银杏黄酮纯化工艺研究

广泛用于肾移植、肝移植和心脏移植等患者,使器官移植成功率大幅度提高。由于Cs A的安全范围窄,毒性反应强,体内过程个体差异很大,即使患者服用等量的Cs A,其血药浓度也有很大的差异[2]。同时,Cs A浓度过高会导致严重的肝肾毒性、高血糖和神经损害,还会诱发感染和引发肿瘤等。本研究病例中62%的中毒反应发生于Cs A血药浓度高于400ng/m l的患者中,因此将血药浓度控制在400mg/m l以下,可以明显降低Cs A毒性反应的发生。而浓度过低则达不到治疗效果,产生排斥反应[3]。

312　肾移植后采用以Cs A为主的三联免疫抑制用药方案的优越性已为移植专家广泛认同,但由于各单位Cs A起始剂量及减量方案不同,国内外尚无统一的Cs A 治疗窗浓度。本研究通过对肾移植术后接受Cs A免疫抑制治疗的59例患者715例次Cs A全血谷浓度测定结果的分析,综合临床上出现中毒反应和排斥反应时患者Cs A谷浓度测定结果,推荐肾移植后在三联免疫抑制剂治疗方案中,较为理想的治疗浓度范围为:术后

<30d:250～450ng/m l;30～90d:250～400ng/m l; 90～180d:180～400ng/m l;180～360d:150～300 ng/m l;1年以上:100～250ng/m l。结果证明,将Cs A 血药浓度调整到推荐治疗浓度范围的中毒反应发生率为14.5%,移植排斥反应发生率为4%。高于推荐治疗浓度范围的毒性反应发生率为56%,低于这一范围的排斥反应发生率为50.4%。因此,调整Cs A用药剂量,实施个体化给药方案,既能达到满意的免疫抑制效果,又能有效降低毒性和排斥反应的发生率;同时可以降低病人的医疗费用。这进一步说明,肾移植后治疗过程中的Cs A血药浓度监测对Cs A中毒和排斥反应鉴别具有重要意义。

参考文献

1　方芸,王欣,裴云萍.环孢素A监测指标及治疗浓度的研究进展.中国药房,2006,17(4):307

2　石杰,曹勇,张新惠.年龄环孢素浓度肾移植术后疗效之相关性分析.

中华肾脏病杂志,2006,22(3):165

3　肖艳,李学庆,王成,等.影响环孢霉素A血药浓度的药物研究进展.

黑龙江医药,2005,18(4):279

银杏黄酮纯化工艺研究3

张静泽,曹　波,白淑芳,陈　虹

(中国人民武装警察部队医学院,天津　300162)

摘　要　目的:考查非水体系中ZX-4型配位吸附树脂对银杏总黄酮类成分的分离纯化方法。方法:根据银杏黄酮的结构特征,考查ZX-4型配位吸附树脂的吸附性能,并采用HP LC法对银杏总黄酮进行定量分析。结果:Z X-4型配位吸附树脂对银杏总黄酮类成分吸附选择性高。以5%HAc乙醇溶液作为洗脱剂,银杏黄酮纯度提高至53.2%,起到了纯化精制的目的。结论:以配位吸附树脂ZX-4作为纯化银杏黄酮的吸附剂;吸附容量大,解吸容易,分离纯化方法简便有效。

关键词　配位吸附树脂,非水体系,银杏黄酮

中图分类号:R914.4 文献标识码:A 文章编号:100625687(2008)0320003204

Pur i f i ca ti on of fl avono i ds fro m H ippohae R ham noides L

Zhang J ingze1,Cao Bo,Bai Shufang,Chen Hong

(1.Depart m ent of Phar macy,Medical College of Chinese Peop le’s A r med Police Forces,Tianjin300162)

ABSTRACT OBJECTI V E T o study a method for separating and purifying the t otal flavonoids in Ginkgo leaf with the coordinate ad2 s or p ti on in the none-aqueous syste m.METHODS Coordinate ads or p ti on resin Z X-4was systematically studied f or its ads orbing capability.HP LC was used t o measure the content of flavonoids in Ginkgo leaf.RES ULTS Flavonoids in Ginkgo leaf can be highly abs orbed by ZX-4resin.The purity of the flavonoids was54.66%in the dried part of5%HAc ethanolic eluti on.CONCLUSI O N It is a si m p le and efficient method t o separate flavonoids in Ginkgo leaf.The coordinate ads or p ti on ZX-4has higher abs or p ti on content than the other resins and it can be des orbed easily.

KE Y WO RD S coordinate ads or p ti on,non-aqueous syste m,Ginkgo flavonoid

3收稿日期:2007212221

银杏又名公孙树,为银杏科银杏属植物(Ginkgo bilobal L)。我国银杏资源丰富,拥有量占世界总量的70%左右。银杏叶中含有黄酮类、萜内酯类、多酚类、生物碱、长链醇、酮类及微量元素等主要化学成分。其中银杏黄酮具有扩张血管、抑制血小板活化因子、抗氧化和调血脂等药理作用[1]。目前,黄酮类成分的提取分离方法主要有溶剂法、超临界流体萃取法和大孔树脂吸附法等。溶剂法工艺过程较烦琐,得到的黄酮产品纯度不高;超临界流体萃取法能够得到黄绿色精提物,黄酮纯度在35%以上,然而设备成本高,而且需高压技术,在设备和过程设计上还缺乏基础数据和系统的方法,目前我国尚未普及;大孔树脂吸附法能耗低,设备简单,是大多数生产厂家所采用的方法,然而普通的吸附树脂选择性较差,产品纯度不高[2,3]。为此,本实验旨在采用配位吸附树脂在非水体系中对银杏提取物中黄酮类成分进行吸附分离,以期能通过简单快捷的方法直接得到较高纯度的银杏黄酮提取物。

1　仪器与试药

DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器(江苏太仓市实验仪器厂),UV-754型紫外-可见分光光度计(上海第三分析仪器厂),吸附柱(定制),恒流泵、自动部分收集器(上海沪西分析仪器厂),高效液相色谱仪(W aters510泵,W aters484检测器),RP-C

18

键合相色谱柱(250mm×4.6mm,7μm)。Z X-4型配位吸附树脂自制。银杏提取物(黄酮含量11%,天津阳辰公司提供),槲皮素对照品(天津市药品检验所药典公司),无水乙醇和环己烷为分析纯。

2　方法与结果

211　银杏黄酮定量测定方法

2.1.1　HP LC分析方法　采用RP-C18键合相色谱柱,流动相为甲醇-水-磷酸(55∶45∶0.3),检测波长368n m,流速0.8m l/m in,进样量20μl,测定样品中黄酮含量。理论塔板数按槲皮素峰计算不低于2500。

2.1.2　标准溶液的配制　精确称取25mg槲皮素对照品置于25m l量瓶中,用甲醇溶解后定容。分别吸取1、2、3、4和5m l对照品溶液于10m l量瓶中,用甲醇定容至刻度备用,进样20μl。在考查的浓度范围内,线性关系良好。线性回归方程为:S=685707.4+ 85095709C,r=0.99992(n=5)。

2.1.3　供试品溶液的制备　称取一定量银杏提取物,加入乙醇-环己烷混合溶剂使之完全溶解,吸取一定量样品溶液蒸干后依次加入30m l甲醇和5m l,25%盐酸,置50m l锥形瓶中,于水浴68℃水解1h,冷却至室温后转入50m l量瓶,加甲醇稀释至刻度。

2.1.4　银杏总黄酮纯度的计算　银杏黄酮中各类苷元的分子在结构上极为相似,而且相对分子质量也相差不多,只是少数非强生色基团不同。因而其对槲皮素的响应因子都应该接近1,即只用槲皮素作为对照,所产生的误差可以忽略,其转换因子平均为2.51。计算方程式如下:银杏总黄酮苷纯度=槲皮素含量×2.51。通过计算得到银杏提取物上柱液中黄酮含量为11.86%[4]。

212　Z X-4型树脂在不同介质中对银杏黄酮的吸附　在实验中考查了负载A l3+的ZX-4型树脂在水、乙醇、乙酸乙酯和环己烷中对银杏黄酮的吸附情况,按(1)式计算树脂的吸附量。

Q=(C0-C e)V/m (1)

式中Q为吸附量,C

和C

e

分别为吸附前初始液浓度和吸附达平衡时的溶液浓度,V为吸附溶液体积, m为树脂质量。结果见图1和图2,在环己烷体系中树脂的吸附量最大,而水、乙醇和乙酸乙酯为介质时树脂吸附量均在2mg/g以下。笔者利用吸附方程对银杏黄酮在环己烷体系中的吸附等温线进行拟合。配位吸附方程1/a=1/nKC+1/n,这个方程与Lang muir吸附方程近似,只是各参数的意义不同,a为树脂上每摩尔金属离子所吸附配体数量;n为树脂上负载的每摩尔金属离子的饱和吸附量,由此值可知树脂上每个金属离子用以配位的平均配位数;K为配位吸附在树脂上的稳定常数,其直接反应了配体与树脂上的金属离子间形成配位键的强度[5]。配位吸附方程关联的ZX-4在环己烷中银杏黄酮的吸附等温线相关性很好,相关系数r=0.99932。通过计算得到稳定性常数K为1.41(L/mg);每个铝离子的配位吸附数为3.11。而在水、乙醇和乙酸乙酯中吸附量很小,且拟合时不能得到线性的方程,可见在水、乙醇和乙酸乙酯等溶剂中由于-OH、-C=O结构的存在对配位吸附产生抑制

。

图1　ZX-4型树脂

在环己烷中对银杏黄酮的吸附等温线