副溶血性弧菌检验
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• 对所有显示生长的增菌液，用接种环在距 离液面以下 1 cm内沾取一环增菌液，于 TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分 离。一支试管划线一块平板。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
TCBS平板上典型特征
•典型的副溶血性弧 菌 在TCBS上，呈 圆形、半透明、表 面光滑的绿色菌落。
TCBS平板上典型特征
• • • • 甘露醇发酵试验--含3%氯化钠的培养基 赖氨酸脱羧酶试验 V-P试验 ONPG 试验—采用3%氯化钠三糖铁琼脂隔 夜培养物进行 • 副溶血性弧菌： 甘露醇 + 赖氨酸脱羧酶+ V-P ONPG -
ONPG 试验
• 挑取1满环新鲜培养物接种 于0.25 mL 3%氯化钠溶液， 在通风橱中，滴加1滴甲苯， 摇匀后置37 ℃水浴5 min。 加0.25 mL ONPG溶液，36 ℃培养观察24 h。 • 阳性结果呈黄色。阴性结果 则24 h不变色。
科玛嘉弧菌显色平板--紫色菌落
4、纯培养
• 挑取3个或以上的可疑菌落，划线3％氯化 钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1 ℃培养 18 h～24h。
5、初步鉴定
• • • • 氧化酶试验 涂片镜检 3%氯化钠三糖铁 嗜盐性试验
• 底层变黄不变黑，无气泡， 斜面颜色不变，有动力
6、确定鉴定
血清分型
• O抗原（耐热的菌体抗原） O1- O13 共13种 • K抗原型（荚膜抗原） K1- K71 共65种 • H抗原（鞭毛抗原），无特异性
三、检测程序
食品安全国家标准 GB 4789.7 -2013 副溶血性弧菌检验
GB 4789.7-2013
1、样品制备
• 食品样品 鱼类：表面组织、肠、鳃 贝类：全部内容物（贝肉和体液） 甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃 水产制品 • 如为带壳贝类或甲壳类，应先在自来水中 洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操 作打开外壳，按上述要求取相应部分。
概 述
• 本菌嗜盐畏酸怕冷，在无盐环境不能生长， 3%～6%盐水繁殖迅速，低于0.5%或高于 10%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋 酸或50%食醋中1 min即死亡。不耐热， 56℃5 min可杀死，90℃1 min灭活。对高 盐浓度抵抗力甚强。5℃以下容易死亡。
• 分类：属弧菌科(Vibrio)，弧菌属。 • 分布：主要存在于近海岸的海水、海底 沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海 产品中。 人多因食用被本菌污染而又未煮熟 的海产品和其他食品而引起中毒。
GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌检验
• 一、概述 • 二、生物学特性 • 三、检测方法
一、概 述
• 副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus于 1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现。 • 该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、 贝壳等海产品中。在37℃、pH7.7、3～ 4%NaCl环境中生长最好。
2、增菌-- 3%氯化钠碱性蛋白胨水
定性--取样品 25 g（mL），加入3%氯化钠
碱性蛋白胨水 225 mL。
定量--选择3个适宜的连续稀释度，每个稀
释度接种3支含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白 胨水的试管，每管接种1 mL。置36℃±1 ℃恒温箱内，培养8 h～18 h。
3、分离—TCBS平板、弧菌显色平板
流行病学
• 季节分布：8-9月为高峰期 • 中毒食品：主要为海产品、其次为水产制 品、淹制品、咸菜及污染食品 • 地区分布：沿海地区居多 • 临床症状：主要有腹痛、腹泻、恶心、呕 吐、发热 • 潜伏期：10小时左右
致病作用
• 主要引起胃肠炎，最常见的是食物中毒和 感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖， 侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素， 引起剧烈的胃肠炎。
二、生物学特性 ---菌体形态及染色特征
• 革兰氏阴性杆菌，无芽孢 • 0.3~0.7×2~6 µm 两端浓染 呈多形态（棒 状、弧状、球状、卵圆形等）排列不规则 • 液体培养基生长单鞭毛，固体培养基常有 周生鞭毛（侧毛）
二、生物学特性 ---培养特性
• 需氧兼性厌氧 • 在含 NaCl 3-4%的培养基中生长良好 • 无盐和NaCl 10%的培养基中均不生长 • 最适培养温度为：30--37℃ • 最适pH范围：pH7.4-pH8.2
• 在固体培养基上，菌落通常隆起，圆形半 透明，表面光滑、湿润、一般不产生色素。 • 在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。 • 肉汤、琼脂、生化管都应含有3-4%的NaCl 含量。
• 神奈川现象(Kanagawa phenomenon，
KP) --在特定条件下，某些菌株在含 高盐(7％)的人O型血球或兔血球及以D 甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产 生β溶血的现象 • 神奈川现象与本菌的 致病性密切相关
ONPG--邻硝基酚-β-D-半乳糖苷
可选择生化鉴定试剂盒或全自动 微生物生化Байду номын сангаас定系统。 • API 20E
7、选做试验
• 血清学分型--11种O抗原血清 • 神奈川试验--我妻氏血琼脂平板
8、结果与报告
• 根据检出的可疑菌落生化性状，报告25 g （mL）样品中检出副溶血性弧菌。
• 如果进行定量检测，根据证实为副溶血性 弧菌阳性的试管管数，查最可能数（MPN） 检索表，报告每g（mL）副溶血性弧菌的 MPN值。
TCBS平板上典型特征
•典型的副溶血性弧 菌 在TCBS上，呈 圆形、半透明、表 面光滑的绿色菌落。
TCBS平板上典型特征
• • • • 甘露醇发酵试验--含3%氯化钠的培养基 赖氨酸脱羧酶试验 V-P试验 ONPG 试验—采用3%氯化钠三糖铁琼脂隔 夜培养物进行 • 副溶血性弧菌： 甘露醇 + 赖氨酸脱羧酶+ V-P ONPG -
ONPG 试验
• 挑取1满环新鲜培养物接种 于0.25 mL 3%氯化钠溶液， 在通风橱中，滴加1滴甲苯， 摇匀后置37 ℃水浴5 min。 加0.25 mL ONPG溶液，36 ℃培养观察24 h。 • 阳性结果呈黄色。阴性结果 则24 h不变色。
科玛嘉弧菌显色平板--紫色菌落
4、纯培养
• 挑取3个或以上的可疑菌落，划线3％氯化 钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1 ℃培养 18 h～24h。
5、初步鉴定
• • • • 氧化酶试验 涂片镜检 3%氯化钠三糖铁 嗜盐性试验
• 底层变黄不变黑，无气泡， 斜面颜色不变，有动力
6、确定鉴定
血清分型
• O抗原（耐热的菌体抗原） O1- O13 共13种 • K抗原型（荚膜抗原） K1- K71 共65种 • H抗原（鞭毛抗原），无特异性
三、检测程序
食品安全国家标准 GB 4789.7 -2013 副溶血性弧菌检验
GB 4789.7-2013
1、样品制备
• 食品样品 鱼类：表面组织、肠、鳃 贝类：全部内容物（贝肉和体液） 甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃 水产制品 • 如为带壳贝类或甲壳类，应先在自来水中 洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操 作打开外壳，按上述要求取相应部分。
概 述
• 本菌嗜盐畏酸怕冷，在无盐环境不能生长， 3%～6%盐水繁殖迅速，低于0.5%或高于 10%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋 酸或50%食醋中1 min即死亡。不耐热， 56℃5 min可杀死，90℃1 min灭活。对高 盐浓度抵抗力甚强。5℃以下容易死亡。
• 分类：属弧菌科(Vibrio)，弧菌属。 • 分布：主要存在于近海岸的海水、海底 沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海 产品中。 人多因食用被本菌污染而又未煮熟 的海产品和其他食品而引起中毒。
GB 4789.7-2013 副溶血性弧菌检验
• 一、概述 • 二、生物学特性 • 三、检测方法
一、概 述
• 副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus于 1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现。 • 该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、 贝壳等海产品中。在37℃、pH7.7、3～ 4%NaCl环境中生长最好。
2、增菌-- 3%氯化钠碱性蛋白胨水
定性--取样品 25 g（mL），加入3%氯化钠
碱性蛋白胨水 225 mL。
定量--选择3个适宜的连续稀释度，每个稀
释度接种3支含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白 胨水的试管，每管接种1 mL。置36℃±1 ℃恒温箱内，培养8 h～18 h。
3、分离—TCBS平板、弧菌显色平板
流行病学
• 季节分布：8-9月为高峰期 • 中毒食品：主要为海产品、其次为水产制 品、淹制品、咸菜及污染食品 • 地区分布：沿海地区居多 • 临床症状：主要有腹痛、腹泻、恶心、呕 吐、发热 • 潜伏期：10小时左右
致病作用
• 主要引起胃肠炎，最常见的是食物中毒和 感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖， 侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素， 引起剧烈的胃肠炎。
二、生物学特性 ---菌体形态及染色特征
• 革兰氏阴性杆菌，无芽孢 • 0.3~0.7×2~6 µm 两端浓染 呈多形态（棒 状、弧状、球状、卵圆形等）排列不规则 • 液体培养基生长单鞭毛，固体培养基常有 周生鞭毛（侧毛）
二、生物学特性 ---培养特性
• 需氧兼性厌氧 • 在含 NaCl 3-4%的培养基中生长良好 • 无盐和NaCl 10%的培养基中均不生长 • 最适培养温度为：30--37℃ • 最适pH范围：pH7.4-pH8.2
• 在固体培养基上，菌落通常隆起，圆形半 透明，表面光滑、湿润、一般不产生色素。 • 在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。 • 肉汤、琼脂、生化管都应含有3-4%的NaCl 含量。
• 神奈川现象(Kanagawa phenomenon，
KP) --在特定条件下，某些菌株在含 高盐(7％)的人O型血球或兔血球及以D 甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产 生β溶血的现象 • 神奈川现象与本菌的 致病性密切相关
ONPG--邻硝基酚-β-D-半乳糖苷
可选择生化鉴定试剂盒或全自动 微生物生化Байду номын сангаас定系统。 • API 20E
7、选做试验
• 血清学分型--11种O抗原血清 • 神奈川试验--我妻氏血琼脂平板
8、结果与报告
• 根据检出的可疑菌落生化性状，报告25 g （mL）样品中检出副溶血性弧菌。
• 如果进行定量检测，根据证实为副溶血性 弧菌阳性的试管管数，查最可能数（MPN） 检索表，报告每g（mL）副溶血性弧菌的 MPN值。