【精品】仪器分析大连理工大学42高效液相色谱仪PPT课件
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高效液相色谱仪ppt课件
8
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高压泵应具有以下性能
流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修
9
根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵
进样装置 （正面）
进样装置 （背面）
11
图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱，
样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。
的出峰顺序相反。
30
2. 流动相类别
按流动相组成成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性； 按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。 常用溶剂： 正己烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙醇、 甲 醇、异丙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动 相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。
反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的
键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
高效液相色谱法 PPT课件
①固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
键合硅胶 ②流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极 性调整剂
常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广。非极性至中等极性的组分，（还有 有机酸、碱及盐等极性组分）
1. 保留机制:
疏溶剂理论 （solvophobic theory）
（二）紫外检测器(ultraviolet detector)
1.检测原理： 朗伯－比尔 (Lambert-Beer) 定律，响应信号 （吸光度）与浓度成正比A=εCl
2.特点： 灵敏度较高（10-6—10-9 g/ml），噪音低，线性 范围宽，稳定性好，适于梯度洗脱，不破坏样品， 应用广（分析、制备）。
三.与气相色谱法相比
气相试样
液相试样 气相流动相 液相流动相 气相柱温 液相柱温
气体、 容易转
气体、 常用氢气 液体、 、氮气
可用的
高柱温
溶剂较多
常温
变为气
固体
体的液
体
第一节 高效液相色谱法的主 要类型和原理
一、主要类型
四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC）
（二）流动相的强度和选择性
1.溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 2.溶剂的选择性
不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故 选择性不同
混合溶剂（二元或多元流动相）
以反相色谱流动相的选择为例：
反相色谱常用溶剂的强度因子
水
甲醇
乙腈
《仪器分析》教案课件PPT-第5章 高效液相色谱法PPT文档
四、尺寸排阻色谱法（SEC） （sizeexclusionchromatography）
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
2017-动相为液体，固定相为固体吸附剂。根据不同组分在固定 相上的吸附能力不同而加以分离。
吸附剂
溶质 溶剂
2017-6-620
吸附剂
二、液液分配色谱法（LLC）
流动相和固定相都是液体。 分离机制：利用组分在两相中溶解度的差异
第五章高效液相色谱法
HighPerformanceLiquidChromatography HPLC
气相色谱中的“气相”代表什么意思？ 气相色谱：流动相是气体 液相色谱：流动相是液体
2017-6-62
第一节高效液相色谱法的特点
一、高效液相色谱法（HPLC） 特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色 谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离 柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分
尺寸排阻色谱法的分离机制：体积排阻效应
样品分子 凝胶珠
流动相
溶质在两相间不 是靠其相互作用 力的不同来进行
分离； 而是按照分子大 小进行分离的； 大分子物质先洗 脱出来，小分子
2017-6-626物质后洗脱出来
孔道
凝胶珠内具有一定大小的孔穴， 体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出 来； 中等体积的分子部分渗透；
2017-6-611
2017-6-612
2017-6-613
六通阀
高压泵
进样前
色谱柱
进样中 （Load）
进样后 （Inject）
4.色谱柱 色谱柱是液相色谱的心脏部件，柱内径 4.6mm或3.9mm，长度15～30cm，不 锈钢柱，填料颗粒5～10μm，柱效为 7000～10000理论塔板数/m。
仪器分析大连理工大学42高效液相色谱仪
4.2.3 检测器
2019/12/19
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2019/19/12/19
液相色谱仪（3）
2019/12/19
液相色谱仪（4）
2019/12/19
液相色谱仪（5）
2019/12/19
液相色谱仪（6）
2019/12/19
1. 结构流程
2019/12/19
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2019/12/19
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2019/12/19
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2019/12/19
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
结束
2019/12/19
2019/12/19
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
2019/12/19
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2019/19/12/19
液相色谱仪（3）
2019/12/19
液相色谱仪（4）
2019/12/19
液相色谱仪（5）
2019/12/19
液相色谱仪（6）
2019/12/19
1. 结构流程
2019/12/19
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2019/12/19
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2019/12/19
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2019/12/19
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
结束
2019/12/19
2019/12/19
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
高效液相色谱仪优秀PPT
DNA电泳与色谱分析，生 物技术药物纯化及鉴定，生 物标志物色谱分析，蛋白质 组学研究等
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
高效液相色谱分析 教学PPT课件
四、离子交换色谱
此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结 合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既 适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、 氨基酸、核酸等。
1. 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力 （或离子交换能力）的差别来实现分离的。
阳离子交换: R - SO-3H M R SO-3M H
从速率理论各项的差别看HPLC与GC的区别
H A B Cu u
1）涡流扩散项A 2）分子扩散项 B/u
A=2dp B=2Dl
3）传质阻力项
包括固定相传质阻力系数和流动相传质阻力系数
Hs
Cs df2 Ds
u
Hm
Cm
d
2 p
Dm
u
Hsm
Csm d p2 Dm
u
改进固定相成为提高液相色谱柱效的一个重要问题
惰性核
薄膜型
表面多孔型
四、排阻色谱法固定相
• 软质凝胶：水为流动相，孔径大小由交联剂控制 • 半硬质凝胶：适用于非极性有机溶剂，不能随意 更换溶剂，能耐较高压力，流速不宜大
• 硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠；多孔硅胶化学 稳定性好，热稳定性好，机械强度高，吸附问题需 要进行特殊处理。
• 选择填料时首先要考虑相对分子质量排阻极限
三、离子对色谱法（IPC）
主要用来分离强极性有机酸和有机碱。
原理：将与待测物离子A电荷相反的离子B（称为 对离子或反离子）加入到流动相中，使待测离子 与对离子形成离子对AB，该AB离子对的性质与A 离子或B离子的性质不同，即间接改变了待测离子 的保留特性。
还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收活发 荧光的基团，以提高检测的灵敏度。
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定 相, 现多为化学键合固定相（通过化学反应将有机 分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、 流失小、适于梯度淋洗等特点 ）。
高效液相色谱分析ppt课件
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性
2019/7/7
2019/7/7
影响色谱峰扩展及分离的因素
• 基本概念及基础理论同气相色谱：保留值、分 配系数、分配比、分离度、选择性因子(分离 因子)、塔板理论及速率理论。
• 由于流动相的差别，对色谱过程必然产生影响。
2019/7/7
2019/7/7
二、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
sm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗
忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
dp 2 Cm Csm Dm
dp 2 C
Dm
T Dm
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效 T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行
缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
2019/7/7
与GC相比，流动相差别
GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
2019/7/7
2019/7/7
影响色谱峰扩展及分离的因素
• 基本概念及基础理论同气相色谱：保留值、分 配系数、分配比、分离度、选择性因子(分离 因子)、塔板理论及速率理论。
• 由于流动相的差别，对色谱过程必然产生影响。
2019/7/7
2019/7/7
二、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
sm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗
忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
dp 2 Cm Csm Dm
dp 2 C
Dm
T Dm
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效 T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行
缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。
2019/7/7
与GC相比，流动相差别
GC：流动相为惰性气体 组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 HPLC：流动相为液体 流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用 流动相种类较多，选择余地广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
仪器分析高效液相色谱PPT课件
这种固载化的配基将只能和具有 亲和力特性吸附的生物大分子相互 作用而被保留，没有这种作用的分 子不被保留。
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2020/4/22
15
6.1.6 离子交换色谱法
离子交换色谱法
固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，
在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基
阳离子交换树脂
在表面未端芳环上接上季胺基
3.流动相
把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往 往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱 剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量。ε0越大，表示洗脱剂 的极性越强。
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2020/4/22
6
6.1.2液---液分配色谱法
在液---液色谱中，流动相和固定相都是液体，它能适用于各种样品类型的 分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非 离子型的化合物。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生 相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性 的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分 作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控 制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
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2020/4/22
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分离原理 尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离
的一种色谱方法。 ➢ 以凝胶 (gel) 为固定相，它类似于分子筛， 但凝胶的孔径比分子筛要大得多。
➢ 凝胶内具有一定大小的孔穴，小分子量 的化合物可以进入孔中，滞留时间长；中等 体积的分子部分渗透；大分子量的化合物不 能进入孔中，直接随流动相流出。
荧光检测器——10-11g。
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2020/4/22
15
6.1.6 离子交换色谱法
离子交换色谱法
固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，
在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基
阳离子交换树脂
在表面未端芳环上接上季胺基
3.流动相
把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往 往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱 剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量。ε0越大，表示洗脱剂 的极性越强。
.
2020/4/22
6
6.1.2液---液分配色谱法
在液---液色谱中，流动相和固定相都是液体，它能适用于各种样品类型的 分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非 离子型的化合物。
(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生 相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性 的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分 作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控 制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。
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2020/4/22
13
分离原理 尺寸排阻色谱是按分子大小顺序进行分离
的一种色谱方法。 ➢ 以凝胶 (gel) 为固定相，它类似于分子筛， 但凝胶的孔径比分子筛要大得多。
➢ 凝胶内具有一定大小的孔穴，小分子量 的化合物可以进入孔中，滞留时间长；中等 体积的分子部分渗透；大分子量的化合物不 能进入孔中，直接随流动相流出。
荧光检测器——10-11g。
高效液相色谱仪介绍课件
谢谢
号
05
数据处理系统： 处理和分析色
谱数据
06
07
流动相储液瓶： 储存流动相
废液收集器： 收集废液
08
泵管路：连接 各部件，保证 流动相的流通
09
10
温度控制系统： 控制色谱柱和 检测器的温度
安全保护装置： 保护操作人员 和仪器的安全
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪是一种利用液体 作为流动相的色谱分析仪器。
安装
定期校准与保养
01
定期检查仪器的 各个部件，确保
其正常工作
02
定期更换易损部 件，如泵密封圈、 进样阀密封圈等
03
定期进行仪器校 准，确保分析结
果的准确性
04
定期清洁仪器， 保持仪器的清洁
和干燥
05
定期检查仪器的 电源和接地线，
确保安全使用
06
定期记录仪器的 使用情况和维护 保养情况，便于 日后查询和分析
农药分析
农药残留检测： 检测农产品中的 农药残留，保障
食品安全
农药质量控制： 监控农药生产过 程中的质量，确 保产品质量合格
农药环境污染监 测：监测环境中 的农药污染，评
估环境风险
农药研发：辅助 农药研发，提高 研发效率和质量
环境监测
01
水质监测：检测水中的污染物和化学物质
02
空气监测：检测空气中的污染物和化学物质
药物代谢：研 究药物在生物 体内的代谢过 程和机制
药物相互作用： 研究药物之间 的相互作用和 影响
3
高效液相色谱 仪的发展趋势
仪器自动化
仪器操作自动化：通过计算机控 制，实现仪器的自动化操作
数据处理自动化：自动采集、处 理和分析数据，提高分析效率
《高效液相色谱仪》课件
《高效液相色谱仪》ppt课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
高效液相色谱仪PPT课件
定和残留严重
进样装置自动进样器
样品瓶置于进样针下方
进样针穿过垫圈进入瓶中
注射器抽取所设定的样品体积来自进样针收回转入针端口使之并成为流路的一部分
色谱柱
柱材料和规格
﹠不锈钢管 ﹠柱管的内径：0.5 ～ 4.6mm ﹠填料粒度：3 ～ 10 μm ﹠柱长度：10 ～ 25 cm
检测器实现了快速、高效和操作自动化。
HPLC和经典液相色谱法的比较
色谱柱柱长/cm 色谱柱柱内径/mm 固定相粒度（粒径 μm）
流动相流动方式 溶液的传质、扩散速度 色谱柱入口压力/MPa 色谱柱柱效/（理论塔板
数/m） 进样量/（g）
分析时间/h
高效液相色谱法 10～25
2～10（不锈钢管） 3～50
四元低压梯度系统
四元高压梯度系统
泵操作注意事项
1. 设定泵运转时的高、低压极限 2. 2. 缓冲盐溶液与有机溶剂转换时必须用去
离子水清洗泵 3. 3. 缓冲盐溶液的浓度不能过高，pH范围
1～13，Cl-的浓度小于0.1mol/L 4. 4. 清洗柱塞
注意事项： 1、 必须设定高、低压极限 2、 缓冲溶液与有机溶剂转换时用去离子水清洗泵 3、缓冲盐溶液的浓度不能过高，pH范围1～13， Cl-的浓度小于0.1mol/L；
7725i型六通阀的特点
旋转操作时不中断流速 可部分充满（可变），也可全部充满(固
定)loop 孔角度较宽，改善了操作的容易程度 进样从1mL到5ml 内部有进样信号线（7725i）;容易使用，可靠
进样针 一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈
进完样后及时冲洗进样器，特别是用盐 或缓冲液作流动相 （由于这些溶液会形成结晶从而磨损垫圈）
进样装置自动进样器
样品瓶置于进样针下方
进样针穿过垫圈进入瓶中
注射器抽取所设定的样品体积来自进样针收回转入针端口使之并成为流路的一部分
色谱柱
柱材料和规格
﹠不锈钢管 ﹠柱管的内径：0.5 ～ 4.6mm ﹠填料粒度：3 ～ 10 μm ﹠柱长度：10 ～ 25 cm
检测器实现了快速、高效和操作自动化。
HPLC和经典液相色谱法的比较
色谱柱柱长/cm 色谱柱柱内径/mm 固定相粒度（粒径 μm）
流动相流动方式 溶液的传质、扩散速度 色谱柱入口压力/MPa 色谱柱柱效/（理论塔板
数/m） 进样量/（g）
分析时间/h
高效液相色谱法 10～25
2～10（不锈钢管） 3～50
四元低压梯度系统
四元高压梯度系统
泵操作注意事项
1. 设定泵运转时的高、低压极限 2. 2. 缓冲盐溶液与有机溶剂转换时必须用去
离子水清洗泵 3. 3. 缓冲盐溶液的浓度不能过高，pH范围
1～13，Cl-的浓度小于0.1mol/L 4. 4. 清洗柱塞
注意事项： 1、 必须设定高、低压极限 2、 缓冲溶液与有机溶剂转换时用去离子水清洗泵 3、缓冲盐溶液的浓度不能过高，pH范围1～13， Cl-的浓度小于0.1mol/L；
7725i型六通阀的特点
旋转操作时不中断流速 可部分充满（可变），也可全部充满(固
定)loop 孔角度较宽，改善了操作的容易程度 进样从1mL到5ml 内部有进样信号线（7725i）;容易使用，可靠
进样针 一定不能使用尖针！它会严重刮坏转子垫圈
进完样后及时冲洗进样器，特别是用盐 或缓冲液作流动相 （由于这些溶液会形成结晶从而磨损垫圈）
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紫外检测器的重要进展； 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测 特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。
2021/2/24
2021/2/24
光电二极管阵列检测器
2021/2/24
三维：光谱-色谱图
2021/2/24
c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
仪器分析大连理工大学42高效液 相色谱仪
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2021/2/24
2021/2/24
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。
通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。
灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度脱。
偏转式、反射式和干涉型 三种。
2021/2/24
示差折光检测器
2021/2/24
d. 荧光检测器
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2021/2/24
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
2021/2/24
4.2.3 检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。
特点：
灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
2021/2/24
b. 光电二极管阵列检测器
（动画）
2021/2/24
(2) 梯度淋洗装置
外梯度（高压梯度）: 利用两台高压输液泵，将
两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）: 一台高压泵, 通过比例调
节阀,将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高 压泵中混合。
2021/2/24
(3) 进样装置
结束
2021/2/24
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2021/2/24
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2021/2/24
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器
2021/2/24
2021/2/24
光电二极管阵列检测器
2021/2/24
三维：光谱-色谱图
2021/2/24
c. 示差折光检测器
（Differential refractive index detector）
仪器分析大连理工大学42高效液 相色谱仪
4.2.1 液相色谱仪与结构流程
2021/2/24
2021/2/24
4.2.2 主要部件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm)，液 体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、 高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳，脉冲小，流量稳定可调，耐腐蚀等特 性。
除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差 值。差值与浓度成正比。
通用型检测器（每种物质 具有不同的折光指数）。
灵敏度低，对温度敏感， 不能用于梯度脱。
偏转式、反射式和干涉型 三种。
2021/2/24
示差折光检测器
2021/2/24
d. 荧光检测器
（Fluorescence detector）
高灵敏度，高选择 性。
对多环芳烃，维 生素B，黄曲霉素，卟 啉类化合物，农药， 药物，氨基酸，甾类 化合物等有响应。
2021/2/24
请选择内容
4.1 高效液相色谱法的特性 4.2 高效液相色谱仪 4.3 液相色谱的固定相与流动相 4.4 液相色谱中的主要分离类型 4.5 液相色谱分析条件的选择 4.6 高效液相色谱法的应用 4.7 离子色谱法 4.8 超临界流体色谱法
2021/2/24
4.2.3 检测器
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。
特点：
灵敏度高； 线性范围宽； 流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
2021/2/24
b. 光电二极管阵列检测器
（动画）
2021/2/24
(2) 梯度淋洗装置
外梯度（高压梯度）: 利用两台高压输液泵，将
两种不同极性的溶剂按一定的 比例送入梯度混合室，混合后 进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）: 一台高压泵, 通过比例调
节阀,将两种或多种不同极性 的溶剂按一定的比例抽入高 压泵中混合。
2021/2/24
(3) 进样装置
结束
2021/2/24
流路中为高压力工作状 态，通常使用耐高压的六通 阀进样装置，
结构如图所示：
2021/2/24
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
2021/2/24
(5) 检测器
紫外检测器 示差折光检测器 荧光检测器 光电二极管阵列检测器