【精品】仪器分析大连理工大学42高效液相色谱仪PPT课件
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高效液相色谱仪ppt课件
8
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高效液相色谱法 PPT课件
①固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
《仪器分析》教案课件PPT-第5章 高效液相色谱法PPT文档
四、尺寸排阻色谱法（SEC） （sizeexclusionchromatography）
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
仪器分析大连理工大学42高效液相色谱仪
4.2.3 检测器
2019/12/19
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2019/19/12/19
液相色谱仪（3）
2019/12/19
液相色谱仪（4）
2019/12/19
液相色谱仪（5）
2019/12/19
液相色谱仪（6）
2019/12/19
1. 结构流程
2019/12/19
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2019/12/19
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2019/12/19
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2019/12/19
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
结束
2019/12/19
2019/12/19
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
2019/12/19
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2019/19/12/19
液相色谱仪（3）
2019/12/19
液相色谱仪（4）
2019/12/19
液相色谱仪（5）
2019/12/19
液相色谱仪（6）
2019/12/19
1. 结构流程
2019/12/19
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2019/12/19
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2019/12/19
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2019/12/19
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
结束
2019/12/19
2019/12/19
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
高效液相色谱仪优秀PPT
DNA电泳与色谱分析，生 物技术药物纯化及鉴定，生 物标志物色谱分析，蛋白质 组学研究等
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
高效液相色谱分析 教学PPT课件
四、离子交换色谱
此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结 合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既 适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、 氨基酸、核酸等。
1. 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力 （或离子交换能力）的差别来实现分离的。
阳离子交换: R - SO-3H M R SO-3M H
从速率理论各项的差别看HPLC与GC的区别
H A B Cu u
1）涡流扩散项A 2）分子扩散项 B/u
A=2dp B=2Dl
3）传质阻力项
包括固定相传质阻力系数和流动相传质阻力系数
Hs
Cs df2 Ds
u
Hm
Cm
d
2 p
Dm
u
Hsm
Csm d p2 Dm
u
改进固定相成为提高液相色谱柱效的一个重要问题
惰性核
薄膜型
表面多孔型
四、排阻色谱法固定相
• 软质凝胶：水为流动相，孔径大小由交联剂控制 • 半硬质凝胶：适用于非极性有机溶剂，不能随意 更换溶剂，能耐较高压力，流速不宜大
• 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠；多孔硅胶化学 稳定性好，热稳定性好，机械强度高，吸附问题需 要进行特殊处理。
• 选择填料时首先要考虑相对分子质量排阻极限
三、离子对色谱法（IPC）
主要用来分离强极性有机酸和有机碱。
原理：将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为 对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子 与对离子形成离子对AB，该AB离子对的性质与A 离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子 的保留特性。
还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收活发 荧光的基团，以提高检测的灵敏度。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定 相, 现多为化学键合固定相（通过化学反应将有机 分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、 流失小、适于梯度淋洗等特点 ）。
高效液相色谱分析ppt课件
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性
2019/7/7
2019/7/7
影响色谱峰扩展及分离的因素
• 基本概念及基础理论同气相色谱：保留值、分 配系数、分配比、分离度、选择性因子(分离 因子)、塔板理论及速率理论。
• 由于流动相的差别，对色谱过程必然产生影响。
2019/7/7
2019/7/7
二、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
sm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗
忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
dp 2 Cm Csm Dm
dp 2 C
Dm
T Dm
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效 T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行
缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
2019/7/7
与GC相比，流动相差别
GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
2019/7/7
2019/7/7
影响色谱峰扩展及分离的因素
• 基本概念及基础理论同气相色谱：保留值、分 配系数、分配比、分离度、选择性因子(分离 因子)、塔板理论及速率理论。
• 由于流动相的差别，对色谱过程必然产生影响。
2019/7/7
2019/7/7
二、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
sm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗
忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
dp 2 Cm Csm Dm
dp 2 C
Dm
T Dm
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效 T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行
缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
2019/7/7
与GC相比，流动相差别
GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
仪器分析高效液相色谱PPT课件
这种固载化的配基将只能和具有 亲和力特性吸附的生物大分子相互 作用而被保留，没有这种作用的分 子不被保留。
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2020/4/22
15
6.1.6 离子交换色谱法
离子交换色谱法
固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，
在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基
阳离子交换树脂
在表面未端芳环上接上季胺基
3.流动相
把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往 往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱 剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量。ε0越大，表示洗脱剂 的极性越强。
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2020/4/22
6
6.1.2液---液分配色谱法
在液---液色谱中，流动相和固定相都是液体，它能适用于各种样品类型的 分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非 离子型的化合物。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生 相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性 的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分 作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控 制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
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2020/4/22
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分离原理 尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离
的一种色谱方法。 ➢ 以凝胶 (gel) 为固定相，它类似于分子筛， 但凝胶的孔径比分子筛要大得多。
➢ 凝胶内具有一定大小的孔穴，小分子量 的化合物可以进入孔中，滞留时间长；中等 体积的分子部分渗透；大分子量的化合物不 能进入孔中，直接随流动相流出。
荧光检测器——10-11g。
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2020/4/22
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6.1.6 离子交换色谱法
离子交换色谱法
固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，
在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基
阳离子交换树脂
在表面未端芳环上接上季胺基
3.流动相
把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往 往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱 剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量。ε0越大，表示洗脱剂 的极性越强。
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2020/4/22
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6.1.2液---液分配色谱法
在液---液色谱中，流动相和固定相都是液体，它能适用于各种样品类型的 分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非 离子型的化合物。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生 相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性 的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分 作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控 制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
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2020/4/22
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分离原理 尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离
的一种色谱方法。 ➢ 以凝胶 (gel) 为固定相，它类似于分子筛， 但凝胶的孔径比分子筛要大得多。
➢ 凝胶内具有一定大小的孔穴，小分子量 的化合物可以进入孔中，滞留时间长；中等 体积的分子部分渗透；大分子量的化合物不 能进入孔中，直接随流动相流出。
荧光检测器——10-11g。
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紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测 特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。
2021/2/24
2021/2/24
光电二极管阵列检测器
2021/2/24
三维：光谱-色谱图
2021/2/24
c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
仪器分析大连理工大学42高效液 相色谱仪
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2021/2/24
2021/2/24
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。
通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。
灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度脱。
偏转式、反射式和干涉型 三种。
2021/2/24
示差折光检测器
2021/2/24
d. 荧光检测器
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2021/2/24
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
2021/2/24
4.2.3 检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。
特点：
灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
2021/2/24
b. 光电二极管阵列检测器
（动画）
2021/2/24
(2) 梯度淋洗装置
外梯度（高压梯度）: 利用两台高压输液泵，将
两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）: 一台高压泵, 通过比例调
节阀,将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高 压泵中混合。
2021/2/24
(3) 进样装置
结束
2021/2/24
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2021/2/24
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2021/2/24
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
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光电二极管阵列检测器
2021/2/24
三维：光谱-色谱图
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c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
仪器分析大连理工大学42高效液 相色谱仪
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
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4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。
通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。
灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度脱。
偏转式、反射式和干涉型 三种。
2021/2/24
示差折光检测器
2021/2/24
d. 荧光检测器
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
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请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
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4.2.3 检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。
特点：
灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
2021/2/24
b. 光电二极管阵列检测器
（动画）
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(2) 梯度淋洗装置
外梯度（高压梯度）: 利用两台高压输液泵，将
两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）: 一台高压泵, 通过比例调
节阀,将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高 压泵中混合。
2021/2/24
(3) 进样装置
结束
2021/2/24
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2021/2/24
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
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(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器