[生物学]地高辛标记系统
地高辛(DIG)
• 外观与性状：为白色结晶或结晶性粉末；无臭，味苦
。熔点235～245℃（分解）。在吡啶中易溶，在稀醇中 微溶，在氯仿中极微溶解，在水或乙醚中不溶
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此外，小剂量时提高窦房结对迷走神经冲动的 敏感性，可增强其减慢心率作用。大剂量(通常 接近中毒量)则可直接抑制窦房结、房室结和希 氏束而呈现窦性心动过缓和不同程度的房室传 导阻滞
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• 3．心脏电生理作用：
通过对心肌电活动的直接作用和对迷走神经的 间接作用，（1）降低窦房结自律性；（2） 提高普肯野氏纤维自律性；（3）减慢房室结 传导速度，延长其有效不应期，导致房室结 隐匿性传导增加，可减慢心房纤颤或心房扑 动的心室率；（4）由于本药缩短心房有效不 应期，当用于房性心动过速和房扑时，可能 导致心房率的加速和心房扑动转为心房纤颤 ；（5）缩短普肯野氏纤维有效不应期。
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不良反应：
• 1. 常见的不良反应包括：促心律失常作用、胃纳不佳 或恶心、呕吐（刺激延髓中枢）、下腹痛、异常的无 力、软弱。
• 2. 少见的反应包括：视力模糊或“色视”，如黄视、绿 视、腹泻、中枢神经系统反应如精神抑郁或错乱。
地高辛标记核酸探针的标记方法
地高辛标记核酸探针的标记方法Last revision on 21 December 2020地高辛标记核酸探针的标记方法核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。
最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。
而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。
近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。
另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。
在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。
由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。
与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度，却减少了非特异性结合的地高辛检测系统，已为人们所接受,并得到广泛的应用。
地高辛(Digoxigenin ,DIG) 又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。
其化学结构如图1 所示。
采用人工方法可以将地高辛的线型间隔臂与dUTP 连接起来,形成DIG-11-dUTP，通过随机引物法或PCR法将其掺入到DNA探针中。
RNA探针的标记是使用噬菌体信息编码的RNA聚合酶，通过体外转录将DIG-11-dUTP掺入到RNA探针中。
寡核苷酸探针的标记则是通过末端转移酶催化，在3'末端加上DIG-11-dUTP/dATP 或DIG-11-ddUTP 尾巴。
对于目的DNA 或RNA 来说，分子杂交后,杂交部分可通过ELISA 实验程序加以检测，即加入一种结合有碱性磷酸酶的地高辛-特异性抗体，它与地高辛半抗原分子形成酶联抗体-半抗原(DIG) 复合物，再加入相应的显色底物，使杂交部分得以显示。
分子生物学试题(附答案)
分子生物学试题（附答案）一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、为了避免反复冻融对核酸样品产生的破坏作用，最好( )A、将核酸小量分装保存B、将核酸冻干保存C、将核酸大量保存D、将核酸溶解保存E、将核酸沉淀保存正确答案：A2、关于梅毒螺旋体的描述错误的是A、可侵犯皮肤黏膜、内脏器官，导致心血管及中枢神经系统损害B、梅毒螺旋体是梅毒的病原体C、梅毒螺旋体属于苍白密螺旋体的苍白亚种D、主要通过性接触、输血、胎盘或产道等途径感染人体E、不会对胎儿产生影响正确答案：E3、用于区分 HBV 主要基因型的序列是A、NS5b 区B、C 区C、NS3 区D、5’UTR 区E、NS5a 区正确答案：D4、下列是 PCR 反应体系中必须存在的成分， ( )除外A、引物B、模板C、dNTPD、Mg2+E、DMSO正确答案：E5、PCR 反应过程中，退火温度通常比引物的Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A6、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E7、硝酸纤维素膜最大的优点是( )A、高结合力B、本底低C、非共价键结合D、共价键结合E、脆性大正确答案：B8、下列物质不适于非放射性探针标记的是A、AKPB、ACPC、生物素D、地高辛E、荧光素正确答案：B9、检测 TB 的实验室技术中，被认为是目前最先进的一种检测TB 及其耐药性的方法是A、PCR 技术B、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、全自动结核杆菌检测技术E、DNA 测序技术正确答案：D10、目前最常用的TB 分子检测方法是A、PCRB、real-time PCRC、SDAD、LPAE、DNA chip正确答案：B11、DNA 指纹分子的遗传性基础是A、连锁不平衡B、MHC 的多样性C、DNA 的多态性D、反向重复序列E、MHC 的限制性正确答案：C12、基因芯片原位合成的描述错误的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针B、适用于寡核苷酸探针C、适用于制作大规模 DNA 探针芯片D、可实现高密度芯片的标准化和规模化生产E、也称为离片合成正确答案：E13、个体识别所使用的 HLA 分型技术不包括下列哪项 ( )A、PCR-RFLPB、PCR-SSPC、PCR-SSOPD、PCR-指纹图E、FISH正确答案：E14、美国食品药品监督管理局规定用于检测尿液标本中淋病奈瑟菌的方法是A、革兰染色镜检B、抗酸染色镜检C、淋病奈瑟菌 16SrRNA 基因检查D、ELISAE、动物接种正确答案：C15、操纵子结构不存在于：A、大肠杆菌基因组中B、真核生物基因组中C、细菌基因组中D、原核生物基因组中E、病毒基因组中正确答案：B16、脆性 X 综合征的临床表现有A、智力低下伴眼距宽、鼻梁塌陷、通贯手、指间距宽B、智力正常、身材矮小、肘外翻、乳腺发育差、乳间距宽C、智力低下伴头皮缺损、多指、严重唇裂及膊裂D、智力正常张力亢进，特殊握拳姿势、摇椅足E、智力低下伴长脸、大耳朵、大下颌、大睾丸正确答案：A17、稀有碱基主要存在于A、核糖体 RNAB、信使 RNAC、转运 RNAD、核 DNAE、线粒体 DNA正确答案：C18、当标本核酸量非常低难以扩增时，可采用的 PCR 技术是A、逆转录 PCRB、转录介导扩增C、原位 PCRD、巢式 PCRE、荧光 PCR正确答案：D19、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解患者的家族史B、疾病表型于基因关系已阐明C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、进行个体的基因分型E、了解相关基因的染色体定位正确答案：A20、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B21、PCR 反应体系不包括A、耐热的 TaqDNA 聚合酶B、cDNA 探针C、4 种 dNTPD、合适的缓冲液体系E、模板 DNA正确答案：B22、阴性质控品失控的原因不包括A、扩增产物污染B、标本交叉污染C、放射性污染D、基因组 DNA 或质粒的污染E、试剂污染正确答案：C23、第三代测序技术的最主要特征：A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：A24、下列方法中能同时检测几种疟原虫混合感染的是A、竞争 PCRB、巢式 PCRC、多重 PCRD、普通 PCRE、PCR-RFLP正确答案：C25、目前，个体识别和亲子鉴定主要依靠A、STR 基因座技术B、PCR-SSOC、蛋白质凝胶电泳技术D、PCR-SSCPE、细胞混合培养技术正确答案：A26、分离纯化核酸的原则是 ( )A、保证一定浓度B、保持一级结构完整并保证纯度C、保持二级结构完整并保证纯度D、保持空间结构完整E、保证纯度与浓度正确答案：B27、未来基因诊断的主要发展方向是A、胎盘着床前诊断B、母体外周血中胎儿细胞分析技术C、对常见病进行分子诊断D、对多发病进行分子诊断E、以上都是正确答案：E28、关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述不正确的是A、特异性高B、可依赖氨基酸序列推测其序列C、分子量小D、可用于相似基因顺序差异性分析E、可用末端转移酶进行5’端标记正确答案：E29、SDS 是一种阴离子表面活性剂，其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A30、基因芯片技术的本质是 ( ) ：A、核酸分子杂交B、蛋白质分子杂交技术C、连接酶链反应D、DNA 重组技术E、酶切技术正确答案：A31、关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A32、DNA 自动化测序技术一般用不到的技术是A、Sanger 的双脱氧链终止法B、Maxam 和 Gilbert 的化学降解法C、荧光标记技术D、PCR 技术E、电泳技术正确答案：B33、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法B、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法C、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断D、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多，但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：A34、实时荧光 PCR 中，GC 含量在 20%~80% (45%~55%最佳) ，单链引物的最适长度为A、35~50bpB、15~20bpC、55~70bpD、5~20bpE、70~90bp正确答案：B35、线粒体病分子生物学检验标志物不包括A、点突变位点B、重复序列C、SNP 位点D、缺失或插入片段E、线粒体单体型正确答案：B36、线粒体基因组编码几种rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案：E37、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B38、下列方法中不属于 RNA 诊断的是A、Northern blotB、RNA 斑点杂交C、基因芯片D、mRNA 差异显示 PCR 技术E、逆转录 PCR正确答案：C39、在对病原体检测中，一次性获得信息量最大的技术是 ( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E40、生物芯片根据芯片上固定的探针种类不同可分为几种，不包括：A、DNA 芯片B、蛋白质芯片C、细胞芯片D、组织芯片E、测序芯片正确答案：E41、以下不需要对引物或探针预先标记的实时定量 PCR 方法是A、TaqMan 水解探针技术B、探针杂交技术C、分子信标技术D、SYBR Green Ⅰ荧光染料技术E、数字 PCR 技术正确答案：D42、关于带正电荷尼龙膜的描述下列不正确的是A、可结合 DNAB、可结合 RNAC、对盐浓度要求不高D、核酸可通过 UV 交联共价结合E、本底较低正确答案：E43、可作为分子遗传标记的是A、HLAB、单拷贝序列C、高表达蛋白D、RFLPE、染色体正确答案：D44、下列关于人类遗传病的叙述不正确的是A、人类遗传病包括单基因遗传病、多基因遗传病和染色体异常遗传病B、21-三体综合症患者体细胞中染色体数目为 47 条C、单基因病是指受一个基因控制的疾病D、遗传性疾病既可以直接诊断，也可以间接诊断E、人类遗传病是指由于遗传物质改变而引起的疾病正确答案：C45、乙型肝炎病毒的核酸类型是 ( )A、双股 DNAB、负股 DNAC、正股 DNAD、单股 DNAE、DNA-RNA 二聚体正确答案：A46、目前白血病的发病机制的研究主要集中的领域不包括A、融合基因与白血病B、遗传学疾病及白血病发病的后天因素C、基因多态性与白血病D、白血病复发的后天因素E、白血病发病的先天因素正确答案：D47、镰状细胞贫血患者，代替其血红蛋白β链 N 端第六个氨基酸残基谷氨酸的是A、苯丙氨酸B、缬氨酸C、酪氨酸D、丙氨酸E、丝氨酸正确答案：B48、多重 PCR 的描述中正确的是：A、同一个模板，多种不同的引物B、相同的引物，多种不同的模板C、多个模板，多种引物D、引物的Tm 值、反应时间和温度、反应缓冲液等尽量不一致以区分不同产物E、同一反应内各扩增产物片段的大小应尽可能相同或接近正确答案：A49、GeneXpert 全自动结核杆菌检测技术现可进行哪种药物的耐药检测A、乙胺丁醇B、吡嗪酰胺C、异烟肼D、链霉素E、利福平正确答案：E50、目前确认与人类肿瘤发生有关的RNA 病毒是A、人乳头状瘤病毒B、乙型肝炎病毒C、EB 病毒D、人类疱疹病毒-8E、丙型肝炎病毒正确答案：E51、编码 HIV 衣壳蛋白的是A、tat 基因B、gag 基因C、env 基因D、vif 基因E、pol 基因正确答案：B52、下列不属于 SNP 检测技术特点的是 ( )A、遗传稳定性B、富有代表性C、密度低D、密度高E、易实现分析的自动化正确答案：C53、下列哪些技术不适用于鉴定菌种亲缘性：A、随机扩增DNA 多态性分析B、连接酶链反应C、PCR-RFLPD、多位点测序分型E、DNA 测序技术正确答案：B54、珠蛋白基因的碱基由G 突变为 C 时，造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B55、HCV 基因分型的“金标准”是( )A、基因分型检测芯片B、测序分析法C、实时荧光 PCRD、基因型特异性引物扩增法E、RFLP正确答案：B56、核酸探针不可用什么标记A、放射性核素标记B、抗体标记C、生物素标记D、荧光标记E、地高辛标记正确答案：B57、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C58、关于 Ct 值的描述，不正确的是A、Ct值是荧光定量 PCR 获得的最初数据资料B、Ct代表了反应达到预定设置的阈值时的循环次数C、Ct 与反应模板的初始模板量成正比D、Ct越小代表其模板核酸拷贝数越多E、Ct值处于扩增曲线和荧光本底基线的交叉点正确答案：C59、提取 DNA 的原则除外A、保证核酸一级结构完整性B、保留所有核酸分子C、核酸样本中不应存在有机溶剂和过高浓度的金属离子D、蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度E、排除 RNA 分子的污染与干扰正确答案：B60、硝酸纤维素和PVDF 膜结合蛋白主要靠( )A、疏水作用B、氢键作用C、离子键作用D、盐键作用E、酯键作用正确答案：A61、以 mRNA 为模板合成 cDNA 的酶是A、DNA 酶B、Taq DNA 聚合酶C、限制性内切酶D、RNA 酶E、逆转录酶正确答案：E62、HIV 核酸类型是：A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D63、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、边合成边测序B、化学降解法测序C、双脱氧终止法测序D、焦磷酸测序E、寡连测序正确答案：D64、线粒体基因突变不包括A、mtDNA 拷贝数的变异B、碱基突变C、插入D、缺失E、重复序列增多或减少正确答案：E65、HIV 核酸类型是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D66、研究得最早的核酸分子杂交种类是( )A、菌落杂交B、Northern 杂交C、Southern 杂交D、液相杂交E、原位杂交正确答案：D67、PCR 中的脱氧核苷三磷酸不包括A、dATPB、dTTPC、dCTPD、dGTPE、dUTP正确答案：E68、PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C69、表达谱芯片A、是在 DNA 水平研究基因之间的表达关系B、是在 mRNA 水平研究基因之间的表达关系C、是在蛋白质水平研究基因之间的表达关系D、不能用于疾病机制的研究E、不能指导个体化治疗正确答案：B70、杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加 1%，则 Tm 值下降A、1~1.5℃B、3~3.5℃C、0.5℃D、4~4.5℃E、2~2.5℃正确答案：A71、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、用荧光素标记探针B、用放射性核素标记探针C、无需经过核酸的提取D、可以用于遗传病的产前诊断E、可以用于基因定位正确答案：B72、以下不是在移植配型中常用的分子生物学检测技术是A、核酸分子杂交技术B、PCR 技术C、基因芯片技术D、免疫组化技术E、基因测序技术正确答案：D73、大多数质粒在自然状态下是( )A、线性双链 DNAB、线性单链 DNAC、线性单链 RNAD、环状双链 DNAE、环状单链 DNA正确答案：D74、珠蛋白生成障碍性贫血的主要原因是A、珠蛋白基因突变导致氨基酸序列改变B、血红蛋白破坏加速C、出现异常血红蛋白 SD、铁代谢异常E、珠蛋白链合成速率降低正确答案：E75、关于分子信标技术的描述，不正确的是A、分子信标设计简单B、操作简便C、背景信号低D、特异性强E、灵敏度高正确答案：A76、下述序列中，在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案：C77、PCR 反应的基本过程不包括以下：A、预变性B、退火C、探针杂交D、变性E、延伸正确答案：C78、最容易降解的核酸探针是A、cDNA 探针B、dsDNA 探针C、ssDNA 探针D、gDNA 探针E、RNA 探针正确答案：E79、Southern 杂交通常是指( )A、DNA 与 RNA 杂交B、DNA 与 DNA 杂交C、RNA 与 RNA 杂交D、蛋白质与蛋白质杂交E、DNA 与蛋白质杂交正确答案：B80、不属于移植配型中常用的分子生物学检测技术是 ( )A、RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSPB、PCR-SSCPC、PCR-SequencingD、PCR-SSO/基因芯片技术E、FISH正确答案：E81、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D82、下列关于Taq DNA 聚合酶的描述，错误的是A、以 dNTPs 为原料B、催化形成3’,5’-磷酸二酯键C、使 DNA 链沿5’→3’方向延伸D、不具有3’→5’外切酶活性E、扩增的DNA 片段越长，碱基错配率越低正确答案：E83、关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E84、关于mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能，轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因，可转录 22 种 tRNA，以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因，编码 2 种 rRNA，即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D85、要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案，首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E86、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D87、寡核苷酸探针的最大的优势是A、杂化分子稳定B、易标记C、易合成D、可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列E、易分解正确答案：D88、细菌感染分子生物学检验的检验对象是A、测定血清中抗体抗原B、测定血清中病原体蛋白含量C、测定样本中核酸含量D、镜检病原体形态E、测定血清中蛋白酶活性正确答案：C89、肺癌的分子生物学检验的意义不包括A、可以较早的发现微小转移的癌灶B、有利于肺癌的早期诊断C、可以减轻肺癌患者化疗的不良反应D、帮助降低肺癌患者的病死率E、可以对肺癌患者的预后作出评估正确答案：C90、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D91、下列病毒中，基因组可直接作为mRNA 的 3 种病毒是A、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、流感病毒B、脊髓灰质炎病毒、AIDS 病毒、麻疹病毒C、脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、新型肠道病毒D、脊髓灰质炎病毒、乙型肝炎病毒、轮状病毒E、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、甲型肝炎病毒正确答案：C92、一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双链，这一过程称A、复杂性B、探针C、杂交D、复性E、变性正确答案：C93、荧光原位杂交的描述正确的是A、快速确定是否存在目的基因B、检测靶分子是 RNAC、用于基因定位分析D、用于阳性菌落的筛选E、用于蛋白水平的检测正确答案：C94、对于寡核苷酸探针，杂交温度一般低于其 Tm 值A、10~15℃B、20~30℃C、15~30℃D、30~40℃E、5℃正确答案：E95、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A96、结核杆菌的分子生物学检验临床意义中不包括A、疗效评价B、早期诊断C、耐药检测D、快速诊断E、鉴别诊断正确答案：B97、决定 PCR 反应特异性的是A、模板B、dNTPC、引物D、缓冲液E、Taq DNA 聚合酶正确答案：C98、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E99、关于单基因遗传病的叙述，正确的是A、原发性高血压是单基因遗传病B、发病机制都已阐明C、可进行定性诊断和定量诊断D、在群体中发病率高E、受多对等位基因控制正确答案：C100、引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、错义突变B、终止密码突变C、整码突变D、无义突变E、移码突变正确答案：A。
原位杂交-经典方法-地高辛标记探针
原位杂交(In situ hybridization)一、目的掌握核酸探针原位杂交操作技术，并利用该技术对单细胞的靶目标进行定位，用于细胞生物学基础研究。
二、原理原位杂交技术（in situ hybridization）是分子生物学和组织化学成功结合的产物，是特定标记的已知序列核酸作为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交并对其实行检测的方法。
其基本原理是含互补序列的标记DNA或RNA片段，即探针，在适宜的条件下与细胞内特定的DNA或RNA形成稳定的杂交体。
原位杂交能在成分复杂的组织中进行单一细胞的研究而不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其他组织中的细胞内DNA或RNA研究更为方便；由于原位杂交不需要从组织中提取核酸，对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性，并可完整地保持组织与细胞的形态，更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。
三、仪器设备烘箱，切片机，展片机，染色缸，湿盒，原位PCR仪，显微镜、镊子、量筒、烧杯、吸水纸、枪与枪头、载玻片、盖玻片、冰盒等。
四、材料和试剂1．材料：带有病原体的水生动物，如感染WSSV病毒的对虾、感染虹彩病毒的水生动物等。
2．试剂：Davidson’s AFA固定液:330 ml 95％乙醇220 ml 福尔马林（37～39％甲醛水溶液）115 ml 冰醋酸335 ml H2O混匀后封口，室温放置；DIG标记与检测试剂盒（Roche公司）；TNE：50 mmol/L Tris-HCl 6.57 g Tris Base10 mmol/L NaCl 0.58 g NaCl1 mmol/L EDTA 0.37 g EDTAddH2O 900 ml （定容至1L）用HCl调pH至7.4，高压灭菌，4℃保存；0.4% 甲醛：37～39％% 甲醛 5.4 mlddH2O 495 ml；蛋白酶K溶液(Pr.K，10 mg/ml)：10 mg Pr.K 溶于1 ml TNE中（用时现配）；20×SSC：3 mol/L NaCl 175.32 g NaCl0.3 mol/L柠檬酸钠88.23 g 柠檬酸钠ddH2O 900 ml （定容至1L）调pH至7.0，高压灭菌，4℃保存；2×SSC：20×SSC 100 mlddH2O 900 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；20×Denhardt’s溶液：0.4％牛清血蛋白0.4 g牛清血蛋白0.4％聚蔗糖0.4 g聚蔗糖0.4％聚乙烯吡咯烷酮0.4 g聚乙烯吡咯烷酮ddH2O 100 ml0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；25％硫酸葡聚糖：25 g硫酸葡聚糖溶于80 ml ddH2O（定容至100 ml），-20℃保存；杂交液：4×SSC50% 甲酰胺1×Denhardt’s5% 硫酸葡聚糖0.5 mg/ml鲑精DNA4℃保存；BufferI：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base150 mmol/L NaCl 8.77 g NaCl用HCl调pH至7.5，定容至1L，高压灭菌，4℃保存，；BufferII：0.5% Blocking agent 0.5 g Blocking agentBufferI 100 ml低温加热溶解，4℃保存一星期；BufferIII：100 mmol/L Tris-HCl 12.11 g Tris Base100 mmol/L NaCl 5.84 g NaCl50 mmol/L MgCl2 10.16 g MgCl2•6H2OddH2O 990 ml（定容至1L）用HCl调pH至9.5，0.45 µm 滤膜过滤，4℃保存；BufferIV：10 mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 1 mmol/LEDTA；显色液（NBT/BCIP使用液）：20 µl NBT/BCIP + 1ml BufferIII。
地高辛标记及检测试剂盒说明书
仅仅研究于生命科学，不适合在诊断过程使用只能在体外使用地高辛DNA标记和检测试剂盒1和NBT/BCIP一起用于颜色检测通过酶联免疫法采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记和检测货号：11 745 832 910此试剂盒储存条件-15o C—-25o C此试剂盒可对10ng-3ugDNA进行12次标记反应可检测100cm2面积的杂交膜24张指导手册2009.11版1前言1.1内容表1前言 (2)1.1内容表 (2)1.2试剂盒内容 (3)2简介 (5)2.1产品概述 (5)3步骤和所需材料 (8)3.1开始之前 (8)3.2地高辛DNA标记 (9)3.3 标记效率的测定 (11)3.4 DNA 的转移和固定 (14)3.5杂交 (16)3.6免疫检测 (18)3.7 DNA印记的洗脱和再杂交 (20)4结果 (21)4.1典型的结果 (21)5附录 (23)5.1故障排除 (23)5.2引用 (24)5.3订购信息 (25)1.2 试剂盒内容附加仪器与所需试剂除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。
在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。
*标记的产品可以从Roche Applied Science 获得2 介绍2.1 产品概况实验原则此试剂盒采用地高辛（DIG），一种甾类半抗原，去标记DNA探针从而通过酶免疫分析应用地高辛标记DNA探针可以用于：所有类型的滤膜杂交总基因组DNA中单拷贝基因的检测，甚至对于高度复杂的生物也可以进行检测，如人，大麦和小麦。
样品材料至少100bp的DNA片段线性的质粒，cos质粒或者λDNA超螺旋的DNA实验时间此表格列出了每一步实验所需的反应时间检测数量一个试剂盒足够用于：不超过3ug的模板DNA的12个标准的标记反应和100cm2有24个斑点的检测质量控制根据操作步骤中的描述，对未标记的对照品DNA（PBR328）进行标记，0.1pg同源DNA 在点杂交中通过16h的显色来检测（1pg同源DNA可以通过1小时的显色进行检测）。
分子生物学考试模拟题及参考答案
分子生物学考试模拟题及参考答案一、单选题（共100题，每题1分，共100分）1、HIV 核酸类型是:A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：D2、核酸分子杂交的基础是A、配体受体结合B、甲基化C、磷酸化D、抗原抗体结合E、碱基互补配对正确答案：E3、HBV 耐药性的检测在临床上主要是针对A、HBV DNA 聚合酶 S 基因的检测B、HBV DNA 聚合酶 P 基因的检测C、HBV DNA 聚合酶 C 基因的检测D、HBV DNA 聚合酶前 C 基因的检测E、HBV DNA 聚合酶 X 基因的检测正确答案：B4、理想的质控品应具备的条件不包括A、阳性质控品所含待测物浓度接近试验的决定性水平B、靶值或预期结果已知C、基质与待测样本一致D、含有未灭活的传染性病原体E、稳定、价廉、同一批次可大量获得正确答案：D5、第二代测序技术最主要技术特征是A、对单分子 DNA 进行非 PCR 的测序B、针对 SNP 进行非 PCR 的测序C、高通量和并行 PCR 测序D、直接分析 SNPE、直接进行个体基因组测序和 SNP 研究正确答案：C6、关于 DNA 芯片描述不正确的是A、探针为已知序列B、有序地高密度地固定于支持物上C、理论基础是核酸杂交D、可研究基因序列E、不能研究基因突变正确答案：E7、可抑制 RNA 酶活性防止其对 RNA 样品降解的是( )A、Tris-HClB、EDTAC、酚试剂D、氯仿E、DEPC正确答案：E8、以 SDA 技术检测结核杆菌时扩增靶点是A、SDAB、IS6110 和 18SrRNAC、IS6110 和 5SrRNAD、IS6110 和 16SrRNAE、IS6110 和 15SrRNA正确答案：D9、最常用的 DNA 探针标记方法是A、随机引物标记B、切口平移标记C、3’-末端标记D、5’-末端标记E、PCR 法正确答案：A10、关于 G-C 之间氢键的描述下列正确的是A、G-C 之间有 3 个氢键B、G-C 之间有 2 个氢键C、G-C 之间有 1 个氢键D、G-C 之间有 4 个氢键E、G-C 之间有 5 个氢键正确答案：A11、PCR 反应的基本过程不包括A、预变性B、退火C、淬火D、变性E、延伸正确答案：C12、关于 mtDNA 复制特点的描述正确的是A、线粒体密码子与核基因密码子相同B、mtDNA 以 D-环复制为主要模式,与核 DNA 复制同步C、mtDNA 两条链的复制是同步的D、mtDNA 为自主性复制,不受核内基因控制E、参与 mtDNA 复制所需的酶、调控因子等由核 DNA 编码正确答案：E13、Alu家族属于A、可变数目串联重复序列B、短串联重复序列C、长散在核原件D、短散在核原件E、DNA 转座子正确答案：D14、纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8,可使比值降低的是( ):A、蛋白质B、牛血清白蛋白C、RNAD、氯仿E、Mg2+正确答案：A15、关于肿瘤分子诊断的说法正确的是A、肿瘤分子诊断的核心是基于细胞水平的分子诊断技术B、肿瘤分子诊断就是利用分子生物学原理和技术建立的肿瘤诊断方法C、肿瘤的分子诊断中根据目的、对象、类型的不同要采取相似的诊断策略与方法D、肿瘤分子诊断的研究成果仅用于临床肿瘤的诊断E、肿瘤分子诊断的含义主要表现在虽然检测对象众多,但大多数标志物是特异性的肿瘤标志物正确答案：B16、利用 DNA 芯片检测基因的表达情况,杂交条件应选( )A、高盐浓度、低温和长时间B、低盐浓度、低温和长时间C、高盐浓度、高温和长时间D、高盐浓度、低温和短时间E、高盐浓度、高温和短时间正确答案：A17、关于 RNA 探针的描述下列不正确的是A、可用于随机引物标记B、特异性高C、灵敏度高D、可用非同位素标记法标记E、不易降解正确答案：E18、SDS 是一种阴离子表面活性剂,其可断开蛋白质分子内和分子间的( )A、氢键B、离子键C、二硫键D、酯键E、疏水键正确答案：A19、单细胞基因扩增一般采用下列何种技术增加检测的敏感性和特异性A、巢式 PCRB、多重 PCRC、PCR-RFLPD、等位基因特异性 PCRE、PCR-SSCP正确答案：A20、在对病原体检测中,一次性获得信息量最大的技术是( )A、ELISAB、荧光定量 PCR 技术C、PCR-RFLP 技术D、原位杂交技术E、基因芯片技术正确答案：E21、采用了所谓酶联级联测序技术的测序方法是A、焦磷酸测序B、双脱氧终止法测序C、寡连测序D、化学降解法测序E、边合成边测序正确答案：A22、引起镰状细胞贫血的珠蛋白基因突变类型是A、错义突变B、终止密码突变C、整码突变D、移码突变E、无义突变正确答案：A23、产前诊断临床应用尚不广泛,原因不包括A、诊断的准确性受到多种制约B、需要生殖医学与遗传学技术的结合C、诊断技术不成熟D、已明确母亲为携带者的婴儿E、单个细胞的遗传诊断困难正确答案：C24、下列属于单基因遗传病的是A、糖尿病B、冠心病C、原发性高血压D、珠蛋白生成障碍性贫血E、精神与神经疾病正确答案：D25、FMR-1 基因上 CGG 重复序列异常扩增导致A、镰状细胞贫血B、脆性 X 综合征C、地中海贫血D、血友病 AE、血友病 B正确答案：B26、被称为细菌“分子化石”的是A、16SrRNAB、IS6110 插入序列C、rfbEO157D、fliCH7E、rpoB正确答案：A27、质粒的主要成分是A、多糖B、蛋白质C、氨基酸衍生物D、DNA 分子E、脂类正确答案：D28、HIV 最易发生变异的部位是A、内膜蛋白B、核衣壳蛋白C、包膜蛋白D、刺突蛋白E、逆转录酶正确答案：D29、DNA 自动化测序技术中,不正确的荧光标记方法A、用荧光染料标记引物5’端B、用荧光染料标记引物3’-OHC、用荧光染料标记终止物D、使用一种或四种不同荧光染料标记E、使荧光染料标记的核苷酸渗入到新合成的 DNA 链中正确答案：B30、以下不是 APC 基因失活方式的是A、移位B、缺失C、插入D、无义突变E、错位拼接正确答案：A31、关于 PCR 反应引物的描述,不正确的是A、引物的长度在 20~30bpB、引物自身或引物之间不应存在互补序列,防止产生二聚体和发夹结构C、引物中 G+C 的含量占 45%~55%D、引物的3’端可以带有生物素、荧光或酶切位点等作为标记E、两条引物的 Tm 值应该尽量相近正确答案：D32、目前的 DNA 自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约A、50bpB、100bpC、500bpD、1000bpE、2000bp正确答案：D33、目前测序读长最大的测序反应:A、连接测序B、双脱氧终止法C、焦磷酸测序D、边合成边测序E、化学裂解法正确答案：B34、K-ras 基因最常见的激活方式是A、染色体重排B、插入突变C、缺失突变D、点突变E、基因扩增正确答案：D35、利用 DNA 芯片检测基因突变,杂交条件应:A、短时间内、低盐、高温条件下的高严紧性杂交B、长时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交C、短时间内、高盐、高温条件下的低严紧性杂交D、短时间内、低盐、低温条件下的高严紧性杂交E、短时间内、低盐、高温条件下的低严紧性杂交正确答案：A36、母亲血浆中的胎儿 DNAA、占母亲血浆总 DNA 的 50%以上B、可用于检测胎儿从母亲遗传而来的线粒体 DNA 突变C、确定 RhD 阳性孕妇所怀胎儿的 RhD 情况D、确定胎儿是否从母亲遗传了 X 连锁的基因突变E、血友病 A 的产前诊断正确答案：C37、最能直接反映生命现象的是:A、蛋白质组B、基因组C、mRNA 水平D、糖类E、脂类正确答案：A38、重复序列通常只有 1~6bp,重复 10~60 次并呈高度多态性的 DNA 序列称为A、微卫星 DNAB、小卫星 DNAC、cDNAD、高度重复顺序 DNAE、单拷贝顺序 DNA正确答案：B39、为封闭非特异性杂交位点,可在预杂交液中加入A、ssDNAB、1×SSCC、10×SSCD、5×TBECE、50×TAE正确答案：A40、探针基因芯片技术的本质就是A、基因重组技术B、聚合酶链反应技术C、蛋白质分子杂交技术D、核酸分子杂交技术E、酶切技术正确答案：D41、引起亨廷顿舞蹈病的突变形式是:A、错义突变B、无义突变C、RNA 剪接突变D、插入缺失突变E、动态突变正确答案：E42、珠蛋白基因的碱基由 G 突变为 C 时,造成的突变称为A、密码子缺失或插入B、单个碱基置换C、融合基因D、移码突变E、片段缺失正确答案：B43、双链 DNA 的 Tm 值主要与下列哪项有关( )A、A-T 含量B、G-T 含量C、A-G 含量D、T-G 含量E、C-G 含量正确答案：E44、下列不是片段性突变引起原因的是A、基因重排B、碱基插入C、碱基缺失D、碱基扩增E、转录异常正确答案：E45、5’-末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是A、T4 多聚核苷酸激酶B、末端转移酶C、AKPD、DNA polⅠE、DNA pol正确答案：A46、下列不属于 SNP 检测技术特点的是( )A、密度低B、易实现分析的自动化C、密度高D、遗传稳定性E、富有代表性正确答案：A47、关于核酸探针的描述下列不正确的是A、可以是 DNAB、可以是 RNAC、可用放射性标记D、可用非放射性标记E、必须是单链核酸正确答案：E48、基因多态性连锁分析中,第一、二、三代遗传标记分别是A、RFLP、SSCP、STRB、RFLP、SNP、STRC、RFLP、STR、SNPD、VNTR、SSCP、SNPE、VNTR、STR、RFLP正确答案：C49、结核分支杆菌的基因组特征是A、单链 DNAB、双链 DNAC、单正链 RNAD、单正链 RNA 双聚体E、单负链 RNA正确答案：B50、要制订一个能够简洁准确的 DNA 测序方案,首先应考虑A、DNA 片段大小B、测序方法C、实验条件D、测序目的E、测序时间正确答案：E51、由于突变使编码密码子形成终止密码,此突变为:A、终止密码突变B、错义突变C、移码突变D、同义突变E、无义突变正确答案：E52、关于荧光原位杂交技术叙述不正确的是( )A、可以用于基因定位B、可以用于遗传病的产前诊断C、用放射性核素标记探针D、用荧光素标记探针E、无需经过核酸的提取正确答案：C53、以下不属于 DNA 分析检测技术的是A、基因芯片B、ASO 杂交C、Northern blotD、RFLP 分析E、PCR正确答案：C54、荧光定量 PCR 检测核酸量的时间段在A、非指数期B、PCR 反应的最初阶段C、PCR 反应最后的时间阶段D、指数期的起始阶段E、指数期的终末阶段正确答案：D55、线粒体糖尿病属于A、2 型糖尿病B、妊娠期糖尿病C、型糖尿病D、特殊类型糖尿病E、新发现的第 5 种糖尿病正确答案：D56、单基因遗传病诊断最重要的前提是A、了解相关基因的染色体定位B、了解患者的家族史C、了解相关基因的基因克隆和功能分析等知识D、进行个体的基因分型E、疾病表型于基因关系已阐明正确答案：B57、DNA 双螺旋之间氢键断裂,双螺旋解开,DNA 分子成为单链,这一过程称A、变性B、复性C、复杂性D、杂交E、探针正确答案：A58、关于带正电荷尼龙膜的描述下列不正确的是A、可结合 DNAB、可结合 RNAC、对盐浓度要求不高D、核酸可通过 UV 交联共价结合E、本底较低正确答案：E59、下述序列中,在双链状态下属于完全回文结构的序列是A、AGTCCTGAB、AGTCAGTCC、AGTCGACTD、GACTCTGAE、ACTCGACT正确答案：C60、规范化的临床基因扩增检验实验室工作区域不包括A、产物分析区B、标本制备区C、试剂储存和准备区D、隔离区E、扩增区正确答案：D61、PCR 反应过程中,退火温度通常比引物的 Tm 值A、低5℃B、低15℃C、高5℃D、高15℃E、相等正确答案：A62、不是自动 DNA 测序仪主要系统之一的是A、测序反应系统B、电泳系统C、荧光检测系统D、探针荧光标记系统E、电脑分析系统正确答案：D63、转录依赖扩增系统与其他 PCR 技术的区别是A、模板是 RNAB、模板是 DNAC、引物是 RNAD、模板和产物都是 RNAE、需要热循环正确答案：D64、PCR 反应体系的描述错误的是A、模板B、一条引物C、dNTPD、DNA 聚合酶E、缓冲液正确答案：B65、核酸探针不可用什么标记A、生物素标记B、抗体标记C、地高辛标记D、荧光标记E、放射性核素标记正确答案：B66、一位男性血友病患者,他亲属中不可能是血友病的是A、外甥或外孙B、姨表兄弟C、叔、伯、姑D、外祖父或舅父E、同胞兄弟正确答案：C67、线粒体基因组编码几种 rRNAA、22 种B、20 种C、18 种D、3 种E、2 种正确答案：E68、以下关于原癌基因说法不正确的是A、普遍存在于人类或其他动物细胞基因组中的一类基因B、在生物进化过程中不稳定C、在控制细胞生长和分化中起重要作用D、容易在多种因素作用下激活成活性形式的癌基因E、活性形式的癌基因才引起细胞癌变正确答案：B69、关于点样法进行 DNA 芯片制备不正确的是A、直接在芯片上用四种核苷酸合成所需探针的 DNA 芯片制备技术B、通过高速点样机直接点样C、多用于大片段 DNA 探针的芯片制备D、成本低E、速度快正确答案：A70、关于 mtDNA 的描述正确的是A、结构基因编码 mtDNA 复制所需的酶、调控蛋白、NADH 氧化还原酶、ATP 酶等B、重链有编码功能,轻链无编码功能C、含 22 个结构基因D、含 tRNA 基因,可转录 22 种 tRNA,以满足线粒体内蛋白质翻译的需要E、含 rRNA 基因,编码 2 种 rRNA,即 12SrRNA 和 18SrRNA正确答案：D71、原核生物基因组特点不应包括:A、重复序列B、断裂基因C、插入序列D、转录产物为多顺反子E、操纵子结构正确答案：B72、开展耳聋基因诊断有重要临床意义,但不包括A、可作为听力筛查的一个有效辅助手段B、可以预测耳聋疾病的病情和预后C、可以了解患者发生耳聋的分子病因D、可以预测下一代出现耳聋的概率E、可作为有效治疗耳聋的手段之一正确答案：E73、关于非放射性探针标记,下列描述不正确的是A、可长时间使用B、目前应用的非放射性标志物都是抗原C、对人体危害小D、酶促显色检测最常使用的酶是碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶E、灵敏度不如放射性探针正确答案：B74、唯一一个在结肠上皮增殖过程中起看门作用的基因是A、MCC 基因B、DCC 基因C、APC 基因D、p53 基因E、HNPCC 基因正确答案：C75、用于基因定位的技术是:A、荧光定量 PCR 技术B、PCR-RFLP 技术C、PCR 微卫星检测技术D、原位杂交技术E、cDNA 表达芯片技术正确答案：D76、影响 DNA 分离纯化效果的是A、材料新鲜,低温保存B、加核酸酶抑制剂C、剧烈震荡D、除净蛋白质E、除净多糖正确答案：C77、PCR-SSCP 描述中错误的是A、检测核酸点突变的技术B、需制备成单链 DNAC、根据空间构象由 DNA 的碱基组成决定的原理D、不需电泳E、敏感性与待分离 DNA 的长度有关正确答案：D78、最早发现与 mtDNA 突变有关的疾病是A、肿瘤B、Leber 遗传性视神经病C、糖尿病D、耳聋E、MELAS 综合征正确答案：B79、DCC 基因突变的主要方式不包括A、等位基因杂合性缺失B、5’端纯合性缺失C、3’端纯合性缺失D、DCC 基因过甲基化E、外显子的点突变正确答案：C80、HBV DNA 中最小的一个开放阅读框是A、P 基因区B、S 基因区C、X 基因区D、前 S 基因区E、C 基因区正确答案：C81、基因诊断间接方法不包括A、基于 SNP 的单倍型分析B、Southern blotC、基于 STR 的微卫星分析D、PCR-RFLPE、RFLP 连锁分析正确答案：B82、双脱氧终止法测定核酸序列时,使用 ddNTP 的作用是:A、作为 DNA 合成的正常底物B、形成特异性终止链C、标记合成的 DNA 链D、使电泳时 DNA 易于检测E、使新合成的 DNA 链不易形成二级结构正确答案：B83、下列叙述不正确的是A、F 质粒的主要特征是带有耐药性基因B、R 质粒又称抗药性质粒C、Col 质粒可产生大肠杆菌素D、F 质粒是一种游离基因E、F 和 ColE1 质粒可以在同一菌株内稳定共存正确答案：A84、关于梅毒螺旋体的实验室检测,下列描述正确的是A、诊断梅毒的传统方法是体外培养B、分子生物学方法是耐药基因分析和流行学研究的首选方法C、镜检法简便,特异性高,但不能用于皮肤黏膜损害的早期诊断D、分子生物学方法不能早期诊断梅毒感染E、血清学检查普遍用于梅毒的筛查、疗效观察和流行病学检查,对早期梅毒诊断敏感正确答案：B85、转录依赖扩增系统的描述错误的是A、以 RNA 为模板B、首先由靶 RNA 合成 DNA 拷贝C、再由 DNA 转录生成大量 RNA 拷贝D、产物为 DNAE、为等温扩增正确答案：D86、次氯酸钠去除临床分子生物学实验室污染源的原理是A、诱导同一 DNA 链上相邻的两个嘧啶之间形成嘧啶二聚体B、氧化损伤核酸C、水解核酸D、与扩增产物的嘧啶碱基形成单加成环丁烷衍生物E、与胞嘧啶形成羟氨基胞嘧啶正确答案：B87、首个被证实和克隆的乳腺癌易感基因是A、BRCA1B、BRCA2C、c-erbB-2/HER2D、ATME、p53正确答案：A88、一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值多少度A、10~15℃B、30~40℃C、40~50℃D、5~10℃E、15~25℃正确答案：E89、有下列哪项指征者应进行产前诊断A、夫妇之一有致畸因素接触史的B、习惯性流产的孕妇C、夫妇之一有染色体畸变的D、35 岁以上高龄的E、以上都是正确答案：E90、关于真菌,以下描述正确的是A、真菌种类繁多,其中大多数对人类有害B、浅部真菌感染对治疗有顽固性,对机体的影响相对较小C、近年真菌病的发病率有明显下降趋势D、病原性真菌根据其入侵组织部位深浅的不同分为浅部真菌和内部真菌E、真菌感染对人体的危害不大正确答案：B91、基因芯片技术的主要步骤不包括( )A、酶切分析B、芯片的设计与制备C、杂交反应D、信号检测E、样品制备正确答案：A92、在如下情况时,可考虑通过基因连锁分析进行分子生物学检验A、基因结构变化未知B、基因点突变C、基因插入D、基因缺失E、基因表达异常正确答案：A93、线粒体基因突变不包括A、mtDNA 拷贝数的变异B、碱基突变C、插入D、缺失E、重复序列增多或减少正确答案：E94、引起急性移植排斥反应最重要的抗原是A、ABO 血型抗原B、HLA 抗原C、超抗原D、异嗜性抗原E、Rh 血型抗原正确答案：B95、人类可遗传的变异中最简单、最常见的一种是( )A、RFLPB、VNTRC、STRD、SNPE、CNV正确答案：D96、大多数质粒在自然状态下是( )A、线性双链 DNAB、线性单链 DNAC、线性单链 RNAD、环状双链 DNAE、环状单链 DNA正确答案：D97、单核苷酸多态性检测芯片探针的设计不正确的是( )A、一般采用等长移位设计法B、包括与靶序列完全匹配的野生型探针C、三种不同的单碱基变化的核苷酸探针D、靶序列与探针完全匹配的杂交点显示较弱的荧光信号E、可以对某一段核酸序列所有可能的 SNPs 位点进行扫描正确答案：D98、杂交时的温度与错配率有关,错配率每增加 1%,则 Tm 值下降A、3~3.5℃B、0.5℃C、4~4.5℃D、2~2.5℃E、1~1.5℃正确答案：E99、电脑显示和打印出的 DNA 碱基序列图谱中不出现的颜色:A、紫B、蓝C、绿D、黄E、红正确答案：A100、常见基因芯片合成的两大类方法是( )A、原位合成和在片合成B、分子印章多次压印合成和在片合成C、原位合成和直接点样D、光引导原位合成和喷墨合成E、离片合成和直接点样正确答案：C。
地高辛标记dna探针原理
地高辛标记dna探针原理
地高辛标记DNA探针是一种通过标记染色体上的特定DNA序列用于鉴定、检测和定位目标DNA的技术。
其原理主要涉及两方面，一是DNA杂交，二是标记检测。
首先，标记DNA探针通过与目标DNA发生杂交反应，将DNA探针上的特定DNA序列与目标DNA上的互补序列结合，使探针与靶标DNA 形成双链DNA杂交物。
这种杂交反应通常在高温下进行，以便将DNA 双链分离，随后在低温下进行，以便使探针和目标DNA结合。
其次，标记检测通过将探针的DNA序列与荧光染料等标记物进行连接，以获得可见的信号。
在探针杂交反应后，如果探针成功与目标DNA结合，则标记物也会随之结合，反之则不会结合。
通常通过显微镜或荧光成像系统观察标记信号来确定目标DNA的存在。
因此，地高辛标记DNA探针的原理主要基于DNA杂交和标记检测技术，可以用于检测和定位目标DNA，为分子生物学等领域的研究提供了有力的支持。
地高辛标记及检测试剂盒说明书
仅仅研究于生命科学，不适合在诊断过程使用只能在体外使用地高辛DNA标记和检测试剂盒1和NBT/BCIP一起用于颜色检测通过酶联免疫法采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记和检测货号：11 745 832 910此试剂盒储存条件-15o C—-25o C此试剂盒可对10ng-3ugDNA进行12次标记反应可检测100cm2面积的杂交膜24张指导手册2009.11版1前言1.1内容表1前言 (2)1.1内容表 (2)1.2试剂盒内容 (3)2简介 (5)2.1产品概述 (5)3步骤和所需材料 (8)3.1开始之前 (8)3.2地高辛DNA标记 (9)3.3 标记效率的测定 (11)3.4 DNA 的转移和固定 (14)3.5杂交 (16)3.6免疫检测 (18)3.7 DNA印记的洗脱和再杂交 (20)4结果 (21)4.1典型的结果 (21)5附录 (23)5.1故障排除 (23)5.2引用 (24)5.3订购信息 (25)1.2 试剂盒内容附加仪器与所需试剂除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。
在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。
*标记的产品可以从Roche Applied Science 获得2 介绍2.1 产品概况实验原则此试剂盒采用地高辛（DIG），一种甾类半抗原，去标记DNA探针从而通过酶免疫分析应用地高辛标记DNA探针可以用于：所有类型的滤膜杂交总基因组DNA中单拷贝基因的检测，甚至对于高度复杂的生物也可以进行检测，如人，大麦和小麦。
样品材料至少100bp的DNA片段线性的质粒，cos质粒或者λDNA超螺旋的DNA实验时间此表格列出了每一步实验所需的反应时间检测数量一个试剂盒足够用于：不超过3ug的模板DNA的12个标准的标记反应和100cm2有24个斑点的检测质量控制根据操作步骤中的描述，对未标记的对照品DNA（PBR328）进行标记，0.1pg同源DNA 在点杂交中通过16h的显色来检测（1pg同源DNA可以通过1小时的显色进行检测）。
[生物学]地高辛标记系统
![[生物学]地高辛标记系统](https://img.taocdn.com/s3/m/7cdf6708bceb19e8b8f6ba9d.png)
操作基本要求
工作环境及试剂要干净：（1）试剂要高 压灭菌；（2）含有SDS 的试剂要过滤灭 菌；（3）TWEEN20应加到预先灭菌过的 试剂中
用具要干净：用之前一定要清洗得非常干 净
操作尼龙膜时要小心（1）戴无尘手套； （2）用干净的镊子夹取膜的边缘
探针模板DNA的要求
质粒DNA纯度要高。最好用高纯度的质粒DNA 分离和纯 化试剂盒纯化质粒模板或用苯酚/氯仿抽提去除残留的蛋 白质。纯化后的模板用H2O 溶解
Antibody solution(Ab) solution : 将4#试剂离心，按1： 5000或1：10000加入Blocking solution，2-8 ºC可放12小 时。（每10ml Blocking solution 加1ul Ab抗体即可）.与 地高辛标记的探针结合。
Color-substrate solution（显色液）：从试剂 5#(NBT/BCIP)中取100ul到5ml Detection buffer，要避光， 现配现用。显示抗体结合的位点
120ºC固定30分钟或紫外交链3-5分钟 将膜放入装有20ml Maleic acid buffer 的塑料器皿中，室
温2分钟 将膜放入10ml Blocking solution中室温温育30分钟 将膜放入10ml Antibody solution 中室温温育30分钟 用10ml Washing buffer 洗2次，每次15分钟 在10ml Detection buffer 平衡2-5分钟 将膜放入2ml 新配制的Color substrate solution 中暗室条
为防止尼龙膜干燥，在准备好下一步处理用试剂 之前不要倒掉正在用的溶液
使用合适的探针浓度 探针用之前68ºC 变性 如果探针与靶DNA 的同源性低于80%，热洗时应
地高辛标记原理及步骤
斑点杂交实验【实验原理】用的高辛标记的HCV RNA探针检测HCV RT-PCR产物。
【实验步骤】1．处理：将尼龙膜浸泡于20×SSC中吸足液体后，夹在两层滤纸中37℃烘烤20—30 min。
（将尼龙膜置入烤箱后立即进行下一步操作）2．变性：将待测DNA样品（HCV经RT-PCR扩增产物；HBV的PCR扩增产物作为阴性对照，每组两种样品各10μL）置于PCR仪中100℃加热10min，立即置冰中，并置于-20℃冰箱中骤冷5min。
（每一排共三组的样品点在同一张尼龙膜上）【原理】使DNA样品变性，即双链DNA→单链DNA。
3．点样：将上述变性后的样品各2μL点在尼龙膜的毛面上，室温下风干后，于烤箱中120℃烘烤30 min。
【原理】使样品中的DNA与膜结合牢固。
4．预杂交：将杂交膜封入杂交袋中（每两组的膜背靠背封在一个杂交袋中），做好剪角标记（勿过大）。
用1000μL加样器，加入预杂交液（Dig Easy Hyb），每组5mL全部加完，使尼龙膜恰恰漂起即可，若5mL预杂交液不足，可适当补加。
除去气泡，置42℃恒温摇床上，轻轻振摇30min-60min。
【原理】封闭杂交膜上多余的非特异性DNA结合位点。
5．杂交液制备：用预杂交液将探针按100ng/mL浓度稀释，即为杂交液。
（已准备好）6．杂交：剪开杂交袋一个小角，倾去预杂交液，加入杂交液2-3mL，除去气泡，封口。
置50℃恒温摇床上，轻轻振荡过夜。
7．洗膜：（1）回收杂交液；（2）室温下，用2×wash solution洗膜两次，每次5min；（3）将0.1×wash solution预热到50℃洗膜两次，每次15min。
【原理】洗去未结合的探针，否则会导致过高的本底。
8. 封闭：取出膜，在含有30mL BufferⅠ的培养皿中浸泡1分钟平衡后，转入30mL BufferⅡ中，室温作用30-60min。
【原理】封闭杂交膜上非特异性的蛋白结合位点。
地高辛标记原理及步骤
斑点杂交实验【实验原理】用的高辛标记的HCV RNA探针检测HCV RT-PCR产物。
【实验步骤】1．处理：将尼龙膜浸泡于20×SSC中吸足液体后，夹在两层滤纸中37℃烘烤20—30 min。
（将尼龙膜置入烤箱后立即进行下一步操作）2．变性：将待测DNA样品（HCV经RT-PCR扩增产物；HBV的PCR扩增产物作为阴性对照，每组两种样品各10μL）置于PCR仪中100℃加热10min，立即置冰中，并置于-20℃冰箱中骤冷5min。
（每一排共三组的样品点在同一张尼龙膜上）【原理】使DNA样品变性，即双链DNA→单链DNA。
3．点样：将上述变性后的样品各2μL点在尼龙膜的毛面上，室温下风干后，于烤箱中120℃烘烤30 min。
【原理】使样品中的DNA与膜结合牢固。
4．预杂交：将杂交膜封入杂交袋中（每两组的膜背靠背封在一个杂交袋中），做好剪角标记（勿过大）。
用1000μL加样器，加入预杂交液（Dig Easy Hyb），每组5mL全部加完，使尼龙膜恰恰漂起即可，若5mL预杂交液不足，可适当补加。
除去气泡，置42℃恒温摇床上，轻轻振摇30min-60min。
【原理】封闭杂交膜上多余的非特异性DNA结合位点。
5．杂交液制备：用预杂交液将探针按100ng/mL浓度稀释，即为杂交液。
（已准备好）6．杂交：剪开杂交袋一个小角，倾去预杂交液，加入杂交液2-3mL，除去气泡，封口。
置50℃恒温摇床上，轻轻振荡过夜。
7．洗膜：（1）回收杂交液；（2）室温下，用2×wash solution洗膜两次，每次5min；（3）将0.1×wash solution预热到50℃洗膜两次，每次15min。
【原理】洗去未结合的探针，否则会导致过高的本底。
8. 封闭：取出膜，在含有30mL BufferⅠ的培养皿中浸泡1分钟平衡后，转入30mL BufferⅡ中，室温作用30-60min。
【原理】封闭杂交膜上非特异性的蛋白结合位点。
地高辛标记系统
随机引物标记
利用随机引物标记的方法将 Digoxigenin11-dUTP掺入到新合成的DNA 链中。 反应体系中包含六碱基随机引物、dNTP(含 有碱性条件下不稳定的Digoxigenin-11dUTP，Klenow 酶及反应所需的Buffer
DIG-dUTP:dTTP的理想比例1：3 20-25bp 可插入一个DIG-dUTP 随机引物法标记的探针是基于模板的不同 区段、不同长度的DNA 片段 可以探测0.03-0.1pgDNA
备注：
含有探针的DiG Easy Hyb杂交液可重复 利用，杂交结束后放入离心管中于-20 ºC 保存，可重复使用几次，只需在使用前 于68 ºC处理10分钟即可 不要煮沸DiG Easy Hyb杂交液
定量结果分析
染色至0.1pg的Control DNA出现斑点，比较 标记的探针与Control DNA 染色情况计算出 地高辛标记的DNA 的量。
如果0.1pg的探针及对照稀释点都显色，则探针标记理想 如果0.1pg的对照显色， 0.1pg的标记探针没显色，但0.3pg显 色，则计算探针浓度（约为理想浓度的1/3）以确定杂交时加多 少探针（25ng探针/ml杂交液） 如果0.1pg的对照显色，但标记探针0.3pg的斑点没显色，则 应重新标记探针
地高辛标记与检测的原理
利用不同的方法将Digoxigenin-11-dUTP掺入到新 合成的探针DNA 或RNA链中或寡核苷酸的末端 探针与目标DNA杂交后，用连接有碱性磷酸酶或 其它偶联物的地高辛的抗体检测地高辛标记的探 针 根据地高辛抗体连接的偶合物不同，利用荧光检 测（anti-DIG-fluorescein，rhodamine)、化学发 光检测(anti-DIG-AP and CSPD or CPD-star)或显 色（anti-DIG-AP and NBT/BCIP or other substrates))的方法将探针杂交的位置显现出来
分子生物学常用的各种技术项目举例
环境。
溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，
尽量减少台面污染。
凝胶电泳原理-EB染色
核酸电泳的指示剂
• 核酸电泳常用的指示剂有两种：
•
⑴ 溴酚蓝
•
⑵ 二甲苯青，
溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；
二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝青色，它 携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移 率比溴酚蓝慢。
分子生物学常用技术
3.1 凝胶电泳技术 3.2 分子杂交技术 3.3 P凝胶电泳技术
凝胶电泳(Gel electrophoresis)是分子克隆的中 心技术之一。
1. 琼脂糖凝胶用于分离200~1000bp的片段；
操作简单、快速，且分离范围广，分辨率高 2. 聚丙烯酰胺凝胶用于分离5~500bp的片段；
1. 放射性核素的标记 （1）切口平移法：该技术由Kelly等于1970年创立。是目前最常用 的一种脱氧核糖核酸的探针标记法。是利用大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 的多种酶促活性将标记的dNTP掺入到新形成的DNA链中去，从而 合成高比活的均匀标记的DNA探针。线状、超螺旋及带缺口的双链 DNA匀可作为模板。首先，极微量的DNaseⅠ在Mg2+的存在下，在 DNA链上随机形成单链切口。利用大肠杆菌DNA聚合酶的5`→3′核 酸外切酶活性在切口处将从旧链5`—末端逐步切除。同时，在DNA 聚合酶Ⅰ的5`→3′聚合酶活性的催化下，
基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探 针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针， cDNA探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。 1.基因组DNA探针： DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百 碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。
地高辛标记核酸探针的标记方法
地高辛标记核酸探针的标记方法地高辛标记核酸探针的标记方法核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。
最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。
而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。
近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。
另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。
在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。
由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。
与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度，却减少了非特异性结合的地高辛检测系统，已为人们所接受,并得到广泛的应用。
地高辛(Digoxigenin ,DIG) 又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。
其化学结构如图1 所示。
采用人工方法可以将地高辛的线型间隔臂与dUTP 连接起来,形成DIG-11-dUTP，通过随机引物法或PCR法将其掺入到DNA探针中。
RNA探针的标记是使用噬菌体信息编码的RNA聚合酶，通过体外转录将DIG-11-dUTP掺入到RNA探针中。
寡核苷酸探针的标记则是通过末端转移酶催化，在3,末端加上DIG-11-dUTP/dATP 或DIG-11-ddUTP 尾巴。
对于目的DNA 或RNA 来说，分子杂交后,杂交部分可通过ELISA 实验程序加以检测，即加入一种结合有碱性磷酸酶的地高辛-特异性抗体，它与地高辛半抗原分子形成酶联抗体-半抗原(DIG) 复合物，再加入相应的显色底物，使杂交部分得以显示。
地高辛标记与检测DNA试剂盒说明书
地高辛标记与检测D N A试剂盒DIGDNALabelingandDetectionKit采用地高辛-dUTP进行随机引物DNA标记，碱性标记，利用NBT/BCIP酶联免疫，随时即用。
此试剂盒可对10ng-3μgDNA进行25次标记反应，可检测10×10cm2面积的杂交膜50张指导手册1前言1.1内容表1前言1.1内容表1.2试剂盒成分2.介绍2.1产品简介3.操作步骤和所需材料3.1在你开始前3.2流程图3.3地高辛标记DNA3.4标记效率的确定3.5DNA的转移和固定3.6杂交3.7免疫检测3.8DNA印记的洗脱和再杂交1.2试剂盒的成分瓶号标记内容包括功能1 无标记对照DNA12 无标记对照DNA23 DNA稀释缓冲液2管1mL50μg/mL鱼精DNA,10mMTris-HCl,1mMEDTA,pH8.0在25℃澄清溶液4 DIG标记的对照DNA20μL5μg/mL质粒pBR328DNA（用BamHI线性化）澄清溶液用于确定标记效率5 六聚核苷酸混合物6 标记用混合物7 DNA聚合酶1大片段标记级8 抗地高辛的碱性磷酸酶结合物200μL750U/mL从羊中获取的，Fab段，结合碱性磷酸酶澄清溶液9 NBT/BCIP10 封阻试剂附加仪器与所需试剂除了上表中列出的试剂外，你必须准备一些溶液。
在下表中，你可以找到不同操作程序需要准备的设备概要。
在每个操作程序的前面提供了详细的信息。
操作程序仪器设备试剂3.3DIG-DNA标记水浴灭菌的双蒸水0.2MpH8.0灭菌的EDTA3.4标记效率的半定量带正电荷的尼龙膜* 地高辛洗涤和封阻缓冲组合*TE缓冲液或者洗涤缓冲液马来酸缓冲液检测缓冲液3.5DNA转移和固定紫外光盒或者商业化可用于紫外交联的其他设备2×SSC或者10×SSC3.6杂交尼龙膜，带正电荷*杂交袋*，或者耐热的塑料袋或者滚筒瓶（分子杂交炉）注意：当用地高辛杂交缓冲液工作时，不要用开口的托盘。
地高辛标记原理及步骤
地高辛标记原理及步骤地高辛（Digoxin）是一种植物来源的药物，常用于治疗心脏病和心律失常。
在临床实验室中，地高辛也可用于标记其他物质，以便进行研究和诊断。
本文将介绍地高辛标记的原理及步骤。
一、地高辛标记的原理地高辛标记是一种共价标记方法，通过将地高辛与待标记物质结合，使其能够被检测出来。
该方法基于地高辛的特殊结构和与其他物质之间的化学反应。
地高辛的结构包含一个呈环状的核苷苷酸结构，其中有一个活性位点。
这个活性位点可以与其他分子中的羟基或氨基等活性基团发生化学反应。
在地高辛标记中，我们利用这个活性位点将地高辛与待标记物质连接起来。
二、地高辛标记的步骤1. 准备地高辛标记试剂首先，我们需要准备地高辛标记的试剂，包括地高辛分子和反应条件。
根据不同的实验需要，地高辛可以选择单独标记或与其他分子共同标记。
2. 标记反应的进行将待标记物质与地高辛标记试剂加入反应体系中，控制好反应时间和温度。
反应条件的选择需要根据实验的具体要求来确定。
3. 纯化标记产物完成标记反应后，需要对反应产物进行纯化，以去除未反应的地高辛和其他杂质。
常见的纯化方法包括色谱层析、电泳等。
4. 检测标记效果对纯化后的标记产物进行检测，确定地高辛与待标记物质的结合情况。
常用的检测方法包括光谱分析、质谱分析、核磁共振等。
5. 应用标记产物纯化并验证了标记产物后，可以将其应用到相应的实验或诊断中。
根据实验的目的和需求，地高辛标记产物可以被用于免疫染色、荧光探针等多个领域。
总结：地高辛标记是一种常用的药物标记方法，其原理是通过地高辛与待标记物质的共价结合。
标记步骤包括准备试剂、标记反应、纯化产物、检测效果和应用标记产物。
掌握地高辛标记原理及步骤对于科研和临床实验室中的药物研究和诊断具有重要意义。
地高辛标记核酸探针的标记方法
地高辛标记核酸探针的标记方法地高辛标记核酸探针的标记方法核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。
最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。
而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。
近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。
另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。
在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。
由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。
与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度，却减少了非特异性结合的地高辛检测系统，已为人们所接受,并得到广泛的应用。
地高辛(Digoxigenin ,DIG) 又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。
其化学结构如图1 所示。
采用人工方法可以将地高辛的线型间隔臂与dUTP 连接起来,形成DIG-11-dUTP，通过随机引物法或PCR法将其掺入到DNA探针中。
RNA探针的标记是使用噬菌体信息编码的RNA聚合酶，通过体外转录将DIG-11-dUTP掺入到RNA探针中。
寡核苷酸探针的标记则是通过末端转移酶催化，在3,末端加上DIG-11-dUTP/dATP 或DIG-11-ddUTP 尾巴。
对于目的DNA 或RNA 来说，分子杂交后,杂交部分可通过ELISA 实验程序加以检测，即加入一种结合有碱性磷酸酶的地高辛-特异性抗体，它与地高辛半抗原分子形成酶联抗体-半抗原(DIG) 复合物，再加入相应的显色底物，使杂交部分得以显示。
ISH探针地高辛(digoxin) 生物素 (biotin) 一抗 二抗 显色系统
Avidin与Streptavidin的区别
Avidin是一种醣蛋白，被发现存在于鸡蛋卵白中，所以中文称之为「卵白素」，鸟类、爬虫类及两栖类的组织中亦存在。
Avidin 总分子量为 67,000 Daltons，由四个完全相同的次体 (subunit)所组成，每个次体皆能与一分子的 biotin 结合。
Avidin 含醣比例颇高，约占了总分子量的 10％。
其 pI＝10-10.5，溶于水及含盐溶液中。
Avidin 在相当广的温度及 pH 范围下皆很稳定。
Streptavidin 也是个由四个相同次体 (subunit)所组成的蛋白质，每个次体皆能与一分子的 biotin 结合，且其与 biotin 之键结亲和力相当于Avidin-biotin 之亲和力。
不过Biotin-Streptavidin 复合物对
于 guanidine.HCl 将两者分开的抗拒能力较Biotin-Avidin 还要强。
此外，Streptavidin 不含醣且具有酸性的pI = 5，正好与Avidin相反。
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DIG-dUTP:dTTP的理想比例1：3 20-25bp 可插入一个DIG-dUTP
随机引物法标记的探针是基于模板的不同 区段、不同长度的DNA 片段
可以探测0.03-0.1pgDNA
标记步骤(20µl)
将10ng-1µg 模板DNA用无菌去离子水补足至16µ l。 沸水浴或干浴98 ºC 10分钟，使DNA变性成单链并
Maleic acid buffer: 0.1M Maleic acid, 0.15M NaCl; adjust with NaOH(solid) to pH 7.5(20℃)0 15-25℃ stable. Dilution of Blocking solution.
Detection buffer: 0.1M Tris-HCl, 0.1M NaCl, pH 9.5(20℃). 15-25℃ stable. Ajustment of pH to 9.5.
用作探针模板的DNA应是线型的，大于100bp，如果模板 DNA >5kb则应用4碱基的限制性内切酶切割成较小片段 （切割后要纯化）
模板的量：10ng-3μg，如果要检测复杂基因组中的单拷贝 基因，标记模板的最低量要300ng（探针浓度：25ng/ml 杂交液）
如果做基因组DNA southern blotting, 应将克隆倒载体上 的DNA 酶切后琼脂糖电泳分离或PCR扩增，得到的片段 都需要用试剂盒纯化
操作基本要求
工作环境及试剂要干净：（1）试剂要高 压灭菌；（2）含有SDS 的试剂要过滤灭 菌；（3）TWEEN20应加到预先灭菌过的 试剂中
用具要干净：用之前一定要清洗得非常干 净
操作尼龙膜时要小心（1）戴无尘手套； （2）用干净的镊子夹取膜的边缘
探针模板DNA的要求
质粒DNA纯度要高。最好用高纯度的质粒DNA 分离和纯 化试剂盒纯化质粒模板或用苯酚/氯仿抽提去除残留的蛋 白质。纯化后的模板用H2O 溶解
迅速冰浴冷却。 充分混匀DiG-high Primer （1#管），并取4 µ l至
变性DNA管，混匀并离心。 37 ºC温育1小时或过夜（最大到不超过20小时）。 停止反应，加2 µ l 0.2M EDTA（pH 8.0）或65 ºC
加热10分钟。
本次实验标记步骤(10µl)
将300ng 模板DNA用无菌去离子水补足至8 µ l。 沸水浴或干浴98 ºC 10分钟，使DNA变性成单链
探针的标记
地高辛标记系统
常用标记物分类
放射性同位素标记
非放射性标记 荧光素标记 生物素标记 地高辛标记
地高辛（DIG）是灵敏度高、非放射性核酸 标记检测体系。DIG检测灵敏度接近同位素 而无放射性危险、相比荧光则不需要特殊 检测设备，相比生物素则没有样本内源干 扰之苦，很适合用于核酸非放标记检测。
地高辛标记的dUTP
地高辛标记系统的特点
标记和检测技术安全 标记的探针稳定可以保存一年 杂交液可以反复使用数次
与放射性同位素标记方法相同之处
标记和杂交技术相似 高灵敏度 低背景 可以标记DNA、RNA 或Oligonucleotides
与放射性同位素标记方法不同之处
无害,安全 产生的废物不需特殊处理 需要分析的时间短 探针稳定
TE buffer: 10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.0. 15-25℃ stable. Stopping color reaction.
试剂准备（2）
Blocking solution :用Maleic acid buffer 10×稀释试剂6# （10×Blocking solution ），成1×的工作液，即每9ml Maleic acid buffer中加入1ml 10×Blocking solution 混匀， 现配现用。封闭膜上非特异性结合位点
检测流程
将地高辛标记好的探针系列稀释，点到一 条尼龙膜上，同时用地高辛标记的control DNA作对照标准，120ºC固定30分钟；
用地高辛抗体免疫检测，按BNT/BCIP显色 步骤显色；
比较显色结果，选择带有可以接受的背景 的最高探针浓度做正式的杂交。
试剂准备（1）
Washing buffer: 0.1M Maleic acid, 0.15M NaCl; pH 7.5(20℃); 0.3%(v/v) Tween20. 15-25℃ stable. Removal of unbound antibody.
Antibody solution(Ab) solution : 将4#试剂离心，按1： 5000或1：10000加入Blocking solution，2-8 ºC可放12小 时。（每10ml Blocking solution 加1ul Ab抗体即可）.与 地高辛标记的探针结合。
地高辛标记与检测的原理
利用不同的方法将Digoxigenin-11-dUTP掺入到新 合成的探针DNA 或RNA链中或寡核苷酸的末端
探针与目标DNA杂交后，用连接有碱性磷酸酶或 其它偶联物的地高辛的抗体检测地高辛标记的探 针
根据地高辛抗体连接的偶合物不同，利用荧光检 测（anti-DIG-fluorescein，rhodamine)、化学发 光检测(anti-DIG-AP and CSPD or CPD-star)或显 色（anti-DIG-AP and NBT/BCIP or other substrates))的方法将探针杂交的位置显现出来
并迅速冰浴冷却。 充分混匀DiG-high Primer （1#管），并取2 µ l
至变性DNA管，混匀并离心。 37 ºC温育1小时或过夜（最大到不超过20小
时）。 停止反应，65 ºC加热10分钟。
探针标记效率检测
目的是确定杂交中使用正确的探针量，探 针用量太多会引起背景太深，用量太少则 无杂交或杂交很弱
随机引物标记
利用随机引物标记的方ຫໍສະໝຸດ 将 Digoxigenin11-dUTP掺入到新合成的DNA 链中。
反应体系中包含六碱基随机引物、dNTP(含 有碱性条件下不稳定的Digoxigenin-11dUTP，Klenow 酶及反应所需的Buffer
DNA的地高辛标记和检测步骤
探针DNA 的标记及标记效率测定 DNA的转移和固定 杂交 免疫测定 洗去膜上探针再次杂交