补体结合试验的原理及应用

补体结合试验的原理及应用

补体结合试验（Complement fixation test，CFT）是一种常用的免疫学试验，广泛应用于临床、动物卫生、微生物学和生化学等领域。本文将介绍补体结合试验的原理、方法和应用。

一、原理

CFT是通过检测抗原-抗体结合后是否影响补体作用来确定是否存在特定抗体的一种免疫学试验。抗原与特异性抗体结合后，形成免疫复合物，该复合物可以与补体结合并激活补体，从而引发一系列补体反应。

而在CFT中，引入两种补体成分：被偶联的抗原与补体激活剂（即受体），以及补体底物（即被激活的补体）。被测血清中如有特异性抗体，可与被偶联的抗原发生结合，使得补体激活剂发生变化，无法与补体底物相结合。因此，测得补体底物与补体激活剂之间无结合，即补体未被激活，则可证明血清中存在特定抗体。

二、方法

1. 试剂与设备

（1）被测血清：取血后离心获取血清；

（2）受体：把抗原与抗体偶联在羊红细胞表面，用0.1M苏打缓冲液洗涤去除未偶联的抗原和抗体；

（3）抗原与特异性抗体：比如，细菌、病毒、药物等；

（4）补体：常见的有裂解法（Lysed Sheep Erythrocytes，LSE）和搅拌法（Z牛补体）；

（5）试管/小瓶/平板：供反应使用；

（6）显微镜、离心机等。

2. 步骤

（1）制备试剂：适量的抗原和抗体分别和受体在适宜条件下以一定比例混合，制成一定浓度的大量受体；另需要制备几重稀有度的抗原和抗体梯度稀释物；

（2）标准样品制备：以已知抗体滴定值的血清为标准样品，依据其相对滴定值制成浓度为10U的配制液；

（3）加样：将待检血清、标准样品及对照血清加到小瓶中，每组加4支小瓶；

（4）加试剂：加入适量偶联抗原及补体；

（5）反应：置平板中，在37℃恒温箱内孵育数小时，待反应结束；

（6）结果判定：利用显微镜观察血清和补体底物与补体激活剂是否结合，判断血清中抗体是否存在。

三、应用

CFT可以测定某一种特定抗体的存在与否，具有特异性、敏感性和准确性等优点。广泛应用于微生物检查、病

毒检测、药物检测、动物疫苗检测、人体疾病的诊断等方面。

在临床疾病诊断方面广泛应用于病原微生物的检测，如梅毒、结核病、乙型肝炎、艾滋病等；在动物卫生方面用于检测牛、猪、鸡等动物的疫苗免疫效果，检测血清中特别抗体等；在微生物学方面，如淋球菌和衣原体的诊断等。

四、优点与不足

CFT优点在于对特定抗体的测试高度敏感和特异性，且无需备专门的设备和试剂，易于使用和操作。而不足之处在于其结果往往需要长时间反应，精度易受人员操作技能和条件等因素影响，且对抗体种类有限，对抗原也有要求，仅适用于特定微生物、病毒和药物等特定领域。同时，原料采集难度较大，需要有相关部门的配合。