在两片之间后，再将推 片向左平稳地推移
将推片自血滴左 侧向右移动
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二.细胞内的DNA、RNA分布
原理：
核酸是呈酸性，与碱性染料甲基绿-哌罗宁 是具有亲和力，这两种碱性染料有选择的特异染 色，甲基绿把DNA染成绿色，哌罗宁把RNA染 成红色。
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5%三氯醋酸 0.1%碱性固绿染液 0.1%酸性固绿染液 丙酮 甲基绿-哌罗宁染液
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实验内容：
细胞内酸性蛋白、碱性蛋白的显示
细胞内DNA和RNA分布
蟾蜍红细胞 洋葱表皮细胞
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一、酸性蛋白质、碱性蛋白质的显示
原理：
细胞内不同蛋白质分子中所带的碱性基团(-NH2)和酸性 基团静电荷多少也不同。
步骤：
血涂片，70%乙醇固定6min 晾干 绿-派罗宁滴染20min 冲洗，吸干 色（沾2-3次）晾干观察
甲基 丙酮分
一小块洋葱表皮 甲基绿-哌罗宁滴染3040min 滴水冲洗 盖片、观察
蟾蜍血涂片：细胞质红色、核蓝绿色、核仁紫红
洋 葱 表 皮：细胞质红色、核绿色
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处死蟾蜍，制作三张蟾蜍血涂片，晾干。