柱层析应用(新)

四季青中酚性化合物的分离

一．实验目的：

(1) 初步了解天然产物的分离，检出，鉴定方法；

(2) 熟悉柱层析的基本操作。

二．实验原理：

原儿茶醛(Protocatechuic aldehyde；3, 4-二羟基苯甲醛) 是四季青叶中抗心绞痛的主要有效成分之一，具有扩张冠状动脉，增加冠脉血流量的作用。该化合物熔点153~154 ºC，易溶于乙醇、丙酮、醋酸乙酯、乙醚和热水，溶于冷水，不溶于苯和氯仿。有引湿性，在水中易氧化变色。

原儿茶酸(Protocatechuic acid；3, 4-二羟基苯甲酸) 存在于冬青科植物冬青的叶等植物中。白色至褐色结晶性粉末，在空气中变色。熔点198~200 ºC，易溶于水、乙醇、乙醚、丙酮和乙酸乙酯，难溶于苯和氯仿。具有抗菌作用，体外试验时对绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、产碱杆菌及枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。亦有祛痰、平喘作用。临床用于治疗慢性气管炎。

OH OH

COOH

OH OH

CHO N

H

NO

2NO

2

NH

2

原儿茶酸(C7H6 O4 ) 原儿茶醛(C7H6O3)2, 4-二硝基苯肼（C6H6N4O4）2, 4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine) 红色结晶性粉末，熔点197～198 ºC，微溶于水、乙醇，溶于酸。用于炸药制造，可用作化学试剂用于鉴别醛、酮。与其生成的2,4-二硝基苯腙为黄色或红色晶体易于观察

三．操作步骤

（1）装柱：硅胶（100~20目，活度：Ⅴ级）6g ,干法装柱。

（2）上样：样品用移液管吸取1ml 加入柱顶。

（3）洗脱：石油醚/乙酸乙酯（4:6），约30ml，小漏斗加入。

（4）收集：用小三角瓶按色带收集，经验为6ml一收集，结果较为理想。

（5）检出：取硅胶CMC-Na小板，在板上如图画小格，用毛细管吸取各分洗脱液分别滴在各小格内，然后用毛细管取检出试剂滴在检品处，上行做空白对照，下行做

反应。当检出洗脱液至无腙的橙色斑点出现时改用氨性硝酸银试剂检出原儿茶酸。

当正反应时应使银－氨络离子的溶液中的银离子被原儿茶酸的邻二酚烃基还原成

金属银呈黑色斑点反应。

（6）TLC检出：将上述流份分别点样进行薄层层析检出，薄层层层析条件：

硅胶CMC－Na薄层板

展开剂：氯仿：丙酮：甲醇：醋酸＝7：2：0.5：0.5

显色剂：25的三氯化铁乙醇溶液显色

并按薄层层析结果合并相同流份。

（7）将层析柱洗净放入烘箱内。记录各流份的点滴反应及薄层层析的结果（绘出图谱）。

以初步判断各流分中所含成分为什么化合物？