银杏黄酮的制备

实验申请

实验项目：银杏黄酮的制备

实验原料：银杏叶粉，对照品芦丁

实验仪器：（1）大孔吸附树脂 （2）722 型分光光度计

（3）真空泵 （4）超声波细胞粉碎机（5）微波炉

实验试剂：乙醇（20%、70%、90%），亚硝酸钠溶液（5%），1M NaOH ，

硝酸铝（10%）

耗材及辅助器材：（1）移液管 1ml ×1，5ml ×1，10ml ×1

（2）容量瓶 25ml ×12 ，500ml ×1，100ml ×4

（3）洗耳球（4）胶头滴管（5）布氏漏斗

（6）量筒 20ml ×1 ，100ml ×1（7）抽滤瓶

实验操作

操作步骤：

黄酮的提取：

1. 校正天平，然后称取处理好的银杏叶粉末 1g 。

2. 将所称样品加入 50ml70%乙醇中，搅拌混匀。

3. 将上述溶液在微波炉中火条件下（10s+10s ）处理3 次。

4. 然后超声破碎（5s+6s ）60 次,测量体积V1，然后搅拌6min.

5. 用循环水真空泵过滤。

6. 滤液用大孔树脂法精制

组长：

组员：

Tel:

E-mail:236150351@

QQ ：236150351

指导老师：刘宝全

2013年09月 25日

7. 装柱：树脂柱高度约为4cm。

8. 取滤液上柱吸附，重复2 次，收集流出液，记录体积V2。

9. 洗涤：用无水乙醇洗涤树脂2 次，流出液为无色透明，再

用高纯水洗涤树脂柱，直至无醇味。

10. 洗脱：用90%乙醇进行洗脱，收集流出液V3，进行黄酮

浓度测定。

11. 制作芦丁标准曲线并测定黄酮含量。

12. 结束，整理实验台。

标准曲线的制定及黄酮含量的测定：

1.准确配制0.292g/L 的芦丁标准液

2.分别取1ml，2ml，3ml，4 ml ，5 ml，6 ml，7 ml，8 ml，9 ml，

标准液和样品液1ml 置于25ml容量瓶中

3.加20%乙醇至12.5ml,加0.5ml亚硝酸钠溶液（5%）

4.放置5min 后加0.5ml 硝酸铝（10%）

5.放置5min 后加5ml 1mol/LNaOH，混匀

6.用20%乙醇稀释至刻度，10min后在510nm 处进行比色测定，

同时做空白对照。记录数值。

7.结束，整理操作

操作流程图：

样品溶解

称取银杏叶粉末1g微波辅助浸提

加70%乙醇

测V1

收集V2

实验记录

试管标号

0 1 2 3 4 5 样品 芦丁标准

液/ml

0 1 2 3 4 5 7 芦丁标准

液含量

（mg ）

0 0.292 0.584 0.876 1.168 1.46 x OD 值

510nm

0 0.059 0.118 0.170 0.230 0.283 0.072

黄酮吸附 装柱 洗柱 精制

洗脱 制作标准曲线

结束

黄酮含量测定 超声波辅助浸提

循环水真空泵过滤

实验总结

数据统计：

已知芦丁标准液的浓度c=0.292g/L ，所以有上述计算结果。

计算：

1ml 样品的OD 值为0,072，带人代入标准曲线Y=0.1967X-0.0069 试管标号

0 1 2 3 4 5 样品 芦丁标准

液/ml

0 1 2 3 4 5 7

芦丁标准

液含量

（mg ）

0 0.292 0.584 0.876 1.168 1.46 0.401 OD 值

510nm 0 0.059 0.118 0.170 0.230 0.283 0.072

X = 401.01967

.00069.0072.0=+(mg) 叶片干粉质量m1=3.015g

最后流出液体积V=41ml

银杏叶粉黄酮的含量

得率= X × 2

V ÷m ÷1000×100% =0.401×2

41÷3.015 ÷1000 ×100% =0.273% 误差分析：

1.仪器与操作人员本身存在着误差。

2.由于抽滤两次，所以黄酮含量有所损失

3.在吸附前，虽然经过多次洗树脂柱，但由于某些因素，树脂柱可能

没有完全洗净。

4.为了保证精制黄酮纯度高，多次用90%乙醇洗涤，所以最终

流出液体积较大。

5.在进行吸光值测量时，只用配套的两支比色皿进行比色，一支

测空白，另一支测其它，这样能减少比色皿带来的实验误差。比色

皿放置于第1、3 暗格中，这样方便取用。

注意事项：

1.微波萃取与超声波破碎时，中间应间隔几秒，间隙时间应大

于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超

声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。

2. 树脂柱底端应放一团棉花，防止液体未被吸附就流下；

在装柱时必须防止气泡、分层及柱子液面在树脂表面以下等

现象发生。

3. 一直保持流速缓慢以加强吸附性，并注意勿使树脂表面干燥。

4.分光光度计应预热30min 左右后再进行测量，保证读数稳定。

5.天平使用方法：

a. 将天平至于干净平整台面，调节水平（气泡位于圆圈内）。

b. 接通电源。

c. 放已知砝码称重。

d. 准则称量药品。不准则校正，然后称量。

6.侧吸光值时，最好只用两个比色皿，以减小因比色皿带来的误差。

7.在加入试剂5~20min 内测定吸光值，因为这段时间内颜色最稳定。

8.微波炉不空转，不放金属。

实验讨论：

Ⅰ.实验目的：

1.了解黄酮类物质的分离，提取和检测方法。

2.了解大孔吸附树脂的特征和在生化分离中的应用。

Ⅱ.实验原理：

1.提取：溶剂提取法：一般指从中草药中提取有效部位的方法，根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性，选用对活性成分溶解度大、对