DNA、血红蛋白的提取与鉴定(S)

血红蛋白的提取和分离
(1)方法及原理 方法 凝胶色谱法 电泳法 原理 根据 相对分子质量的大小 带电性质 的差异 各种分子 分离蛋白质 以及 分子本身大小 、形状的不同
透析袋能使小分子 自由进出，大分子保留 在袋内。可除去样品中 分子量较小的杂质 透析 缓冲溶液作用： 维持PH基本不变。 人体血浆中缓冲液：
(2)实验操作程序 样品处理: 红细胞的洗涤(生理盐水) →血红蛋白的释 放 →分离血红蛋白溶液 （蒸馏水） （离心） ↓ 粗分离: 用透析法除去样品中相对分子质量较小 的杂质 ↓ 纯 化: 用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化 ↓ 纯度鉴定: 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对 分子质量,即对血红蛋白进行纯度鉴定。
A 低速短时间离心
（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、从动物细胞获取DNA，做法及所依据的原理？ 动物细胞在低渗溶液（如蒸馏水）吸水易破裂， 释放出内容物。 2、植物细胞 ① 加入一定的洗涤剂和食盐 ② 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 洗涤剂——能瓦解细胞膜，利于DNA释放。 食 盐——利于DNA的溶解于研磨液中。 （三）除去滤液中的杂质
H2CO3/NaHCO3 NaH2PO4 / Na2HPO4
1、相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可 表示为图中哪一个（ B ）
2、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的 电泳迁移率主要取决于（ B ） A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 注：SDS所带的负电荷量大大超过了蛋白质分子原有 的电荷量，掩盖了蛋白质间的电荷差别。
（四） DNA的析出与鉴定 1、DNA的析出 原理： DNA不溶于酒精溶液。 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的冷 做法： 却的酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min， 溶液中会出现白色丝状物 ——粗提取DNA 2、DNA的鉴定 沸水浴
DNA＋二苯胺
蓝色
注：二苯胺要现配现用
• 1 在DNA粗提取过程中，先后两次向烧杯中加 入蒸馏水的作用分别是 B • A稀释血液；冲洗样品 • B使血细胞破裂；降低NaCl浓度使DNA析出 • C使血细胞破裂；增大DNA溶解量 • D使血细胞破裂；提取含杂质较少的DNA 思考：三次加入NaCl的作用分别是？ 第1次加速染色质中的DNA与蛋白质分离。 第2次使DNA溶解。 第3次DNA鉴定中，溶解DNA。
分离血红蛋白溶液
有机溶剂
（无色透明的甲苯层） （红色透明液体）
脂类物质 （白色脂溶性物质沉淀层） 血红蛋白溶液
红细胞破碎物沉（暗红色沉淀物）
3、下面关于对血红蛋白提取和分离的样品的处 理措施中，正确的是(BCD)多选 A．采集血样后要高速短时间离心获得血细胞 B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤 次数，否则血浆蛋白无法除净。 C．在蒸馏水和甲苯的作用下，细胞破裂，释放 出血红蛋白 D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红 蛋白和其他杂质分离开来
• 2 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是D • A．洗涤剂能瓦解细胞膜，同时也能控制DNA在 NaCl溶液中的溶解度 • B．在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验 中，需要控制的自变量是洗涤剂和植物细胞 • C．常温下，DNA遇二苯胺被染成蓝色 • D．将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温 10～15分钟能去除滤液中的杂质，其原理是利用 了DNA和蛋白质对高温耐受性的不同
鸡血
抗凝剂 静置
鸡血 蒸馏水，破碎细胞 细胞 搅拌 过 滤 收集滤液（核内物质） 2mol/L NaCl 溶解核内的DNA 蒸馏水 析出含DNA的黏稠物 过滤或挑出 含DNA的黏稠物 2mol/L NaCl DNA的黏稠物再溶解 过 滤
DNA 鉴定
Baidu Nhomakorabea
二 沸 苯 水 胺 浴 白色丝 等体积、冷 提取含较少杂质的DNA 状物 却的酒精
DNA的粗提取与鉴定
一 基本原理
①DNA在不同浓度的NaCl溶液 中溶解度不同，在 0.14 的 NaCl溶液中溶解度最低。
②DNA 不溶于 酒精。 ③DNA在 沸水浴 条件下，可 被 二苯胺染成 蓝 色。 二、实验设计 （一）材料 但一般选用DNA含量相对较高的组织， 选取： 如鸡血、菜花、洋葱等。