疟原虫镜检
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法,具有严格的操作程序和技术要求,为了统一方法、规范程序、提高血检质量,特制定本操作规范一、血片制作(一)所需器材载玻片玻片3张(1张作载玻片,1张作推片,1张作采血后滴于玻片备血用)采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
(二)操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片,首先用目测法将载玻片从右(磨砂处为右)到左等分成6格,接着用记号笔在第1、2格即(磨砂处)写下血检病人基本信息:编号、姓名、制片日期结果(镜检结束后补写)。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂,婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后,以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深,约挤出1-2滴血,滴于玻片上(以备涂制厚薄血膜用)。
3、涂制血膜厚血膜:用推片的一角,取血一小滴(约4微升),置于平置的载玻片上,由里向外一个方向旋转约4圈,涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。
厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜。
薄血膜:以推片一端的中部取血一小滴(约1微升),使血滴与载玻片接触,血液沿推片边缘向两侧展开,将推片与载玻片保持25-30度,均匀而迅速适当地用力向前推成舌形薄血膜。
薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳,(直观透过玻片能清晰看到报纸上的字)。
二、固定(一)所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管(二)操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后,用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上,起固定薄血膜作用,(注意不能固定厚血膜)。
三、染色〈一〉吉氏染染色法(一)所需器材1、吉氏染液(原液)2、器具染色用的盘子、染色缸、烧杯、吸管若干。
染色及冲洗用水蒸馏水、冷开水、自来水、pH7.2缓冲液。
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法,具有严格的操作程序和技术要求,为了统一方法、规范程序、提高血检质量,特制定本操作规范。
一、血片制作(一)所需器材载玻片玻片3张(1张作载玻片,1张作推片,1张作采血后滴于玻片备血用)采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
(二)操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片,首先用目测法将载玻片从右(磨砂处为右)到左等分成6格,接着用记号笔在第1、2格即(磨砂处)写下血检病人基本信息:编号、姓名、制片日期结果(镜检结束后补写)。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂,婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后,以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm 深,约挤出1-2滴血,滴于玻片上(以备涂制厚薄血膜用)。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4~5μl,涂于载玻片的第三格(靠近磨砂侧),由里向外一个方向旋转2~4圈,涂成直径为0.8~1.2cm的圆形厚血膜;再用该角沾取血液1~1.5μl血置于载玻片的中心点即(第四格前缘中点);接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍;最后用推片的下缘置载玻片的中心点(1~1.5μl血液处),当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时,使两玻片保持25°~35°角,从右向左迅速推成舌状薄血膜,即(薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部)。
如(图1)、(图2)疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳,(直观透过玻片能清晰看到报纸上的字);厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜。
二、固定(一)所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管(二)操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后,用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上,起固定薄血膜作用,(注意不能固定厚血膜)。
疟原虫镜检操作流程
疟原虫镜检操作流程疟原虫镜检操作可有趣啦,就像一场小小的探索之旅呢。
一、准备工作。
咱们先得把要用的东西都找齐喽。
那需要啥呢?显微镜肯定是必不可少的啦,就像战士上战场不能没有枪一样。
然后就是载玻片和盖玻片,这俩就像是舞台和舞台上的小屋顶,疟原虫就在这上面表演呢。
还有采血针、酒精棉球这些小物件,采血针用来取血,酒精棉球用来消毒,它们可都是小助手。
另外,染色剂也得准备好,这染色剂就像是给疟原虫化妆的东西,能让咱们把疟原虫看得更清楚。
二、采血。
采血这一步可得小心点儿。
找个舒服的地方让被采血的人坐好或者躺好,别让人家紧张,就像跟朋友聊天似的,说“放松哈,就一下下,不疼的”。
用酒精棉球在手指尖或者耳垂轻轻擦一擦,消消毒。
然后拿起采血针,就像拿一支小小的魔法棒,轻轻一扎,血就出来啦。
把这一滴血小心地滴在载玻片的一端,可别滴太多,也别滴到外面去了,一滴小小的、圆圆的血滴就像一颗红色的小珍珠在载玻片上呢。
三、涂片。
血滴在载玻片上了,咱们就要开始涂片啦。
拿另一个载玻片的一端,轻轻地斜着靠在有血滴的载玻片上,就像小滑梯一样。
然后慢慢地把这个载玻片往前推,让血滴在两个载玻片之间均匀地铺成薄薄的一层。
这一步可有点像画画的时候把颜料涂开,要涂得薄厚均匀才好呢。
如果涂得太厚了,疟原虫就会像躲猫猫一样藏在里面,咱们就不容易看到它啦;要是涂得太薄了,可能疟原虫都没几个在上面,也不好找。
四、固定和染色。
涂片弄好之后呢,要固定一下。
这就像是给疟原虫拍个照片定住它的样子。
可以用小火苗稍微烤一烤载玻片,不过得小心别烤糊了,要不然疟原虫就被烤成小焦炭啦。
固定好之后就到染色的时候了。
把染色剂小心地滴在涂片上,让染色剂把疟原虫包裹起来,就像给疟原虫穿上一件彩色的衣服。
等染色剂在涂片上待一会儿,就像让疟原虫在染缸里泡个澡,把自己染得美美的。
五、镜检。
终于到了最激动人心的镜检啦。
把载玻片放在显微镜的载物台上,就像把宝贝放在展示台上一样。
先从低倍镜开始看,慢慢地转动粗准焦螺旋,让镜头一点点靠近载玻片,就像在寻找宝藏一样。
疟原虫镜检技术技术和要求 (王波)
(五)血片的染色
吉氏染液 保存时间长, 保存时间长,染色时间长 瑞氏染液 保存时间短, 保存时间短,染色时间短 瑞吉氏
Hale Waihona Puke 六、镜检工作的一些要求1、疟原虫镜检工作中,凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 疟原虫镜检工作中,凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 2、做好镜检登记:凡是镜检疟原虫的均需如实登记,阴、 做好镜检登记:凡是镜检疟原虫的均需如实登记, 阳性片保存待复核。 阳性片保存待复核。 每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 3、每一个月均要向所在的县区疾控中心上报一次镜检数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。 包括镜检人数、阳性、阴性数。 血片需要制作厚、薄血膜。 4、血片需要制作厚、薄血膜。 镜检结果需分型。(如果无法确定疟原虫类型, 。(如果无法确定疟原虫类型 5、镜检结果需分型。(如果无法确定疟原虫类型,可及时 联系所在辖区疾控中心,进行血片复核) 联系所在辖区疾控中心,进行血片复核) 一旦发现阳性病例,需留存血样。 6、一旦发现阳性病例,需留存血样。
标签
(二)采血的部位
以耳垂采血为主。 以耳垂采血为主。 如使用抗凝静脉血, 如使用抗凝静脉血,制作的血片容易造成厚血膜 的脱落。 的脱落。
(三)采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴) 厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴),涂成 边缘光滑之圆形,直径约0.8 1.0厘米左右 0.8— 厘米左右。 边缘光滑之圆形,直径约0.8—1.0厘米左右。 薄血膜血量只需0.5 1.0立方毫米左右 0.5立方毫米左右, 薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过多则血 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米, 2.5厘米 膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约2.5厘米,宽约 厘米。 2厘米。
人体疟原虫镜检技术
薄血膜中成熟裂殖体形态特征
间日疟原虫裂殖体 大于正常红细胞;裂 殖子12~24个,通常 16~18个,排列不规则; 疟色素常集于一侧, 黄褐色
恶性疟
恶性疟
厚血膜恶性疟环状体
恶性疟
7个环状体散在于5个白细胞之间,每个虫体可见一个红色的核和蓝色断裂的或皱缩的原 浆
厚血膜恶性疟配子体
厚血膜恶性疟配子体
恶性疟
厚血膜中疟原虫的形态特征
厚血膜的优点是能够提高疟原虫的检出率,厚 血膜上原虫集中,检出率比薄血膜高出十几倍 甚至数十倍,尤其是在轻度感染的情况下。但 是,厚血膜的镜检亦受到很多因素的影响:厚 血膜层次多、背景深、透光差,虫体收缩,疟 原虫的形态结构远不如薄血膜上清晰典型;
镜检工作所需注意的事项
1、在镜检中显微镜的使用:油镜、目镜、视野需按顺序 逐个检查。 2、疟原虫镜检工作中,凡是发热病人。疟疾、疑似疟疾、 及不明原因的发热病人均需进行疟原虫镜检。 3、做好镜检登记:凡是镜检疟原虫的均需如实登记,阴、 阳性片保存待考核。 4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴 性。 5、如发现恶性疟以最快的通信方法,在24小时内报县、 市、省疾病预防控制机构,阳性血片留待上级复核。 6、对每例确诊疟疾病人,在进行抗疟治疗前须采集病人 静脉血5-10ml,并制作厚薄血片4张和滤纸血4份,以 送省进行分子生物学鉴定。
卵形疟原虫 Plasmodium ovale
环状体
Ring stage
疟原虫实验室镜检-课件(1)
53
2024/9/19
54
2024/9/19
55
2024/9/19
56
以下照片在一般发热病人血片中是观察不到的
2024/9/19
57
2024/9/19
58
2024/9/19
59
2024/9/19
60
2024/9/19
61
2024/9/19
62
2024/9/19
63
2024/9/19
2024/9/19
19
寄生的红细胞
染色后,寄生的红细胞溶解,轮 廓消失,但有时尚留下一“影子” 或小点。
2024/9/19
20
实图
2024/9/19
21
2024/9/19
22
2024/9/19
23
2024/9/19
24
2024/9/19
25
2024/9/19
26
2024/9/19
27
64
2024/9/19
65
2024/9/19
66
2024/9/19
67
混合感染
2024/9/19
68
2024/9/19
69
2024/9/19
70
2024/9/19
71
2024/9/19
72
谢谢!
2024/9/19
73
小于正常红细胞;裂殖子 较小,8~26个,通常8、 18个,排列不规则,疟 色素成团块状,黑褐色
2024/9/19
9
雌配子体(薄血膜)
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞,圆形;核 小.致密,深红色,偏于一 侧,胞浆深蓝色;疟色素散 在
人体疟原虫镜检专业技术标准
血片的制作1
玻片的执持方法: 无论在拭擦玻片,制作血片或染色 血片时,手指仅可夹持玻片两侧缘, 切匆触及玻片之上下面以免手上油 脂污及玻片面,使薄血涂布不匀, 厚血膜易于脱落
4、厚血膜涂制
取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上,推片以右手 拇指和食指持其二侧,以左端下角从受检者之耳垂沾取血 滴,在载玻片之适当位置, 自内向外回转扩大,涂成厚 血膜,使厚薄均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上 之残留小量血液。
采血的时间---间日疟
间日疟原虫及三日疟原虫,在患者刚发冷发热 以后,大部是在环状滋养体期,故这一时期区 别疟原虫种类是不容易的。虽在—般情况下, 随便什么时间检查感染者的末稍血液,多少能 查到各个时期的原虫,但适当的取血时间,一 般是在患者发作数小时至十余小时,即已滋养 发育至具有易于鉴别的晚期滋养体期.
3、做好镜检登记:凡是镜检疟原虫的均需如实登记,阴、 阳性片保存待考核。
4、每一个月上报一次镜检数。包括镜检人数、阳性、阴 性。
5、如发现恶性疟以嘴快的通信方法,在24小时内报县、 市、省疾病预防控制机构,阳性血片留待上级复核。
六、血片制作与染色
1、血片的清洁 新的载皮片必须洗洁净后才可直接浸于 95%的酒精中, 然后一一取出,用软而洁净并没有棉花毛的细布擦干, 擦亮,妥善放置,勿使灰尘沾污。 用过的载玻片可用5%之煮沸肥皂水洗涤,将玻片一张 一张的放入其中待肥皂水稍冷后,用毛刷或纱布细心 拭擦。再用清水漂洗干净并以纱布擦干,然后浸于 95%酒精内脱脂,照上述法处理, 亦可用洗涤液清洗,在整个擦洗过程中,应注意避免 玻片互相磨擦,而使玻片面磨毛,以致不堪使用。
薄血膜间日疟环状体
服药后形态改变的间日疟原虫
薄血膜间日疟环状体
疟原虫的镜检技术-制片染色
利用特异性抗体对疟原虫进行染色, 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数,提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘,发现数据间的关联和规律 ,为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂,避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂,按照染色剂的要求进 行操作,确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征,避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质,避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片,并对其进行 染色,可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区,疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断,以指导治疗和防控。
在实验室研究中,疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域,该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程,从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟原虫镜检技术
•
甘油
3ml
•
纯甲醇
97 ml
• 将瑞氏染剂粉置于研钵内,加入甘油
充分研磨后,然后加入少量甲醇碾磨后倒 入有玻塞瓶中,再分次用甲醇冲洗碾钵中 的瑞氏染粉甘油液,倒入瓶中,直至洗完。 充分摇匀,一般放置一二星期后,再过滤
应用(保存时间愈久,染色力愈佳)。
• 急用时,放置24小时后过滤也可使用。
资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
(2)缓冲液的配制
PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4
(ml)
( ml)
DW (ml)
6.8
49
51
900
7.0
63
37
900
7.1
68
32
900
7.2
73
27
900
7.4
81
19
900
• 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。
• 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂
资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。
• (1)两种贮备液的配制:
• 贮备液I • •
1/15M磷酸氢二钠(Na2HPO4)溶液
Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml
• 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 (KH2PO4 )溶液
•
KH2PO4 9.07 g
•
蒸馏水 1000 ml
资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
资料仅供参考,不当之处,请联系改正。
一、显微镜镜检用于疟疾诊断
• 显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断
技术(金标准)
• 主要优点
- 特异高 - 能区分虫种 - 能分期 - 能计数 - 1小时内能完成诊断程序
疟原虫显微镜镜检技术(共74张PPT)
正确的推片姿势
取血量及涂片法(涂片操作)
厚血膜 用推 片的一角, 从取血部位刮取约4微升 血量(相当于火柴头 小),使血滴与平置的 载玻片接触,再由里向 外一个方向旋转,转 2~4圈,涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚 血膜,血膜厚薄均匀, 过厚易于脱落,过薄达 不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
定的实验室检查方法(WS259-2006)。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、 临床病例、确诊病例和带虫者,前两者依 据流行病学史和临床表现即可做出诊断, 而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。 及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类, 以能针对虫种选择正确的治疗方案。
(吉氏染色) 散在呈金黄色,集成团块呈黑褐色
在薄血膜上加瑞氏染液5~8滴,染色1~2分钟。 单张血片染色:薄血膜经固定干燥后,用2%吉氏染液稀释液1~2毫升,滴入血片标本上染色30分钟左右; 虫体占红细胞体积的2/3至3/4 虫体较小,圆形,占满胀大的红细胞 涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解,疟原虫在形态上仍可分辨,但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。 厚血膜涂在第3格中央,薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 在普查时均应查完整个厚血膜,未查见疟原虫则判为阴性。 将瑞氏染剂粉1g置于研钵内,加入15ml甘油充分研磨后,倒入有塞玻璃瓶中,再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液,倒入瓶中,摇匀后, 置室温下,每天摇动5分钟,3天后即可使用。
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉克置于研钵中,加少量甘油充分研磨,边加 边磨,至25毫升加完为止,倒入60或100毫升带有玻
塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇,洗去甘油浓
疟原虫镜检技术
细胞计数(国际标准) 。
白细胞疟原虫计数法
●例如 计数200 WBC中有35个疟原虫,在不知患
者白细胞数的情况下,以每微升血8 000个白细 胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为: 35(计数的疟原虫数)÷200(计数的白细胞)x 8000(每微升血白细胞数) =1400 / μl 答:该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
2. 原虫细胞浆呈条带状或方形
3. 成熟裂殖体呈菊花状 4. 裂殖子数通常为6-12个 5. 齐氏点(西门氏点)较少见
卵形疟原虫形态特征
1. 被寄生红细胞正常大小或略涨大,边 缘呈彗星状也称齿轮状 2. 疟原虫通常呈椭圆形 3. 薛氏点与间日疟相似
4. 裂殖子数通常为6-12
● 四种人体疟原虫都有双核和多重感染现象
red cell
A typical Plasmodium malariae presentation
Female patient, arrived from Brazil two weeks previously. Flu like symptoms since arrival.
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区, 中部 地区病例较多 ● 病程良性, 有复发
三日疟 P.malariae
●遍及热带和亚热带地区,特别是东、西非洲,呈片状、 块状分布 ●三日疟在我国非常少见,只在南方有散在报告
卵形疟 (蛋形疟) P.ovale
● 主要分布非洲。缅甸、东南亚有散在报告 ● 在我国卵形疟消灭
P. ovale
(P.m.)
(P.o.)
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带地区,是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强,无免疫力者 感染 后出现急性症状,不及时治疗可危及生命(脑 型疟)
疟原虫镜检规章制度
疟原虫镜检规章制度第一章总则第一条为规范疟原虫镜检工作,提高疟疾诊断准确率,保障患者健康,特制定本规章制度。
第二条本规章制度适用于医疗机构、检验检测机构开展疟原虫镜检工作。
第三条疟原虫镜检应遵守相关法律法规和相关标准,确保检测结果准确可靠。
第四条医疗机构和检验检测机构应建立健全疟原虫镜检管理制度,保证检测人员熟练掌握检测技术。
第五条疟原虫镜检工作应当严格遵守检验检测质量管理规范,确保检测结果准确。
第六条医疗机构和检验检测机构应当配备专业的技术人员从事疟原虫镜检工作。
第七条疟原虫镜检工作应当遵循“安全、准确、迅速”的原则,保证检测工作质量和效率。
第八条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系,确保检测结果可靠。
第二章疟原虫镜检设备和耗材第九条医疗机构和检验检测机构应当购置标准符合要求的疟原虫镜检设备,并定期维护和保养设备。
第十条医疗机构和检验检测机构应当使用符合要求的疟原虫镜检耗材,保证检测过程的质量和准确性。
第十一条疟原虫镜检设备和耗材应当定期检测和校准,确保检测结果准确可靠。
第三章疟原虫镜检人员第十二条从事疟原虫镜检工作的人员应具有相应的专业技能和执业资格,熟练掌握检测技术。
第十三条疟原虫镜检人员应当遵守相关法律法规和相关标准,保证检测结果的准确性和可靠性。
第十四条疟原虫镜检人员应当接受规范的培训,不断提升自身的专业水平和技能。
第十五条疟原虫镜检人员应当定期进行健康体检,确保身体健康,保障检测工作的顺利进行。
第四章疟原虫镜检流程第十六条疟原虫镜检工作应当遵循严格的操作流程,确保检测过程准确无误。
第十七条疟原虫镜检工作应当按照标准操作规程进行,规范操作步骤,确保检测结果的可靠性。
第十八条疟原虫镜检的检测和分析过程应当记录详细,以备查证。
第十九条疟原虫镜检工作完成后应及时整理和归档相关资料,保证检测结果能够有效利用。
第五章疟原虫镜检质量控制第二十条医疗机构和检验检测机构应当建立健全疟原虫镜检的质量控制和质量保证体系,加强对检测工作的监督和管理。
疟疾镜检的实验室技术
疟疾镜检的重要性
疟疾镜检能够快速、 准确地诊断疟疾,为 及时治疗提供依据。
对于疟疾高发地区, 疟疾镜检是监测和评 估疟疾流行情况的重 要手段。
通过疟疾镜检,可以 及早发现疟疾,防止 病情恶化,减少并发 症的发生。
疟疾镜检的历史与发展
疟疾镜检最早可追溯到19世纪末期,当时使用简单的显微镜观察血液样本。
免疫学检测
检测方法
采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光抗体试验(IFA)等方法检测血液中疟 原虫抗原或抗体。
检测原理
利用特异性抗体与疟原虫抗原结合的原理,通过显色反应或荧光标记来判断疟原 虫的存在。
03
疟疾镜检的步骤与操作
样本采集与处理
采集时间
选择疟疾感染后红细胞期, 即发热后2-3天采集样本, 此时疟原虫数量最多,检 出率最高。
改进样本处理方法,提高疟原虫 的提取和富集效果,降低背景干
扰,提高检测灵敏度。
特异性抗体标记
利用特异性抗体标记疟原虫,降 低非特异性染色,提高检测特异
性。
基因检测技术
利用基因检测技术,对疟原虫基 因进行检测,提高检测的灵敏度
和特异性。
降低操作复杂度与成本
简化操作流程
优化检测流程,减少操作步骤,降低操作复杂度。
采集部位
通常采集静脉血液,常用 肘静脉或耳垂。
采集量
根据检测需求,一般采集 5-10ml血液。
血液样本处理
离心分离
将采集的血液放入离心管中,以 一定速度离心,使红细胞下沉, 分离出血浆和白细胞层。
制备涂片
用毛细管吸取白细胞层中的疟原 虫,均匀涂在载玻片上,晾干后 进行显微镜检查。
显微镜检查
显微镜类型
镜检过程需要经过多个步骤,包括血液采集、制片、染色和观察等,操作较为复杂。
疟原虫镜检技术
恶性疟原虫
●恶性疟原虫红细胞外期发育约需要5天,大约感染 后第6天,在周围血液中查见疟原虫。
●恶性疟原虫在红细胞内期发育最初24小时内,一 般能在周围血液中查到环状体,亦可能查到大滋 养体。
●24小时后聚集在肝、脾、脑、骨髓等内脏的毛细 血管内发育进行裂体生殖。恶性疟原虫裂体生殖 周期36~48小时。
2. 间日疟原虫大滋养 体( T )
红细胞:胀大褪色,出 现分布均匀,数目较 多,红色薛氏小点。
大小:较大。 胞浆:不规则,浅蓝色
,出现阿米巴伪足, 有空泡。 核:红色,一个。 色素:细小杆状,黄葛
色,分布不均匀。
间日疟原虫大滋养体
薄血膜间日疟原虫形态
3.间日疟原虫未成熟
裂殖体( S )
红细胞:胀大,褪色, 可有薛氏小点。
疟色素:无。
2. 恶性疟原虫大滋养体
红细胞:大小正常, 颜色较深,可出现较 粗、大小不一、分布 不匀、数目较少红色 茂氏小点。
大小:较小。
胞浆:蓝色,圆形, 空泡不显著。
核:一个,红色。
疟色素:细小,金黄 色,晚期结成块状, 呈黑褐色。
3.恶性疟未成熟裂殖体
红细胞:大小正常, 颜色较深,可 有茂氏 小点。 大小:较小。 胞浆:规则,圆形或卵 圆形,蓝色。 核:分裂为二个以上, 红色。 疟色素:黄褐色颗粒, 常集成黑褐 色团块。
薄血膜间日疟原虫形态
5.间日疟原虫雌 (大)配子体
形状大小:圆或椭 圆,大于正常红 细胞。
胞浆:深蓝色。
核:一个,较小, 致密,深红色, 位于一边。核周 可见明显不染色 带。
疟色素:黄褐色,数目 较多,均匀散在 分布。
薄血膜间日疟原虫形态
6.间日疟原虫雄 (小)配子体
疟原虫的镜检技术
正确使用显微镜步骤
01
02
03
04
05
将载玻片放在载物台上, 用压片夹固定。
转动转换器,将低倍物镜 对准通光孔。
调节光圈和反光镜,使视 野亮度适宜。
转动粗准焦螺旋,使镜筒 缓缓下降,直到物镜接近 载玻片。
一只眼注视目镜内,同时 逆时针方向转动粗准焦螺 旋,使镜筒缓缓上升,直 到看清物像为止。再略微 转动细准焦螺旋,使看到 的物像更加清晰。
结果判断失误
应结合临床症状和其他检查结果进 行综合判断,避免误诊或漏诊。
06
镜检技术在疟疾防控中应用前景
提高镜检技术准确性和效率
01
02
03
改进显微镜设备
采用高分辨率、高对比度 的显微镜,提高疟原虫检 测的准确性。
优化镜检流程
建立标准化的镜检操作流 程,减少人为因素对结果 的影响,提高检测效率。
05
常见误区及问题解决方法
涂片制作中常见问题
涂片过厚或过薄
染色时间不足或过长
应掌握适当的涂片厚度,过厚会影响 观察,过薄则可能漏检。
应严格控制染色时间,确保疟原虫着 色清晰。
血液未充分干燥
涂片后应等待血液完全干燥,否则在 染色过程中可能导致颜色不均匀。
观察过程中常见问题
02
Hale Waihona Puke 0103显微镜使用不当
100%
流行病学调查
通过对人群进行疟原虫检测,可 以了解疟疾的分布情况、流行趋 势和传播途径等信息,为制定防 治策略提供依据。
80%
药物疗效评价
在治疗过程中进行疟原虫检测, 可以观察药物的疗效和患者的恢 复情况,及时调整治疗方案。
02
镜检技术原理及方法
疟原虫镜检操作规程
疟原虫镜检操作规程疟原虫镜检操作规程1.标本采集1.1标本采集前病人的准备:间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10余小时采血;恶性疟患者,应在发作后20小时左右采血。
1.2标本种类:全血或末梢血。
1.3标本要求:厚血片溶血要及时。
2.标本运送:室温运送。
3.标本拒收标准:被细菌污染。
4.操作步骤 4.1 薄血片法:4.1.1在洁净玻片上,滴血液标本1滴,以常法推制成薄片。
4.1.2 血膜完全干燥后即可用瑞氏法染色,干后用油镜镜检。
4.2厚血片法:4.2.1在洁净玻片上,滴血液标本2滴。
4.2.2用推片将血液由内向外转涂成直径约1cm、厚薄均匀的血膜,在室温中自然干燥。
4.2.3 在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴,完全覆盖血膜,溶血约5分钟后倾去溶血液。
4.2.4 不必待干,进行瑞氏染色,干后镜检。
5.结果判断在油镜下观察,薄片须至少100个视野,厚血片至少20个视野,才能报告“未见疟原虫”;发现虫体后还应在薄血片上进行分类鉴别。
疟原虫胶体金法简易操作步骤原理基于双抗体夹心法工作原理,检测时,滴加5μL全血样本于试剂卡加样孔处,随之滴加4滴裂解液,裂解后的样本在毛细管效应下向上层析。
如样本中含有恶性疟原虫特异性乳酸脱氢酶(pflDH)和疟原虫乳酸脱氢酶(panLDH),将于胶体金标记物panLDH单克隆抗体反应形成复合物,在层析作用下前移,被预先固定在硝酸纤维膜上检测区的pflDH/panLDH单克隆抗体捕获,在检测区内形成1条/2条红色反应线,此时为阳性结果,如样本中无pflDH/panLDH抗原,在检测区内无红色反应线,此时为阴性反应。
步骤1.无菌采集患者EDTA-2K抗凝静脉血2ml。
1. 沿锡箔袋切口,撕开锡箔纸,取出疟原虫抗原检测卡,用铅笔或水写笔编号并做好登记。
2. 吸取5μL全血样本垂直滴加于加样孔A区,同时滴加4滴裂解液于加样孔B区。
3. 15分钟内观察显示结果,超过30分钟无临床意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
未成熟裂殖体
三日疟
卵形疟
圆形或宽带状,核分裂为2个 与三日疟相似 以上,空泡消失;疟色素深褐 色,分布不匀。
间日疟未成熟裂殖体
成熟裂殖体
间日疟
恶性疟
大于正常红细胞;虫体占满胀 小于正常红细胞;裂殖子较
大的红细胞 ;裂殖子12-24个,小,8-26个,通常8-18个,
通常16-18个,排列不规则,疟 排列不规则,疟色素成团块
间日疟配子体
间日疟配子体
间日疟原虫雄配子体
三日疟配子体
P. malariae:
macrogametocyte microgametocyte
恶性疟配子体
恶性疟配子体
雌配子体与滋养体的形态鉴别
大小 核
雌配子体
大滋养体
几乎充满被寄生的红 不超过被寄生的红细胞
细胞
3/4
一个,较大且致密, 一个,带状,周围无明
多
薄血膜疟原虫形态特征
间日疟:环状体、滋养体、裂殖体、配子体 恶性疟:环状体、配子体 三日疟:环状体、滋养体、裂殖体、配子体 卵形疟:环状体、滋养体、裂殖体、配子体
小滋养体(环状体)
间日疟
恶性疟
约为红细胞直径的1/3; 核1 约为红细胞的1/6;环纤细, 个,位于虫体一侧;胞浆较少,核1-2个,核位于细胞边缘, 呈环状,环较粗大;核浆中 呈乳头状。一个红细胞寄生2个 间出现大空泡。一个红细胞寄 环状体的常见。
卵囊(oocyst)
动合子穿过蚊胃壁,在胃基底膜下,虫体变圆并分泌 囊壁形成球形的卵囊(oocyst),卵囊也称囊合子。
孢子增殖 --无性繁殖
卵囊逐渐长大并向蚊胃壁外突出 囊合子逐渐发育长大,囊内的核和胞质反复分裂进行孢子增 殖,生成成千上万的子孢子
子孢子(sporozoite)形成
呈梭形,10~15µm×1µm,两端尖细,中间有一核,能微微弯曲运动。 在解剖媒介蚊虫涎腺压片中可以见到。 主动从卵囊壁钻出或因卵囊破裂后散出,随血淋巴钻入蚊体组织,最终 聚集于蚊唾腺 只有到蚊唾腺内的子孢子才具有传染性
三日疟原虫 Plasmodium malaria P.m 少见
卵形疟原虫 Plasmodium ovale
P.o 少见
全球主要疟疾流行地区包括非洲,印度次大陆,东南亚,拉丁美洲和太 平洋岛国等。每年有3-5亿人感染,因疟疾死亡人数达100万,85%在非洲
2007年-2013年全国疟疾疫情趋势
面临的挑战
雄配子体
间日疟
恶性疟
圆形或椭圆形,虫体较大,占 腊肠形,两端钝圆,核大,疏 满胀大的红细胞;核大,疏松,松,淡红色,位于中央;胞浆 浅红色,多位于虫体中央 ; 浅蓝色或浅红色;疟色素位于 胞浆浅蓝色或淡红色;核与浆 核周。 之间有不染色带。疟色素散在 均匀分布于虫体边缘。
配子体
三日疟
卵形疟
形态与间日原虫的配子体相似,与三日疟相似 但虫体小于正常红细胞。疟色 素深褐色,颗粒粗大。
2、不典型疟疾(非洲多见)
❖ 原因不明发热,热型和发作周期不规律 ❖ 胃肠型恶性疟症状 ❖ 中枢神经型恶性疟症状
(三)实验室检查
1、病原学检测(显微镜血涂片) 2、抗原检测(RDT) 3、基因检测(PCR)
1.病原学检测(显微镜镜检血涂片) ❖ 操作简便、敏感性高、可鉴别虫种,计数
原虫密度,但需要有经验的化验员 ❖ 指导临床救治(原虫密度≥10%或Pf晚期虫 期提示重症),排除仪器误读。
蚊(胃、唾腺)
红细胞外期—肝细胞内裂殖体
按蚊刺吸人血时,子孢子随蚊唾液进入人体,约30分钟 随血流侵入肝细胞。 在肝细胞内,子孢子→滋养体→裂体增殖→红外期裂殖 体→裂殖子(约12000个) →肝细胞破裂→裂殖子散出 →血窦,一部分裂殖子被Mф吞噬,一部分则侵入RBC 内发育。 目前认为间日疟原虫和卵形疟原虫的子孢子有:速发型 和迟发型
雌性按蚊--终宿主--虫媒
蚊唾液腺内含有疟原虫子孢子 当雌蚊刺吸人血时,可随唾液进入人体 雌性按蚊饱餐人血
在蚊体内:♀按蚊)
配子生殖(有性生殖,在蚊胃腔)
♀配子体 ♂配子体
蚊吸血 入蚊胃
♀
配 子
受精 合
♂
子
配 子
孢子增殖 (无性,胃壁)
穿过
动 胃壁 卵
合 子
囊
子 孢 子
(P.v9-10天;P.m25-28天;P.f10-12天;P.o16天)
生2个环状体和1个环状体有2
个核不如恶性疟原虫多见。
间日疟环状体(薄血膜)
间日疟环状体(薄血膜)
间日疟环状体(薄血膜)
恶性疟环状体(薄血膜)
恶性疟环状体(薄血膜)
恶性疟环状体(薄血膜)
小滋养体(环状体)
三日疟
卵形疟
约为红细胞直径的1/3,略小于间 日疟。核1个,较大;环较粗厚; 偶见细小褐色颗粒状疟色素。
人体红细胞内期疟原虫
三期六种形态: • 滋养体期:小滋养体、大滋养体 • 裂殖体期:未成熟裂殖体、成熟裂殖体 • 配子体期:大配子体(雌配子体)、小配子体(雄配子体)
人体红细胞内期疟原虫的基本结构
细胞质(胞浆) 核 疟色素
1.细胞浆
被染成蔚蓝色或深蓝色,随着虫体发育,细胞 浆逐渐增多。早期为环状,发育到大滋养体阶段, 胞浆呈阿米巴样活动,胞浆内有空泡。
形态不规则,较大;空泡明显,1 黄褐色。一般不出现在外周 或2~3个;出现细小,黄褐色的 血。
疟色素。
间日疟滋养体
间日疟滋养体
间日疟大滋养体
间日疟大滋养体
间日疟大滋养体
间日疟大滋养体
间日疟大滋养体
大滋养体
三日疟
卵形疟
虫体较小,核1个,常呈长条状; 虫体略小,核1个,红色;胞浆致
胞浆致密,常呈带状,空泡不显 密,常呈圆形,极少呈带状,空
红细胞外期(P.v8天;P.m11天;P.f6天;P.o9天)
(蚊叮咬)
裂体增殖
入血
子孢子 速发型
红外期 裂殖体
裂体增殖
裂殖子
侵入RBC
裂殖子
侵入RBC
迟发型 (休眠子)
红外期 裂殖体
P.v; P.o
红细胞外期—肝细胞内裂殖体
红细胞内期
由肝细胞释放出的红细胞外期裂殖子侵入RBC内进行裂体增 殖,称为红细胞内期(红内期)。 基本过程:环状体 →大滋养体 →未成熟裂殖体 →成熟裂殖 体 →裂殖子→健康RBC ,重复上述过程几次,部分裂殖子 在RBC内不再进行裂体增殖,而发育为配子体 红内期裂体增殖周期:间日疟和卵形疟为48h;三日疟72h; 恶性疟36-48h 发作周期和红内期裂体增殖周期一致。
或联合用药的口服剂型(ACT)
疟疾现症病人的治疗
(2)恶性疟 ACT 双氢青蒿素哌喹片
(3)重症疟疾 首选青蒿素类药物的注射剂型,包括:蒿甲醚注射剂、
青蒿琥酯注射剂等。同时给予对症治疗和支持疗法,病情 缓解并且能够进食后ACT
疟原虫生活史
终宿主:雌性按蚊 中间宿主:人 感染阶段:子孢子期 传播媒介:雌性按蚊,中华按蚊、嗜人按蚊、微小按蚊、 大劣按蚊等。 寄生部位:人(肝细胞、红细胞)
红细胞内期(P.v48h;P.m72h;P.f3648h;P.o48h)
环状体 大滋养体 早期裂殖体 成熟裂殖体
♀配子体 (大配子体) ♂配子体 (小配子体)
疟疾发作、热型与原虫发育的关系
37C0
裂体增殖
在蚊体内的发育
配子生殖--有性繁殖
♀按蚊刺吸疟疾患者血液,疟原虫随血入蚊胃,仅♀♂配 子体存活并继续进行配子生殖,而其它各期疟原虫均被消 化。 ♂配子体形成♂配子(male gamete)或称小配子(microg amete)。 ♀配子体逸出RBC外,经减数分裂,发育为不活动的圆形 或椭圆形的♀配子(female gamete)或称大配子
形态与间日疟相似,略小于间日 疟。核1个,较大;环较粗厚;无 疟色素;寄生的红细胞在环状体 阶段即出现明显变化(薛氏点出现
较早,粗大、数多)。
三日疟环状体(薄血膜)
卵形疟环状体(薄血膜)
大滋养体
间日疟
恶性疟
经8~10小时,虫体增大,胞质增 较小,圆形;空泡小;早期疟色 多,伸出伪足。阿米巴样,虫体 素细小,金黄色,晚期结成块状,
2.核
即细胞核或染色质粒。在正常情况下核染成 鲜红色,呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构 致密,只有在个别发育阶段较为疏松。
3.疟色素
不着色,颜色和颗粒的形状,因疟原虫种类而异,疟色 素在虫体内散在分布或聚集成团块。 间日疟原虫--呈短棒状,黄褐色; 恶性疟原虫--呈细砂状,黑褐色; 三日疟原虫--呈砂粒状,深褐色; 卵形疟原虫--与间日疟原虫相似。
疟原虫镜检
安徽省CDC地寄科
目录
疟疾 疟原虫生活史 疟原虫镜检技术 血片制作与染色
疟疾
什么是疟疾?
疟疾(Malaria)是由疟原虫寄生于人体引起的
传染性寄生虫病,寄生于人体的疟原虫种类:
间日疟原虫 Plasmodium vivax
P.v 多见
恶性疟原虫 Plasmodium falciparum P.f 次之
间日疟成熟裂殖体
裂殖子
卵形疟成熟裂殖体
雌配子体
间日疟
恶性疟
圆形或椭圆形,虫体较大,占 新月形,两端较尖;核小,致 满胀大的红细胞;核小,致密,密,深红色,位于中央;胞浆 深红色,多位于虫体一侧 ;胞 深蓝色;疟色素位于核周。 浆致密,深蓝色,不含空泡; 核与浆之间有不染色带。疟色 素粗大,散在均匀分布。
2.免疫学检测(快速免疫诊断试条RDT) ❖ 操作简单、快速 ❖ 敏感性常低于镜检,不能确定原虫密度
3.基因检测 (PCR)
❖ 检测特异性、敏感性
优于镜检
bp
❖ 检测时间和成本高于