次高分子量蛋白质 Marker (43kD-200kD)使用说明
WB二抗稀释液-凯基生物
WB二抗稀释液Cat Number:KGP107For Research Use OnlyStore at4℃for one yearExpire date:20130105一、试剂盒说明WB二抗稀释液是蛋白印迹(Western Blot,WB)等实验中最常用的蛋白类生物试剂,为保证抗体标记物具有较高的生物活性,厂家在生产运输过程中一般都以较高的浓度分装保存。
在蛋白印迹等实验中,为获得较好的染色结果,降低实验成本,二抗在使用前都需要适当稀释。
本产品仅用于WB实验中二抗的稀释。
二、试剂盒组份WB二抗稀释溶解液100mlBSA3g说明书一份三、使用说明1、WB二抗稀释液的配制:按照需求的量配制含3%BSA的WB二抗稀释溶解液,比如称取0.3gBSA溶于10ml的WB二抗稀释溶解液,现配现用。
2、用时取适量用于二抗稀释。
二抗的稀释倍数请参照抗体生产厂家使用说明。
四、注意事项1.本产品属蛋白制剂,室温放置过久易导致蛋白的降解和活性丧失。
2.反复冻融亦会导致蛋白活性的丧失。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4.WB二抗稀释液现配现用。
五、凯基相关产品(详见凯基网站)1、蛋白提取核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒全蛋白提取试剂盒膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒磷酸化蛋白提取试剂盒(简易型)活性蛋白提取试剂盒红细胞裂解液细菌蛋白提取试剂盒酵母蛋白提取试剂盒植物蛋白提取试剂盒蛋白裂解液系列2、蛋白定量BCA法蛋白定量检测试剂盒Bradford法蛋白定量检测试剂盒Lowry法蛋白定量检测试剂盒3、蛋白染色蛋白质银染检测试剂盒蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒考马斯亮蓝蛋白快速染液4、蛋白分子量Marker蛋白分子量Marker(14KD-116KD)蛋白分子量Marker(10KD-200KD)预染蛋白分子量Marker(20KD-118KD)预染彩色蛋白分子量Marker(11KD-250KD)5、Western bloting组装试剂盒凯基蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒凯基Western bloting检测试剂盒6、Western bloting化学发光试剂盒ECL检测试剂盒加强型ECL检测试剂盒。
Livning彩色预染蛋白marker(10-180KD) with 45kDa使用说明书
Livning彩色预染蛋白marker(10-180KD)with45kDa使用说明书产品名称规格货号Livning彩色预染蛋白marker(10-180KD)with45kDa250μl*1LVN150-1Livning彩色预染蛋白marker(10-180KD)with45kDa250μl*2LVN150-2Livning彩色预染蛋白marker(10-180KD)with45kDa2x250μl*10LVN150-10【储存条件】-20˚C恒温长期保存,4˚C保存6个月,建议分装保存,避免反复冻融。
【产品简介】本产品由跨度从10~180kDa的10种纯化的天然蛋白混合而成,各条带浓度约为0.2~0.4mg/ml。
其中75kDa条带为红色预染条带,方便判断各个条带的准确位置。
本产品适合作为SDS-PAGE电泳时,变性蛋白样品的分子量参照,并可实时观察蛋白样品的电泳分离状况,也可用于检测Western blot的转膜效率。
由于共价结合的染料会影响蛋白质分子的电泳迁移率,本产品适于粗略地估计目的蛋白样品的分子量。
【使用方法】1.将本产品于室温融化后,轻柔混匀,使沉淀充分溶解;2.加入3~5μl到SDS-聚丙烯酰胺胶的上样孔中,与待测样品一起电泳和转膜;3.电泳结束后,通过考马斯亮蓝染液染色观察条带。
【注意事项】1.使用时应该将从冰箱中取出的产品恢复至室温后使用,否则可能由于低温下蛋白变性不彻底导致电泳条带出现不同程度的弥散;2.使用前先将产品恢复至室温后混匀,使沉淀充分溶解,否则可能导致电泳条带出现不同程度的弥散或拖带;3.本产品含有SDS,蛋白已变性,不宜作为天然蛋白分子电泳时的分子量参照标准。
【图列展示】(单一浓度PAGE胶,Tris-Glycine电泳缓冲液,实际电泳图)8686************(梯度胶和单一浓度胶,Tris-Glycine 电泳缓冲液,带型示意图)【附录:转膜和洗膜】A 、转膜条件(冰上进行):a.Transfer with buffer containing 20%methanol to fix proteins on membrane.b.Wash membrane with PBS or TBS containing less than 0.1%Tween-20at 4°C.B 、洗膜条件(4度进行):Membrane:Nitrocellulose membranes /PVDFWash Buffer:1X Tris buffered saline,0.1%Tween-20(TBST)(吐温20不能超过0.1%)C 、Stripping Buffer:15g Glycine,1g SDS,10ml Tween20,pH2.2–Adjust volume to 1L如果需要用到含有DTT /b-ME 的Stripping buffer ,膜需要先以1X Tris buffered saline(TBS)洗三次,把Tween-20去干净后,再进行Stripping 。
预染蛋白marker说明书
g 时可以根据自身的实验条件和实验习 n 惯通过预实验确定合适的上样量,这样
可以节约成本,同时获得效果更佳的实 验图片; l 未使用的双色预染蛋白质分子量标准 保存于所要求的储存条件,在 4°C 可放 置 2 个月。
上样量
根据上样孔的大小,本双色预染蛋白分子量 标准通常每次上样 5-10 μl(5×1.5 mm 胶孔 5 μl 足够),即可在电泳时、电泳后或转膜后 观察到非常清楚的蛋白质条带。 注:35 和 50 kDa 之间的弱带为 40 kDa。
15-150 kDa 双色预染蛋白
Marker
Reagent Grade 产品编号: C610011 包装: 250 μl 储存: -15°C~-20°C 品牌: 生工 注:该产品不适用于人或动物诊断或治疗使 用。
一般描述
c 本双色预染蛋白分子量 marker 包含了从 15 te kDa 到 150 kDa 共 8 种纯化的预染蛋白质
内含物
67 mM Tris-HCl, pH 7.5, 20 mM DTT, 5 mM EDTA, 2% (W/V) proclin300.
注意
本彩色预染 marker 已经配制在 1×SDS-PAGE 上样缓冲液中,可直接使用, 不要煮沸。
(15, 20, 25, 35, 50, 70, 100, 150 kDa),其中 70 kDa 条带为橙色,其余条带为蓝色,适合
io 作为 SDS-PAGE 和 Western 的蛋白质分子
量标准。
B 使用说明
l 室温下解冻后轻轻混匀或者是用移液 枪缓慢吹打均匀,不要煮沸;
n l 取本产品 5 μl 与实验样品同时进行聚 o 丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),建
蛋白marker分子量
蛋白marker分子量
蛋白marker分子量是指用于在蛋白质分子量测量中作为参考标准的特定蛋白质分子量标记。
这些marker通常是由具有已知分子量的蛋白质分子组成的混合物,通过电泳等技术与待测样品一起运行来确定待测样品中蛋白质分子的分子量。
常用的蛋白marker分子量范围从10 kDa到250 kDa不等,其中包括常见的标记蛋白如β-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶和肌红蛋白等。
使用蛋白marker分子量可以快速、准确地确定待测蛋白质的分子量,是蛋白质分析中不可缺少的工具之一。
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PH0302-超低分子量蛋白Marker II (3.4-100kD)使用手册
PH0302|超低分子量蛋白Marker II(3.4-100kD)Ultra Low Molecular Weight Protein Marker货号:PH0302规格:☐10T(50ul)保存:Store@-20℃◆产品简介本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.4kD-100kD。
可以用来判断SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
◆使用说明第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用;本产品为即用型,融化后既能使用,不能95℃加热处理。
一.制胶:I配制分离胶1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层,使凝胶表面保持平整。
4.静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一(一块0.75mm mini胶用量)分离胶浓缩胶18%T,5%C/6.0ml5%T,3.3%C/2ml 40%PAA(19:1) 2.7ml/40%PAA(29:1)/0.25ml4×凝胶缓冲液 1.5ml0.5ml乙二醇(电泳级) 1.8ml/ddH2O/ 1.25ml10%APS50-65μl20μlTEMED6μl2μl注:如非必须,不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II配制浓缩胶去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。
1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
蛋白标准品(Marker)知识汇总
蛋白Mark er可分为:一、未预染的Ma rker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Mar ker即单色预染和多色预染。
在wester n blot 过程中,分子量Mar ker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。
这个 Wester n Blot 参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Ma rker也是west ern blot实验成功的必要条件之一。
总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。
以下是关于蛋白分子量标准的小叙:一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。
现在的Mar ker多数都选用预混和的Mar ker,方便不同大小的蛋白比较。
预混的Mar ker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁知道哪条是那条!数到眼都花了。
所以当看到特别浓的那几条标志带就记得是哪里了。
不过要记得,小带通常都不那么容易看清楚的。
在选择上来说,当然是选择其中至少有一条条带和自己的目的蛋白大小相近的最好,越近越好。
如果你的蛋白不幸在两条跨度较大M arker条带之间,选别的Mar ker吧。
预混的Mar ker 使用上不如预染Marke r(pre-staine d)好用,因为电泳过程中完全看不到,要和目标蛋白一起等到最后染色才―开蛊‖,无法对实验起预示参照作用。
彩虹130广谱蛋白marker说明书
第1页,共2页彩虹130广谱蛋白marker 说明书货号:PR1950规格:20T (100μL)/50T(250μL)/100T(250μL×2)/500T(250μL×10)保存:-20℃保存,有效期至少2年。
产品特点:●三色预染,颜色鲜亮,条带整齐,便于观察。
●用量少,节约成本,仅5μL 即可完美呈现(1.5mm ,10孔梳)。
●广谱多带,一支即可满足多种实验需求。
产品简介:本产品包含9种彩色预染的已知分子量标准蛋白,分子量范围为15kD-130kD ,每种蛋白含量约为0.2-0.4mg/mL 。
预染marker 可以用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot 的转膜效果。
经SDS-PAGE 凝胶电泳或转移到PVDF 或NC 膜上可得到清晰的9条彩色蛋白条带,其中72kD 条带为红色,25kD 条带为绿色,其余条带为蓝色。
使用说明(仅供参考):1.本产品是即用型液体,可直接上样电泳。
上样前无需加热,稀释或添加还原剂。
2.上样5μL ,SDS-PAGE 电泳过程及转膜后可看见清晰的彩虹条带。
3.建议分离胶浓度为15%。
电泳示意图说明:注意事项:1.本产品含有较高浓度甘油,常规-20℃保存为液体状态,可直接使用。
若冰箱温度不稳,导致结冰,可适当分装后置于4℃保存,至少稳定6个月。
2.Marker 分离效果与PAGE 胶浓度相关,若分离胶浓度低于15%,25kD 以下条带不易分离,但不影Beijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:响绿色(25KD)及以上条带。
如果目的条带小于25KD,建议分离胶浓度大于或等于15%。
3.转膜效果与转膜时间有关,需根据客户目的条带大小而定,如果转膜后较大分子量条带有部分未转膜成功,属于正常现象。
相关产品:P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT)P1200SDS-PAGE凝胶制备试剂盒T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液D106010×电泳转移缓冲液PR1920彩虹245广谱蛋白markerPR1700预染次高分子量蛋白markerSW3010膜封闭液DA1010DAB显色试剂盒(20×)PE0010ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)第2页,共2页。
marker说明书
CERTIFICATE OF ANALYSISPageRuler ™Prestained Protein Ladder#SM067210 x 250 µl(for 100 mini gel applications 5 µl per well or 50 large gel applications 10 µl per well)Lot: Expiry Date:Storage: stable at 4°C for up to 3 months. For long term storage, store at -20°C.SM067_57_9.docDescriptionPageRuler ™Prestained Protein Ladder is a mixture of 10 recombinant, highly purified colored proteins with apparent molecular weights of 10 kDa to 170 kDa. Ladder proteins are covalently coupled with a blue dye except for two reference bands prestained with different colors. The 72 kDa reference band is orange and 10 kDa reference band is green.The ladder is supplied in gel loading buffer and isready-to-use: no heating, further dilution or addition of a reducing agent is required.ContentsApproximately 0.1-0.2 mg/ml of each protein in the storage buffer (62.5 mM Tris-H 3PO 4 (pH 7.5 at 25°C), 1 mM EDTA, 2% (w/v) SDS, 10 mM DTT, 1 mM NaN 3 and 33% (v/v) glycerol).Applications∙ Monitoring of protein separation during SDS-PAGE (1). ∙ Verifying Western transfer efficiency (2, 3).∙ Approximate sizing of proteins on SDS-polyacrylamidegels and Western blots.Instruction for Use❶ Thaw the ladder at room temperature for a few minutes to dissolve precipitated solids. DO NOT BOIL!❷ Mix gently, but thoroughly, to ensure the solution is homogeneous.❸ Load the following volumes of the ladder on an SDS-polyacrylamide gel:– 5 µl per well for mini gel,– 10 µl per well for large gel.Use the same volumes for Western blotting.❹ After the run is complete, stain the gel or perform Western transfer procedure as desired.Note•Each lot of the PageRuler™ Prestained Protein Ladder is calibrated against a precisely sized, PageRuler™ Unstained Protein Ladder and calculated apparent molecular weights are reported in the picture.•For precise molecular weight determinations use PageRuler™ Unstained Protein Ladder, #SM0661, see.•In 8 or 10% gels low molecular weight proteins may migrate with the dye front.•Loading volumes are intended for use in gels with a thickness of 0.75 mm. For thicker gels, the recommended loading volume should be increased.•PageRuler™ Prestained Protein Ladder could be used in Western blotting with all common membranes: PVDF, nylon and nitrocellulose.•Longer transfer times or higher transfer voltages may be required for Western blotting of large (>100 kDa) proteins.Lot specific MW, kDa4-20% Tris-glycine SDS-PAGEcontinued on back pageQUALITY CONTROL5 µl of PageRuler™ Prestained Protein Ladder resolves 10 bands of equal intensities in 4-20% SDS-PAGE (Tris-glycine buffer) and after Western blotting onto PVDF membrane.Quality authorized by: Jurgita Zilinskiene References1. Laemmli, U.K., Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4, Nature, 227, 680-685, 1970.2. Burnette, W.N., "Western blotting": electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate – polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A, Anal. Biochem., 112 (2), 195-203, 1981.3. Towbin, H., et al., E lectrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 4350-4354, 1979.This product is manufactured under the license forStrep-tag® technology covered by US patents Nos.5,506,121, 6,103,493 and foreign counterparts. Related Products∙DualColor™ Protein Loading Buffer Pack #R1011∙Loading Buffer Pack #R0891∙Spectra™ Multicolor Broad Range Protein Ladder #SM1841∙PageRuler™ Unstained #SM0661∙PageRuler™ Plus Prestained Protein Ladder #SM1811∙PageSilver™ Silver Staining Kit #K0681∙PageBlue™ Protein Staining Solution #R0571∙10X Tris-glycine-SDS Buffer #B46∙10X Tris-tricine-SDS Buffer #B48∙DTT #R0861 ∙ProteoJET™ Mammalian Cell Lysis Reagent #K0301∙ProteoJET™ Cytoplasmic and Nuclear ProteinExtraction Kit #K0311∙Bradford Reagent, ready-to-use #R1271∙Bovine Serum Albumin Standard Set, ready-to-use #R1281∙Bovine Gamma Globulin Standard Set, ready-to-use #R1291PRODUCT USE LIMITATION.This product is developed, designed and sold exclusively for research purposes andin vitro use only. The product was not tested for use in diagnostics or for drugdevelopment, nor is it suitable for administration to humans or animals.Please refer to for Material Safety Data Sheet of the product.。
TaKaRa 蛋白质分子量标准(低)
∙o Protocolso Standard Protocolo Manual/Datasheet∙Cat.# Product Size Note3450 Protein Molecular Weight Marker (Low) 200 lanes3451 Protein Molecular Weight Marker (High) 200 lanes3452 Protein Molecular Weight Marker (Broad) 200 lanesDescriptionProtein Molecular Weight Markers are designed for use in SDS-Polyacrylamide gel electrophoresis. There are 3 kinds of Protein Molecular Weight Marker, Low (Molecular weight range : 14.3 - 97.2 kDa) , High (Molecular weight range : 44.3 - 200 kDa) and Broad (Molecular weight range : 6.5 - 200 kDa).Each protein is proportioned to yield uniform band intensities when perform staining Coomassie Brilliant Blue R-250 after run on SDS polyacrylamide gel.5µl of 20-fold diluted marker is loaded per lane of SDS-PAGE minigel for standard use. In this case, this marker is sufficient for 200 lanes.Electrophoresis ResultLow(Cat.# 3450) High(Cat.# 3451) Broad(Cat.# 3452)15% SDS-PAGE 7.5% SDS-PAGE 5-20% gradientSDS-PAGEStorageProtein Molecular Weight Marker, 1 MDTT: -20°C5×Loading Buffer : Store at room temperature after used.ComponentProtein Molecular Weight Marker 50 µl5×Loading Buffer1 ml1 M DTT 100 µlConcentration12 µg/µl (Cat.# 3450) 10 µg/µl (Cat.# 3451) 18 µg/µl (Cat.# 3452)Form50 mM Tris-HCl, pH6.81 mM EDTA200mMNaCl50% glycerolComponent Protein Low(Cat.# 3450)Protein Source M.W.(Da)Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Carbonic Bovine 29,000anhydraseTrypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300High(Cat.# 3451)Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidaseE. coli116,000Phosphorylase B Rabbitmuscle97,200SerumAlbuminBovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287Broad(Cat.# 3452) < /TR>Protein Source M.W.(Da)Myosin Pig 200,000 β-galactosidase E. coli116,000 Phosphorylase B Rabbit muscle 97,200 Serum Albumin Bovine 66,409Ovalbumin Hen eggwhite44,287CarbonicanhydraseBovine 29,000 Trypsin Inhibitor Soybean 20,100Lysozyme Hen eggwhite14,300Aprotinin Bovinepancreas6,5005×Loading Buffer200 mM Tris-HCl , pH6.810% SDS 0.05%BPB50% GlycerolNote∙All products are intended to be used for research purpose only. They are not to be used for drug or diagnostic purposes, nor are they intended for human use. They shall not to be used products as food, cosmetics, or utensils, etc∙Takara products may not be resold or transferred, modified for resale or transfer, or used to manufacture commercial products without written approval from TAKARA BIO INC.∙If you require licenses for other use, please call at +81 77 543 7247 or contact from our website at ∙Please confirm the content about the license or patent used in this document that relates to the Takara Bio product by clicking the license mark.Moreover, please confirm the "Limited Use Label License" or "patent" concerning the product of another manufacturers or respective owners in their Web site/catalog etc.Page TOP。
蛋白marker标记颜色方法
蛋白marker标记颜色方法全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:蛋白marker标记颜色方法在生物科学研究中,标记蛋白是非常常见的实验技术之一。
蛋白marker的标记可以帮助研究人员在实验中追踪和定位蛋白,从而更好地理解蛋白的功能和相互作用。
而标记蛋白的颜色选择也是非常重要的,不同颜色的标记能够帮助实验者在实验过程中更清晰地识别和分析样品。
本文将介绍一些常用的蛋白marker标记颜色方法,希望能够帮助读者更好地进行蛋白标记实验。
一、荧光标记荧光标记是蛋白标记颜色中最常用的方法之一。
通过将蛋白与荧光物质结合,可以在光学显微镜下直接观察到蛋白标记的颜色。
常用的荧光标记包括FITC(荧光异硫氰酸酯),TRITC(罗丹明异硫氰酸酯)和Cy5(Cyanine5)。
这些荧光物质在实验中常用于免疫荧光染色、融合蛋白标记等实验中。
荧光标记的优势是信号强度高、灵敏度高且不受环境影响,适用于单细胞和组织的标记。
在实验中,荧光标记的颜色可以根据荧光物质的不同而有所区分。
比如,FITC标记的蛋白呈现绿色,TRITC标记呈现橙红色,Cy5标记呈现红色。
实验者可以根据实验需要选择不同的荧光标记物质,并通过显微镜观察到标记蛋白的颜色。
二、生物素标记生物素标记是一种基于生物素-亲和素相互作用的蛋白标记方法。
生物素是一种维生素H成分,具有与亲和素结合的特性。
在实验中,生物素可以与生物素素结合并形成稳定的结合物,从而实现蛋白的标记。
生物素标记的颜色在实验中常表现为紫色,实验者可以通过观察颜色变化来判断蛋白是否标记成功。
生物素标记的优势是其结合力强、稳定性高,适用于长时间的实验操作。
另外,生物素标记也可以用于有机溶剂、高温、酸碱环境等多种条件下的蛋白标记。
因此,在一些特殊实验条件下,生物素标记是一种非常理想的标记方法。
三、酶标记酶标记是另一种常用的蛋白标记方法。
通过将蛋白与酶结合,可以在实验中通过酶的催化作用来识别蛋白的存在。
常用的酶标记包括辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等。
PH0304 宽分子量蛋白Marker10-200kD使用手册
1PH0304|宽分子量蛋白Marker (10-200kD)Catalog No :PH0304Size :☐20T (100ul)Storage :Store@-20℃
◆简介
本产品包含14种蛋白质混合物,分子量范围为10kD-200kD,经过SDS-PAGE 电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到14条带,可以用来判断SDS-PAGE 电泳后蛋白质的分子量。
◆保存
Store at -20℃;有效期12个月
◆使用参考
a 第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用。
b 取出分装后的Marker,常温融化,轻柔彻底混匀,管底不能见沉淀物。
注:此Marker 为即用型,溶化后直接上样,不要95℃处理!
c 上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。
一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
注:使用银染时,由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法,可以适当降低Marker 上样量。
d 电泳结束后,染色,观察结果。
电泳结果如出现带型缺失现象或样品聚集在分离胶上沿,可在Marker 中加入终浓度为100mM 的DTT 后再上样。
12%分离胶电泳示意图
梳子尺寸:0.75mm*5mm
上样量:5ul。
蛋白质分子量标准(高)使用说明书
蛋白质分子量标准(高)Protein Molecular Weight Marker (High)使用说明书Takara Code : D531A浓度: 10 μg/μl制品内容(约200次量)Protein MW Marker(high)50 μl5×Loading Buffer 1000 μl1 M DTT(Dithiothreitol)100 μl制品说明Protein Molecular Weight Marker(High)是由五种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的,它的分子量范围为:44.3 KDa~200KDa。
进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时,经考马斯亮蓝R-250染色后的各种蛋白质的条带强度均一。
每微升本制品的蛋白量为10 μg,稀释20倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,每次取5 μl(for SDS-PAGE mini gel)。
以每次使用5 μl(20倍稀释液)计算时本制品约可使用200次。
保存条件制品原液可在-20℃下长期保存,制品的20倍稀释液可在-20℃下保存2~3个月,制品的原液和制品的20倍稀释液都应避免多次反复冻融。
制品中的各种蛋白质种类使用注意推荐使用7.5~10%的聚丙烯酰胺凝胶。
浓度太高,高分子量的蛋白分离效果不好,有可能聚集于分离胶的上部。
使用方法1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT2 μl 5×Loading Buffer 20 μl* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2.按以下方法稀释本制品。
稀释液22 μl灭菌蒸馏水73 μl* 20倍的制品稀释液可在-20℃下保存2~3个月,但应避免多次反复冻融。
如果一次稀释量较多时,可以小量分装后在-20℃下保存,以避免反复冻融。
3. 均匀混合后,100℃加热处理5分钟,然后取5 μl进行7.5~10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳(for SDS-PAGE mini gel)。
4. 7.5%、10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后,经考马斯亮蓝R-250染色后的结果如下。
换个姿势了解蛋白质Marker!
换个姿势了解蛋白质Marker!蛋白分子量标准,常称之为蛋白Marker。
在免疫印迹(Western blot)试验中,分子量Marker虽不起眼,但意义重大,是阳性对照,是大小的标准,是必须的。
只有Marker精确无误了,实验结果才有说服力。
除此之外,蛋白Marker还能够提示电泳是否正常,转移是否成功等信息。
在实验中经常会说“跑”电泳我们可以用“团队障碍跑”来描述蛋白质在凝胶中的运动体型大的阻碍大,跑的慢体型小的阻碍小,跑的快对于未知蛋白组我们可以根据它的停止时位置分析和区分其中蛋白质的大小这就要求我们设置一个特殊的赛道“Marker组”让具有指示性的蛋白质组(Marker)一起移动在相同的时间内与蛋白质“裁判”跑一样距离的其分子大小也是一致的Marker组的分子大小我们是知道的就可以根据目的蛋白的大小进行筛选再对目的蛋白进行后期的分离与检测蛋白质电泳示意图蛋白Marker可分为两大类:1、未预染的Marker按照包含的蛋白质分子量大小来区分,又可以分为:宽分子量蛋白Marker、高分子量蛋白Marker以及低分子量蛋白Marker2、预染的Marker按照染料颜色的多少可以分为:单色预染和多色预染。
【未预染的Marker】这是最简单,也是最准确的一种。
由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小所必须的。
1、宽分子量蛋白Marker如果从实验室总体考虑的,就选范围尽量宽,条带分布比较均匀的,这样你的蛋白无论在哪个区间都容易判断,避免落在一段空白区域中。
不过条带越多,每次上样量也就越大。
拿到Marker后,如果买的是大包装,就应该考虑分装,尽量避免反复冻融。
另外,宽分子量蛋白Marker不一定每一条都能够看到,特别是小分子量蛋白。
如果侧重大蛋白,那小的可能就已经跑掉了。
2、高分子量蛋白Marker通常在检测大分子量蛋白时使用高分子量蛋白Marker。
3、低分子量蛋白Marker在一般的蛋白电泳当中,更常用的是低分子量蛋白Marker,除了有指示蛋白大小的作用以外,有时还可用作粗略的定量。
超低分子量蛋白MARKER
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Genia Life Sciences,Inc. warrants that its products conform to the information contained in this and other Genia Life Sciences publications.Purchasermust determine the suitability of the product(s) for their particular use. Additional terms and conditions may apply.Product Specification 超低分子量蛋白MARKER
#C0213 15T(150ul)
Store at -20℃
建议使用效期:1 YEAR
储存条件:
-20℃有效期1年,避免反复冻融。
使用说明:1.开封后,溶于150ul 的1×上样缓冲液,于95℃水浴5min,可根据需要进行小量分装,每管10ul,-20℃贮存,
每次取一管使用,避免反复冻融。
2.使用前取分装后的小管室温融化后,95℃预热5min 即
可上样电泳,用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带。
产品描述:本产品包含3种多肽和2种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.3KD-20.1KD。
可以用来判断SDS-PAGE 上多肽和小蛋白的分子量。
本品为蛋白质和多肽混合物的冻干粉,每种蛋白含量约为15-22.5ug,配有一支1×上样缓冲液。
条带示意图:注意事项:
本产品为科研用试剂。
次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)说明书
次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)说明书
货号:PR1500
规格:10T
保存:-20℃可保存至少一年。
避免反复冻融,建议分装保存。
产品简介:
本产品包含5种蛋白质混合物,分子量范围为43kD-200kD,每种蛋白的含量约为20μg。
经SDS-PAGE 电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。
可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。
本产品配有一支蛋白上样缓冲液(150μL)。
使用说明:
将两支试剂开启,取100μL1×蛋白上样缓冲液加入蛋白Marker干粉中,混匀,置于1.5ml离心管中,100℃沸水浴加热5分钟,冷却后根据需要分装成小管,建议每管分装10μL,-20℃贮存,每次取一管使用。
注:如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管沸水浴预热3-5分钟后再上样电泳。
用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。
注意事项:
1.建议分离胶浓度7%,浓缩胶浓度4%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。
电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结束。
整个电泳过程大约需3-4个小时。
2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。
蛋白质marker
●使用方法
1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT 5×Loading Buffer
* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2 μl 20 μl
2. 按以下方法稀释本制品。
Protein MW Marker(Low) 稀释液 灭菌蒸馏水
5 μl 22 μl 73 μl
* 20 倍的制品稀释液可在-20℃下保存 2~3 个月,但应 避免多次反复冻融。如果一次稀释量较多时,可以小 量分装后在-20℃下保存,以避免反复冻融。
50 μl 300 μl
30 μl
●制品说明
Protein Molecular Weight Marker(Low)是由 六种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的,它的分 子量范围为:14.3 KDa~97.2 KDa。进行聚丙烯 酰胺凝胶电泳时,经考马斯亮蓝 R-250 染色后的 各种蛋白质的条带强度均一。每微升本制品的蛋白 量为 12 μg,稀释 20 倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电 泳,每次取 5 μl(for SDS-PAGE mini gel)。以 每次使用 5 μl(20 倍稀释液)计算时本制品约可 使用 200 次。
蛋白质分子量标准(低)
Protein Molecular Weight Marker (Low)
使用说明书
TaKaRa Code:D530A
●浓 度:12 μg/μl
●arker(Low) 5×Loading Buffer 1 M DTT(Dithiothreitol)
3. 均匀混合后,100℃加热处理 5 分钟,然后取 5 μl 进行 10%~15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳 (for SDS-PAGE mini gel)。
4. 10%、12%、15%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后,经 考马斯亮蓝 R-250 染色后的结果如下。
PH0307 彩虹预染超低分子量蛋白Marker (1.2-45KD)使用手册
PH0307|彩虹预染超低分子量蛋白Marker(1.2-45KD)(Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker)Catalog No:PH0307Size:☐50ul Store at-20℃◆简介彩虹预染超低分子量蛋白质Marker可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。
本产品包含3种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为 1.2kD-45kD,分子量大小为1.2kD,4.6kD,10kD,16kD,27kD,45kD(注:蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过)。
◆保存-20℃保存,开封后有效期12个月◆使用参考1.超低分子量多肽的蛋白电泳较常规的蛋白电泳更为复杂,请仔细参阅说明书后再进行操作。
2.第一次收到产品后,室温彻底融化混匀,离心快甩将溶液收集到管底,根据需要适量分装,-20℃贮存,每次使用时取一管使用。
3.本蛋白Marker为即用型产品,使用前取一管Marker样品室温彻底融化后可以直接上样,不要加热。
一般说来,0.75mm×5mm(厚度×宽度)的加样孔上样5μl,其他规格梳子请适当调整上样量。
【注】如非必须,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
4.制胶:先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。
电泳时,80v跑30-60分钟左右,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至130-150v,至所有条带分离清楚后即可停止电泳。
整个电泳过程大约需要2-3个小时。
5.如果是较小的多肽(小于5KD),电泳之后可将胶置于固定液中固定30分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如果不固定直接染色,小蛋白可能会不清楚。
6.染色:如果进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白快速染色液,该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的理想替代品。
预制胶快速使用指南说明书
预制胶快速使用指南说明书修订日期:2019.07.29 Cat Number:KGMG系列℃12 monthsStore at 4 forFor Research Use Only(科研专用)一、试剂盒说明请参考如下表格选择合适的预制胶,以便更好地进行蛋白电泳分析。
胶浓度最佳分离范围8-16%160-10KDa4-20%250-10KDa4-12%250-20KDa8% 180-20KDa10% 160-20KDa12% 120-6.5KDa最大上样量10 80μl12 60μl15 40μl二、注意事项准备电泳槽和电泳缓冲液,请使用MOPS 或者MES 电泳缓冲液进行电泳,请勿使用Tris-甘氨酸电泳缓冲液代替。
兼容电泳槽:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 Tetra System), Hoefer Mighty Small (SE 250/SE 260/ SE 280), IBI Universal Protein System , 六一、天能,Invitrogen Nove X-Cell I,II, Surelock(须与特供的挡板一起使用,如有需要请下单时备注).三、操作步骤1. 电泳前务必撕去胶板底部胶带,平稳推出梳子,将预制胶装入兼容的电泳槽中,再加入电泳缓冲液(MOPS或MES):2.如使用Bio-Rad 电泳槽,请确保密封条安装方向:将电泳槽内框架的绿色硅橡胶密封条取出,然后将其平坦的一面朝外并重新插回内框架的凹槽中。
撕掉胶带推出梳子3.本试剂盒提供预制胶比 invitrogen NuPAGE预制胶略薄,因此提供了特制的塑料挡板,使之可以应用于Invitrogen Novex电泳槽中。
使用Invitrogen Novex Mini-Cell 电泳槽时必须配套使用适配的塑料挡板(挡板如有需要,请下单时备注)。
当使用一片胶进行电泳时,需在该片胶的外侧增加一片凯基提供的挡板,插入电泳槽中以补足厚度差,电泳槽另一边仍需插入 Invitrogen提供的挡板;当使用两片胶进行电泳时,需在两片胶的外侧各自增加一片凯基提供的挡板,插入电泳槽中以补足厚度差。
超低分子量蛋白质Marker(3.3kD-20. 1kD)说明书
第1页共3页
夹层胶 10%/2mL 0.407mL / 0.667mL / 0.926mL
浓缩胶 4%/2mL 0.160mL / 0.496mL / 1.344mL
10%APS TEMED
40µL 5µL
40µL 5µL
40µL 5µL
北京索莱宝科技有限公司
20μL 3µL
20μL 3µL
凝胶制备及染色注意事项: 1. 先配制分离胶,聚合后再配制夹层胶,最后配制浓缩胶,3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时,30v 跑1-2小时后,待指示前沿到达分离胶上沿时,把电压调至100v,至电泳结束,整个电泳过程大约需要6-8 小时。 2. 由于多肽所含的氨基酸数目较少,因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性),则会影响其在 SDS-PAGE 图上的条带迁移率,即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。 3. 由于 SDS-PAGE 的图谱上,蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为 15,000-200,000, 因此对于分子量小于 10000 的蛋白质或多肽的分子量,只能根据标准分子量进行估计,推断其是否落入预 测的分子量范围。 4. 由于超低分子量多肽(3000 及 3000 以下),极易从凝胶上浸出,因此染色及脱色时间不宜太长,脱色后 凝胶也不宜在水中浸泡保存过久,否则条带会消失。 5. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟,再进行染色,能得到较好的蛋白条带;如时间不允许,也可 不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白 胶快速染色液(货号:P1300),该产品具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。
凝胶的配置方法:
49.5%T 3%C 49.5%T 6%C 凝胶缓冲液 甘油 ddH2O
蛋白Marker说明书
蛋⽩Marker说明书PageRuler Prestained Protein LadderSM0671A prestained SDS-PAGE MW marker with contrasting colored reference bands at10 and 70kDa.The Thermo Scientific PageRuler Prestained Proteis a mixture of ten (10) blue-, orange- and green-srecombinant proteins (10 to 170kDa) for use as sizstandards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)Western blotting.This prestained protein MW marker is designed fomonitoring the progress of SDS-polyacrylamide geelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onylon and nitrocellulose membranes, and for estimapproximate size of separated proteins that have b visible with gel stains or Western blot detection reagents. The ladder contains one orange refer at 70kDa and one green band at 10kDa.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 170kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boil Sharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingTwo reference bands– orange at 70kDa and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 1 1mM NaN3 and 33% glycerol. Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSm1841The Thermo Scientific Spectra Multicolor Broad RangeProtein Ladder is a 4-color protein standard containing 10prestained recombinant prokaryotic proteins (10 to 260kDa)for use as size standards in gel electrophoresis and Westernblotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. Four different chromophores (blue, orange, green, pink) are bound to the different component proteins, producing a brightly colored ladder with an easy-to-remember pattern.Highlights:Size range– 10 proteins spanning 10 to 260kDaMulticolor– four different colors for unambiguous band-size assignmentReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intensity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:Sm1811The Thermo Scientific PageRuler Plus Prestained ProteinLadder is a mixture of nine (9) blue-, orange- andgreen-stained recombinant proteins (10 to 250kDa) for useas size standards in protein electrophoresis (SDS-PAGE)and Western blotting.This prestained protein MW marker is designed formonitoring the progress of SDS-polyacrylamide gelelectrophoresis, for assessing transfer efficiency onto PVDF,nylon and nitrocellulose membranes, and for estimating theapproximate size of separated proteins that have been made visible with gel stains or Western blot detection reagents. A blue chromophore is bound to all proteins, except proteins of two reference bands of 70kDa and 25kDa that are colored with an orange dye and one green reference band of 10kDa. PageRuler Plus Prestained Protein Ladder is ready to use: no heating, further dilution or addition of a reducing agent is required before loading onto a gel.Highlights:Size range– nine proteins spanning 10 to 250kDaReady-to-use– supplied in a loading buffer for direct loading on gels; no need to boilSharp bands– color-coded bands of similar intesity for easy visualizationQuality tested – each lot evaluated by SDS-PAGE and Western blottingBright reference bands– orange at 70 and 25kDa, and green at 10kDaMembrane-compatible– colored bands transfer to membranes for Western blotting Includes:Dye-stained proteins in 62.5mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25°C), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT, 1mM NaN3 and 33% glycerol.Applications:Monitoring protein migration during SDS-polyacrylamide gel electrophoresisMonitoring protein transfer onto membranes after Western blottingSizing of proteins on SDS-polyacrylamide gels and Western blotsProduct Details:。
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次高分子量蛋白质Marker(43kD-200kD)使用说明
货号:PR1500
规格:10T
保存:-20℃可保存至少六个月。
避免反复冻融,建议分装保存。
产品简介:
次高分子量蛋白质Marker包含5种蛋白质混合物,分子量范围为43kD-200kD,每种蛋白的含量约为20ug。
经SDS-PAGE电泳,用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。
可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。
本产品配有一支蛋白上样缓冲液(150ul)。
使用说明:
将两支试剂开启,取110ul蛋白上样缓冲液加入蛋白Marker干粉中,混匀,取出液体,置于 1.5ml离心管中,100℃沸水浴加热5分钟,冷却后根据需要分装成小管,建议每管分装10µl,-20℃贮存,每次取一管使用。
注:如长期贮存后使用,使用前最好取分装后的小管99℃预热3分钟后再上样电泳。
用考马斯亮蓝G-250染色后可见5条蛋白带(见下示意图)。
注意事项:
1.建议分离胶浓度7%,浓缩胶浓度4%,制胶时先配制分离胶,聚合后再配制浓缩胶。
电泳时,80v电压大约跑1小时后,待指示剂沿到达分离胶上沿时,将电压调至120v,直到电泳结束。
整个电泳过程大约需3-4个小时。
2.电泳之后可将胶进行染色观察,如果使用配方进行染色时效果不好或考虑其毒性,可以选择考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液,具有染色快,无毒,灵敏性高等特点,是常规染色液的替代品。
相关试剂:
P10154×蛋白上样缓冲液(含DTT)
T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
P1300-1SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
P1300-500考马斯亮蓝快速染色液。