红细胞血型系统及其检测
红细胞血型的名词解释
红细胞血型的名词解释红细胞血型是指人类红细胞表面存在的一种血型抗原差异，主要包括ABO血型系统和Rh血型系统。
这些血型抗原的存在与红细胞膜上特定的糖和蛋白质有关，不同的血型之间存在着互不相容的现象。
研究红细胞血型可以帮助医师进行输血配型，预防输血反应的发生。
一、ABO血型系统的名词解释ABO血型系统是最早被发现和研究的血型系统，它由两种糖基化抗原A和B组成。
在红细胞表面，如果存在A抗原，则称为A型血；存在B抗原，则称为B型血；同时存在A和B抗原，则称为AB型血；如果红细胞表面没有A和B抗原，则称为O型血。
另外，还存在抗A和抗B两种血型抗体，分别存在于非对应的血型中。
这些抗体的存在导致了不同血型之间的互不相容，如A型血不可输给B型血，否则会引起输血反应。
ABO血型系统的遗传规律是由基因决定的。
基因有两个等位基因，即A和B。
A型血或B型血都是由两个相同的等位基因所决定，而O型血则由两个不同的等位基因决定。
如果一个人的基因表现为AO或BO，则表现为A型或B型血，而AA、BB或AB则表现为AB型血。
OO型血则意味着它没有A和B两种抗原的基因。
二、Rh血型系统的名词解释Rh血型系统是指红细胞膜上存在的Rh抗原。
如果红细胞膜上有Rh抗原，则称为Rh阳性；如果没有，则称为Rh阴性。
Rh血型系统的命名源于一种猴类抗原，是在20世纪40年代被发现的。
Rh血型的互不相容主要是指Rh阴性个体对Rh阳性血液产生的免疫反应。
Rh血型也是由基因决定的，有两个等位基因，即Rh阳性和Rh阴性。
如果一个人的基因表现为Rh阳性，则表现为Rh阳性血型，否则为Rh阴性血型。
在Rh血型中，Rh阴性血型的个体在输血中更容易引发免疫反应，因为它们会抗体抗原反应产生抗Rh抗体。
三、其他血型系统的名词解释除了ABO血型系统和Rh血型系统，还存在其他多个血型系统，如Kell、MNS、Duffy和Kidd等系统。
这些血型系统的遗传规律和存在的抗原及抗体不同于ABO和Rh血型系统。
红细胞血型原理与检测策略
红细胞血型原理与检测策略引言：红细胞血型是指红细胞表面的抗原和血清中的抗体的特异性反应。
根据不同的抗原和抗体的存在与否，可以将人类的红细胞血型分为A、B、AB和O型。
了解红细胞血型具有重要的临床意义，包括输血、器官移植和孕产妇管理等方面。
本文将介绍红细胞血型的原理以及常用的检测策略。
一、红细胞血型的原理红细胞血型是由红细胞表面的抗原和血清中的抗体决定的。
抗原是一种能够刺激机体产生抗体的物质，而抗体则是一种能够与抗原特异性结合的免疫球蛋白。
根据红细胞表面抗原的不同，人类的红细胞血型可分为A、B、AB和O型。
1. ABO血型系统：ABO血型系统是最常见和最重要的红细胞血型系统之一。
根据红细胞表面是否存在A抗原和B抗原，人类可以分为A型、B型、AB 型和O型。
A型红细胞表面有A抗原，B型红细胞表面有B抗原，AB型红细胞表面同时具有A抗原和B抗原，而O型红细胞表面则没有A抗原和B抗原。
2. Rh血型系统：Rh血型系统是另一个重要的红细胞血型系统。
Rh血型系统中最重要的抗原是Rh因子，也称为D抗原。
如果红细胞表面有Rh因子，则为Rh阳性；如果没有Rh因子，则为Rh阴性。
二、红细胞血型的检测策略红细胞血型的检测通常包括血型鉴定和抗体筛查两个方面。
1. 血型鉴定：血型鉴定是指确定个体的ABO血型和Rh血型。
常用的血型鉴定方法包括直接血细胞法和血清试剂法。
直接血细胞法是通过将被测血液与已知血型的抗血清混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与抗A血清混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为A型；如果与抗B血清混合后出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
血清试剂法是通过将被测血液与已知血型的红细胞混合，观察凝集反应来确定血型。
例如，将被测血液与A型红细胞混合，如果出现凝集反应，则说明被测血液为B型。
2. 抗体筛查：抗体筛查是为了检测血清中是否存在与红细胞抗原相对应的抗体，以避免输血引起的不良反应。
常用的抗体筛查方法包括交叉试验和抗人球蛋白试验。
血型的鉴定方法及操作全解
规则抗体：ABO系统产生抗Ａ、抗Ｂ是有规律的。 Landsteiner规律： Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ 不规则抗体：除ABO 系统外，其他系统产生的抗体 均不符合上述规律。 正常人血液中一般没有不规则抗体，又称为意外抗体 （unexpected antibody）。
完全抗体和不完全抗体
原理：根据IgM类抗体与红细胞膜上特异性抗 原能发生凝集反应。 正定型：已知血型抗体试剂 + 红细胞
鉴定红细胞上血型抗原
反定型：已知标准红细胞 + 血清
鉴定血清中抗体
反应条件：生理盐水介质，室温，肉眼可见凝 集反应 平板法，试管法，微孔板法，试管离心法最可 信赖。 应用：ABO血型定型、RhD抗原定型 （IgG+IgM，IgM单克隆抗体），交叉合血
增强IgG抗体 的凝集作用
注意事项：
Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照
方法学评价
简单经济
稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血 型系统
3.抗人球蛋白实验（Coomb’s test）
原理和方法
抗IgG
待测红细胞 + 抗RhD（IgG）
红细胞凝集
+ 抗人球蛋白
应用延伸：
红细胞血型
红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion)
2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原
一、ABO血型系统
1. ABO血型抗原和抗体特性
2.ABO血型的遗传与生化
（1）ABO基因型与表型 A型——AA，AO B型——BB，BO AB型——AB O型——O
血型鉴定
基因
酶
合成抗原
思考：A、B、AB型红细胞是否存在H物质？
（3）ABH可溶性抗原形成
分泌型血型物质：ABH抗原存在于红细胞、 内皮细胞、血小板、淋巴细胞、上皮细胞等， 也可出现在除脑脊液外的分泌液中，唾液中最 丰富。 Se，se基因——与体液分泌有关，Se编码α – L-fucocyltransferase，形成分泌液中的H抗 原，H也可转化为A或B抗原，Se不影响红细 胞上ABH形成，Se为分泌型；se为非分泌型； 19chr。
红细胞血型
红细胞血型分类： ISBT（The International Society of Blood Transfusion)
2002年，29个系统，200多个抗原 目前，30个系统，300多个抗原
一、ABO血型系统
1. ABO血型抗原和抗体特性
2.ABO血型的遗传与生化
（1）ABO基因型与表型 A型——AA，AO B型——BB，BO AB型——AB O型——O
是存在于红细胞上的化学结构，化学本质是糖 和多肽，是红细胞膜上的跨膜蛋白。 存在于红细胞膜上（完全抗原），也存在于上 皮细胞以及各种体液和分泌液中（半抗原）。
RBC 存在于体液、分泌液中
红细胞血型抗体
天然抗体、免疫抗体
规则抗体、不规则抗体 完全抗体，不完全抗体 同种抗体，自身抗体
Βιβλιοθήκη 天然抗体和免疫抗体Rh抗体种类 抗D，抗E，抗C，抗c，抗e
ABO和Rh血型系统的临床意义
安全输血的主要保证
新生儿溶血病的诊断 器官移植的必要条件 其他：遗传学研究，法医学鉴定
红细胞血型检测技术
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞血型系统及其检测PPT课件
红细胞血型系统
主要内容： 红细胞血型系统免疫学基础 ABO血型系统 Rh血型系统 其他红细胞血型系统 多凝集红细胞
一、免疫学基础原理
（一） 抗原（antigen）
免疫原(immunogen）是能够刺激机体免疫 系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以 在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞 结合,产生免疫反应。
抗原抗体反应的特点
高度特异性 可逆性 比例性 两个反应阶段：致敏和凝集阶段
影响红细胞凝集反应的因素
抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度 红细胞间距离
常用红细胞抗原和抗体鉴定试验
生理盐水法
saline agglutination test
抗球蛋白试验 antiglobulin test , Coombs
抗原抗体反应的特异性
抗原的功能
抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液 免疫（humoral response）或细胞免疫（cellmediated response) 反应。
前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液 中；后者由淋巴细胞介导，出现延迟性超过敏反 应或排斥移植物的生物效应。
影响抗原免疫原性的因素
红细胞 红细胞
自然状态下的红细胞
黄色表示红细胞 表面的负电荷层
红细胞之间保持 24nm的距离
蓝色表示红细胞 周围的正电荷层
按抗体与抗原反应的最适温度，分为两种 冷型抗体 cold antibody 温型抗体 warm antibody
按照抗体与相应抗原的依存关系
规则抗体 不规则抗体（意外抗体）
输血前检查的要求
▪ 输入的红细胞 ▪ 输入的血浆成份
在受血者体内必须 不凝集或不溶血
血型鉴定与输血不良反应的实验诊断
血型鉴定与输血不良反应的实验诊断(一)血型鉴定及交叉配血常用试验及其意义1.红细胞血型系统：(1)ABO血型系统1)ABO血型抗原及基因：2)ABO血型抗体IgM抗体：天然获得IgG抗体：后天免疫获得IgM与IgG抗体的特性(2)Rh血型系统1)Rh血型抗原：D抗原，临床检测Rh(D)，汉人≥99.7%C/E/c/e抗原：弱，不检测2)Rh血型抗体：IgG抗体：70%的Rh(-)者可通过免疫获得3)Rh血型的变异型：弱D型：有D抗原，但弱表达部分弱D型：部分D缺失，弱表达DEL：D抗原完全或大部分缺失，不表达2.白细胞血型（略）3.血小板血型(1)血小板非特异性抗原：相关抗原HLA抗原：HLA-I类抗原红细胞血型抗原：ABO血型抗原——血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR)：原因复杂，免疫/非免疫/未明确因素。
免疫因素中主要由HLA 抗原引起(2)血小板特异性抗原（Human Platelet Antigen,HPA)——输血后紫癜(post-transfusion purpura, PTP)：输血/怀孕史患者输血后5-10天突然出现的PLT减少。
文献报道多为HPA-1a 引起（欧美研究多）——新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAIT)：母体抗胎儿HPA IgG（来源于父方）。
原发性血小板减少性紫癜母亲的免疫性抗体引起(二)血型鉴定与交叉配血常用试验1.红细胞血型鉴定(1)ABO 血型鉴定正定型(forward grouping)：细胞定型反定型(reverse grouping)：血清定型1)吸收放散法可鉴定弱A或弱B型2)临床意义①输血：正反定型结果一致。
同型相输。
否则——急性溶血性输血反应②实体器官移植：ABO血型相同。
否则——超急性排斥反应③评估ABO新生儿溶血病患病风险(2)Rh血型鉴定1)RhD细胞定型：Rh(+) / Rh(-)2)临床意义输血：同型相输的原则，紧急时？——弱D供血者亦视为阳性预防新生儿溶血病(Rh-HDN)实体器官移植：超急性排斥反应(3)红细胞交叉配血试验1)主侧配血：受者血清+供者RBC2)次侧配血：供者血清+受者RBC 结果均为阴性——发现不规则抗体方可接受输血3) 自身对照：受者血清+受者RBC——发现自身抗体2.血小板血型鉴定(1)血小板抗原分型：HPA分型：血清法或分子生物学法HLA分型：分子生物学法(2)血小板抗体检测：ELISA法HLA抗体：在血小板同种抗体免疫中重要(＞79.9%)HPA抗体：与HLA抗体共同形成了血小板同种抗体(17.6%)(三)血型鉴定及交叉配血的主要临床应用1.临床输血主要相容：同型相输次要相容：必要时可接受的2.新生儿溶血病HDNABO血型不合：常见，程度较轻; Rh血型不合：少见，程度较重HDN发生原理：（以Rh-HDN为例）抗人球蛋白法检测HDN：IgG类抗体不发生肉眼可见凝集反应加入中间试剂：抗人IgG免疫球蛋白发生肉眼可见的凝集反应产前检查（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）[目的]预测夫妻间HDN发生的可能性[结果] 配合——不会发生HDN; 不配合——测抗体，阳性者测效价[正常范围]ABO抗体效价≥512，Rh抗体效价≥16→密切监控，Rh抗体效价≥32且有溶血史者考虑换血 产后检查：新生儿IgG抗体测定（检测新生儿血清中是否含有母源IgG抗体）直接抗球蛋白试验(direct antiglobulintest, DAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）检测新生儿RBC是否被母体IgG致敏游离抗体试验：亦称间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test, IDAT)：（不完全抗体、RBC、抗人球蛋白）抗体释放试验：与DAT同，但敏感度高于DAT（不完全抗体、O型RBC/酶处理O型RBC、抗人球蛋白）——释放条件：热释放、冷释放、乙醚释放等——诊断HDN的最有力证据3.不规则抗体筛查与鉴定(1)概念：规则抗体(regular antibody)：——ABO系统中的抗-A、抗-B的IgM抗体不规则抗体(irregular antibody)：——除规则抗体之外的血型抗体(2)特点：抗体效价较弱，易漏检(3)筛查方法：受者血清+抗体筛选细胞(4)鉴定方法：筛查阳性者血清+谱细胞(5)意义：发现有临床意义的不规则抗体，确保输入合适的抗原阴性的血液三、不规则抗体筛查与鉴定(四)常见输血不良反应的实验诊断常见输血不良反应的发生率血小板输注无效特殊的输血不良反应，即指各种因素导致的输注血小板后无“适当反应”诊断标准：1h/24h血小板回收率(PPR)和血小板纠正值(CCI)为指标。
红细胞血型系统
• （一）完全抗原 即同时显示抗原性和免疫原性— 蛋白质
• （二）半抗原 只显示抗原性而无免疫原性---多 糖、类脂
• （三）抗原决定簇（表位）抗原上一种特异性的 呈立体排列的化学基团，每一个抗原有多个表位
• 血型抗原 是红细胞上的化学构型，依生化性质 分为：
红细胞血型系统
临检与血检教研室
• 一、输血学定义 是围绕将献血者血液输给 患者进行救治这一中心，研究、开发、和 应用一切可采用的科学技术手段及管理措 施，提高血液和血液制品（包括血液代用 品和人造血液）的质量和安全性，从而保 证临床输血的安全性和有效性。
输血发展史
两个里程碑 • 1628年William
为E、C、c、e. 红细胞上正常D抗原数 1万到3.3万 弱D 抗原数 200-1万 增强D抗原数 7.5-20万
Rh血型抗原
2、 D抗原的分类 正常的D抗原 弱D型（Du型；weak D): 与正常的D抗原无质差别,但数量很少。 弱D红细胞与IgM类抗-D试剂反应呈阴性，抗球蛋
白方法检测为阳性 氨基酸改变位于细胞膜内或是跨膜区 不完全D型（Partial D ）:
• （六）ABO血型系统与临床
• 1、输血：选择血型相同的供血者，进行交 叉配血完全相合才能输血
• 2、母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病
• 3、器官移植时，受者与供者也必须ABO血 型相符才能移植。
二、Rh血型系统
应该怎么做？
• 车祸伤者大出血，急需输血 • 查为RH阴性血 • 医院及血库无RH阴性血 • 若不输血患者生命垂危
• （六）、 ABO血型系统的抗原亚型
• 亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构 和性能或抗原位点数有一定差异
红细胞血型检测
7)疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患 者中，ABO血型系统的抗原性可受到抑制，检出困难。
8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常， 发生多凝集现象。
9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B” 的活性。
4. 若受血者使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意洗 涤被检红细胞。
5. 每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于 2~8℃至少7天。
红细胞血型检测
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二、受血者和供血者ABO和Rh定型
（一）、原理
根据红细胞膜表面上有无A 抗原或B抗原，将血型分为 A型 、B型、AB型、O型4种。A型人血清中含有抗-B抗体，B 型人血清中含有抗-A抗体，O型人血清中含有抗-A抗体和 抗-B抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。
红细胞血型检测
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三、不规则抗体筛选和鉴定
5. 微柱凝胶卡式检测法
三、不规则抗体的鉴定
抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是2或3个人份的 O型红细胞成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有 以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N，条件不足的 实验室不一定具备Lua、V、Cw、Kpa、Jsa 类的抗原。 一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定其特异性。 抗体鉴定实验包含以下主要内容： (1)自身细胞检查：观察患者(受者)的血清与患者(受者)自 身细胞的反应情况，确定血清内是否有自身抗体或自身抗 体和同种抗体二者同时存在。 (2)普红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用各种抗体检 查技术，检测患者的血清，确定其抗体的特异性。
正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应，检测红细胞 表面是否存在A抗原或B抗原。
Rh血型系统及检测-1
Rh血型基因
• 编码Rh血型抗原为两个高度同源的基因 RHD基因和RHCE基因，RHD编码D抗原， RHCE编码Cc/Ee抗原。RHD抗原阳性者的 人有RHD和RHCE基因，而RHD阴性的人 绝大部分只有RHCE基因无RHD基因，或 少部分为RHD阴性者有无功能的RHD基因， 因此不存在d抗原，也无抗-d抗体。RHD和 RHCE基因均含有10个内含子和10个外含 子，其两基因碱基数量及排列基本是一致 的。
D基因 D阳性（RH：1） X D抗原多肽 无D基因 D阳性（RH：-1）
CE基因
Cc和Ee抗原多肽 CE基因
Cc和Ee抗原多肽 无效D基因 X 不编码D抗原多肽 Cc和Ee抗原多肽 CE基因
图 RH双结构基因—Two Structural Rh Geneg
(1986年Tippett提出，cDNA，PCR技术证实)
• 1、RH血型抗原由两个基因编码，RHD编码D抗原， RHCE编码Cc/Ee抗原。 • 2、RHD阳性人有RHD和RHCE基因，RHD阴性人大部份 只有RHCE基因无RHD基因，但少部分人有无功能的RHD 基因。 • 3、RHD和RHCE基因均为10个外含子和10个内含子。 • 4、RHD无等位基因，既无d基因，也必然无d抗原和-d抗 体。 • 5、现在已经摈弃了RH血型基因两个假说： • （1）Fisher-Races:C,D,E三个紧密连接的基因位点学说。 • （2）wieners:Rh-Hr单一基因的多等位基因假说。
• 表1 Rh 基因复合物三种表述及频率 • 基因 复合物 频率 ---------------------------------------------------------------------------------• CDE Rh-Hr 字母/数字 英国 中国(广东人) ---------------------------------------------------------------------------------• DCe R1 Rh1,2,-3,-4,5 0.4205 0.7292 • dce r Rh-1,-2,-3,4,5 0.3886 0.0232 • DcE R2 Rh1,-2,3,4,5 0.1411 0.1870 • Dce R0 Rh1,-2,-3,4,5 0.0257 0.0334 • dcE r” Rh-1,-2,3,4,-5 0.0119 0.0000 • dCe r’ Rh-1,2,-3,-4,5 0.0098 0.0189 • DCE Rx Rh1,2,3,-4,-5 0.0024 0.0041 • dCE Ry Rh-1,2,3,-4,-5 0.0000 0.0036
红细胞血型抗体的分类及检测
红细胞血型抗体是人体免疫系统产生的针对不同血型抗原的抗体。
这些抗体可以在特定情况下引起血型不合适的输血反应或妊娠并发症。
红细胞血型抗体通常根据它们对不同血型抗原的反应以及它们可能引起的输血反应类型进行分类。
以下是一些常见的红细胞血型抗体分类及检测方法：
1. IgM 类抗体：这些抗体属于较早产生的类型，通常在初始免疫应答时形成。
常见的IgM类抗体包括反A抗体（抗A抗体）和反B抗体（抗B抗体）。
2. IgG 类抗体：这些抗体属于较晚产生的类型，通常在再次暴露于特定抗原后产生。
这些抗体更小，能更容易进入胎盘，因此在妊娠期间可能引发问题。
例如，Rh（D）抗体是IgG类抗体，可能导致Rh血型不合适的妊娠并发症。
检测红细胞血型抗体的常见方法包括：
1. 凝集试验：将被测血清与已知血型抗原混合，观察是否出现凝集反应。
如果出现凝集，表示血清中存在相应抗体。
2. 间接抗人球蛋白试验（间接抗人球蛋白试验，IAT）：这是一种常用于检测患者血清中的抗体的方法。
患者的血清与已知血型的红细胞混合，然后添加抗人球蛋白血清，观察是否出现凝集反应。
3. 直接抗人球蛋白试验（直接抗人球蛋白试验，DAT）：这种方法用于检测已凝集在患者红细胞表面的抗体。
通常用于检测新生儿溶血性疾病。
4. 流式细胞术：这是一种现代化的方法，利用流式细胞仪对红细胞进行检测，可以精确地确定血液中的不同抗体。
这些方法在临床上常用于血型鉴定、输血前筛选和处理妊娠期间的血型不合适问题。
需要强调的是，红细胞血型抗体的分类和检测方法可能会随着医学科技的进步而有所变化，因此在实际操作中应遵循当前的标准和指南。
红细胞血型检测
红细胞血型检测摘要】目前红细胞血型至少已发现有26个血型系统，400多种血型抗原。
ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是对人类影响最大的一个系统。
本节重点介绍ABO和Rh两个血型系统。
【关键词】红细胞类型检验(一)ABO血型系统1.ABO血型的分类人类红细胞表面有两种抗原，分别为A抗原和B抗原，A型红细胞表面含A抗原；B型红细胞表面含B抗原，AB型红细胞表面含有A和B两种抗原，O型红细胞既不含有A抗原也不含有B抗原。
在人的血清中，存在着两种天然抗体，一种叫抗A抗体，一种叫抗B抗体，在A型人的血清中含有抗 B抗体，在B型人的血清中含有抗A抗体，在AB型人的血清中既不含有抗A抗体也不含有抗B抗体，O型人的血清中含有抗A和抗B两种抗体。
两种抗体可分别与相应的A或B抗原发生免疫反应。
2.ABO抗原与血型物质 ABO系统的血型抗原有A、B、H三种，它们属于多糖类抗原，主要存在于红细胞表面，与脂质、蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇，抗原成分由多糖和多肽组成。
多肽部分决定血型的抗原性，多糖部分决定血型的特异性，H抗原是A、B抗原基础物质。
ABO各型红细胞上都有H抗原，O型最多，其顺序分别为O>A2>A2 B>B>Al B。
ABH抗原在胎儿37天时便能检出，以后反应的敏感性不断增强，至出生时红细胞 ABH抗原的敏感性已是成人的20％，至20岁时达高峰，抗原性终生不变，所以，初生儿不易鉴定血型。
3.ABO血型抗体 ABO血型系统抗体若按产生的原因又分、为“天然抗体”和“免疫性抗体”。
(1)天然抗体：没有可以觉察的抗原刺激，在体内自然存在的抗体称为天然抗体，如人体血清中的抗A、抗B抗体，就属于天然抗体。
天然抗体大多数都是IgM，分子量100万，分子的长度为95 nm，由于分子量大，不能通过胎盘，不耐热，70℃加热l小时便破坏，能在等渗盐水中与含有相应抗原的红细胞发生凝集，因此，又叫凝集素或盐水抗体或完全抗体。
Rh血型系统及检测-1
Rh血型抗原
• Rh血型基因编码两条多肽，即RHD编码D抗原多肽，RHCE 基因编码CcEe多肽，两条多肽均为416个氨基酸组成，贯穿 红细胞膜12次，成6个环，NH2端和COOH端均在细胞浆中。 应用分子生物学技术和单克隆抗D试剂研究结果，摈弃了传统 的DuD variant和Dmosaic等几种表示弱D抗原的方式。现将 RHD抗原分为5种，分别是：（1）D-正常D抗原（2）弱 D(WeakD）-抗原质正常而量少的RhD抗原（3）不完全D-抗原
第十四页，编辑于星期四：十六点 五十一分。
• D抗原分类：根据D抗原的数量和质量不同以及抗原性不同， 将D抗原分类为5种。
• （1）D：常见的D抗原。
• （2）弱D：只是D抗原量少，质无变化，现称之为DU，不同于 传统的DU，传统的DU包括D抗原量减少和质量变化的红细胞。
• （3）表位不完全型D（Partial D）D抗原数数目基本正常，但缺失 正常D抗原上部分抗原表位。
中国(广东人)
----------------------------------------------------------------------------------
• DCe R1 Rh1,2,-3,-4,5
0.4205 0.7292
• dce r Rh-1,-2,-3,4,5
0.3886 0.0232
Rh血型功能
• Rh血型抗原多肽在红细胞膜上发挥结构和 功能蛋白的作用，即维持红细胞膜结构完整 性，同时发挥着阳离子膜转运通道的作用， 以及可能发挥着磷脂酰丝氨酸在细胞膜双层 间运动的催化作用。
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历史和命名
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完全抗原（antigen，complete）
具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为
完全抗原。
半抗原 （hapten）
缺乏免疫原性而只有反应原性的抗原称为半抗原。
抗原的基本特征
1、外源性 2、分子量大，结构复杂
3、特异性
免疫原性（immunogenicity）
4、抗原性
{
反应原性（specificity）
直接凝集 direct agglutination 间接凝集 indirect agglutination
IgM抗体造成的直接凝集
间接凝集反应的两个阶段
• 第一阶段
致敏阶段
•
第二阶段
真凝集阶段
IgG抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反应
试管中红细胞凝集强度的判断
红细胞凝集反应结果的判读评分标准
红细胞抗体检测
什么情况下对输血患者做抗体检测？ 妊娠史 输血史 近期需要多次输血患者
二、红细胞血型检测
输血前免疫学检查内容
常用的检测技术
（一）、输血前免疫血液学检验
输血前检查分为两个方面，一方面是对供血者进
行的检查，另一方面是对实际 接受输血的患者 （受血者）进行的检查。 输血前检查的目的在于为每一名受血者选择适合 的血液成分，使其有正常的存活时间，并且不引 起受血者本身红细胞临床上的明显破坏
类 似酶性质的一组复杂的血清蛋白系统。各成分均 以不活动的酶原形式存在于血清中，只有被激活 后，把酶原变成酶，才能发挥其生物活性作用，
所以也叫做补体系统。
补体的性质
补体的性质是非特异性，不稳定，易被
紫外线、机械振荡、化学药物以及加热破坏
其活性 。
（三）红细胞抗原抗体反应
抗原抗体反应是机体防御系统功能的一
受血者血样本
血液标本的要求
血液标本必须经鉴定和标记，并和血液 申请单上内容核对、确定 标本必须能代表患者的当前免疫状况 防止血液标本的稀释和溶血 输血前检查最好使用血清，也可以使用 血浆。
每次输血后标本至少保存7天。
为什么输血前检查用血清比血浆更好？
首先，有时血浆中可形成小的纤维蛋白凝块使 认读困难。其次，一些通过补体激活才能反应的抗 体，用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四 乙酸（EDTA）或枸橼酸盐能螯和钙并阻止补体激 活。
4+ 3+ 2+ 1+ W+ 阴性 1个凝块，背景清晰，无游离红细 2~3个凝块，背景清晰，无游离红细 多个小凝块，背景清晰，无游离红细 无数的小颗粒，背景混浊，有游离红细胞 镜下较少凝集，有较多的游离红细胞 肉眼观察不到凝集，镜下全为游离红细胞
抗原抗体反应的特点
高度特异性 可逆性 比例性 两个反应阶段：致敏和凝集阶段
抗原抗体反应的特异性
抗原的功能
抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液 免疫（humoral response）或细胞免疫（cellmediated response) 反应。 前者通过浆细胞合成抗体输送到血液或体液
中；后者由淋巴细胞介导，出现延迟性超过敏反
应或排斥移植物的生物效应。
影响抗原免疫原性的因素
6、鉴定器材和试剂血清被污染
Rh血型鉴定可能出现假阴性的原因
1、受检细胞悬液浓度太高，与试剂血清比例
失调。
2、漏加或错加定型试剂
3、观察结果时摇动用力过度，摇散弱凝集。
4、试剂血清保存不当引起变质
5、定型血清的使用方法不当
6、D变异型检测应用抗人球蛋白试验
红细胞血型抗体的分类
按产生的原因和条件大致可分为三类
天然抗体 免疫抗体
natural antibody immune antibody
自身抗体
autoantibody
同种抗体 allo-antibody
按照与相应红细胞是否在盐水中产生凝集
完全抗体（complete antibody）
5、嵌合体血型（开米粒，chimerism )
13、低丙种球蛋白血症
15、年龄因素
14、药物等因素
16、防腐剂因素
17、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和 分析弱抗原时的差异
技术问题
1、不干净的试管
2、血清与细胞的比例
3、离心速度。
4、 污染的试剂和标本
5、记录结果错误 6、 漏加试剂。 7、弄错标本 8、阳性溶血反应误认为阴性。
IgG
能
不能 能
能 能
难 易
否 是
难 易
IgM 不能
补体 complement
补体是存在于人和动物血清中的一种正 常成分，由球蛋白、糖和磷脂结合而成，约占 血清球蛋白总量的10％。它能补助各种特异性 抗体溶解相应的细菌和细胞。
补体系统
complement system
补体是由20多种血清蛋白成分组成的具有
Rh血型定型
主要鉴定D抗原，定型时应按抗D血清试
剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验， 包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试 验。
Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因
1、受检红细胞直抗阳性 2、高蛋白试剂引起缗钱状凝集 3、纤维蛋白造成的凝块
4、定型试剂中存在的其它抗体
5、多凝集细胞造成的假阳性
影响红细胞凝集反应的因素
抗原抗体的比例 反应温度 溶液的pH值 孵育时间 离子强度 红细胞间距离
常用红细胞抗原和抗体鉴定试验
生理盐水法 抗球蛋白试验 蛋白水解酶试验 低离子强度试验 聚凝胺试验 凝胶试验 吸收放散试验
saline agglutination test antiglobulin test , Coombs enzyme-treated cell agglutination low ionic- strength solution, LISS polybrene technique gel technique absorption elution test
红细胞血型系统及血型检测
李宝华 临床基础检验学教研室
红细胞血型系统
主要内容： 红细胞血型系统免疫学基础 ABO血型系统 Rh血型系统 其他红细胞血型系统 多凝集红细胞
一、免疫学基础原理
（一） 抗原（antigen）
免疫原(immunogen）是能够刺激机体免疫
系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以 在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞 结合,产生免疫反应。
输血前检查的要求
输入的红细胞
在受血者体内必须
不凝集或不溶血
输入的血浆成份
不导致受血者红细
胞的明显破坏，
输血前检查的主要程序
受血者的病史和血样本等的检查、 核
对及处理。
ABO和Rh定型 抗体筛选和鉴定 交叉配血试验
标签和发血
受血者病史和血样的检查、核对及处理
输血申请单
血标本要求
温型抗体 warm antibody
按照抗体与相应抗原的依存关系
规则抗体
不规则抗体（意外抗体）
按免疫球蛋白的生物化学特性分为五类
IgG
IgM
IgA
IgE
IgD
IgG的四种亚类
IgG和IgM免疫球蛋白的特征
通过 胎盘
盐水 反应
结合 被2-Me 补体 破坏
降低温度 提高反应
被血型物 质中和
• • • • •
种属间的抗原性 同种间的抗原差异 个体间的差别 进入途径
抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺
激频率
红细胞血型抗原
红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面,有不同 的外部形态，有或没有某一个抗原成份，形成了不
同的血型。
红细胞血型抗原必须是用相应抗体检测到的红
细胞表面抗原，属于遗传性状。
红细胞血型抗原的生化结构
由结合到蛋白或脂上的碳水化合物 carbohydrat 决 定 如： ABO 、 Lewis 、 Hh 、 P、 Ii等
由蛋白的氨基酸序列决定 如： MNSs、 Rh、 Kell、 Kidd等大多数血型抗原
血型系统（blood group system）
由单一基因座位控制，或是由二个或更多的紧密连
欲解决技术问题
应洗涤红细胞3次并配盐水悬液进行重新
正反定型试验并检查红细胞直抗
被检者自身ABO血型问题
1、血清异常
3、异常基因 6、疾病因素导致抗原减弱 8、获得性B 高 10、近期内进行大量血浆置换 11、异常的血浆蛋白 12、意外抗体的存在
2、红细胞致敏
4、近期输血 7、红细胞多凝集现象 9、血型特异性物质过
锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制
血型集合（blood group collection）
抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合
高、低抗原频率组 ( high and low frequency antigens )
高频抗原 （high frequency antigens)
为大多数人所具有的血型抗原，表示1000个
人中至少有999人存在此抗原。
低频抗原 (low frequency antigens)
为少数人所具有的血型抗原，表示 1000个人
中最多只有1人有此抗原。又称为私有血型组抗原。
（二）红细胞血型抗体(antibody)
抗体是机体对外来抗原刺激所产生的 一组具有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋
白( immunoglobulin， Ig )。
部分，借以排除外来物质对机体的损害，