哺乳动物细胞培养基的基本要求
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方
细胞培养的最佳生长条件和培养基配方细胞培养是一种很重要的实验技术，它可以帮助我们了解和研究细胞的生命活动过程。
在进行细胞培养之前，我们需要明确和了解细胞培养的最佳生长条件和培养基配方。
这些因素直接影响着细胞的生长和繁殖，因此选择合适的生长条件和培养基配方对于获得高质量的细胞培养是至关重要的。
细胞培养的最佳生长条件受到多个因素的影响，其中最重要的是温度、湿度和二氧化碳浓度。
对于大多数哺乳动物细胞而言，理想的生长温度往往在37摄氏度左右。
较低的温度会减缓细胞代谢活动，而过高的温度则会导致细胞脱水、代谢异常甚至死亡。
此外，细胞培养的湿度也非常重要。
过低的湿度会导致细胞脱水，而过高的湿度则可能引发细菌或霉菌的生长，对细胞培养产生不利影响。
通常情况下，细胞培养时会在培养器内加入一定浓度的二氧化碳，以维持细胞培养的最佳PH值。
大多数情况下，使用5% CO2浓度可以满足细胞的生长需求。
除了生长条件外，培养基配方也是细胞培养中不可或缺的因素。
通常情况下，培养基可以分为基础培养基和补充物两部分。
基础培养基提供了细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、无机盐和维生素等。
常用的培养基包括DMEM （Dulbecco's Modified Eagle Medium）、RPMI-1640和MEM (Minimum Essential Medium)等。
这些培养基在组成和配方上略有区别，根据细胞的类型和需求，选择合适的基础培养基是十分重要的。
除了基础培养基外，补充物也是细胞培养中必不可少的。
补充物可以提供特定的生长因子、激素、细胞黏附因子和补充物等，以满足不同细胞的特殊需求。
常见的补充物有胎牛血清、人血清、胰岛素、转铁蛋白和脯氨酸等。
胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是一种广泛使用的培养基补充物，它提供了丰富的生长因子、激素和营养物质，可以促进细胞的快速生长和繁殖。
然而，由于FBS来源和成分的不确定性，一些研究也开始使用人血清作为替代品，以减少动物血清对实验结果的可能影响。
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
dmem培养基说明书
dmem培养基说明书引言：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）是一种常用的细胞培养基，被广泛应用于生物医学研究和药物开发领域。
它是由美国科学家Eagle于1959年根据鹰氏基础培养基改良而成，具有高度灵活性和广泛的使用范围。
本篇文章将介绍DMEM培养基的组成成分、适用细胞类型以及培养条件等相关内容。
一、组成成分DMEM培养基主要由以下成分组成：1. 高糖：DMEM含有较高浓度的葡萄糖（通常为4500 mg/L），以提供细胞所需的能量。
2. 氨基酸：DMEM中含有完整的氨基酸，满足细胞在培养过程中的蛋白质合成需求。
3. 维生素：DMEM中包含维生素，有助于促进细胞的正常生长和代谢。
4. 胎牛血清：DMEM中通常添加10-15%的胎牛血清，提供生长因子和其他必需的营养物质。
5. 缓冲液：DMEM中含有缓冲液，可以维持培养基的稳定pH值。
二、适用细胞类型DMEM培养基适用于多种不同类型的细胞，包括：1. 哺乳动物细胞：DMEM培养基适用于多种哺乳动物细胞的培养，如人类肺细胞、小鼠胚胎成纤维细胞等。
2. 癌细胞株：DMEM培养基也广泛应用于癌细胞的培养。
它提供了细胞生长所需的基本营养物质，使癌细胞在体外中保持其生长和繁殖的能力。
3. 神经细胞：DMEM培养基还可用于神经细胞的培养。
通过添加适当的神经生长因子，可以促进神经细胞的生长和分化。
三、培养条件1. 温度：DMEM培养基需要在37℃的恒温箱中培养，以模拟体内温度条件。
2. 湿度：细胞在培养过程中需要适当的湿度保持，可以通过在培养箱中添加水盘或湿化器来实现。
3. CO2浓度：大多数细胞在体外培养时需要适当的CO2浓度来维持酸碱平衡。
DMEM培养基通常在5% CO2的气氛下培养。
4. 培养时间：培养时间根据不同的细胞类型和实验设计而定。
有些细胞需要频繁的传代，而有些细胞可以长时间稳定培养。
结论：DMEM培养基是一种优质的细胞培养基，具有成熟的配方和广泛的适用范围。
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
动物细胞培养管理制度
动物细胞培养管理制度一、培养基的准备和管理1.1 培养基的准备1.1.1 培养基成分的准备应严格按照配方进行，精确称量各种成分，尽量避免因操作不当或器皿受到污染导致成分比例出错。
1.1.2 培养基成分的保存应在密封、阴凉、干燥、无异味的条件下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.1.3 开启新瓶或新袋的培养基前，应先用无菌液体将外包装表面消毒，避免外包装受到污染，然后在洁净无菌的操作台上打开瓶盖，尽量避免让空气中的微生物进入培养基内。
1.2 培养基的管理1.2.1 包装好的培养基应有清晰的标签，标注成分、配制日期、有效期等信息，并存放于适当的温度下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.2.2 一旦发现培养基外观发生变化，如颜色、透明度等明显异常，应停止使用，并将问题培养基送至实验室进行分析检测。
1.2.3 使用的培养基应记录每次使用的日期、批号、制备者等信息，以便后期的追踪和管理。
二、细胞的培养和传代2.1 细胞的培养2.1.1 在细胞培养前，应先对工作台、培养箱等培养环境进行必要的消毒处理，保证操作环境的无菌。
2.1.2 培养细胞前，应仔细查看细胞培养饲养瓶或培养皿，检查是否有异物或污染，如有，应立即处理或更换合适的饲养瓶或培养皿。
2.1.3 细胞培养进程中，应定期检查细胞的状态，如细胞的形态、密度、生长速度等，一旦发现异常应及时进行处理。
2.2 细胞的传代2.2.1 传代前，应先对饲养瓶或培养皿中的细胞进行观察和计数，掌握细胞的状态和数量，以确定需要传代的细胞数目。
2.2.2 传代操作时，应注意操作的轻柔、迅速和无菌，避免对细胞造成机械性损伤或污染。
2.2.3 传代后，应对培养皿或饲养瓶进行标记，记录传代的日期、次数等信息，以便后期的追踪和管理。
三、细胞的冻存与解冻3.1 细胞的冻存3.1.1 冻存前应检查细胞的状态、数量和培养基的成分是否符合冻存要求，然后进行冻存液的配置和标记，避免出错。
3.1.2 冻存过程中，应确保细胞在冻存容器内的均匀分布，避免出现细胞团或细胞沉积现象，影响细胞的存活率。
哺乳动物细胞培养技术
哺乳动物细胞培养技术一、前言哺乳动物细胞培养技术是生物学研究中的重要分支，它可以为生物医学研究提供大量的细胞材料，从而促进了细胞生物学、免疫学、药理学等领域的发展。
本文将介绍哺乳动物细胞培养技术，包括培养基的配制、无菌操作、细胞分离与传代、冷冻保存和复苏等方面。
二、培养基的配制1. 基础培养基哺乳动物细胞培养最常用的基础培养基是DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）和RPMI-1640（Roswell Park Memorial Institute 1640），这两种培养基都是以含有必需氨基酸和维生素的高糖量液体为基础，添加适当浓度的人血清或牛血清作为营养来源。
2. 补充因子除了上述基础成分外，还需要添加多种补充因子，如抗生素（青霉素和链霉素）、重组人胰岛素、转铁蛋白等。
抗生素可以有效地抑制细菌和真菌的生长，保证培养物的无菌性；胰岛素是细胞增殖和分化所必需的营养物质，可以提高培养细胞的存活率和增殖能力；转铁蛋白则可以促进铁离子的转运，保证细胞正常代谢。
3. pH值调节pH值对于细胞生长和代谢具有重要影响，因此需要在培养基中添加缓冲液来调节pH值。
最常用的缓冲液是HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸），其pH范围为7.0~8.0。
三、无菌操作无菌操作是哺乳动物细胞培养过程中最为关键的环节之一。
以下是无菌操作需要注意的几个方面：1. 实验室环境实验室环境应该保持清洁、干燥、通风，并且应该经过消毒处理。
实验人员应该穿戴干净、整洁、合适的实验服，并戴上口罩和手套。
2. 器皿消毒所有用于培养细胞的器皿都需要在高压蒸汽灭菌器中进行消毒处理，以杀死其中的所有微生物。
3. 操作流程无菌操作应该按照一定的操作流程进行，包括洗手、穿戴实验服、准备实验器具和培养基、开展操作等步骤。
在操作过程中要注意不要碰触到非无菌区域和非无菌器具。
四、细胞分离与传代1. 细胞分离细胞分离是指将原始细胞群体中的单个细胞分离出来，使其成为一个独立的单元。
动物细胞培养的基本条件
动物细胞培养的基本条件
1. 培养基，动物细胞培养需要使用含有营养物质的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640等。
培养基中通常含有氨基酸、糖类、维生素、无机盐、生长因子和血清等成分，以支持细胞的生长和增殖。
2. 温度，动物细胞通常在37摄氏度的温度下培养，这是因为这个温度符合动物体内的生理条件，有利于细胞的正常生长和代谢活动。
3. pH值，培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，这个范围有利于细胞的生长和代谢，维持细胞内外环境的稳定性。
4. 湿度，细胞培养需要在恒定的湿度下进行，通常采用5%二氧化碳培养箱来维持适当的湿度和CO2浓度，以维持培养环境的稳定。
5. 无菌条件，动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞受到外源微生物的污染，通常在无菌工作台或生物安全柜中进行操作。
6. 细胞密度，在培养过程中，需要控制细胞的密度，避免细胞
过度增殖或过度稀释，通常通过离心和重新悬浮来调节细胞密度。
总的来说，动物细胞培养的基本条件包括适当的培养基、温度、pH值、湿度、无菌条件和细胞密度等因素，这些条件的合理控制对
于维持细胞的生长和稳定的培养环境至关重要。
通过严格控制这些
基本条件，可以有效地进行动物细胞培养实验，为细胞生物学和生
物医学研究提供可靠的实验基础。
不同细胞对培养基的组分的要求
不同细胞对培养基的组分的要求
不同细胞对培养基的组分有不同的要求，这取决于细胞类型和生长特性。
以下是一些常见细胞类型对培养基组分的要求的例子：
1. 细菌细胞：
-碳源：细菌通常需要碳源来进行能量和生物合成。
-氮源：氨基酸或无机氮化合物用于蛋白质合成和细胞增殖。
-矿物质和微量元素：提供必需的矿物质和微量元素，例如镁、铁、钙等。
2. 哺乳动物细胞：
-基本营养物质：哺乳动物细胞通常需要含有葡萄糖、氨基酸、维生素和矿物质的培养基。
-生长因子和激素：某些细胞类型需要额外添加生长因子（如表皮生长因子、胰岛素样生长因子等）和激素来促进细胞增殖和特定功能的表达。
-血清或替代物：大多数哺乳动物细胞需要血清中的成分或替代物来提供必要的生长因子、蛋白质
和激素等。
3. 昆虫细胞：
-蛋白酶抑制剂：昆虫细胞对蛋白酶敏感，因此培养基中常添加蛋白酶抑制剂以防止细胞损伤。
-脂质和类固醇：某些昆虫细胞类型需要额外的脂质和类固醇来满足其生长和代谢需求。
4. 植物细胞：
-碳源：植物细胞通常使用蔗糖、葡萄糖或其他碳源作为能源和碳供应。
-植物生长调节剂：培养植物细胞时，通常需要添加植物生长调节剂，如植物激素（如生长素、激动素）和维生素等。
这只是一些示例，不同细胞类型有不同的要求。
因此，在培养不同类型的细胞时，需要根据其特定需求和生理特性来优化培养基的配方。
细胞培养基的技术要求
细胞培养基的技术要求细胞培养基是一种提供细胞生长和繁殖所需的营养物质和环境条件的培养液。
它在细胞培养和细胞实验中起着至关重要的作用。
为了保证细胞培养基的质量和有效性，有一些技术要求需要遵守。
细胞培养基的配制需要严格按照配方比例进行。
不同类型的细胞需要不同的培养基配方，因此需要根据细胞类型的要求来选择合适的培养基。
培养基的配制过程中应注意避免外源性污染，如细菌、真菌和病毒等。
同时，培养基的配制过程中应避免使用含有抗生素的培养基，以免影响细胞生长和实验结果。
细胞培养基的pH值需要控制在适宜范围内。
pH值的过高或过低都会对细胞的生长和繁殖产生不利影响。
一般来说，细胞培养基的pH 值应在7.2-7.4之间。
为了保持细胞培养基的稳定性，可以将培养基放置在含有二氧化碳的培养箱中，以维持适宜的pH值。
第三，细胞培养基的温度需要适当控制。
细胞的生长和繁殖对温度非常敏感，一般来说，细胞培养基的温度应保持在37摄氏度。
为了保持培养基的稳定温度，可以使用恒温箱或培养箱来控制温度。
此外，还可以在细胞培养过程中定期检测培养基的温度，确保温度的稳定性。
细胞培养基的贮存也是关键的一步。
细胞培养基应保存在低温下，一般在-20摄氏度或更低的温度下保存。
同时，细胞培养基的密封性也非常重要，以避免污染和营养物质的损失。
在使用细胞培养基前，需要先检查其外观和质地，确保没有异常情况发生。
细胞培养基的使用过程中需要注意无菌操作。
细胞培养基应在无菌条件下进行配制和使用，以避免细胞培养基被细菌、真菌等微生物污染。
在使用细胞培养基的过程中，操作人员应佩戴合适的防护设备，如实验手套、口罩和实验服等，以减少外源性污染的可能性。
细胞培养基的技术要求可以总结为以下几点：严格按照配方比例配制、控制pH值在适宜范围内、保持温度稳定、妥善贮存以及无菌操作。
遵守这些技术要求可以保证细胞培养基的质量和有效性，为细胞培养和细胞实验提供良好的条件。
在细胞培养研究中，细胞培养基的选择和使用是至关重要的，只有掌握了这些技术要求，才能更好地进行细胞培养和研究工作。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
哺乳动物细胞培养基的基本要求
哺乳动物细胞培养基的基本要求(一)营养成分细胞生长繁殖所需要的营养成分包括氨基酸、单糖、维生素、无机离子和H2O。
氨基酸和维生素的添加量是有限的，某些氨基酸和维生素的添加量往往是凭经验的，通常与某个细胞系的建立过程有密切关系。
例如，Fisher’s培养基含有高浓度的叶酸，这是因为L5178Y对叶酸的依赖性，在这种培养基的发展过程中，叶酸就被沿用下来了。
大多数细胞的培养基都含有葡萄糖作为能量来源，葡萄糖的主要代谢途径是通过无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸可转化为乳酸盐或乙酰乙酸盐，然后进入柠檬酸循环被氧化成CO2和H20。
培养基中乳酸的累积在培养胚胎及转化细胞时尤为明显，提示体外培养时柠檬酸循环不能像多细胞机体内那样完全进行。
有证据表明，碳源的大部分来自谷氨酰胺而非葡萄糖。
这也解释了为何某些培养的细胞对谷氨酰胺和谷氨酸盐的需求异常高。
(二)促生长因子及激素促生长因子及激素在商品干粉培养基或液体培养基中一般都不添加，含血清培养液的来源正是血清本身。
在无血清培养基中+经常需要添加这些组分。
自然凝集的血清，与利用物理方法如离心法去除细胞得到的血浆相比，对于刺激细胞的增殖，效果更好。
原因是，自然凝集的血清保留了更多的生长因子，如血小板生长因子。
(三)渗透压和pH培养基中基础平衡盐溶液组成的盐类是维持渗透压平衡的主要化合物，这些盐类主要包括Na一、K+、Mg2+、Cl一、SO42-、Ca2+、POi 和HCO3-等。
大部分培养基的盐浓度是依据Eargle’s和Hank’s平衡盐溶液而来，Eargle’s平衡盐溶液的Hank，s浓度高，适合5％CO2的气体环境。
Hank’s平衡盐溶液的HCO3-浓度低，适用于空气环境。
5％CO2的气体环境中，培养液的pH稳定及调节依赖于溶解在培养液的CO2气体和组成培养基基础平衡盐溶液的缓冲作用。
酚红是常用的pH指示剂，一般培养液中都有添加，pH7．4呈红色，pH7．O 变橙色，pH6．5变黄色，而pH7．6呈红色中略带蓝色．pH7．8呈紫色。
动物细胞培养所需的基本条件
血清培养基的优点：
含有丰富的利于细胞生长的成分
血清培养基缺点：
（1）动物血清来源有限，价格高，不宜大量使用
（2）动物血清成分复杂且成分不稳定，使生长过程不易检测控制。
（3）虽然血清对细胞生长有效，但会对后期培养产物的分离、提纯以及检测造成一定困难。
血清的生物功能
1.提供基本营养物质：氨基酸、
维生素、无机物、脂类物质、
养。
❖
⑴氨基酸：培养基提供必需的12种氨基酸
⑵维生素：B族维生素
⑶糖类：大多以葡萄糖为碳源
⑷无机盐
⑸其它成分：嘌呤，嘧啶以及抗氧化剂
⒊无血清培养基
①提高重复性
②减少微生物污染
③供应充足稳定
④产品易纯化
⑤避免血清因素对细胞的毒性
⑥减少血清中蛋白对生物测定的干扰
❖
无血清培养基(Serum free medium,SFM)是不含血清的动物细胞培养基，由基础培养基和添加组分组成。试图
核酸衍生物等，是细胞生长
必须的物质。
2.提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺
皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇
激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如
成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板
生长因子等。
3.提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的
低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、
以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细
对于大多数动物组织而言，在植块培养1～3天 后，即有细胞从植块向外迁移，随着培养时间 的推移，迁出的
细胞会越来越多，而且迁出的细胞不断分裂繁殖，逐渐涨满支持物表面
组织块培养法
❖
使用组织块培养法，外植块能在一定限度内保持其原有的组织结构，有利于适应外界培养环境，操作简便，是
动物细胞的培养条件和培养基
4～0.7kPa
动物细胞的培养条件和培养基
动物细胞的培养条件和培养基
二、动物细胞的培养 基的种类和组成
分3类: ⒈天然培养基 ⒉合成培养基 ⒊无血清培养基
动物细胞的培养条件和培养基
动物细胞的培养条件和培养基
⑶溶氧 ⑷搅拌 ⑸进出液流量 ⑹其它
动物细胞的培养条件和培养基
第七节 动物细胞制药的前 景与展望
一、提高产量降低成本和改进质 量方面的研究
二、转基因动物的研究 三、组织工程的研究
动物细胞的培养条件和培养基
一、提高产量、降低成本和改 进质量方面的研究
为了提高产量,要提高细胞表达水平。 为降低成本，须改进培养基配方。 为改进产品质量，关键是糖基化质量。 改进工艺，生产设备等
⒉气升式生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
⒊中空纤维式生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
平床式中空纤维式生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
⒋透析袋或膜式生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
Hale Waihona Puke ⒌固定床或流化床式生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
CellGen plus生物反应器
动物细胞的培养条件和培养基
第五节 动物细胞培养方 法和操作方式
一、动物细胞大规模培养的方法 依细胞种类:
原代培养、 传代培养 依培养基: 液体培养、 固体培养
动物细胞的培养条件和培养基
依培养器和方式: 静止培养、旋转培养、 搅拌培养、微载体培养、 中空纤维培养、 固定床或流化床培养
哺乳动物细胞培养条件
哺乳动物细胞培养条件1.“温度得合适呀，这就像人得待在舒服的环境里一样，得知。
比如小敏培养小鼠细胞，温度设高了，那些细胞就像在蒸桑拿，没多久就死翘翘啦。
要是温度不对，细胞能好好活吗？哼。
”2.“培养基得选对，这就像给孩子选合适的奶粉，得知。
比如小宇用了不适合的培养基培养猪细胞，那些细胞饿得慌呢，都不长个啦。
培养基不合适，细胞能茁壮成长吗？不可能呀。
”3.“二氧化碳浓度有要求呢，这就像花儿需要合适的空气成分，得知。
比如小萱培养的人类细胞，二氧化碳浓度不对，细胞就像喘不过气来的人，状态差得很。
要是不控制好，细胞能正常代谢吗？悬乎着呢。
”4.“得有合适的渗透压，这就像游泳得在合适深度的水里，得知。
比如小辉培养的牛细胞，渗透压高了，细胞里的水都被抽干啦，像瘪了的气球。
渗透压不合适，细胞能完好无损吗？肯定不行啦。
”5.“pH 值要稳定，这就像人的情绪得平稳，得知。
比如小琳培养的猫细胞，pH 值老变，细胞就像在坐过山车，一会儿舒服一会儿难受，最后都生病了。
pH 值不稳定，细胞能健康吗？够呛哦。
”6.“无菌环境是必须的，这就像生活的地方不能有病菌一样，得知。
比如小俊在有菌的环境里培养猴细胞，那些细菌就像小怪兽，把细胞都吃光啦。
要是有菌，细胞能安全吗？做梦呢。
”7.“营养物质得充足，这就像人吃饭得吃饱，得知。
比如小琪培养的兔细胞，营养不够，细胞就像没吃饱饭的小孩，有气无力的。
营养不足，细胞能有活力吗？没门儿。
”8.“细胞密度得合适，这就像住房子得有合适的人数，得知。
比如小涛培养的狗细胞，密度太大，细胞们挤得难受，就像在拥挤的公交车里，都长不好啦。
密度不合适，细胞能好好发展吗？肯定不行呀。
”9.“光照条件也有讲究，这就像人睡觉和起床需要合适的光线，得知。
比如小萌培养的羊细胞，光照太强，细胞就像被晒晕了一样，功能都受影响啦。
光照不对，细胞能正常工作吗？不可能啦。
”10.“添加的生长因子要合适，这就像给汽车加合适的润滑油，得知。
dmem质量标准
DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）是一种改进型的Eagle's培养基，常用于哺乳动物细胞培养。
DMEM培养基的质量标准因生产厂家、用途和产品类型而有所不同。
一般来说，DMEM培养基的质量标准包括以下几个方面：
1. 成分：DMEM培养基的主要成分包括氨基酸、维生素、盐类、矿物质等。
高质量的DMEM 培养基要求成分比例适中，有利于细胞的生长和繁殖。
2. pH值：DMEM培养基的pH值对其质量有重要影响。
高质量的DMEM培养基pH值应稳定在7.2-7.4之间，有利于细胞的生长。
3. 渗透压：DMEM培养基的渗透压应保持在280-300 mOsm/L，以维持细胞的正常生理功能。
4. 细菌和内毒素：高质量的DMEM培养基要求无菌、无病毒、无支原体，同时不含内毒素，以避免对细胞造成损害。
5. 稳定性：高质量的DMEM培养基要求储存稳定性好，避免因储存条件不佳导致的质量变化。
6. 质量控制：生产厂家应对DMEM培养基进行严格的质量控制，确保产品质量和批次稳定性。
细胞培养基的基本要求
细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。
营养成分：1.氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。
2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。
细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。
体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。
4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
5.促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。
有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。
有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。
6.渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。
鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。
对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围都适宜。
7.pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。
氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。
一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。
在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。
二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。
动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2 ～7.4 ，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。
哺乳动物细胞培养简述
哺乳动物细胞培养简述刘志坚赛默飞世尔科技应用专家1 前言细胞培养是指通过模拟机体内的生理条件，将从生物机体内取出的器官、组织或细胞等，在体外进行培养，并使其继续生存、生长和繁殖的过程。
严格而言，细胞培养的对象不仅指各种动物细胞，同时也包含植物细胞，本手册主要讨论动物细胞培养的相关内容，简称细胞培养。
现代的动物细胞培养始于1907 年，动物学家R.G. Harrison 应用淋巴液做培养基，在无菌条件下成功培养了蝌蚪的神经板，并观察到神经细胞突起生长的过程；20 世纪40 年代末、50 年代初，得益于抗生素、胰酶以及各种标准培养基的开发、使用，细胞培养技术取得迅速发展，至20 世纪60 年代，各大公司陆续推出各种适宜细胞生长的容器（瓶、皿、板等），同时进一步改善了细胞培养相关的仪器、试剂等，细胞培养逐渐成为现代生物研究的基本技术之一，广泛应用于现代生物医学和生物科学研究的各个方面。
细胞培养是研究细胞生命活动规律的一种简单易行的技术，其主要优点如下：（1）培养对象是活的细胞，并且能够实现较好的均一性和线性放大，适宜于各种规模的研究；（2 ）培养条件可人为改变，并能得到严格的控制，便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响；（3）体外培养的细胞可以通过各种技术进行观察、分析，实验结果便于观察、检测和记录。
细胞培养虽然具有许多优点，但是也存在一定的局限性，其中最主要的一点是细胞体外培养的体系与真正的机体内环境并不完全一致，细胞的生物学特性在一定程度上也会发生改变，因此，体外培养条件下观察到的结果可能并不绝对地符合机体内细胞的真实情况，这一点在应用培养细胞进行研究时必须充分考虑。
2 体外细胞培养特点与类型体外培养的细胞主要呈现悬浮型和贴壁型两种状态，并在培养过程中，表现出一些固有的生长特性：接触抑制和密度抑制、自分泌和旁分泌等，此外，对于贴壁型细胞而言，体外生长增殖过程中，存在反复贴壁的现象，充分认识这些培养特点，对于维持细胞的正常形态和生理功能十分重要。
实用哺乳动物细胞培养
实用哺乳动物细胞培养手册细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下,使其生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术.细胞培养的培养物可以是单个细胞,也可以是细胞群.1、实验室设计细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。
细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。
细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。
2、常用设施及设备（1）超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。
（2）无菌操作间：一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。
操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。
缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。
（3）操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物（4）洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。
（5）分析间：显微镜、计算机及打印机等。
3、培养器皿常用细胞培养器皿有培养瓶、培养板、培养皿等。
常准备量是使用量的三倍。
器皿应选择透明度好、无毒、利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。
常用的器皿有下面几种。
（1）液体储存瓶：用于储存各种配制好的培养液、血清等液体，常用规格有500ml、250ml、100ml 等几种。
（2）培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位，规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等几种。
（3）培养皿：用于开放式培养及其它用途。
分直径30mm、60mm、120mm 等几种。
（4）吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。
其改良后管上部有球型刻度称改良吸管，刻度吸管用于移动液体。
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哺乳动物细胞培养基的基本要求
(一)营养成分
细胞生长繁殖所需要的营养成分包括氨基酸、单糖、维生素、无机离子和H
2
O。
氨基酸和维生素的添加量是有限的，某些氨基酸和维生素的添加量往往是凭经验的，通常与某个细胞系的建立过程有密切关系。
例如，Fisher’s培养基含有高浓度的叶酸，这是因为L5178Y对叶酸的依赖性，在这种培养基的发展过程中，叶酸就被沿用下来了。
大多数细胞的培养基都含有葡萄糖作为能量来源，葡萄糖的主要代谢途径是通过无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸可转化为乳酸盐或乙酰乙酸盐，然后进入柠檬
酸循环被氧化成CO
2和H
2
0。
培养基中乳酸的累积在培养胚胎及转化细胞时尤为
明显，提示体外培养时柠檬酸循环不能像多细胞机体内那样完全进行。
有证据表明，碳源的大部分来自谷氨酰胺而非葡萄糖。
这也解释了为何某些培养的细胞对谷氨酰胺和谷氨酸盐的需求异常高。
(二)促生长因子及激素
促生长因子及激素在商品干粉培养基或液体培养基中一般都不添加，含血清培养液的来源正是血清本身。
在无血清培养基中+经常需要添加这些组分。
自然凝集的血清，与利用物理方法如离心法去除细胞得到的血浆相比，对于刺激细胞的增殖，效果更好。
原因是，自然凝集的血清保留了更多的生长因子，如血小板生长因子。
(三)渗透压和pH
培养基中基础平衡盐溶液组成的盐类是维持渗透压平衡的主要化合物，这些
盐类主要包括Na一、K+、Mg2+、Cl一、SO
42-、Ca2+、POi 和HCO
3
-等。
大部分培养基的盐浓度是依据Eargle’s和Hank’s平衡盐溶液而来，
Eargle’s平衡盐溶液的Hank，s浓度高，适合5％CO
2
的气体环境。
Hank’s平
衡盐溶液的HCO
3
-浓度低，适
用于空气环境。
5％CO
2
的气体环境中，培养液的pH稳定及调节依赖于溶解在培
养液的CO
2
气体和组成培养基基础平衡盐溶液的缓冲作用。
酚红是常用的pH指示剂，一般培养液中都有添加，pH7．4呈红色，pH7．O 变橙色，pH6．5变黄色，而pH7．6呈红色中略带蓝色．pH7．8呈紫色。
由于对颜色的观察有很大的主观性，因而建议操作者用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准色标，密封放在与存放培养液相同材质的瓶子中。
NaHCO
3的浓度取决于气相中的CO
2
浓度，NaHCO
3
除了具有pH缓冲能力以外，
还有显著的营养作用。
Ca2+是某些细胞黏着能力所必需。
如在悬浮培养时，减少Ca2+可以减少细胞的聚集和附着。
(四)无毒、无污染残留
培养液可以直接购买商品培养液，也可在购买商品干粉培养基后自行配制。
谨慎使用配制用水是避免细胞毒性二价离子、有毒有机物和微生物污染的关键措施。
细胞毒性二价离子一般指ca”、Mg’以外的二价金属离子，它们往往属于微量元素，过量了容易导致细胞中毒，细胞培养时出现诸如细胞生长分裂受阻、细胞坏死、细胞凋亡等现象。
保存这些培养液的试剂瓶是否干净无菌也显得非常重要，并且试剂瓶是否在常温下会溶出细胞毒性物质也是选择何种试剂瓶的原则之一。
一般建议使用玻璃试剂瓶或无细胞毒性的工程塑料制造的试剂瓶。
由于塑料试剂瓶反复使用时容易释放出有害物质，故不建议反复使用。
玻璃试剂瓶在反复使用过程中，清洗时尤其注意排除清洗剂残留和金属离子残留。
某些清洗剂不宜用于玻璃试剂瓶的清洗，如洗洁精含芳香类有机物、洗衣粉含酶类物质，这些物质在器皿清洗过程中，很难清除彻底，容易导致二次污染。
一般建议使用玻璃清洗剂、洗衣皂、去污粉等一类清洁剂。
(五)抗生素
常用的细胞培养用抗生素中，可以只使用一种，如单一使用庆大霉素或卡那霉素都比较实用便利。
多数情况下，抗生素的添加都源于习惯，因此，对于受过专业、系统训练的操作者而言，可以不需要直接添加抗生素到培养液中。
换言之，在培养液购买或利用干粉配制液体培养基时，添加抗生素不是必需的，主要依据操作者的熟练程度和操作习惯决定。
不建议添加的理由主要有以下几个方面：
①无菌操作的客观条件和无菌操作技术日臻成熟，在超净工作台内进行严格的无菌操作，通常不太容易带来微生物污染。
②大多数时候，某些抗生素的抗菌谱是有限的，某些环境微生物如果属于抗药菌，则添加的抗生素无效。
经常使用某些抗生素，容易诱导产生培养环境的抗药菌。
使用某些抗生素对培养细胞的生长与分裂也会产生一定的影响。
③抗生素在低浓度下，其生物活性的半衰期更短，需要频繁添加，增加操作难度。
④使用抗生素可以掩盖低程度的微生物污染。
⑤霉菌和酵母的污染很难使用抗生素控制。
在体外细胞培养中使用抗生素，类似于在超净工作台内使用酒精灯作辅助消毒或灭菌一样，不利于掌握严格的无菌操作技术，对于初学者而言，特别提请注意。