叶绿体色素的提取
绿叶中色素的提取和分离实验原理
绿叶中色素的提取和分离实验原理
绿叶中色素的提取和分离实验：
1、提取：绿叶中的色素——研磨法。
称取、剪碎5g叶片，放入研钵中。
加入少许二氧化硅、碳酸钙、5mL丙酮。
快速、充分研磨。
根据叶绿体中的色素在有机溶剂（乙醇、丙酮等）中溶解的特性，用丙酮可将色素从叶片中提取出来（若用95％的酒精作溶剂，则应向色素提取液中加入无水碳酸钠，除去色素提取液中的水分。
若用丙酮作溶剂，则用量不宜过多，以2～5mL为宜，过多会影响色素浓度，过少不易过滤），过滤后收集滤液，将滤液收集到小试管中，及时用棉塞将试管塞紧备用。
2、分离：制备滤纸条，将干燥过的定性滤纸剪成6cm×lcm的条，一端剪去两角，距该端lcm处用铅笔画一条极细的横线。
用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线，待干燥后再重复画2～3次（次数越多色素越多）。
实验原理：
1、色素提取原理：色素溶于有机溶剂而不溶于水，可用95%的乙醇、丙酮等有机溶剂来溶解色素，从而提取绿叶中的色素。
色素提取也可用水浴加热法，即把叶片剪碎后放在95%的乙醇中，进行隔水加热来提取。
一般地说，叶片加热到变成黄白色，叶片中的色素基本上被提取出来了。
2、色素分离原理：各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散速度比较快，反之则比较慢，从而使各种色素相互分离开来。
叶绿体色素的提取分离理化质和定量测定
六、实验结果观察及计算
（1）实验结果观察描述
（2）计算组织中叶绿体色素含量
（用mg/g鲜重或干重表示）
公式
叶绿素的浓度（C） 提取液体积 稀释倍数
叶绿体色素含量=
样品鲜重（或干重）
七、思考题
（1）叶绿素a、b在蓝光区也有吸收峰，能否 用这一吸收峰波长进行叶绿素a、b的定量分析？ 为什么？
叶绿素中镁可被H+取代而形成褐色去镁叶绿素。 去镁叶绿素遇铜则成为铜代叶绿素。 皂化反应： 叶绿素可与碱起皂化反应而形成醇（甲醇和叶绿 醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水--分开叶绿素 与类胡萝卜素。
2. 定量测定
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分 光光度计在某一特定波长下测定其光密度，即可用 公式计算出提取液中各色素的含量。
四、 实验步骤
1. 提取叶绿素
研磨法 材料剪碎 加入有机溶剂
研磨、匀浆 过滤 提取液
研磨法提取光合色素
荧光现象
（2）纸层析分离现象观察
去镁叶绿素
（3）叶绿素荧光现象观察
（4）H+和Cu2+对叶绿素 中Mg2+的取代作用
（5）皂化反应现象观察
铜代叶绿素 绿黄色素分层现象
五、定量测定
（1）定量用叶绿素提取液制备 （2）分光光度计测定 （3）实验数据及其处理
（2）用不含水的有机溶剂如无水乙醇、无水 丙酮等提取植物材料，特别是干材料的叶绿体 色素往往效果不佳，原因何在？
（3）研磨提取叶绿素时加入CaCO3. 石英砂 各有什么作用？
Ca=12.72D663 - 2.59D645 （1） Cb=22.88D645 - 4.67D663 （2） 将Ca与Cb相加即得叶绿素总量（CT）： CT=Ca+Cb=20.2D645+8.05D663（3） 或：
叶绿素的提取与分析测定
植物叶绿体色素的分析一、实验目的：1、学会叶绿体色素的分离方法。
2、掌握叶绿素的定量测定。
一、3、了解高等植物叶绿体色素的种类组成、性质。
二、实验原理：1、叶绿体色素的提取：（1）原理：叶绿体色素是植物捕获太阳能进行光合作用的重要物质，高等植物的叶绿体色素一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素等组成。
叶绿体色素的提取是利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性,将待测的植物叶片用研钵研磨让植物组织破碎，利用丙酮的溶解能力将叶绿体色素溶于丙酮中，通过用滤纸过滤分离植物组织碎片，即可以得到叶绿体色素的丙酮粗提液。
（2）步骤：称取新鲜的植物叶子(菠菜等)4g，放入研体中加5ml80%丙酮，少许碳酸钙和石英砂,研磨成匀浆,再加入20ml丙酮，以漏斗过滤到棕色瓶中备用2、叶绿体色素的分离：（1）原理：叶绿体色素的分离提纯一般用层析的方法，其中纸层析是最简单的一种。
当溶剂不断地从纸上流过时，由于混合物中各成分在流动相和固定相间具有不同的分配系数，引起它们的移动速度不同，因而使混合物分离。
（2）步骤：1）取滤纸条(6.5×30cm),在离纸边1.5cm处用铅笔划一直线，在另一端两角分别拴上一根线(见图1)，用毛细管取吸绿素提取液沿着铅笔线划一条样带，使样带宽度在3mm以内，如色素过淡用电吹风吹干后再点数次，直到样带呈深绿色为止。
2）在层析缸中加入四氯化碳20ml及少许无水硫酸钠,然后将滤纸吊在层析缸中,使下端浸入溶剂中,色素点要略高于液面,滤纸条边缘不可碰到层析缸璧(如图2)用聚乙烯薄膜两层封住层析缸,直立于暗处层析。
3）0.5小时后，观察色素带分布(最上端是橙黄色的胡萝卡素，其次是黄色的叶黄素，然后是兰绿色的叶绿素a和黄绿色的叶绿素b)，记录色谱图。
如图所示：3、叶绿体色素的性质（一）荧光现象：叶绿体色素在吸收光能以后可以从基态跃迁到激发态，当处于第一单线态（激发态）的电子再回到基态时其携带的能量将以光的形式放射出来产生荧光，叶绿素荧光的颜色是红色的。
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理
浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理叶绿体色素是植物共同的分子，是植物叶片绿色色素的主要成分，在植物的基因组中占有非常重要的地位。
叶绿体色素的提取和分离实验是植物生理学研究中常见实验，它们的研究对于深入解析植物叶片绿色色素的组成、形成机制以及植物的适应和演化有重要的意义。
本文简要介绍叶绿体色素提取、分离实验的基本原理以及实验步骤。
一、叶绿体色素的提取1.提取用植物组织植物细胞是由多种组织结构的嵌套形式组成的，而叶绿体这种特殊的细胞构造，它们除了在细胞质和细胞核里贮存着叶绿素外，还处于细胞子室内、细胞膜之间，因此叶绿体色素的提取，必须从整个植物细胞体内提取。
2.提取步骤a)取植物组织消化，加入蛋白酶消化液，消化温度保持在37℃，消化完成后，用离心机将悬浮液离心分离；b)将悬浮液和脉粗滤；c)用离心机将滤液离心，并将残留物清除；d)用硫酸钠缓冲液将离心液中的叶绿体色素进行沉淀分离；e)最后，用离心机将沉淀液离心，取得叶绿体色素提取液。
二、叶绿体色素分离实验叶绿体色素分离实验是以“四维定律”为基础的，四维定律指的是溶解物的溶解度与温度、酸度、配体浓度等四个维度的变化而发生变化。
以下是叶绿体色素分离实验的实验步骤：1.温度调节将叶绿体色素提取液加入50mL的萃取液中，将温度调节到10°C，保持温度稳定后，用离心机将其离心十分钟；2.酸度调整将离心液加入室温的硫酸铵溶液中，搅拌均匀，然后再次利用离心机离心，将叶绿体色素沉淀出来；3.配体浓度调整将离心液和硫酸铵溶液加入50mL的氯化钠溶液中搅拌均匀，然后将其再次离心，至此叶绿体色素被沉淀出来，即可获得叶绿体色素的分离液；最后，用离心机离心冷却至温度达到最低，来增强叶绿体色素的沉淀，以达到纯度高的目的。
综上所述，叶绿体色素的提取、分离实验步骤比较复杂，从植物组织的提取、细胞色素的悬浮液提取、细胞色素的滤液提取、通过改变温度、酸度、配体浓度的方法对叶绿体色素的分离实验，至此，叶绿体色素的提取和分离实验基本原理就介绍完了。
叶绿体色素的提取理化性质与含量测定
2.4 叶绿素含量的计算
1）叶绿素a、b分别在665nm和649nm波长处（95%乙醇提取）有最大的 吸收峰，同时在该波长处叶绿素a，b的比吸收系数K为已知，我们即可以 根据Lambert-Beer定律，列出以下关系式：
Ca=13.95A665 – 6.88 A649 Cb=24.96 A649 – 7.32 A665 CT =Ca + Cb= 18.08 A649 + 6.63A665
浓酸：叶绿素溶液与浓酸作用，Mg被H+取代，且生成的去镁叶绿素迅速 分解出叶绿醇，并形成去镁叶绿酸，呈褐绿色。
叶绿素的理化性质
1）吸收光谱 红光区：640~660 nm；篮紫光区：430~450 nm 。 2）荧光现象 叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而在反射光下呈红色。 3）皂化反应 叶绿素是叶绿酸的酯，可与碱起皂化反应而生成醇和叶
3ml提取液 +1ml 20%NaOH-甲醇（摇匀）603℃mi水n 浴 冷却 + 3ml苯（摇匀） + 3ml蒸馏水（逐滴加，摇匀） 静置，观察分层现象。
下层是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的叶绿素a和b（以及少量的叶黄素）； 上层是苯溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。 对照：另取3ml 叶绿体色素提取液，加入2ml 苯和2ml 蒸馏水观察与皂化 的叶绿素有何不同？ （结果与分析3）
叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×稀释倍数×提取液体积] /样品鲜重
比较两种方法所得的实验结果。 （结果与分析5）
5. 结果与分析
详见实验步骤（结果与分析1-6）
6. 注意事项
1）为了避免叶绿素的光分解，操作时应在弱光下进行， 研磨时间应尽量短些，以不超过2分钟为宜。
2）叶绿体色素提取液不能浑浊，否则应重新过滤。 3）分光光度计的正确使用。
叶绿体中色素的提取和分离
生物体内的主要能源物质是: 糖类 生物体内主要的储能物质是: 脂肪
生物体进行生命活动的直接 能源物质: ATP 最终能量来源: 太阳的光能
能量之源——光与光合作用
太阳光中有能量，我 们制造出太阳能电池板 可以捕获其中的能量并 转化为电能。 绿色植物也能捕获 并转化太阳光中的能量， 那么，绿叶中通过什么 物质或结构捕获并转化 光能呢？
小鼠
存活。
结论： 植物能够净化因燃烧或呼吸而变混浊的空气。
结论1： 普利斯特利的实验 只有在阳光照射下
才能成功
结论2： 植物体只有绿叶才能更 新空气。
结论： 淀粉是光合作用的产物之一。
极 细 光 束
黑暗中
光照下
结论： 叶绿体是植物进行光合作用的场所 光合作用需要在光下进行 光合作用中释放氧气
O2
光合作用的过程
学习目标： 1．了解光合作用的探索历程 2. 掌握光合作用的过程
1
光合作用的概念:
光合作用是指绿色植物通过叶绿体,利 用光能,把二氧化碳和水转化成储存能 量的有机物,并且释放氧气的过程。 2 光合作用反应式: CO2 + H2
*O 光能 叶绿体
有机物 + *O2
在光合作用的探索历程中， 有几个比较重要的突破性实验？ 分别有什么发现？在探索过程中 最杰出的科学家是谁？
光合作用的过程
阅读课本P:103—106,填写下表
项目
光反应
叶绿体的类囊体薄膜上 光、色素、酶，水 H2O
酶
暗反应
叶绿体的基质上 酶，水，ATP, [H]，C5
场所 条件
物质变化
[H]+O2 ↑
酶
ADP+Pi+能量
提取叶绿体色素的方法
提取叶绿体色素的方法解析：提取叶绿体色素的方法一、准备工具大试管、台秤、研钵、剪刀、量筒、漏斗、分液漏斗、软术寒、烧杯、滤纸、小试管、分兆计、酒精灯、吸耳球、移液管、电吹风、毛细管95%乙醇、CaCO3、石英砂、汽油、苯、KOH、甲醇、乙酸铜、盐酸二、步骤1. 称取新鲜去大叶脉的菠菜叶片，或芹菜、油菜等其他植物的新鲜绿叶5 g，剪碎放人研钵中，加入乙醇5 ml、少许CaCO3，中和细胞中的酸防止Mg，从叶绿素中心释放，和石英砂,研磨成勻浆,再加入适量的乙醇20~25 ml，然后用漏斗过滤，即得叶绿体色素液。
2. 若用千拒肥排粉时，则称取1g 干粉放人小烧杯中，加95%乙醇20~30 ml 提取,并随时搅动。
待乙醇呈深绿英露色时,滤出浸提液备用。
取准备好的滤纸条(2cmX20cm)，将其一端剪去两侧，中间留一个长约1.5cm,宽约0.5cm的窄条。
3. 用毛细管吸取叶绿体色素提取液点于滤纸的下端窄条的上方中央，注意一次所点溶液不可过多，如色素过淡,用电吹风吹千后再重复1~2次。
4. 在大试管中加入汽油5~10ml，或其他层析液，如石油醚:丙酮苯体积比为20 :2 :1的混合溶液，然后将滤纸条上端固定在软术塞上，插人试管内，使窄条进入溶液中，色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁，盖紧软木塞,直立于阴暗处，或试管外套一黑纸套。
5. 经0.5~1h后，观察分离后色素带的分布。
最上端橙黄色的是胡萝卜素,其次为叶黄素，再下面蓝绿色为Chl a,最后的黄绿色为Chl b。
6. 取叶绿体色素提取液少许于1支试管中，用反射光和透射光观察提取液的颜色有何不同，反射光下观察到的提取液颜色即为叶绿素产生的荧光颜色。
取叶绿体色素提取液少许，分装于两支试管，光对叶绿素的破坏作用中，一支放在黑暗处(或用黑纸套包裹)，另一支放在强光下(阳光下)，经过2~3h后，观察两支试管中溶液的颜狠敏色有何不同。
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
叶绿体色素提取和分离
对实验的反思和改进建议
在实验过程中，应严格控制实验 条件，确保实验结果的准确性和
可靠性。
在提取色素时，可以采用更温和 的方法，以减少对叶绿体的破坏，
提高提取效率。
可以尝试采用不同的分离方法， 以提高色素的分离效果和纯度。
THANKS FOR WATCHING
在叶绿体色素提取和分离实验中，可以采用分光光度法、色谱法等方法测定色素 含量。这些方法能够准确测量色素的浓度，进而评估提取效果。实验结果应提供 不同处理下叶绿体色素的含量数据，以便进行比较和分析。
叶绿体色素的纯度分析
总结词
叶绿体色素纯度是衡量提取物质量的重要指标，高纯度的色 素有利于后续实验和应用。
02 实验材料
实验材料的选择
选择新鲜的绿色植物
为了获取高纯度的叶绿体色素，应选 择新鲜、绿色的植物，如菠菜、豌豆 等。
选用适宜的溶剂
实验器材的准备
准备好实验所需的玻璃器皿、滤纸、 研钵、离心机等器材，确保其清洁度。
常用的溶剂有丙酮、乙醇等有机溶剂， 根据实验需求选择合适的溶剂。
实验材料的处理
植物材料的研磨
将新鲜植物材料剪碎后放入研钵 中，加入适量溶剂进行研磨，使 叶绿体充分释放。
过滤和离心
将研磨后的混合物过滤，去除残 渣，然后使用离心机将色素溶液 与残渣分离。
色素溶液的纯化
根据实验需求，可以采用不同的 方法对色素溶液进行纯化，如纸 层析、柱层析等。
实验材料的保存
溶剂的储存
01
有机溶剂应存放在阴凉、干燥的地方，避免阳光直射和高温。
详细描述
纯度分析可以通过色谱分析、光谱分析等方法进行。这些方 法能够检测色素中的杂质和污染物，并评估色素的纯度。实 验结果应提供色素纯度的数据，包括纯度百分比和杂质含量 等信息，以便了解提取物的质量。
叶绿体色素的提取及理化性质的
3
叶绿体色素在酸性和碱性溶液中的溶解度不同， 因此可以通过调节pH值进行提取和分离。
稳定性
01
叶绿体色素对光、热、酸、碱等条件敏感，容易发生降解。
02
在酸性环境中，叶绿素a和叶绿素b容易被氧化成脱镁叶绿素，
导致颜色变化。
在光照条件下，叶绿体色素会发生光降解，导致颜色变淡。
03
荧光性质
叶绿体色素具有荧光性质，其 中叶绿素a的荧光强度最强，
其次是叶绿素b。
荧光光谱分析可用于研究叶 绿体色素的结构和组成，以 及其在不同环境条件下的变
化。
荧光性质可用于叶绿体色素的 定量分析，通过测量荧光强度 可以计算出样品中叶绿体色素
的浓度。
03 叶绿体色素的应用
在农业上的应用
促进光合作用
叶绿体色素能够吸收光能，并将其转化为化学能，用于植物的光 合作用，促进植物生长。
不同植物种类的叶绿体色 素组成和含量不同，影响 植物对不同光照环境的适 应性。
植物分类学
叶绿体色素的组成和含量 可作为植物分类的依据之 一。
提取原理
根据相似相溶原理：叶绿体色素易溶 于有机溶剂，如丙酮、乙醇等，而不 溶于水。因此，通过加入有机溶剂， 可以将叶绿体中的色素提取出来。
色素分子在有机溶剂中的溶解度与温 度、压力、有机溶剂的种类和浓度等 因素有关。
提取过程中要保持低温，防止色素降解。 过滤时选用合适的滤纸，确保色素完全收集。
研磨时要充分，以释放出更多的色素。
避免使用金属器具直接接触有机溶剂，以防发生化学反 应。
02 叶绿体色素的理化性质
溶解性
1
叶绿体色素不溶于水，易溶于酒精、丙酮、氯仿 等有机溶剂。
2
叶绿素a和叶绿素b在层析液中的溶解度不同，因 此可以通过纸层析法进行分离。
分离叶绿体色素的方法
分离叶绿体色素的方法
1.离心法
叶绿体的密度较高，可利用这一特性通过离心来分离色素。
首先将植物细胞研磨并过滤，得到植物细胞的提取液。
将提取液放入离心管中，以逐渐增加转速的方式离心，使叶绿体向离心管的底部沉淀。
然后将上清液倒掉，用草酸铵溶液洗涤沉淀，最后用适量的液态透明质酸-乙醇溶液悬浮叶绿体，就可以得到纯净的叶绿体色素。
2.柱层析法
柱层析法常用于对叶绿体中的叶绿素a和叶绿素b进行分离。
首先将植物细胞研磨并过滤，得到植物细胞的提取液。
然后将提取液加入柱层析柱中，常用的柱层析材料包括硅胶和凝胶。
通过改变溶剂的流动速度和成分，使不同种类的叶绿素在柱层析柱上具有不同的流动速度，从而实现对叶绿素的分离和纯化。
3.电泳法
电泳法通过在电场中将叶绿体色素进行分离。
首先将植物细胞研磨并过滤，得到植物细胞的提取液。
然后将提取液加入凝胶电泳板中，通过施加电场，使带电的叶绿体色素在凝胶中移动。
由于不同种类的叶绿体色素在电场下具有不同的迁移速度，因此可以通过电泳法将叶绿体色素分离出来。
以上是常用的分离叶绿体色素的方法，每种方法都有其优缺点。
离心法简单快捷，但无法实现对不同种类叶绿体色素的有效分离；柱层析法可以分离不同种类的叶绿素，但操作较为繁琐；电泳法具有高分辨率和高灵
敏度，但对实验条件要求较高。
根据实际需要选择合适的方法进行操作，可以有效地分离叶绿体色素。
叶绿体色素实验
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和含量测定实验一、叶绿体色素的提取、分离1.实验名称叶绿体色素的提取、分离实验2.实验原理叶绿体中色素与内囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素不溶于水，而溶于有机溶剂，可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液用薄层色谱法加以分离和鉴别。
本实验采用酒精提取。
层析法原理： K=Cs/Cm。
3.实验试剂与材料新鲜菠菜叶体积分数百分之九十五的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1）天平，研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸4.实验步骤1．叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4~5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。
（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2~3ml 95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml 95%乙醇，暗处放置3~5min，上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。
2.色素分离：取硅胶预制板一个，用毛细管吸取提取液，在板短边据下端1厘米处划一细线，待干后再次划线，重复3,4次。
在层析缸中加入层析液，高度0.5厘米，将预制板放入层析液中进行层析。
改好缸盖。
待色素较好分离后，取出硅胶预制板，迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。
5.实验结果与分析滤纸条上出现4条色素带，从上到下依次是：橙黄色胡萝卜素（最快）黄色叶黄素蓝绿色叶绿素a（最多）黄绿色叶绿素b（最慢）二.理化性质1.实验目的验证叶绿素的理化性质。
2.实验原理叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。
叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。
然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。
2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。
过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。
3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。
常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。
通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。
4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。
随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。
这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。
叶绿体色素的提取
叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取是一项实验技术，涉及从植物叶片中提取叶绿体色素的过程。
下面是关于该实验的详细步骤和注意事项。
一、实验目的本实验旨在学习叶绿体色素的提取方法，了解叶绿体色素的种类和性质，掌握叶绿体色素的提取和纯化技术。
二、实验原理叶绿体色素是植物叶片中的一类重要色素，包括叶绿素、类胡萝卜素和黄酮类化合物等。
这些色素在光合作用中起着重要的作用，可以帮助植物吸收光能并转化为化学能。
叶绿体色素的提取通常使用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）作为提取剂，通过研磨、过滤和分离等步骤将色素从叶片中提取出来。
三、实验步骤1.准备实验材料：新鲜的植物叶片（如菠菜、甘蓝等）、称量纸、研钵、玻璃棒、漏斗、滤纸、丙酮、无水乙醇等。
2.称量植物叶片：选择新鲜的植物叶片，用称量纸称取5g左右，记录重量。
3.研磨：将称好的植物叶片放入研钵中，加入少量丙酮和无水乙醇混合液（比例为1:1），用玻璃棒充分研磨至匀浆状。
4.过滤：将研磨后的匀浆通过漏斗倒入滤纸中，用玻璃棒轻轻压榨，使滤纸上的液体完全流尽。
5.分离：将滤纸上的色素用玻璃棒刮下，用丙酮和无水乙醇混合液洗涤滤纸上的色素，洗液收集到棕色瓶中。
6.纯化：将收集到的洗液通过旋转蒸发仪进行浓缩，得到纯化的叶绿体色素。
7.分析：通过光谱分析、色谱分析等方法对提取到的叶绿体色素进行分析鉴定。
四、注意事项1.实验过程中要使用新鲜的植物叶片，以保证色素的含量和活性。
2.研磨时要充分破碎细胞，以便色素的提取。
3.过滤时要注意滤纸的选择和使用，避免滤纸上的杂质对色素纯度的影响。
4.分离时要小心操作，避免色素的损失。
5.纯化时要注意控制温度和时间，避免高温导致色素分解。
6.分析时要选择合适的分析方法，以便准确鉴定叶绿体色素的种类和性质。
7.注意安全操作，避免溶剂溅到皮肤或眼中。
8.实验结束后要及时清理实验现场，将废液和废弃物妥善处理。
9.本实验中使用的丙酮和无水乙醇等有机溶剂应妥善保管和使用，避免对环境和健康造成影响。
叶绿体中色素的提取用的物质
叶绿体中色素的提取用的物质
叶绿体中色素提取的物质有：
1. EDTA：乙二胺四乙酸，也叫芐酸，是一种维持叶绿体的必需条件，能够调节pH和离子平衡，起到配合体特殊性复制叶绿体的作用。
2. 普鲁兰液：由80％甘油、20％乙二醇组成，用于辅助新陈代谢，同时也能调节叶绿体膜结构，保持叶绿体的正常功能。
3. 尿囊素：它是一种非常重要的膜质脂质，可以稳定叶绿体的水溶性物质，同时还可以抑制高温环境下的膜脂质挥发，可以防止叶绿体的膜结构改变。
4. 果糖：提取叶绿体的过程中果糖可作为能量的供给，可以为叶绿体提供热能使其反应充分活跃，同时果糖可以避免某些离子参与抵抗膜上脂质分布，保证叶绿体膜结构的稳定。
5. 甲醇：用于溶解叶绿体，能够使其保持混合态，但不会影响构型，可以在中性或弱酸碱条件下保持叶绿体膜结构不变。
6. 矿物质：种类繁多，包括钠、钙、镁、铁、钾等元素。
它们可以调
节叶绿体的电解质平衡，维持其正常的结构及功能，为充分发挥叶绿体提供必要的条件。
提取叶绿体色素的方法
提取叶绿体色素的方法
叶绿体色素是一种非常重要的生物分子，可以在植物中找到。
它们起着重要的作用，可以参与光合作用，吸收太阳能以供有机物质的合成。
因此，叶绿体色素的提取显得尤为重要。
提取叶绿体色素的方法有几种，其中最常用的是离心法和沉淀法。
（1）离心法：首先，要将样品分离出叶绿体，可以用离心法。
在离心容器中加入植物细胞悬液，先用慢速离心运转1分钟，再用中速离心运转5分钟，最后再用高速离心运转5分钟，使叶绿体聚集在容器的离心池的底部，然后可以得到细胞浆液，再进行叶绿体的提取。
（2）沉淀法：检测混合物中的叶绿体，可以用沉淀法。
在混合
物中加入氯化钠或氯化钙溶液，使叶绿体发生沉淀，然后用离心法分离叶绿体，最后滤过，就可以得到叶绿体色素溶胶了。
提取叶绿体色素需要准备一些特定的试剂，比如：Tris-HCl缓
冲溶液、NaCl 、EDTA 、Triton X-100 、B-mercaptoethanol 、Glycerol 、蛋白酶K 、蛋白酶R 以及植物细胞悬液。
- 1 -。
叶绿体色素的提取酒精的作用
叶绿体色素的提取酒精的作用
在叶绿体色素的提取实验中，酒精的作用是作为溶剂来提取叶绿体中的色素。
叶绿体中的色素能够溶解在酒精或丙酮等有机溶剂中，因此，通过加入无水酒精（或丙酮）可以有效地将叶绿体中的色素分离出来。
具体步骤和作用如下：
1.研磨：首先将叶绿体与适量的无水酒精混合，在研磨过程中，叶绿体被破坏释放出色素。
2.过滤：将研磨后的混合物进行过滤，分离出叶绿体碎片和色素溶液。
3.收集色素：收集滤液，其中含有溶解的叶绿体色素。
酒精在这个过程中的作用是溶解叶绿体中的色素，使得它们从固态的叶绿体中释放出来，并形成可以被收集的溶液。
此外，使用无水酒精可以减少水分的影响，避免色素的降解，从而提高色素的提取效率和纯度。
需要注意的是，在使用酒精作为溶剂时，应当确保实验操作在通风良好的条件下进行，因为酒精蒸气具有一定的毒性，长时间暴露可能对健康造成影响。
同时，实验结束后，应当妥善处理酒精，避免火灾和安全事故。
叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取属于植物生理学研究课题中的重要内容，主要用于研
究植物光合作用机制和生理活动等。
叶绿体色素提取的方法有：
1. 普通法：普通法，也称为离心法，是从叶绿体提取色素的常的方法，主要包括叶绿体分离、碱提取和色素沉淀等步骤。
2. 高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法能够高效提取出叶绿体
色素，且对不同类型的叶绿素色素都具有很好的效果。
3. 原子吸收法：此方法利用叶绿体色素在原子吸收分析中的特殊的亮
度特性，可以同时测量特定波长的吸收谱，从中可以提取出大量不同
类型的叶绿体色素。
4. 光子聚焦荧光技术：光子聚焦荧光技术的原理是采用具有抑制作用
的特定波长发射出自身特定荧光，从而进行叶绿体色素的提取。
5. 光波谱法：光波谱法是利用光信号的强度大小，通过特定波长的发
送和接收来测定叶绿体色素浓度大小及组成成分，从而获得精确的叶
绿体色素提取结果。
通过以上五种方法可以进行叶绿体色素的提取。
但是在实际的应用中，
根据检测工具的不同，也要注意一些特殊的技术要求，例如提取样品的选择、采集参数的调节等，以保证实验的准确性和可靠性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
叶绿体色素的提取、分离、理化性质和含量测定
Ⅰ提取与分离
实验日期：2011.10.22
实验者：XXX
同组姓名：XXX
一、实验目的：
1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。
二、实验原理:
叶绿体是进行光合作用的细胞器。
叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。
植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。
本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。
三、实验材料与试剂:
1.新鲜的菠菜叶片。
2.体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂。
3.研钵，漏斗，滤纸，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板。
四、实验步骤:
（一）色素提取液的制备
1.取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎（越碎越好），放
入研钵中。
2.向研钵中加入少量CaCO3，加2~3ml体积分数为95%的乙醇，研磨至糊状，
再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出，残渣再用10ml
体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色
素提取液。
提取液应尽量避光保存。
因提取量较大，可用于其他相关实验
（即用于后面的理化性质的验证）。
（二）叶绿体色素的分离
1.取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，
距下边缘1cm处用毛细管划线，自然风干后划第二次，重复操作3~4次，
确保划的滤液细线颜色足够深，使分离结果更加明显。
2.取已经加入适量展开剂的层析缸，把硅胶预制板带有色素的一端放入，使
其下端浸入展开剂中，但注意液面不可超出滤液细线。
迅速改好层析缸盖
减少展开剂的挥发对人体产生的不良影响。
注意观察展开剂的扩散过程，
当各种色素得到较好分离，且展开剂前沿接近硅胶预制板上端边缘处时，
取出硅胶预制板迅速用铅笔标出展开剂前沿和各色素带的位置。
注意要迅
速，否则展开剂前沿很快会挥发消失，且前沿和各个色素带的位置均会有
微小变动。
3.测量出前沿和各个色素带距离原点的距离并记录。
五、实验结果与分析（以图辅助以文字展示）:
.
自上而下分别为：胡萝卜素，叶绿素a，叶绿素b，叶黄素。
各自到原点的距离：
展开剂前沿：8.50cm
胡萝卜素：8.10cm ，Rf=0.95
叶绿素a：6.70cm ，Rf=0.79
叶绿素b：6.30cm ，Rf=0.74
叶黄素：5.90cm ，Rf=0.69
事实上实验中不止看到了这四种色素带，在它们下面还有一些分离出来的色素带，但是不在本实验的讨论范围中，故不予考虑。
Ⅱ理化性质
一、实验目的：
验证叶绿体素的理化性质。
二、实验原理：
1.叶绿素可与碱起皂化反应产生的盐能溶于水中，因此可用此法分离叶绿素和类胡萝
卜素。
2.叶绿素吸收光子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回基态时
可发射出红光量子因而产生荧光。
3.叶绿素的化学性质很不稳定，易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，
而类胡萝卜素则较稳定。
4.叶绿素中的镁可以被H+取代而成褐色的去镁叶绿素。
去镁叶绿素遇铜成为铜代叶
绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的
浸渍标本。
三、实验材料与试剂：
1.新鲜菠菜叶片。
2.叶绿素提取与分离实验中剩余的叶绿素提取液。
3.小试管，试管架，水浴锅（60℃和90℃各一个），10ml移液管，洗耳球，三角瓶。
4.体积分数为95%的乙醇，笨，醋酸铜粉末，质量分数为5%的稀盐酸，醋酸-醋酸铜
溶液，氢氧化钾-甲醇溶液。
四、实验步骤：
（一）光对叶绿素的破坏作用
取2支小试管，各加入2.5ml叶绿体色素乙醇提取液，并用乙醇稀释一倍。
其中一支放在直射阳光下，另一只用锡纸包严，40min后对比观察颜色有
何变化。
（二）皂化作用（绿色素与黄色素的分离）
1．取1支小试管加入3ml浓的叶绿素乙醇提取液，加入1ml氢氧化钾-甲醇溶液，充分摇匀。
2．片刻后，加入3ml苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1ml左右蒸馏水，轻轻混匀（勿激烈摇荡），然后置于试管架上静置分层。
若溶液不分层，则用
滴管吸取蒸馏水，沿管壁滴加，边滴加边摇动，直到溶液开始分层时静置。
（三）H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用
1．取2支试管，第一支加叶绿体色素提取液5ml，作为对照。
第二支试管加叶绿体色素提取液5ml后，再加入质量分数为5%的稀盐酸数滴，摇匀，
观察溶液颜色变化情况。
当溶液变褐后，再加入少量醋酸铜粉末，60℃水
浴加热，观察溶液颜色变化情况，并与对照试管相比较。
2．取新鲜菠菜叶片两小片（能塞进小试管即可），放入试管中，加醋酸-醋酸铜溶液，使之没过叶片，90℃水浴加热，随时观察叶片颜色的变化，直至
颜色不再变化为止。
（四）荧光现象的观察实验前
取一支小试管加入3ml浓的叶绿体色素乙醇提取液，在直射光下照射，比
较溶液的透射光与反射光颜色有何不同。
五、实验结果与分析（以图辅助以文字展示）：
（一）光对叶绿素的破坏作用
（二）皂化作用（绿色素与黄色素的分离）
有明显的分层现象，上层显黄色，下层显绿色。
（三）H+和Cu2+对叶绿素分子中Mg2+的取代作用
绿色→→→→黄色→→→→绿色
（四）荧光现象的观察
实验前（左边光
照）
利用另外一支试管取未用锡箔纸包的
叶绿素溶液进行对比如图，右边为光照
后的叶绿素溶液
实验后（由于实验过程中包锡箔纸
的试管不慎打翻导致现在这样）
反射光明显是红色的
明显透射光是绿色的。