细菌标本片的制备及染色

一、细菌标本片的制备

1.抹片

（1）固体培养物：取洁净的玻片一张，把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后，取1-2环无菌生理盐水，放于载玻片的中央，再将接种环灭菌，冷却后，从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许，与水混匀，作成直径1cm的涂面。接种环用后需要灭菌。

（2）液体培养物：可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环，在玻片上作直径1cm涂面。

（3）液体病料（血液，渗出液，腹水）：取一张边缘整齐的载玻片，用一端蘸取血液等液体材料少许，在另一张洁净的玻片上，一45°角均匀推成一薄层的涂面。

（4）组织病料：以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块，以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。

无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和观察

2.干燥

涂片应在室温下自然干燥，必要时将涂片涂面向上，置于火焰高处微加热干燥。

3.固定

（1）火焰固定。是常用的方法，将干燥好的抹片涂面向上，在火焰上来回通过数次（4-6次），以手背触及玻片微烫手为宜。

（2）化学固定。有的血片，组织触片用姬姆萨染色时，要用甲醇固定3-5min

二、常用的细菌染色法

1.美蓝染色法：在经火焰固定的涂片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2-3min，水洗，晾干或吸水纸轻压吸干镜检，结果，菌体呈蓝色

2.革兰氏染色法。

（1）在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，染1-

3min，水洗

（2）加革兰氏碘液媒染，作用1-2min，水洗

（3）加95%酒精脱色约30s至1min，水洗

（4）加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右，水洗，吸干后镜检

3.瑞士染色法

细菌抹片自然干燥后，滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本，1-3min后，再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上，轻轻摇晃使染色液混合均匀，5min左右水洗，干后镜检，菌体呈蓝色，组织细胞的胞浆呈红色，细胞核呈蓝色

4.姬姆萨染色法。血片或组织触片自然干燥后，用甲醇固定3-5min，干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里，染色30min，或者染色数小时或24h，取出水洗，吸干或烘干，镜检。细菌呈蓝青色，组织细胞浆呈红色，细胞核呈蓝色