CELL-SELEX技术及其在白血病研究中的应用
什么是Cell-Based ELISA以及应用
1、Cell-Based ELISA 的优点：Cell-Based ELISA（基于细胞的ELISA）是一种全新的ELISA技术，有两个最突出的优点：1.1不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。
这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了实际情况。
同时不用包被微孔板，简化了实验流程，有助于提高效率。
科研人员在一个96 孔酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。
由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样本的损失也能降到最低，比起其他普通的ELISA 测定方法，这项全新的ELISA 技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。
1.2 可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。
同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，可以减少工作量，此外还可以满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。
2、Cell-Based ELISA 的两种技术：某些公司发展了双通道Cell-Based ELISA技术；双通道与单通道Cell-based ELISA比较：双通道cell-based ELISA，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白，R&D Systems提供的Cell-based ELISA就是双通道cell-based ELISA，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）；单通道cell-based ELISA，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通ELISA的主要区别在于样品处理过程：3、cell-based ELISA 的应用：该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量；4、有cell-based ELISA产品的公司：目前，多家elisa 产品提供商均提供cell based elisa 试剂盒，如Rnd systems， raybiotech， ebioscience，millipore 等公司；5、如何自己进行cell based elisa 实验？事实上，根据单通道的cell based elisa 原理，可以自己建立cell based elisa 实验系统；细胞加入培养板中；加入刺激物或者抑制剂进行培养；对细胞进行固定或者封闭；加入第一抗体；加入HRP 结合的二抗（二抗的选择，同western blot）；加入底物进行显色；。
SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析
SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析指数富集配体系统进化技术(Systematic evolution of legends by exponential enrichment SELEX)是一种能获取与靶分子高选择、高亲和力结合的寡核苷酸的筛选技术,制备出的产物被称为适配体(aptam-ersDlers)。
适配体安全、无毒,具备特殊的三维结构,确保了其可与靶分子高特异性的结合,并可进一步改变靶分子的生物活性和生命进程。
适配体最大优势是没有免疫原性,并且分子量小、可化学合成、稳定性强、易于修饰和标记,与传统化学方法和免疫学方法相比,具有无可比拟的优越性。
近年来在传统SEL-EX技术基础上,各类衍生SELEX技术也被不断发展和完善,被广泛应用在生命科学研究、生物医药等领域,特别是在疾病的诊断与治疗等方面,显示出广阔的应用前景。
目前已有几种适配体诊断技术和适配体药物进入到了临床试验或临床应用阶段。
1 SELEX技术简介1. 1筛选过程SELEX技术依据分子生物学的原理,首先人工构建一个随机寡核苷酸文库,随机核苷酸序列的长度为20-40bp左右,所包含的不同种立体构象,几乎可以涵盖自然界存在的所有种类的靶分子。
将靶标物质与随机文库在一定条件下进行混合,形成文库洋巴标复合物,把未结合的核酸洗脱掉,富集与靶物质结合的核酸分子,以后者为模板进行PC R扩增,得到的产物经分离纯化后,作为进行下一轮筛选的模板。
如此反复,通过多轮(8-15轮)筛选,与靶标不结合或亲和性弱的核酸分子被充分去除,而与靶分子亲和性强的核酸分子被分离出来,同时其纯度随着筛选轮数的增加而增加。
最后筛选到的文库要经过克隆测序和特异性修饰,经过这些步骤后,所获得的特异识别靶分子的核酸才是适配体。
1.2优势和特点1)亲和力高、特异性强。
适配体与靶标之间,凭借彼此互补的三维结构,相互作用后形成牢固稳定的复合物,其解离常数通常能达到pmol/L-nmol/L的水平,并且能分辨出靶标结构上细微的差别。
SELEX 技术及其在肿瘤诊治中的应用进展
SELEX 技术及其在肿瘤诊治中的应用进展摘要】指数式扩增配体的系统进化 (Systematic evolution of ligands by exponential enrichment SELEX) 技术是一类新的体外组合化学筛选技术，通过它能获得高效地与多靶物质特异性结合的单链或双链寡核苷酸适配子(aptamer)，目前已广泛应用于肿瘤的诊断与治疗中。
SELEX 技术获得的适配子与蛋白质类抗体相比具有多种优势，展现出了在肿瘤诊断和治疗方面的极大潜能。
本文主要就SELEX 技术在肿瘤诊断和治疗两方面的应用进展作一综述。
【关键词】 SELEX 技术；核酸适配子；肿瘤诊断；肿瘤治疗指数式扩增配体的系统进化技术(Systematicevolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)是一项由Ellingtong 和Tuerk[1,2]在20 世纪90 年代初建立的体外组合化学筛选技术，由其获得的核酸适配子(aptamer)，是一段具有明确三级构象的短的单链或双链寡核苷酸序列，即DNA(ssDNA、dsDNA)或RNA。
核酸适配子的出现，改变了人们对核酸只能做遗传物质的传统认识，利用核酸结构的多样性，可使核酸适配子高效、特异地结合各种与之空间构象互补的靶分子。
利用SELEX技术筛选获得适配子识别靶分子的模式与抗体类似，但与蛋白质类抗体相比，核酸类适配子具有更多的优越性，如结合力强、亲和力高、特异性好、库容量大、靶分子范围广等[3]。
这些特性使得核酸适配子在疾病的诊断与治疗领域成为更为有效的工具。
1 SELEX 技术的基本原理SELEX 过程包括以下几个步骤[4]：①构建文库：在体外人工构建一个含有1012～1015 个随机寡核苷列文库，随机寡核苷酸片段的长度一般为20～40bp；②筛选、分离：在适宜条件下,使随机单链寡核苷酸序列与靶分子相互作用，分离出与靶分子特异结合的寡核苷酸序列；③扩增：PCR 扩增特异结合的寡核苷酸适配子，用作新一轮筛选。
白血病干细胞的研究及治疗的新进展
白血病干细胞的研究及治疗的新进展
白血病是一种常见的恶性肿瘤，由于其发病机制复杂，治疗难度大，一直是医
学研究的热点之一。
白血病的治疗主要靠化疗和放射治疗，然而这些方法虽然能够一定程度上控制白血病的发展，但是它们对正常细胞的伤害也非常大。
干细胞治疗是近年来一种非常热门的治疗方法，特别是对于白血病这种疾病来说，干细胞疗法可以说是一个极具潜力的治疗方案。
事实上，在过去几年里，干细胞治疗已经成为白血病治疗领域的重头戏。
然而，在干细胞治疗中，白血病干细胞是一个非常重要的研究领域，也是干细
胞治疗的主要难点之一。
白血病干细胞具有极强的繁殖能力和自我更新能力，这些特性是化疗和放射治疗难以克服的。
近年来，研究人员在白血病干细胞研究和治疗方面取得了一些令人鼓舞的成果。
例如，研究人员利用干细胞技术成功地使白血病干细胞分化为正常的血细胞。
此外，许多研究人员正在围绕白血病干细胞进行药物筛选，并取得了一些显著的结果。
此外，干细胞移植也是治疗白血病的一个有效方法。
干细胞移植是指将捐献者
的干细胞移植到患者体内，以替代癌细胞。
在这种治疗方案中，白血病干细胞是被彻底清除的，从而达到治疗效果。
总的来说，白血病干细胞的研究和治疗是一个极其重要的领域，目前尚存在许
多困难和挑战。
但是，随着科技的发展和研究的深入，相信我们一定能够取得更多的突破，为治疗白血病这种疾病做出重要的贡献。
毛细管区带电泳表征不同细胞与适配体Sgc8c相互作用
毛细管区带电泳表征不同细胞与适配体Sgc8c相互作用娄蓓蕾1 张璐1 孟朝阳1 孙欣1 屈锋1* 赵新颖1,21北京理工大学生命学院，北京 100812北京市理化分析测试中心，北京 100089核酸适配体是特异性结合目标分子（如金属小分子、RNA、DNA、蛋白质等）的寡核苷酸，通过体外SELEX（指数富集配基的系统进化）技术产生。
完整细胞的特异性核酸适配体可作为细胞探针。
高效筛选细胞适配体是细胞识别、药物传输、微生物检测以及肿瘤诊断与治疗相关研究的重要基础。
通过cell-SELEX方法，已经筛选出不同类型癌细胞（淋巴细胞白血病、髓细胞性白血病、肝癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌等癌症的癌细胞）的多种探针[1]。
其中Sga16（Kd= 5.00 ±0.52 nM）、Sgc8（Kd=0.80±0.09 nM）都是蛋白酪氨酸激酶-7的适配体，能特异的结合CCRF-CEM（人急性白血病细胞）细胞[2]。
Sgc8c是经过删减Sgc8的序列简化而来的碱基数最少，与目标细胞结合能力更高的适配体[3]。
Sgc8c与Jurkat 细胞[4]以及Sga16与其他14种癌细胞的相互作用[5]已有报道，但目前表征细胞与适配体相互作用多使用流式细胞术或荧光显微镜观察。
本工作基于简便快速的毛细管区带电泳，研究适配体sgc8c与四种不同类型细胞（人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat、人神经胶质瘤细胞U251、人宫颈癌细胞HeLa、人前列腺癌细胞PC3等）的相互作用，初步比较了适配体sgc8c与四种细胞的相互作用差异。
未经固定的活细胞（Jurkat、HeLa、U251、PC3）与sgc8c混合，通过CZE-LIF检测。
优化了上述细胞与适配体混合及相互作用的条件，并对CZE-LIF检测涉及的缓冲液种类、pH值、毛细管内径、分离电压等分别进行了考察。
将四种细胞分别与适配体在冰上孵育1小时，在优化的分析条件下检测到四种细胞和适配体的相互作用差异，通过统计细胞与适配体产生的复合物的峰面积进行适配体Sgc8c与四种细胞的相互作用强弱的比较（图1）。
Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体
Cell-SELEX技术筛选急性早幼粒细胞白血病NB4细胞适配体陈鑫;李卫滨;王开宇;兰小鹏【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2012(30)7【摘要】目的用以细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(Cell-SELEX)技术获得与急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4高亲和力、高特异性的适配体.方法以NB4细胞为靶标,用Cell-SELEX技术从随机单链DNA(ssDNA)文库中筛选出一组适配体,将筛选得到的适配体群进行克隆、测序及结合力测定,用流式细胞仪和荧光显微镜对结合率最高的适配体进行亲和力和特异性分析.结果第1,4,7,10,13,16,19轮筛选获得的次级文库与NB4细胞的结合率分别为(1.6％,3.8％,6.3％,11.4％,15.4％,19.9％,16.7％);第16轮筛选的21个阳性克隆菌测序结果表明,存在有3种高度富集的适配体,分别为CX1序列2个,CX5序列3个,CX9序列16个;流式细胞仪检测3种序列的结合率分别为9.7％,12.6％,17.2％;CX9的解离常数(Kd)为16.2 nmol/L;荧光显微镜下发现,CX9与NB4细胞结合的荧光强度高于K562细胞.结论用Cell-SELEX技术成功筛选到针对NB4细胞的适配体CX9,为荧光标记适配体快速鉴定APL提供实验依据.【总页数】4页(P518-521)【作者】陈鑫;李卫滨;王开宇;兰小鹏【作者单位】第二军医大学福州总医院临床医学院,福州350025;解放军第94医院检验科,南昌330002;南京军区福州总医院检验科,福州350025;南京军区福州总医院检验科,福州350025;第二军医大学福州总医院临床医学院,福州350025;南京军区福州总医院检验科,福州350025【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.Cell-SELEX筛选人骨肉瘤细胞MG-63核酸适配体的实验研究 [J], 翁艳;陈冬冬;涂少臣;周燕芸;张韬2.用于未纯化蛋白样品核酸适配体筛选的Western印迹-SELEX筛选技术的建立[J], 李慧;邵宁生;赵强;梁超;丁红梅;李洁;黄皑雪;苏雪婷;张令强;李少华3.基于cell-SELEX技术筛选高转移胃癌细胞系HGC-27核酸适配体 [J], 刘涛;王进军;方晓娜;何磊;杨伟丽;罗昭锋;王亚雷4.CELL-SELEX筛选膀胱癌核酸适配体的细胞学研究 [J], 平秦榕;李翀;梁剑伟;刘杨文易;雷容;王剑松;颜汝平5.基于Cell-SELEX技术的去势抵抗性前列腺癌细胞核酸适配体的筛选与鉴定 [J], 仲津漫;丁健科;邓蕾;向颖;刘朵朵;杨全新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析
SELEX技术的研究进展及在医学中的应用分析指数富集配体系统进化技术(Systematic evolution of legends by exponential enrichment SELEX)是一种能获取与靶分子高选择、高亲和力结合的寡核苷酸的筛选技术，制备出的产物被称为适配体(aptam-ersDlers)。
适配体安全、无毒，具备特殊的三维结构，确保了其可与靶分子高特异性的结合，并可进一步改变靶分子的生物活性和生命进程。
适配体最大优势是没有免疫原性，并且分子量小、可化学合成、稳定性强、易于修饰和标记，与传统化学方法和免疫学方法相比，具有无可比拟的优越性。
近年来在传统SEL-EX技术基础上，各类衍生SELEX技术也被不断发展和完善，被广泛应用在生命科学研究、生物医药等领域，特别是在疾病的诊断与治疗等方面，显示出广阔的应用前景。
目前已有几种适配体诊断技术和适配体药物进入到了临床试验或临床应用阶段。
1 SELEX技术简介1. 1筛选过程SELEX技术依据分子生物学的原理，首先人工构建一个随机寡核苷酸文库，随机核苷酸序列的长度为20-40bp左右，所包含的不同种立体构象，几乎可以涵盖自然界存在的所有种类的靶分子。
将靶标物质与随机文库在一定条件下进行混合，形成文库洋巴标复合物，把未结合的核酸洗脱掉，富集与靶物质结合的核酸分子，以后者为模板进行PC R扩增，得到的产物经分离纯化后，作为进行下一轮筛选的模板。
如此反复，通过多轮(8-15轮)筛选，与靶标不结合或亲和性弱的核酸分子被充分去除，而与靶分子亲和性强的核酸分子被分离出来，同时其纯度随着筛选轮数的增加而增加。
最后筛选到的文库要经过克隆测序和特异性修饰，经过这些步骤后，所获得的特异识别靶分子的核酸才是适配体。
1.2优势和特点1)亲和力高、特异性强。
适配体与靶标之间，凭借彼此互补的三维结构，相互作用后形成牢固稳定的复合物，其解离常数通常能达到pmol/L-nmol/L的水平，并且能分辨出靶标结构上细微的差别。
Cell_SELEX技术在肿瘤诊治中的应用进展_吕彬
＊Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ Ｍａｊｏｒ Ｓｔａｔｅ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｃｈｉｎａ （９７３Ｐｒｏｇｒａｍ，２０１０ＣＢ７３２４０５）ａｎｄ ｔｈｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１０ＸＤ１４００８００）．
蛋白质乃至整个细 胞 的 寡 聚 核 苷 酸 （几 十 个 碱 基 的 单链 ＤＮＡ 或 ＲＮＡ）。 大 小 一 般 小 于 １００ 个 碱 基， 多为１５～４０个碱 基，因 其 独 特 的 三 维 结 构，能 以 高 亲和力、高特 异 性 与 一 系 列 靶 物 质 结 合 。 ［１］ 核 酸 适
国 家 “９７３ 计 划 ”项 目 （２０１０ＣＢ７３２４０５）；上 海 科 委 优 秀 学 科 带 头 人 计 划 项 目 （１０ＸＤ１４００８００） △Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉｅｌｉｕ＠ｆｕｄａｎ．ｅｄｕ．ｃｎ
２２８
复 旦 学 报 （医 学 版 ） ２０１３ 年 ３ 月 ，４０（２）
Ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｃｅｌｌ－ＳＥＬＥＸ－ｂａｓｅｄ ａｐｔａｍｅｒｓ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ
ＬＹＵ Ｂｉｎ，ＺＨＡＮＧ Ｊｕｎ，ＤＵ Ｗｅｎ－ｑｉ，ＬＩＵ Ｊｉｅ△
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉａｇｅｓｔｉｖｅ ａｎｄ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｈｕａｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００４０，Ｃｈｉｎａ）
血液病的分子诊断技术及新型治疗方法
血液病的分子诊断技术及新型治疗方法血液病是指发生在血液及造血系统中，包括骨髓、淋巴、脾等处的疾病。
它们涉及血细胞的生成、分化和功能异常，包括血红蛋白类疾病、白血病、淋巴瘤、骨髓纤维化等。
人们一直致力于寻找更准确、便捷、精确的诊断方法和更有效、更安全的治疗方法，以应对这些血液病的挑战。
近年来，血液病的分子诊断技术正在快速发展。
在这些技术中，分子生物学、微生物学和免疫学等领域的最新技术都被应用到了血液病的诊断中。
例如，PCR技术、基因测序技术、比色法和Elisa法等技术被广泛应用于血液病的诊断。
PCR技术是一种非常重要的血液病分子诊断技术，它可以通过复制和扩增特定的DNA序列来进行检测。
对于血液病的诊断来说，PCR技术可以用来检测特定的基因突变或基因型。
例如，在骨髓瘤中，不同的突变可以确定患者的治疗方案。
PCR技术可以大量有选择地检测特定的基因序列，既可以用于诊断，也可以用于治疗指导。
与此同时，基因测序技术也是血液病分子诊断领域的重要技术。
目前，基因测序技术已经广泛应用于多种血液病的研究和诊断中。
通过基因测序技术，可以检测具有表明疾病遗传因素的具体DNA 变异。
这项技术已经被广泛应用于白血病、骨髓瘤等恶性血液病的诊断和预测。
除了分子诊断技术，血液病的新型治疗方法也在逐步发展。
例如，针对血液病中的癌细胞特异性抗原，特异类杀细胞疗法（CAR-T疗法）是一种新兴的治疗方法。
这种方法通过人工合成T细胞受体，实现对血液病中肿瘤细胞的杀灭。
该方法可以彻底清除潜在的肿瘤细胞，控制或治愈类似急性淋巴细胞白血病等血液肿瘤。
此外，针对不同血液病的分类，还有一系列新型抗癌药物正在研究中。
例如，针对急性骨髓性白血病等血液病中特异的细胞通路，国内相关药物研究正在取得突破性进展。
总的来说，血液病的分子诊断技术和新型治疗方法正在快速发展中。
这些技术越来越精确和有效，使得医生和病人生活变得更容易。
在未来，随着新技术的出现和成熟，我们可以期待更多的突破，并为血液病患者带来更多的希望和健康。
血液科新技术应用案例分享
血液科新技术应用案例分享【血液科新技术应用案例分享】近年来，随着科技的不断进步，血液科领域也迎来了一系列令人振奋的新技术。
这些新技术的应用为疾病的早期诊断、治疗方案的个性化设计以及患者的康复提供了有力支持。
本文将以实际案例为基础，介绍血液科新技术在临床中的应用和取得的突破。
第一节：液体活检在血液肿瘤诊断中的应用液体活检是一种基于血液样本进行的非侵入性肿瘤检测技术，通过检测循环肿瘤DNA或其他可溯源的生物标志物，可以实现早期诊断、疾病进展监测以及治疗效果评估。
例如，在一项研究中，一位患有白血病的患者的血液样本经过液体活检分析后，发现其循环肿瘤DNA的浓度迅速升高，提示疾病出现复发风险。
基于这一结果，医生能够及时调整治疗计划，提高患者的生存率和生活质量。
第二节：基因编辑技术在血液病治疗中的应用基因编辑技术的出现给基因治疗带来了新的希望。
通过针对特定的突变基因进行修复、替换或靶向抑制，基因编辑技术可以显著提高血液病的治疗效果。
一项临床试验中，研究者采用基因编辑技术成功治愈了一名患有遗传性血液病的儿童。
在该技术的帮助下，研究者可以精确地修复患者体内的突变基因，从根本上消除患病原因，为患者带来健康和无忧的明天。
第三节：人工智能在血液科诊断中的应用人工智能作为一种新兴的技术手段，已经在血液科诊断中展现出巨大的潜力。
通过大数据的分析和机器学习的算法，人工智能可以辅助医生进行病例分析、疾病诊断和治疗方案推荐。
例如，在某研究中，研究者开发出一种基于深度学习的人工智能系统，可以对血液样本中的细胞形态学进行自动识别和分类。
该系统在临床实践中表现出与专业医生相当甚至更好的识别准确度，大大提高了血液病的早期诊断效率。
第四节：干细胞疗法在血液科领域的应用干细胞疗法作为一种新兴的治疗方法，可以通过重新编程或替代患者体内的受损细胞，实现疾病的治疗和康复。
在血液科领域，广泛应用于造血干细胞移植治疗。
通过采集患者体内的造血干细胞或配型相匹配的供体的干细胞，并进行干细胞移植，可以重建受损的造血系统，治愈或减轻一系列血液病。
基于Cell-SELEX的核酸适配体在生化分析与生物成像中的应用
基于Cell-SELEX的核酸适配体在生化分析与生物成像中的应用堵玉林;莫柳婷;易娅莎;邱丽萍;谭蔚泓【摘要】Aptamers are single-stranded oligonucleotides ( DNA or RNA ) selected through a technology termed "Systematic evolution of ligands by exponential enrichment" ( SELEX ) . In addition to high affinity and high specificity for their target molecules, aptamers have some advantages such as low molecular weight, easy synthesis, high chemical stability, low immunogenicity, and convenient modification. Based on the Cell-SELEX technique, a panel of aptamers which can specifically recognize target cell lines has been generated. By targeting specific membrane proteins in their native state, these aptamers can identify subtle molecular differences among different cell lines, thus have attracted a broad interest in biomedical research. In this review, we summarized the development of aptamers and their use in detection, profiling and imaging of tumor cells. Also, their perspectives were discussed.%基于Cell-SELEX的核酸适配体是指以活细胞为靶标物,通过指数富集的配基系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的单链寡核苷酸.它能够与靶标细胞高亲和性、高特异性结合,具有分子量低、合成简单、化学稳定性好、免疫原性低、易于功能化修饰等优点,已广泛应用于生命科学研究领域.本文综述了基于Cell-SELEX技术筛选的核酸适配体在肿瘤细胞检测、分析和成像方面的研究进展,并对核酸适配体研究的发展前景和趋势进行了展望.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】9页(P1757-1765)【关键词】核酸适配体;Cell-SELEX;生化分析;生物成像;肿瘤细胞【作者】堵玉林;莫柳婷;易娅莎;邱丽萍;谭蔚泓【作者单位】分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082;分子科学与生物医学实验室,化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学化学化工学院,生命科学学院,核酸适配体湖南省工程实验室,长沙410082【正文语种】中文近年来，癌症的发病率和死亡率不断上升，已成为我国居民最主要的死亡原因之一。
分子生物学技术在血液病研究中的应用研究
分子生物学技术在血液病研究中的应用研究引言血液病是由于血液系统中某些细胞发生异常增生、功能障碍或癌变而引发的一种疾病。
血液病种类繁多，其中包括白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等，对人类的健康和生命都带来了极大的威胁。
在早期，传统的检测手段对血液病的诊断和治疗有很大的限制。
随着分子生物学技术的不断发展，越来越多的研究表明，这些技术在血液病的研究中具有重要的应用价值。
第一章分子生物学技术在血液病诊断中的应用1. 流式细胞术流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，可以实现对不同类型细胞的分类和计数，并分析细胞表面、内部蛋白质和DNA等方面的特性。
这种技术在血液病的诊断和治疗中有着广泛的应用。
例如，利用流式细胞术可以对白血病患者的免疫表型进行分析，通过分析细胞表面的不同标志物，可以实现对白血病细胞和正常细胞的区分，这对于判断病情和治疗效果具有重要意义。
2. 分子遗传学检测技术分子遗传学检测技术是利用DNA或RNA等分子作为研究对象，通过特定的实验操作和方法，对其结构、功能等特性进行分析和研究的技术。
这种技术在血液病的研究中有着广泛的应用。
例如，通过PCR扩增、Sanger测序等技术可以检测常见的血液病相关基因突变，例如BCR-ABL、JAK2 V617F等，这对于血液病的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
第二章分子生物学技术在血液病治疗中的应用1. 基因治疗基因治疗是利用基因工程技术，将外源性基因投入人体细胞中，从而改变细胞的功能、代谢等生理特性的一种治疗手段。
在血液病的治疗中，基因治疗可以实现对肿瘤细胞的杀伤和生长的抑制，从而达到治疗的目的。
例如，目前已经开发出一种针对白血病的基因免疫治疗，将CAR-T细胞注入人体，通过识别并攻击白血病细胞，从而达到治疗的效果。
2. 细胞治疗细胞治疗是将病人自己体内的干细胞或造血干细胞经过培养、扩增等技术处理后，再经过输注等方式，达到治疗的目的的一种方法。
在血液病治疗中，细胞治疗也是一种有效的治疗手段。
Cell-SELEX技术研究进展
Cell-SELEX技术研究进展赵仲麟;李燕;袁超【摘要】适配子是通过SELEX技术,即指数富集配体系统进化技术,经反复放大筛选得到的、与目标分子有高度亲和性的分子.SELEX技术常使用纯化的靶分子,目前活细胞也可用于筛选目标,这种技术称为细胞指数富集配体系统进化技术(Cell-SELEX),其优点是产生的适配子可以与活细胞中的靶分子的天然构象发生作用.细胞表面的跨膜蛋白也可作为适配子的目标.此外,在不知道任何细胞表面分子的情况下也可以得到细胞特异性适配子.对Cell-SELEX技术的应用及研究进展进行综述.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2014(000)005【总页数】5页(P52-56)【关键词】Cell-SELEX;生物标记物;癌症研究;核酸;适配子【作者】赵仲麟;李燕;袁超【作者单位】河南农业大学理学院,郑州450002;郑州轻工业学院食品与生物工程学院,郑州450002;河南农业大学理学院,郑州450002【正文语种】中文适配子是从组合核酸库中筛选到的、与靶分子具有高度亲和性的分子［1] 。
与抗体类似，适配子对目标分子具有高度亲和性和特异性。
然而适配子还有很多额外的优点，如可以抵抗还原条件和热变性等。
典型的适配子一般少于40个核苷酸，同时还要易于化学合成。
另外，适配子可以在一些生理条件下，可通过反义寡核苷酸杂交使其失活。
因此，可以用于设计解毒剂。
适配子在分子生物学和医学已经被广泛应用［2] 。
适配子通过SELEX技术，即指数富集配体系统进化技术，经反复的放大筛选得到的［3，4] 。
这个过程中，单链核酸库与靶分子孵育，单链核酸包括DNA、RNA和修饰的核酸，库由30-100个核苷酸的随机序列组成，约含1014-1015变异体。
与目标有结合活性的变异体将被回收，然后通过RT-PCR进行文库富集扩增，然后利用富集的PCR产物，通过模板链除去或体外转录重建单链库。
该过程将重复几轮至20轮不等，最终找到目标适配子。
流式细胞基本原理和在白血病中应用
Requirements for assigning more than one
lineage to a single blast population
• Myeloid lineage
– Myeloperoxidase (flow cytometry, immunohistochemistry or cytochemistry) or
三.成熟淋巴细胞增殖 性疾病
循环淋巴细胞增殖性疾病
❖慢性淋巴细胞白血病 ❖幼稚淋巴细胞白血病 ❖毛细胞白血病 ❖脾边缘区淋巴瘤 ❖大颗粒淋巴细胞白血病 ❖皮肤T细胞淋巴瘤相关白血病
…………
这类疾病必须有流式细胞术的辅助诊断！
确定克隆来源！
正常淋巴细胞
淋巴细胞增殖性疾病(克隆扩增)
T or B or NK
白血病诊断依赖于多种检测方法
样本
形态学
基础和金标准
流式细胞术
必需
细胞遗传学/FISH 重要
分子生物学
急性白血病免疫分型的价值
• 区分淋系、髓系白血病 • 区分淋系白血病中的T、B-ALL • 鉴定混合细胞性白血病的类型：
T-M、B-M、T-B、T-B-M
• 治疗过程中监测MRD，评价疗效 • 提示某些遗传学异常：
– Weak CD19 with at least 2 of the following strongly expressed:CD79a,cytoplasmic CD22,CD10
MPAL (mixed phenotype acute leukemia)
WHO 2008
Two Leukemic Populations
B-ALL:多数表达CD34、CD38dim、TDT、 CD19、CD10str、CD20,这些标志的任意组合 CD34/CD22、CD34/CD20、TDT/CD10等，也 可加上某些异常标志如 CD13、CD33、CD15 即可将ALL细胞与正常骨髓和外周血细胞分开 （60～80%）。
血液科新技术及新药研发与应用
血液科新技术及新药研发与应用血液科作为医学领域的一个重要分支，致力于研究血液疾病的预防、诊断和治疗。
随着科技的发展和不断的研究探索，血液科领域涌现出了许多新技术和新药物，极大地推动了血液疾病的治疗进展。
本文将介绍一些血液科新技术及新药的研发与应用，希望能对读者对此领域的了解有所帮助。
一、基因编辑技术在血液科研发中的应用基因编辑技术是目前生物医学领域的热点之一，它可以针对特定基因进行精确修饰，对血液疾病的治疗提供了新的思路和方法。
例如，在白血病治疗中，科学家通过基因编辑技术将患者的白血病细胞中的恶性基因进行修饰，以达到治疗效果。
这种个性化的治疗方式，可以更加精确地针对疾病的特点和个体的差异，提高治疗效果。
二、免疫细胞疗法在血液科研发中的突破免疫细胞疗法是近年来血液科领域取得的一项重要突破。
它通过改变患者自身的免疫系统，使其能识别和攻击癌细胞，对于一些难治性的血液疾病具有独特的治疗效果。
该技术以CAR-T细胞治疗为代表，通过提取患者的T细胞并经过基因修饰，使其具备识别和杀伤癌细胞的能力，再将其重新输注给患者，从而实现个体化的治疗手段。
三、多靶点药物的研发与应用传统的药物研发主要针对单一的靶点，而现代药物开发趋向于多靶点药物。
在血液科领域，多靶点药物的研发与应用取得了一定的进展。
例如，一些新型的抗癌药物可以同时抑制癌细胞的多个生物学靶点，从而提高疗效并减少副作用。
这种药物研发模式的应用可以有效地提高治疗的准确性和有效性。
四、疫苗研发在血液科领域的价值疫苗是预防疾病最有效的手段之一，而在血液科领域，疫苗的研发也扮演着重要的角色。
例如，干细胞移植是一种常见的治疗血液疾病的手段，但与之相关的并发症往往影响了移植的成功率。
通过研发针对这些并发症的预防性疫苗，可以降低移植过程的风险，并提高患者的治疗效果。
因此，疫苗研发在血液科领域具有重要的价值和应用前景。
五、个体化医疗在血液科领域的推广个体化医疗是指根据个体的基因组信息和疾病特点，为患者提供个体化的诊断和治疗方案。
白血病干细胞的分离及其在治疗中的应用前景
白血病干细胞的分离及其在治疗中的应用前景白血病是一种严重的血液系统恶性肿瘤，其发病率逐年上升。
传统化疗或放疗虽然可以控制白血病的发展，但对于复发或难治型白血病无法提供足够的治疗效果。
因此，研究白血病干细胞的分离以及其在治疗中的应用前景是非常重要的。
白血病干细胞是指一类具有自我更新和多能分化能力的细胞，即在肿瘤组织中可以不断产生新的癌细胞。
因此，白血病干细胞在白血病的发展过程中起着至关重要的作用。
目前的白血病治疗主要是针对肿瘤细胞进行化疗或放疗，但是这种治疗方法不能完全清除白血病干细胞，因此会出现复发或难治现象。
通过对白血病干细胞进行分离，可以有效地解决难以治愈白血病的问题。
目前，研究者们主要采用流式细胞仪、磁性珠分离等方法，对白血病干细胞进行分离和检测。
流式细胞仪是一种利用细胞表面标记物差异对混合细胞进行分型的技术，可以精确地分离白血病干细胞。
而磁性珠分离技术则是通过特定标记物将白血病干细胞与其他细胞分离，具有最高的选择性和纯度。
在白血病干细胞的分离后，接下来的探索则是在其在治疗中的应用前景。
从理论上来说，充分清除白血病干细胞是达到白血病治愈的关键。
研究者们正着手研发新的干细胞治疗技术。
一种常用的技术是通过使用干细胞移植来纠正骨髓干细胞功能失调引发的疾病，比如白血病等。
这种移植方式主要用于解决EX高危险等难治的白血病问题。
除此之外，也有研究人员利用基因治疗技术，将基因修饰后的干细胞直接引入患者体内，以替换原有的异常干细胞。
这种技术具有更好的特异性和低毒副作用。
当然，白血病干细胞的分离和应用不是一蹴而就的，仍然存在许多需要解决的问题。
首先，黏附性白血病干细胞的分离仍然存在难度，这与其生长环境以及标志物的缺乏有关，需要进一步的研究。
其次，干细胞治疗的应用还存在着医学伦理问题，因治疗方案需要进行基因操作研究，给医学实践和审批都带来了困难。
不过，无论是干细胞治疗技术还是基因修饰技术，都是治疗白血病的发展方向，解决了患者收治后重复治疗，治疗效果不稳定或新型疾病无法正确诊断等问题。
SELEX技术及其在治疗领域应用的研究进展
SELEX技术及其在治疗领域应用的研究进展
SELEX技术及其在治疗领域应用的研究进展
SELEX技术由于适配子与靶物质结合的特异性和亲和力可与抗体媲美,已被广泛应用于治疗领域的研究工作中,显示出良好的应用前景.目前涉及多种疾病治疗的适配子,包括感染性疾病、肿瘤、心血管疾病、免疫系统疾病等已被筛选出来,并且疗效已经通过体外实验或动物模型得到证实.
作者：徐意刘健 XU Yi LIU Jian 作者单位：天津生物工程职业技术学院,生物药学系,天津,300462 刊名：湖南文理学院学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF HUNAN UNIVERSITY OF ARTS AND SCIENCE(NATURAL SCIENCE) 年，卷(期)：2009 21(2) 分类号：Q349+.53 关键词：SELEX 寡核苷酸适配子研究应用。