变性与非变性聚丙烯酰胺的区别

非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体
现在哪里？
作者: 墨池(站内联系TA)收录: 2011-07-31 发布: 2011-07-21
1 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？
2 SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？
谢谢(*^__^*) 嘻嘻
收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。

2. SRAP（貌似叫什么...相关序列扩增多态性）标记这个应该是非变性PAGE，6%的PAGE胶配方就不用发了吧，google一下一大堆。

TEMED和过硫酸铵都是最
Originally posted by holyala at 2011-07-21 2121:
1. 变性胶加尿素或者其他变性剂，非变性胶是不加的。

一般做RNA分离或回收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。

2. SRAP（貌似叫什么...相 ...
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2138:
TEMED和过硫酸铵的先后呢？
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2019:
1 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？
2 SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？
谢谢(*^__^*) 嘻嘻
1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。

2.SRAP一般用变性的聚丙烯酰胺，毕竟片段还是比较小。

3.配胶时不用加入过硫酸铵，灌胶前同时加入过硫酸铵(注意有毒！低温保存)和TEMED（也有毒，特臭）。

另外，这些问题貌似分子克隆那本书非常详细，只不过SRAP标记较新而已，没
Originally posted by changes at 2011-07-21 2107:
1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。

2.SRAP一般 ...
Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2104:
你说SRAP是变性的，我看师姐的配胶过程没有一点体现变性的物质。

非变性胶也可以，但是分辨率会低些。

另外，你是用SRAP标记做什么的，多态
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 0727:
APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。

...额~~话说我们一般都是把丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺配成40%的母液，用的时候根据所需要的浓度加一定量的母液即可。

要是每次都搞丙烯酰胺来配，那谁
Originally posted by changes at 2011-07-21 2107:
1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋
白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电
泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。

2.SRAP一般 ...
这个我有点问题...跑DNA的PAGE电泳要用变性胶么？根据我的经验，双链DNA跑尿素PAGE的时候由于变性导致双链打开，电泳图会非常难看，原本的单一条带会变成非常接近的两个条带。

嗯，不过我这种情况是DNA片段较大（＞50bp）的时候，不知道十几个bp的DNA会怎样。

so...我只用过尿素PAGE分离
为单链
Originally posted by changes at 2011-07-21 2202:
非变性胶也可以，但是分辨率会低些。

另外，你是用SRAP标记做什么的，多态
性还是标记目的基因或遗传图谱构建？
Originally posted by holyala at 2011-07-22 1055:
...额~~话说我们一般都是把丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺配成40%的母液，用的时
候根据所需要的浓度加一定量的母液即可。

要是每次都搞丙烯酰胺来配，那谁
受得了啊。

Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 1320:
你理解有误，我们说的就是指母液，不知道你怎么理解成这样了
不知道是哪里的问题啊...如果我理解不对的话，那么冼亮淀粉酶大大说的：“APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。

” 意思难道是所有东西都
Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 1313:
多态性。

一种观赏花卉50个品种的遗传多样性分析
多态性的话建议使用变性胶检测，使用大板、长板，那样跑出来相当漂亮，也方便统计条带。

另外，材料的亲缘关系最好也明确，对于最终结果的分析有帮助。

Originally posted by holyala at 2011-07-22 1454:
不知道是哪里的问题啊...如果我理解不对的话，那么冼亮淀粉酶大大说的：“APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。

” 意思难道是所 ...
Originally posted by changes at 2011-07-22 1422:
多态性的话建议使用变性胶检测，使用大板、长板，那样跑出来相当漂亮，也方便统计条带。

另外，材料的亲缘关系最好也明确，对于最终结果的分析有帮助。

:P
变性胶的配方有么？可否参考一下下(*^__^*) 嘻嘻……。