masson染色结果分析教程文件
PH0622 Masson三色染色液(马松染色)使用手册
自备材料
1、固定液：选用甲醛升汞或甲醛盐溶液，亦可选购中性福尔马林试剂； 2、95%乙醇、无水乙醇等系列乙醇； 3、蒸馏水或去离子水；
使用方法
1、切片常规脱蜡至水。 2、用配制好的试剂(A)染色 5～10min。 3、用酸性乙醇分化液分化、水洗。 4、用氨水溶液返蓝、水洗。 5、蒸馏水或者去离子水洗 1min。 6、丽春红品红染色液染色 5～10min。 7、用乙酸溶液洗 1min。 8、磷钼酸溶液洗 1～2min。 9、用乙酸溶液洗 1min。 10、直接放入苯胺蓝染色液中染色 1～2min。 11、乙酸溶液洗 1min。 12、95%乙醇快速脱水。 13、无水乙醇(Ⅰ) 5～10s。 14、无水乙醇(Ⅱ) 5～10s。 15、无水乙醇(Ⅲ) 5～10s。 2
1
试剂(F): 磷钼酸溶液 试剂(G): 苯胺蓝染色液 使用说明书
50ml 50ml
100ml 100ml 1份
RT 避光 RT 避光
主要成分
试剂(A): 主要由苏木素和氯化铁等组成。 试剂(B): 主要由乙醇、酸溶液等组成。 试剂(C): 主要由稀氨水等组成。 试剂(D): 主要由丽春红、品红等组成。 试剂(E): 主要由乙酸等组成。 试剂(F): 主要由磷钼酸等组成。 试剂(G): 主要由苯胺蓝、弱酸等组成。
Phygene Masson 三色染色试剂盒的特点： ①染色稳定； ②分化时间短，1～2s； ③色彩清晰鲜艳； ④适用范围广，适宜于组织的石蜡切片、冰冻切片等染色； ⑤所染切片保存时间长且不易褪色。
试剂存储
常温保存，有效期至少一年
试剂组分
试剂名称 试剂(A) :Weigert 铁苏木素染液 | A1:苏木素染液 试剂(A) :Weigert 铁苏木素染液 | A2:氯化铁溶液 规格：50ml 25ml 25ml 规格：100ml 50ml 50ml 保存 RT 避光 RT 避光
肾组织masson染色实验步骤
肾组织masson染色实验步骤一、实验前准备1.准备工作台和必要的实验用具。
2.准备好嵌入的组织切片。
3.将切片浸泡在脱水、透明化、蜡包埋、切片、脱蜡等溶液中进行处理。
二、固定和脱水1.将组织切片置于4的多聚甲醛中，固定时间约为24小时。
2.取出固定后的组织切片，先放入70的乙醇中脱水，随后放入95的乙醇中进行脱水处理。
三、透明化1.将脱水后的组织切片放入甲醇中透明化。
2.从甲醇转移到二甲苯中进行透明化处理。
四、蜡包埋1.将透明化后的组织切片置于液态石蜡中，进行蜡包埋处理。
2.在包埋前，确保石蜡的温度适中。
五、切片1.将包埋后的组织切片切割成4-6微米的薄切片，准备进行染色。
2.使用切片机进行切割，注意切片的厚度要一致。
六、脱蜡1.将薄切片放入脱蜡热盒中进行脱蜡处理。
2.确保脱蜡的时间和温度控制得当，以保证切片中的蜡全部被脱除。
七、染色1.准备好Masson染色试剂盒，按照说明书中的配方将试剂配置好。
2.将脱蜡后的切片浸泡在甲醇中5分钟，以去除残留的蜡质。
3.将切片放入伊红染液中浸泡5分钟，随后用蒸馏水洗净。
4.将切片放入酸性橙G染液中浸泡5分钟，随后用蒸馏水洗净。
5.将切片放入甲苯中进行脱水处理，然后覆盖玻片，施加封片剂，完成Masson染色。
八、镜检1.将染好色的切片放置在显微镜下进行观察。
2.检查切片中的细胞核、细胞质、胶原纤维等成分的染色情况。
九、结果分析1.根据观察结果，分析肾组织中的胶原纤维、细胞核、细胞质的染色情况。
2.对比正常组织和异常组织的染色情况，进行结果分析和总结。
十、实验总结1.总结本次实验的操作步骤和所得结果。
2.对实验中可能存在的问题和改进方法进行总结和反思。
以上就是对肾组织Masson染色实验步骤的详细介绍，希望可以帮助到需要进行此项实验的科研工作者。
对于肾组织Masson染色实验步骤的详细介绍，实验中的每一步都至关重要，它们共同构成了一项完整的实验流程。
接下来，我们将对每一步进行更详细的讲解，以便读者更好地理解和掌握实验的操作技巧和要点。
Masson三色染色法--染色案例
Masson三色染色法
1.实验目的
MASSON染色观察病变的组织
2.实验材料
2.1石蜡切片
2.2仪器与试剂
2.2.1
（1）电热恒温干燥箱
（2）光学显微镜及拍照设备
（3）冰箱
（4）电子天平
（5）盖玻片
（6）染缸
2.2.2
（1）二甲苯
（2）无水乙醇
（3）Weigent氏苏木素液
（4）1％盐酸液
（5）立春红-品红溶液
（6）1％磷钼酸液
（7）1％淡绿液
（8）1％醋酸液
3.实验步骤：
操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；
(2)Weigent氏苏木素液染核5-10分钟；
(3)自来水洗；
(4)1%盐酸酒精分化数秒（在显微镜下控制染色，除核为黑色，片中其他均混为白色）；
(5)自来水洗；
(6)丽春红—品红溶液5-10分钟
(7)清水水溶液洗；
(8)1%磷钼酸分化直到各种成分被染清晰10分钟（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）；
(9)清水洗
(10)1%淡绿液染2—5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液替代）
(11)1％醋酸水溶液处理2MIN
(12)常规脱水、透明、封片。
结果：胶原纤维绿色（或蓝色），肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。
Human-肺癌-马松染色法
Human-肺-马松染色法
Human-软骨-马松染色法
Human-胰腺癌-马松染色法
武汉云克隆诊断试剂研究所。
masson染色步骤(临床医学研究中心总结)
试剂名：改良 Masson 三色染色液货号：G1345 品牌：索莱宝1、石蜡切片65℃烘烤1h（使组织更贴合玻片，并溶解石蜡。
如果是刚切好的切片，则烘烤2-3h），立即放入脱蜡剂中脱蜡；2、脱蜡：脱蜡剂Ⅰ（15min）、脱蜡剂Ⅱ（15min）水化：无水乙醇I（5min）、无水乙醇 II（5min）、95%乙醇I（5min）、95%乙醇II （5min）、85%乙醇（5min）、75%乙醇（5min）脱蜡处理，蒸馏水3min3、将 Bouin 液滴在组织上，于室温作用一晚或置入 37℃的温箱内 2h 进行媒染，然后流水冲洗至切片组织上的黄色消失。
4、天青石蓝染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
5、Mayer 苏木素染色液滴染3min，稍水洗玻片上无染料即可。
（显微镜下观察，细胞核呈现深蓝色，细胞质有蓝色）6、酸性乙醇分化液分化3-5s，流水冲洗 10min返蓝。
（细胞核呈现灰蓝色，细胞质应相对透明无色）7、丽春红品红染色液染 2-5min，稍水洗玻片上无染料即可。
（容易造成深红或紫红色，基本看不清细胞核。
建议先染色30s-1min，显微镜下观察，适当增加时间）8、磷钼酸溶液浸泡10min，倾去上液，切片不用水洗，直接滴入苯胺蓝染色液染 5-10min。
（如果丽春红染色过深，苯胺蓝也应该适当染久一些，最终应该是红蓝色分明，能明显分辨出胶原显微）9、弱酸溶液处理 2min。
10、透明：切片直接依次放入无水乙醇 I（5min）-无水乙醇 II（5min）- 脱蜡剂Ⅰ（5min）- 脱蜡剂Ⅱ（5min）。
然后用纸巾擦干玻片上残余脱蜡剂，或直接铺平玻片在通风橱内，干燥脱蜡剂。
使用中性树脂封片。
注：masson染色不像HE可以把颜色洗脱再重复步骤，建议使用同一批切片，先摸索染色时间。
Masson三色染色图示
Masson三色染色法
试剂
1.Bouin液
饱和苦味酸75ml，甲醛25ml，冰醋酸5ml.
2.Ⅰ液：1%比布列西猩红水溶液90ml，1%酸性复红水溶液10ml，冰醋酸1ml。
3.Ⅱ液：磷钼酸 2.5g，磷钨酸2.5g，蒸馏水100ml
4.Ⅲ液：苯胺蓝2.5g，冰醋酸2ml，蒸馏水100ml。
5.weigert铁苏木精液
A液
苏木精1g
90%乙醇100ml
B液
30%氯化铁4ml
蒸馏水100ml
纯盐酸1ml
A和B液需要分瓶存放，临用前A液和B液等量混合
6.1%冰醋酸水溶液冰醋酸1ml，蒸馏水100ml。
Masson三色染色步骤
染色步骤
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.Bouin液室温过夜或56℃1h
3.流水冲洗黄色消失
4.蒸馏水洗
5.Weigerrt铁苏木精染核10mins
6.盐酸酒精分化
7.流水冲洗10mins
8.蒸馏水洗
9.Ⅰ液2mins
10.蒸馏水洗
11.Ⅱ液15mins
12.Ⅲ液5mins
13.蒸馏水洗
14.1%冰醋酸浸洗5mins
15.常规脱水、透明、封固
结果
肌肉红色
胶原纤维蓝色
核黑色。
masson 染色肾组织的描述
masson 染色肾组织的描述摘要：一、引言二、Masson染色原理三、Masson染色在肾组织中的应用四、Masson染色的操作步骤五、Masson染色结果的解读六、Masson染色在肾组织研究中的优势与局限七、展望与总结正文：一、引言Masson染色是一种常用的组织化学染色方法，广泛应用于病理学、组织学等领域。
在肾组织研究中，Masson染色具有重要的意义。
本文将对Masson染色在肾组织中的应用进行详细介绍，并探讨其在肾组织研究中的优势与局限。
二、Masson染色原理Masson染色是一种双染色方法，主要通过两种染色剂对组织中的胶原纤维和肌纤维进行染色。
胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色。
这种染色方法能够清晰地显示肾组织的胶原纤维和肌纤维分布，有助于研究肾组织的结构与功能。
三、Masson染色在肾组织中的应用1.肾小球肾炎：Masson染色可以显示肾小球的纤维化程度，有助于判断肾小球肾炎的病理类型和病情严重程度。
2.肾间质纤维化：Masson染色可以清晰地显示肾间质的纤维化程度，有助于评估肾间质纤维化的程度和病变范围。
3.肾血管病变：Masson染色可以显示肾血管的胶原纤维分布，有助于研究肾血管病变的发生机制和病变特点。
4.肾肿瘤：Masson染色可以显示肾肿瘤周围的纤维组织，有助于判断肿瘤的侵袭性和转移风险。
四、Masson染色的操作步骤1.取材：切取新鲜肾组织块，固定于甲醛溶液中。
2.脱水：依次用乙醇、丙酮进行脱水处理。
3.透明：采用透明剂使组织透明。
4.染色：按照Masson染色试剂盒说明书进行操作，染色剂包括Masson 试剂、丽春红试剂等。
5.脱色：用分化液进行脱色处理。
6.冲洗：用清水冲洗组织切片。
7.透明：用透明剂透明处理。
8.封片：滴加封片剂，覆盖玻片，晾干。
五、Masson染色结果的解读1.胶原纤维：呈蓝色，分布于肾小球、肾小管、肾血管等部位。
2.肌纤维：呈红色，主要分布于肾小球和肾小管。
马松三色染色原理masson
备注
1 Bouin氏液是常用的混合固定液
配方： 苦味酸饱和液（1.22％）75ml 制，对皮肤及肌腱有软化作用。
福尔马林25ml
冰醋酸5ml
此液一般在临床用时配
2 苦味酸-酸性品红法
一Weigert氏铁苏木素液
甲液 苏木素
1g
无水酒精（或 95％酒精） 100ml
乙液 29％三氯化铁水溶液
4ml
蒸馏水
二 Van Gieson氏染液
A液:1%酸性品红水溶液 B液：苦味酸饱和水溶液（约1.2%） A、 B两夜分瓶盛放。临用前取A液1份，B液9份混合后使用 操作方法 1 组织固定于10%甲醛液，常规脱水包埋 2 切片脱蜡至水 3 用Weigert氏铁苏木素染液5~10分钟 4 流水稍洗 5 1%盐酸酒精迅速分化 6 流水冲洗数分钟 7 用Van Gieson氏染液染1~2分钟 8 倾去染液，直接用95%酒精分化和脱水（可放入温箱烤干后，直接透明封片） 9 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固 结果：肌纤维，胞质及红细胞黄色，胞核蓝褐色
95ml 用时，取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏 木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染 液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退 色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。
临用前取a液1份b液9份混合后使用操作方法1组织固定于10甲醛液常规脱水包埋2切片脱蜡至水3用weigert氏铁苏木素染液510分钟4流水稍洗51盐酸酒精迅速分化6流水冲洗数分钟7用vangieson氏染液染12分钟8倾去染液直接用95酒精分化和脱水可放入温箱烤干后直接透明封片9无水酒精脱水二甲苯透明中性树胶封固结果肌纤维胞质及红细胞黄色胞核蓝褐色
masson染色实验步骤 概述及解释说明
masson染色实验步骤概述及解释说明1. 引言1.1 概述Masson染色实验是一种常用的组织学技术，用于观察和分析组织样本中胶原纤维、肌纤维以及其他重要成分的分布和形态。
该实验技术通过特定的染料，能够使不同组织成分显色，并进一步提供了对组织结构和功能的深入认识。
Masson 染色方法已广泛应用于肿瘤学、病理学、解剖学等领域。
1.2 文章结构本文将从引言、Masson染色实验步骤、实验结果与解释、应用与意义以及结论等几个方面进行详细阐述。
1.3 目的本文的目的是为读者介绍Masson染色实验的基本步骤，并对其结果进行解释说明。
同时，还将探讨该实验在各个领域中的应用情况以及潜在意义和价值。
这些内容将有助于读者更全面地了解Masson染色技术，并为其在相关研究工作中提供参考和指导。
期待它们有望增加我们对组织样本中胶原纤维·肌肉纤维及其他关键成分的认识时请加填具体2. Masson染色实验步骤：2.1 实验前准备：在进行Masson染色实验之前，需要做好以下准备工作：1. 资料收集：先了解Masson染色的原理和目的，研究相关文献，了解该实验在什么情况下适用以及可以得到哪些信息。
2. 材料购买：准备所需的材料，包括Masson染色试剂盒、显微镜玻片和载玻片等。
3. 设备检查：确保显微镜、组织切片机和染色设备等实验设备正常运行并进行必要的校准或维护。
4. 实验环境准备：为了保证实验结果的准确性，要确保实验室环境清洁、无尘，并控制好温度和湿度。
5. 安全措施：遵循实验室安全规定，佩戴个人防护装备，如手套、眼镜和口罩等。
2.2 组织样本制备：在进行Masson染色实验前，需要对组织样本进行制备处理。
具体步骤如下：1. 组织获取：从动物或人体中采集需要研究的组织样本，可以是器官或组织结构。
2. 组织固定：将采集到的组织样本放入适当的组织固定剂中（如福尔马林），使得组织结构保持完整并防止腐败。
3. 组织包埋：将固定后的组织样本进行包埋处理，通常是将其浸泡在液态石蜡中，然后冷却使其凝固。
MASSON三色染色法
因此：在Masson染色法中，酸 性品红和丽春红染肌纤维，而苯 胺蓝或亮丽染胶原纤维。
【试剂配置】：
（1）Masson复合染色液
酸性品红1g ；丽春红2g；橘黄G 2g；0.25%醋酸300ml
（2）亮绿染色液
亮绿SF 0.1g ，0.2%醋酸100ml。
[染色步骤]：
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水 （2）Masson复合染色液5min （3）0.2%醋酸水溶液稍洗。 （4）5%磷钨酸5-10min （5）0.2%醋酸水溶液浸洗2次 （6）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次 （7）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
不同的组织和细胞成分，它们的空隙大小是 不同的，空隙的大小，决定了组织的渗透性， 如空隙小，组织结构致密，渗透性低；空隙 宽，组结构疏松，渗透性高。 如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料 先后或混合染色，则可发现红细胞被最小分 子的阴离子染料着染。由此说明红细胞对阴 离子染料的渗透性最小。肌纤维与胞质次之， 而胶原纤维具有最大的渗透性。 根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不 同的阴离子染料进行染色，便可把不同组织 成分显示出来。
染料分子的大小，主要由其分子量来体现。 一般来说小分子量者易于穿透结构致密， 渗透性低的组织，而大分子染料只能进入 结构疏松，渗透性高的组织。 常用胶原纤维染色而几种阴离子染料的分 子量由小到大分别是：
Masson三色
Masson三色染色液说明书【产品名称】Masson三色染色液【包装规格】货号：DC0032套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒【预期用途】主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。
【检验原理】Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【主要组成成分】试剂组成主要成分1、Weigert铁苏木素A液苏木素2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁3、酸性乙醇分化液乙醇4、蓝化液碳酸盐5、丽春红品红染色液丽春红、品红6、乙酸溶液乙酸7、磷钼酸溶液磷钼酸8、苯胺蓝染色液苯胺蓝【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】组织片充分固定和脱蜡。
【检验方法】1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋；2、切片常规脱蜡至水；3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗；4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟；5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟；6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗；7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片；8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；9、苯胺蓝染色液复染，倾去玻片上染色液(不用水洗)；10、用乙酸工作液处理切片，至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制)；11、95%乙醇迅速脱水，无水乙醇脱水数次后，二甲苯透明，中性树胶封固。
马松三色染色原理masson1
马松三色染色原理masson.Masson染色(2010-09-02 14:43:20转载标签:杂谈分类:实验日志masson 染色原理Masson三色法(根据Masson,1929试剂配制(一 Weigert氏铁苏木素液(见苦味酸——酸性品红法(二丽春红酸性品红液丽春红(Ponceau 2R 0.7g酸性品红(acid fuchsin 0.3g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml(三 1%磷钼酸水溶液磷钼酸(phosphomolybdic acid 1g蒸馏水加至 100ml(四 2%苯胺蓝液苯胺蓝(aniline blue 2g冰醋酸(glacial acetic acid 2ml蒸馏水加至 100ml(五亮绿液亮绿(light green 1g蒸馏水 99ml冰醋酸(glacial acetic acid 1ml操作方法1. 组织固定于Bouin氏液或Zenker氏液,流水冲洗一晚,常规脱水包埋。
2. 切片脱蜡至水。
如用Zenker氏液固定者,应进行除汞处理,其步骤如下:(1 切片脱蜡后于0.5%碘酒精作用10分钟。
(2 稍水洗(3 5%硫代硫酸钠作用5分钟。
(4 流水冲洗10分钟3. Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。
4. 流水稍洗。
5. 1%盐酸酒精分化。
6. 流水冲洗数分钟。
7. 丽春红酸性品红液染5-10分钟。
8. 蒸馏水稍冲洗。
9. 1%磷钼酸水溶液处理约5分钟。
10.不用水洗,直接用苯胺蓝液或绿液复染5分钟。
11.1%冰醋酸处理1分钟。
12.95%酒精脱水多次。
13.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固结果:胶原纤维虽蓝色(用苯胶蓝液复染或绿色(用亮绿复染。
胞质、肌纤维和红细胞红色。
胞核蓝褐色。
注意事项:1.组织用Bouin氏液或Zenker氏液固定为佳。
如已用10%甲酸液固定,切片可在脱蜡至水后.再放入Bouin氏液作用一晚或置37。
C温箱内1-2小时,然后流水冲洗切片至黄色消失再进行染色。
冰冻切片弹性纤维(ELASTIC)马森(MASSON)染色试剂
冰冻切片弹性纤维（ELASTIC）马森（MASSON）染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途冰冻切片弹性纤维（ELASTIC）马森（MASSON）染色试剂是一种旨在使用标准化的化学脱蜡方法和伟郝夫（Verhoeff）苏木素以及三色染料（trichrome），分析和区分冰冻组织切片中的弹性纤维的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。
广泛用于结缔组织、肌肉组织和纤维蛋白的研究等。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景弹性纤维（elastic fiber），又称为黄色纤维（yellow fiber），是固有结缔组织（Connective tissue proper）细胞外基质的成分之一，由平滑肌细胞和成纤维细胞产生弹力蛋白质（elastin）、原纤维蛋白（fibrillin；FBN）等构成。
弹性纤维具有可伸展性。
存在于皮肤、肺、动脉、静脉、弹力软骨、牙周韧带（periodontal ligament）、脂肪组织中。
弹性纤维缺失导致皮肤松弛症（cutis laxa）、威廉姆斯综合征（Williams Syndrome）等疾病。
基于摩罗利（mallory）首次应用三色系统的方法，马森（masson）进行了改良，在三色复合染料体系中，使用苯胺篮（aniline blue）替代绿篮。
同时使用伟郝夫（Verhoeff）苏木素选择性染色弹性纤维，三色复合染料帮助区别其它包括肌肉、胶原纤维、纤维蛋白（fibrin）等组织成分。
马森方法操作复杂，可以细致区分多种组织成分。
产品内容清理液（Reagent A）200毫升固着液（Reagent B）10毫升韦格液（Reagent C）100毫升祛色液（Reagent D）20毫升岑克液（Reagent E）100毫升范氏液（Reagent F）10毫升比氏液（Reagent G）10毫升酸性液（Reagent H）10毫升染色液（Reagent I）10毫升修正液（Reagent J）10毫升脱水液A（Reagent K）10毫升脱水液B（Reagent L）10毫升透明液（Reagent M）10毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证6月用户自备小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器培养箱或烘箱：用于样品反应孵育微波炉：用于样品反应孵育处理中性树脂：用于切片封片光学显微镜：用于切片染色后观察分析实验步骤一、样品固着处理1．准备好5微米厚的冰冻切片2．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面3．室温下孵育2分钟4．小心移去切片上的清理液（Reagent A）5．小心加上200微升固着液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面6．室温下孵育5分钟7．小心移去切片上的固着液（Reagent B）8．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面9．室温下孵育2分钟10．小心移去切片上的清理液（Reagent A）二、样本染色处理操作一：标准染色1．小心加入1毫升韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面2．放进60℃恒温培养箱孵育60分钟3．小心移去韦格液（Reagent C）4．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟5．小心移去切片上的清理液（Reagent A）6．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面7．室温下孵育5分钟8．小心移去祛色液（Reagent D）9．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟10．小心移去切片上的清理液（Reagent A）11．小心加入1毫升岑克液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面12．放进60℃恒温培养箱孵育60分钟13．小心移去岑克液（Reagent E）14．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟15．小心移去切片上的清理液（Reagent A）16．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面17．室温下孵育30分钟18．小心移去范氏液（Reagent F）19．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟20．小心移去切片上的清理液（Reagent A）21．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面22．室温下孵育5分钟23．小心移去祛色液（Reagent D）24．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟25．小心移去切片上的清理液（Reagent A）26．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面27．室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）28．小心移去比氏液（Reagent G）29．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面30．小心移去切片上的清理液（Reagent A）31．重复实验步骤29至30二次32．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以孵育15分钟，增强染色效果）33．小心移去切片上的酸性液（Reagent H）34．小心加上200微升染色液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面35．室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）36．小心移去切片上的染色液（Reagent I）37．小心加上200微升修正液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面38．室温下孵育2分钟39．小心移去切片上的修正液（Reagent J）40．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟41．小心移去切片上的清理液（Reagent A）42．（选择步骤）小心加上200微升脱水液A（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作）43．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液A（Reagent K）44．（选择步骤）小心加上200微升脱水液B（Reagent L）在切片上，铺满整个切片样品表面45．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液B（Reagent L）46．（选择步骤）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，铺满整个切片样品表面47．（选择步骤）小心移去切片上的透明液（Reagent M）48．放上盖玻片或封片（中性树脂）49．即刻在一般光学显微镜下观察：弹性纤维――呈现黑色细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色角蛋白――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色操作二：热处理染色1．准备3个50毫升烧杯或小型染色缸，分别加入50毫升清理液（Reagent A）、韦格液（Reagent C）和岑克液（Reagent E）2．小心放进上述固着处理的切片到50毫升韦格液（Reagent C）小型染色缸里3．放进微波炉（600瓦）加热45秒4．小心移去切片上的韦格液（Reagent C）5．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟6．小心移去切片上的清理液（Reagent A）7．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面8．室温下孵育5分钟9．小心移去祛色液（Reagent D）10．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟11．小心移去切片上的清理液（Reagent A）12．小心将切片置入50毫升岑克液（Reagent E）小型染色缸里13．放进微波炉（600瓦）加热60秒14．小心移去岑克液（Reagent E）15．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟16．小心移去切片上的清理液（Reagent A）17．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面18．室温下孵育30分钟19．小心移去范氏液（Reagent F）20．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟21．小心移去切片上的清理液（Reagent A）22．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面23．室温下孵育5分钟24．小心移去祛色液（Reagent D）25．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟26．小心移去切片上的清理液（Reagent A）27．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面28．室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）29．小心移去比氏液（Reagent G）30．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面31．小心移去切片上的清理液（Reagent A）32．重复实验步骤30至31二次33．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面34．室温下孵育10分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）35．小心移去切片上的酸性液（Reagent H）36．小心加上200微升染色液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面37．室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）38．小心移去切片上的染色液（Reagent I）39．小心加上200微升修正液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面40．室温下孵育1分钟41．小心移去切片上的修正液（Reagent J）42．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟43．小心移去切片上的清理液（Reagent A）44．（选择步骤）小心加上200微升脱水液A（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作）45．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液A（Reagent K）46．（选择步骤）小心加上200微升脱水液B（Reagent L）在切片上，铺满整个切片样品表面47．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液B（Reagent L）48．（选择步骤）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，铺满整个切片样品表面49．（选择步骤）小心移去切片上的透明液（Reagent M）50．放上盖玻片或封片（中性树脂）51．即刻在一般光学显微镜下观察：弹性纤维――呈现黑色细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色角蛋白――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色注意事项1．本产品为50次操作2．操作时，须戴手套3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全4．建议使用玻璃染色缸5．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干6．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面7．整个操作，在避光状态下进行8．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察9．样品染色后保存，避免光照10．本公司提供系列特定组织染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定显色清晰。
Masson染色
Masson染色Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一。
试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml。
将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。
Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。
0.2%冰醋酸水溶液：冰醋酸0.2 ml，蒸馏水100 ml。
1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。
苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98 ml，冰醋酸2 ml。
1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml。
Masson三色法步骤1、石蜡切片脱蜡至水。
2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。
3、依次自来水和蒸馏水洗。
4、用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。
5、充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。
6、蒸馏水洗。
7、用Masson 丽春红酸性复红液5-10min。
8、以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
9、1%磷钼酸水溶液分化3-5min。
10、不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min。
11、以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。
12、95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。
结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色)，胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。
体会与说明：1、控制好染色步骤。
2、组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。
3、0.2%冰醋酸水溶液洗，可使色调清晰鲜艳。
4、磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。
masson染色阅读方法
masson染色阅读方法
马松染色解读法
马松染色是一种组织学染色技术，用于区分结缔组织中的不同成分。
该技术通过利用胶原蛋白和肌纤维的高亲和力，使用酸性染料和碱性染料的组合对组织切片进行染色。
具体步骤：
1. 组织固定：将组织样品置于甲醛或福尔马林等固定液中，以保存组织结构。
2. 石蜡包埋：固定后的组织脱水并浸入石蜡中，形成石蜡包埋块，以便进行切片。
3. 切片：使用微切机将石蜡包埋块切成薄切片（通常为 4-6 微米厚）。
4. 脱蜡：将切片放置在溶剂（例如二甲苯）中，以去除石蜡。
5. 水化：将脱蜡切片逐步浸入一系列乙醇溶液（从 100% 到70%）中，以使切片复水。
6. 核染色：使用苏木精（一种碱性染料）对切片进行染色，以突出细胞核。
7. 酸性福红染色：使用酸性福红（一种酸性染料）对切片进行染色，以染色胶原蛋白和肌纤维。
8. 脱水：将染色切片再次逐步浸入一系列乙醇溶液（从 70% 到 100%）中，以脱水。
9. 透明：将脱水切片置于二甲苯等透明剂中，使其透明。
10. 安装：将透明切片安装在载玻片上，使用永久安装剂（例如加拿大树胶）覆盖。
解读结果：
马松染色后，胶原蛋白和肌纤维呈现红色，而细胞核呈现蓝色或紫色：
胶原蛋白：红色或粉红色
肌纤维：红色
细胞核：蓝色或紫色
马松染色可用于评估结缔组织的分布、结构和量化。
它广泛应用于病理学、组织学和组织工程等领域。
HE Masson实验步骤及分析方法
HE染色1.烤片机60-70℃，烤片20min2.脱蜡至水。
二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸5min，tap water or dH2O流水冲洗，擦净玻片。
3.苏木素滴染5-10min，tap water or dH2O流水冲洗。
4.浸入95%酒精30-60s后取出勿擦，滴染伊红3-5min。
5.脱水。
75%酒精-90%酒精-95%酒精-无水酒精-无水酒精依次涮一涮，最后一个无水酒精3min。
二甲苯I、II每缸5min6.封片。
待残余二甲苯挥发，中性树胶封片。
分析方法：1.拍照。
40×物镜下选取含有圆形或近似圆形细胞的视野拍照，拍照张数依组织大小和HE染色结果而定，但应确保含有足够的细胞数。
2.定标。
在同一显微镜下拍测微尺，算得40×物镜下90 pixels=10um。
打开Image J—Open—Analyse—Set Scale—Set Measurement—Freehand selections—圈目标细胞—Analyse—Measure—Analyse—Label—保存带标记的图片。
3.测量。
选择含有细胞核的、圆形或近似圆形的细胞，用Image J测量细胞大小。
每块组织至少选取60个细胞。
最后求Area的平均值。
Masson染色1.烤片机60-70℃，烤片20min2.脱蜡至水。
二甲苯I、II、III每缸10min，梯度酒精（无水、无水、90%、80%）每缸5min，tap water or dH2O流水冲洗。
3.Bouin液固定。
用事先60℃预热15min的Bouin液固定1h，dH2O冲洗5min。
4.含铁苏木素A、B各20ml（等体积混合），5min，dH2O冲洗5min，再用去离子水冲洗数次。
5.滴染碱性品红5min，去离子水冲洗数次。
6.Mix磷钨酸10ml、磷钼酸10ml、去离子水20ml，5min。
切勿冲洗。
masson三色法染色
Masson复合染色液的配制：酸性复红1 g丽春红2 g橘黄G 2 g0.25%醋酸300 ml混匀，过滤后备用。
亮绿染色液的配制：亮绿干粉0.1 g0.2%醋酸100 ml充分混匀，过滤后备用。
Masson染色（1）常规脱蜡至水：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→100%酒精Ⅰ5 min→100%酒精Ⅱ5 min→95％酒精3 min→90％酒精3 min→80％酒精3 min→70％酒精3 min→蒸馏水1 min（2）Masson染色：Masson复合液5 min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次→1%磷钨酸6 min→自来水过洗1次→亮绿15min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次（3）常规脱水透明：70%酒精30 s→80％酒精30 s→90%酒精30 s→95％酒精30 s→100%酒精Ⅰ5 min →100%酒精Ⅱ5 min→二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性树胶封片至于操作要点的话觉得就是在masson复合液和亮绿的染色时间得摸索一下，还有就是70，80酒精时间尽量短，脱色很厉害，不过要是实在脱得严重的话，还可以倒回来重新染色附图一张，心肌梗死masson染色，肌纤维红色，胶原绿色，红细胞橘黄色高倍镜下•脱水4%多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋切片；切片脱蜡至水后入重铬酸钾—醋酸液或3%升汞处理1小时；水洗后染Regaud氏苏木素10分钟；自来水充分洗后，用2%盐酸酒精分化；流水冲洗到蓝黑色；1%丽春红酸性品红液中染5分钟；蒸馏水洗；1%磷钼酸水溶液媒染5分钟；不经水洗入2%淡绿液3分钟；1%醋酸液分色1分钟；脱水、透明、中性树胶封固。
结果：细胞核染黑蓝色，胶原纤维呈绿色，神经胶质纤维、肌纤维、红细胞呈红色。
病理学技术特殊染色Masson三色染色法
病理学技术特殊染色Masson三色染色法
试剂：
①Regaud苏木精：苏木精1克溶于蒸馏水80毫升，加温溶解，冷却；加95%酒精和甘油各10毫升，数日后使用
②丽春红G酸性品红液：丽春红G 0.7克，酸性品红0.3克，蒸馏水 99毫升，冰醋酸1毫升
③0.2%醋酸水溶液：冰醋酸1毫升，蒸馏水200毫升
④1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1克，蒸馏水100毫升
⑤蓝水溶液：苯胺蓝2克，蒸馏水98毫升，冰醋酸2毫升
⑥1%亮绿水溶液：亮绿1克，蒸馏水100毫升，冰醋酸1毫升
方法：
⑴石蜡切片脱蜡至水
⑵含汞固定者须脱汞去碘
⑶自来水洗，蒸馏水洗
⑷Regaud苏木精或Weigert苏木精染细胞核5~10分钟，充分水洗
⑸过染用盐酸酒精分色，蒸馏水洗
⑹丽春红G酸性品红液染色5~10分钟
⑺0.2%醋酸水溶液分色短时
⑻1%磷钼酸水溶液1~3分钟
⑼直接用苯胺蓝或亮绿液染5分钟
⑽0.2%醋酸水溶液洗短时
⑾95%酒精及无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片
结果：
胶原纤维、黏液、软骨蓝色或绿色（亮绿染色）；
细胞质、肌肉、纤维素、神经胶质红色；
细胞核蓝黑色。
masson染色
4.9石蜡切片检查放入装有10％中性缓冲福尔马林的小瓶，入4℃冰箱固定（<24 h），再经过脱水、浸蜡和包埋等步骤，制成石蜡块，连续4μm切片制成石蜡切片，进行如下检查：4.9.1 HE染色4.9.1.1试剂配制①10％中性缓冲福尔马林溶液的配制：40％甲醛原液50 mL，加入0.01 mol/LpH 7.4的PBS 450 mL中。
0.01 mol/L pH 7.4的PBS配置：NaCI 8.0 g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，KCI 0.2 g，加蒸馏水定容至1000 mL，高压消毒灭菌20 min。
②苏木素液：苏木素2.5 g，纯乙醇25 mL，钾明矾2.5 g，氧化汞1.25 g，冰乙酸20 mL，蒸馏水500 mL。
配制方法：先将苏木素溶于乙醇中（稍加热），将预先已溶有明矾的蒸馏水加入苏木素乙醇液中，使溶液尽快沸腾后，将火焰熄灭，慢慢加入氧化汞，防止溶液溅出，再煮沸2 min。
此时将烧瓶立即浸入冷水中，当染液冷却后，加入醋酸，室温保存，用前过滤。
③伊红Y染色液：伊红Y 0.5-1.0 g，蒸馏水75 mL，95％乙醇25 mL，冰乙酸1-2滴。
配制方法：先取少许蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红研碎，再加入全部蒸馏水，溶解后加入乙醇。
④盐酸乙醇分化液：盐酸0.5 mL，75％乙醇100 mL。
⑤其它：二甲苯，梯度浓度乙醇，中性树脂等。
4.9.1.2操作步骤：①捞片后在58-60℃烘烤15 min。
②切片脱蜡至水：二甲苯Ⅰ10min、二甲苯Ⅱ5min、无水乙醇Ⅰ2min、无水乙醇Ⅱ2min、95％乙醇1 min、80％乙醇1 min、75％乙醇1 min、蒸馏水洗2 min。
③苏木素染色5 min，自来水冲洗。
④盐酸乙醇分化3 s（提插2下），自来水冲洗，温水（约50℃）5 min。
⑤置伊红液2 min，切片进入蒸馏水中速洗一下。
⑥常规脱水，透明，封片：95％乙醇Ⅰ1min、95％乙醇Ⅱ1min、100％乙醇Ⅰ1min、100％乙醇Ⅱ1min、二甲苯石炭酸（3：1）1 min、二甲苯Ⅰ1min、二甲苯Ⅱ1min、中性树脂封固。
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Masson三色染色液说明书
【产品名称】
Masson三色染色液
【包装规格】
货号：DC0032
套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒
【预期用途】
主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。
【检验原理】
Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。
该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。
【主要组成成分】
试剂组成主要成分
1、Weigert铁苏木素A液苏木素
2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁
3、酸性乙醇分化液乙醇
4、蓝化液
碳酸盐
5、丽春红品红染色液丽春红、品红
6、乙酸溶液乙酸
7、磷钼酸溶液磷钼酸
苯胺蓝
8、苯胺蓝染色液
【储存条件及有效期】
5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】
组织片充分固定和脱蜡。
【检验方法】
1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋；
2、切片常规脱蜡至水；
3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗；
4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟；
5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟；
6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗；
7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片；
8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；
9、苯胺蓝染色液复染，倾去玻片上染色液(不用水洗)；
10、用乙酸工作液处理切片，至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制)；
11、95%乙醇迅速脱水，无水乙醇脱水数次后，二甲苯透明，中性树胶封固。
【检验结果的解释】
胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，肌纤维、纤维素和红细胞呈红色，细胞核呈蓝黑色。
【检验方法的局限性】
仅限于病理组织内容物染色观察。
【注意事项】
1、酸性乙醇分化液分化时间应根据切片厚薄、组织的类别和新旧而定。
2、如蓝化液使用量较大，可自行配制Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂水溶液予以替代。
3、磷钼酸处理时最好在镜下控制，分化到胶原纤维呈淡红色、纤维呈红色即可，分化时间根据染色深浅而定。
4、部分组织脱水时容易造成脱色过度，应注意肉眼控制。
5、本产品仅用于体外诊断，应由专业人士使用及进行结果的判读。
6、使用前应详细阅读说明书，并做好个人卫生防护，在有效期内使用，生产日期、生产批号和失效日期见包装。
7、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
【基本信息】
备案人/生产企业名称：安徽雷根生物技术有限公司
住所：淮北凤凰山经济开发区凤冠路三期标准化厂房三号厂房。