丙二醛(MDA)含量的测定ppt课件
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生化理论10 丙二醛(MDA)的测定
测定管
0.1 0.1
测定空白管①
0.1 0.1
试剂B/ml 试剂C/ml
50%冰醋酸/ml
混匀 （摇动试管）
3.0 3.0
3.0
3.0
1.0 1.0
1.0
1.0
加入试剂后，用旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，刺一小孔， 95℃水浴40min③,取出后流水冷却，然后3500-4000r/min，离心10min。取 上清， 532nm处，1cm光径，用蒸馏水调零，比色测定各管吸光度值。
50%冰醋酸 无水乙醇
实验十 丙二醛（MDA）的测定
操作：
按指导做。
计算：
按指导做。
报告：
按常规。
实验十 丙二醛（MDA）的测定
操作：
取4支干净试管，按下表进行操作。
管号 标准管 标准空白管
试剂
10nmol/ml标准品/ml 0.1
无水乙醇/ml
0.1
血清（桨）②/ml
试剂A/ml
0.1 0.1
原理：
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸
（polyunsaturatedfattyacid,PUFA）,引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化 物，如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或内过氧基，以及新氧 自由基等。脂质过氧化作用不仅把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解 产物，而且通过链式或链式支连反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能 导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞 代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸（PUFA）的 过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA的量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。
丙二醛含量的测定
2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，参加少许石 英砂和2 mL 0.05 mol ·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
3正3,,55常,,55生´´--长三三的甲甲以基基将缓及恶恶经唑唑匀冲逆22,,44境浆液--二二处酮酮理转，的小移分麦、到三玉米试次或其管冲他植中洗物的，研叶片再钵。 用，合3 并m提L 取0.液05。mol ·L-1磷酸 5式%中硫，代V3t巴：．比提妥取在酸液溶总提液体为积取空〔白m液测L〕53；中2 nm参、6加00 n5m和4m50 nLm处0的消.光5值。%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 05 mol4·L．–1磷将酸缓试冲液管， 放入沸水浴中煮沸10 min，〔自试管内溶液中
吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
O
O
OH
HN 2
OO
+
100 O C HN
N
S NO H
硫代巴比妥酸
H
H
丙二醛
HS N H
O HO N H
S
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸〔用5 %三氯醋酸
溶解定容〕； 3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
出现小气泡开场计时〕。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
3正3,,55常,,55生´´--长三三的甲甲以基基将缓及恶恶经唑唑匀冲逆22,,44境浆液--二二处酮酮理转，的小移分麦、到三玉米试次或其管冲他植中洗物的，研叶片再钵。 用，合3 并m提L 取0.液05。mol ·L-1磷酸 5式%中硫，代V3t巴：．比提妥取在酸液溶总提液体为积取空〔白m液测L〕53；中2 nm参、6加00 n5m和4m50 nLm处0的消.光5值。%硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 05 mol4·L．–1磷将酸缓试冲液管， 放入沸水浴中煮沸10 min，〔自试管内溶液中
吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
O
O
OH
HN 2
OO
+
100 O C HN
N
S NO H
硫代巴比妥酸
H
H
丙二醛
HS N H
O HO N H
S
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸〔用5 %三氯醋酸
溶解定容〕； 3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
出现小气泡开场计时〕。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
丙二醛MDA含量的测定
06
丙二醛MDA含量测定的发展趋势和展 望
丙二醛MDA的简介
第一章
丙二醛的性质和作用
丙二醛是一种有机化合物，是衡量机体氧化应激水平的重要指标。 丙二醛在体内主要由脂质过氧化产生，可以反映机体细胞的氧化应激状况。 丙二醛可以与蛋白质、核酸等大分子物质发生交联，影响细胞的结构和功能。 丙二醛在某些条件下可以激活细胞的信号转导途径，参与细胞凋亡和坏死等过程。
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MDA含量的生物学意义
丙二醛（MDA）是生物体内自由基反应的 产物，可以反映细胞膜脂质过氧化的程度。
MDA含量可以作为评估氧化应激状态的指 标，对于研究抗氧化和抗衰老等领域具有 重要意义。
MDA含量的变化可以反映某些疾病的发生 和发展过程，例如糖尿病、动脉粥样硬化 等。
通过测定MDA含量，可以为临床诊断和 预防提供参考，例如通过抗氧化剂的补 充来降低MDA含量，从而延缓衰老和预 防疾病。
监测水体污染： 通过测定水体中 丙二醛MDA含量， 评估水体污染程 度和来源。
监测土壤污染： 通过测定土壤中 丙二醛MDA含量， 评估土壤污染状 况和来源。
监测大气污染： 通过测定大气中 丙二醛MDA含量， 评估大气污染状 况和来源。
监测生物体污染： 通过测定生物体 内丙二醛MDA含 量，评估生物体 受到的污染和危 害程度。
注意事项：丙二醛含量测定结果的解读需结合其他指标和临床表现进行综合分析，不能单纯依 靠丙二醛含量判断病情
异常值的原因及分析
仪器故障或操作 失误
试剂污染或失效
样本不均一或处 理不当
实验环境不佳， 如温度、湿度 等不稳定
结பைடு நூலகம்解读的注意事项
正确使用标准曲线 避免仪器故障和操作失误 考虑样品的代表性 注意样品的保存和运输
丙二醛(MDA)的测定方法
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， pH 7.8。
材料
正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪 成0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许 石英砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成 匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇 匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液 中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出 并放入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
丙二醛MDA的测定方法-文档资料
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一
5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
计算结果
MDA
mmol g-1FW
=
6.452
D532
D600
0.559
D450
Vt Vs W
式中，Vt：提取液总体积（mL）；
Vs：测定用提取液体积（ml）；
FW：样品鲜重（g）。
注意事项
1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处 于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会 增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。
2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色 反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为。
O
O
OH
HN 2
+
S NO H
硫代巴比妥酸
OO
100 OC
HN
N
H
H
丙二醛
HS
N H
O HO
N H
S
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
MDA丙二醛ppt课件
1． 自动氧化(体内一些分子，例如儿茶酚胺、血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素C和 巯基在氧化的过程中会产生自由基。)
2．酶促氧化(一些经由酶催化的氧化过程会产生自由基。)
MDA丙二醛
自由基
自由基（英语：Free Radical），又称游离基，是指化合物的分子在光热等外界条 件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。在书写时，一般在 原子符号或者原子团符号旁边加上一个“·”表示没有成对的电子。如氢自由基 （H·，即氢原子）、氯自由基（Cl·，即氯原子）、甲基自由基（CH3·）和四甲基 哌啶氧自由基等。[1]自由基极易发生反应（如二聚反应、夺氢反应、氧化反应、 歧化反应等）。机体氧化反应中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的 组织和细胞，进而引起慢性疾病及衰老效应。自由基可以是带正电荷，负电荷或者 不带电荷。虽然金属以及它们的离子或者它们的络合物有不成对的电子，但按照常 规习惯定义不算是自由基。[2] 除了极个别情况， 大多数的未成对电子形成的自由 基都具有较高的化学活性。如果体内含有自由基，被认为会导致退化性疾病和癌症。
• 由于自由基含未配对的电子，所以极不稳定(特别 是羟自由基)，因此会从邻近的分子(包括脂肪、蛋 白质、和DNA)上夺取电子，让自己处于稳定的状 态。这样一来，邻近的分子又变成一个新的自由 基，然后再去夺取电子。如此连锁反应的结果， 让细胞的结构受到破坏，造成细胞功能丧失、基 因突变、甚至死亡。 • 但是少量并且控制得宜的自由基是有用的。例如 白血球利用自由基(超级氧，一氧化氮)来杀死外来 的微生物，体内一些分解代谢的反应须要自由基 来催化，血管的舒张和部分神经、消化系统讯号 的传导要藉助于自由基(一氧化氮)，基因经由自由 基的刺激而得以产生突变以更适应环境的变化。
丙二醛(MDA)含量的测定ppt课件
• 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反 应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol ·L-1）
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产 物之一。植物在逆境下遭受伤害与活 性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切 相关。
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 n0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸
溶解定容）； 3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
注意事项
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 必要时要排除可溶性糖的干扰。
吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产 物之一。植物在逆境下遭受伤害与活 性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切 相关。
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 n0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸
溶解定容）； 3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
注意事项
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 必要时要排除可溶性糖的干扰。
吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
丙二醛(MDA)含量的测定
丙二醛（MDA ）含量的测定丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。
植物在逆境下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
一：原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。
其中丙二醛（MDA ：Malondialdehyde ）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA 了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA ）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm 处有一吸收高峰，并且在660n m 处有较小光吸收。
根据其532 nm 的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm 处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
硫代巴比妥酸 丙二醛 3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）仪器设备1. 分光光度计；2. 研钵；3. 剪刀；4. 恒温水浴；5. 试管：20 mL ×46. 离心机。
二：试剂1. 5 %三氯醋酸；2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）；3. 0.05 mol · L –1磷酸缓冲液， pH 7.8。
+100 C O HNS N HO O O H H HN HS NH OO HO OH N N H S 2O三：方法与步骤1．取三裂叶蟛蜞菊叶片4片（每株1片），洗净擦干，剪成0.5 cm 长的小段，混匀。
2．称取叶片切段0.1g ，放入冰浴的研钵中，加入1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
将匀浆转移到试管中，再用1 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，分2次冲洗研钵，合并提取液。
3．在提取液中加入2 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。
丙二醛MDA的测定方法
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
植物生理学实验课件植物在逆境下遭受伤害或衰老与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关膜脂过氧化的产物有二烯轭合物脂类过氧化物丙二醛乙烷等
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
O HN 2 S N H O O H O H HS N H O HO N H 100 C
O
O
OH N S
+
HN
硫代巴比妥酸
丙二醛
Hale Waihona Puke 3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 研钵； 剪刀； 恒温水浴； 试管：20 mL×4 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， pH 7.8。
丙二醛MDA的测定方法
植物生理学实验课件植物在逆境下遭受伤害或衰老与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关膜脂过氧化的产物有二烯轭合物脂类过氧化物丙二醛乙烷等
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
计算结果
Vt MDA mmol g FW = 6.452 D532 D600 0.559 D450 V W s
-1
式中，Vt：提取液总体积（mL）； Vs：测定用提取液体积（ml）； FW：样品鲜重（g）。
注意事项 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处 于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会 增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色 反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol · L-1） 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间 ，最好使用低温离心机离心。
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
计算结果
Vt MDA mmol g FW = 6.452 D532 D600 0.559 D450 V W s
-1
式中，Vt：提取液总体积（mL）； Vs：测定用提取液体积（ml）； FW：样品鲜重（g）。
注意事项 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处 于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会 增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色 反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol · L-1） 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间 ，最好使用低温离心机离心。
丙二醛MDA的测定方法
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？
O HN 2 S N H O O H O H HS N H O HO N H 100 C
O
O
OH N S
+HN硫源自巴比妥酸丙二醛3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 研钵； 剪刀； 恒温水浴； 试管：20 mL×4 离心机。
试剂
植物生理学实验课件?植物在逆境下遭受伤害或衰老与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关膜脂过氧化的产物有二烯轭合物脂类过氧化物丙二醛乙烷等
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
计算结果
Vt MDA mmol g FW = 6.452 D532 D600 0.559 D450 V W s
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原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
计算结果
1
V t M D A m m o l g F W = 6 . 4 5 2 D D 0 . 5 5 9 D 5 3 2 6 0 0 4 5 0 V W s
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）； • Vs：测定用提取液体积（ml）； • FW：样品鲜重（g）。
注意事项
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 必要时要排除可溶性糖的干扰。 • 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反 应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol · L-1） • 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石 英砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中 出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
丙二醛(MDA)含量的测定
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
O HN 2 S N O H O O H
O
OOH N+100 C HNH
硫代巴比妥酸
丙二醛
N S HSN OHO H H
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 研钵； 剪刀； 恒温水浴； 试管：20 mL×4 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸 溶解定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， pH 7.8。