核酸提取试剂盒ppt课件

核酸提取试剂盒
➢核酸
核酸广泛存在于所有动物、植物细胞、微生物内、生物体内核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。 根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸，简称RNA和脱氧核糖核酸，简称DNA。 DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。 RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用，其中转移核糖核酸，简称tRNA。 起着携带和转移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，简称mRNA，是合成蛋白质的模板。 核糖体的核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白质的主要场所。
DNA提取方法
4.苯酚抽提法： 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液 时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。 蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并 含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的 物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 。
百度文库
离心柱及收集管 溶菌酶缓冲液 ELB 裂解液 GDL 缓冲液 GDB 蛋白洗涤液 PWB 洗涤液 WB 蛋白酶 K 洗脱液 EB
离心柱试剂盒组成
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离心柱操作步骤
所有离心步骤皆使用台式离心机，为室温下操作。 第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签，在洗涤液WB中加入无水乙醇。 1.取适量的细菌培养液（最多提取的细菌数量为2×109个），10,000rpm离心1分钟，弃上清，留细菌沉淀备用。 2.提取的细菌为革兰氏阴性菌，可以在菌体沉淀中加入200µl裂解液GDL。用吸头吹打几下，充分混匀。然后进入步骤4 3.提取的细菌为革兰氏阳性菌，必须要进行溶菌酶破壁处理（如不确定为何种菌属，请按处理革兰氏阳性菌的方法进行
DNA提取方法
磁珠法：生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多 种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的 作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体 中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶 向物质。
• 离心柱子法
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柱子
• 磁珠法
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生物磁珠
核酸提取试剂盒
离心柱试剂盒（细菌）概述
本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。该试剂 盒提供的方法简单易行，通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA 结合在柱材上，避免酚仿抽提。所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和 稳定性好等特点。可以满足PCR、酶切、分子杂交和文库构建等各种分子生物学实验 需要。
离心柱操作步骤
7.对于革兰氏阴性菌70℃保温15分钟（革兰氏阳性菌需70℃保温30分钟）。等溶液变成清亮后，离心数秒去除管壁上的 水珠。如果溶液未变清凉，说明细菌裂解不充分，起始菌量太大，需要适当调整。
8.加入220µl的无水乙醇，剧烈振荡，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。 9.将离心柱装在收集管上，然后将所得的溶液及沉淀都转移入离心柱中。12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的滤液。 10. 加入500µl蛋白清洗液PWB，12,000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。 11. 加入500µl洗涤液WB，12,000rpm离心30秒。（使用前请检查是否已经加入无水乙醇） 12. 重复步骤11的操作一次。 13. 12,000离心1分钟，去掉离心柱中的所有液体。将离心柱放在一个干净的新的1.5ml离心管中，置于37℃ 烘箱放置5‐10分钟，待管中的乙醇全部挥发为止。 14. 往离心柱中央悬空滴加经70℃水浴预热的100-200µl洗脱液EB。室温放置2分钟后，12,000rpm离心30秒，洗脱
DNA提取方法
5.水抽提法：利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于 水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体 积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ，80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥 ,即得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取 过程中加入SDS。 6.阴离子去污剂法：用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA . 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
➢核酸提取试剂盒
DNA提取试剂盒 RNA提取试剂盒
DNA提取方法
➢DNA提取方法
1.碱裂解法：碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的。 2.煮沸法：煮沸时将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来，离心沉淀后将杂质去 除，上清液即可用作pcr扩增。 3.浓盐法：利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 化纳提取,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时 蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将 DNA 钠盐沉淀出来。
）。具体操作如下：称20mg溶菌酶，置于1.5ml离心管中，取1ml溶菌酶缓冲液ELB，反复吹打几次将溶菌酶完全 溶解，配制成溶菌酶裂解液。向细菌沉淀中加入200µl溶菌酶裂解液（未用完的溶菌酶裂解液可保存于‐20℃，以备 下次使用），吹打重悬细菌沉淀。37℃破壁处理30分钟以上，一些较难处理的细菌可以延长处理时间。破壁处理完 成后便可以将水浴温度调至70℃备用。 4.RNA清除处理，补加5µlRNase A溶液，充分混匀。 5.加入15µl蛋白酶K，充分混匀。 6.加入220µl缓冲液GDB充分混匀。加入缓冲液GDB可能会出现白色沉淀，放置于70℃水浴时便会消失。
核酸提取试剂盒
洛阳惠尔纳米科技有限公司 狄光辉
试剂盒
试剂盒分类
➢ 核酸提取
磁珠法，离心柱法，DNA和RNA，不同样本
➢ 蛋白检测
elisa试剂盒，免疫共沉淀试剂盒，化学发光试剂盒，免疫组化试剂盒，放射免疫试剂盒，免疫荧光试剂盒
➢ 重金属检测
不同重金属离子检测，不同样本中重金属离子检测
➢ 其他
PH检测，污染气体检测等等