丙二醛(MDA)含量的测定
丙二醛含量测定
植物组织中丙二醛含量测定方法一：一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol· L－1。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至匀浆，再加8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定植物组织中的丙二醛（malondialdehyde, MDA）是一种重要的生物指示物，它是脂质过氧化反应生成的副产物，被广泛用于评估植物在环境胁迫下的氧化损伤程度。
本文旨在介绍植物组织中丙二醛含量的测定方法。
一、实验原理脂质过氧化反应是指脂质分子在产生自由基的作用下和氧分子反应产生的一系列复杂化学反应，其中丙二醛是其主要生成产物之一。
丙二醛含量可用氨基苯酚反应法进行测定，方法如下：二、实验步骤1.制备样品：将植物组织样品取出后，立即放入液氮中快速冷冻，然后在-80℃条件下保存。
制备样品时最好避免使用任何金属仪器或操作工具。
2.提取组织丙二醛：取出冰冻样品，加入10%四氢吡啶，用离心机离心5分钟，将上清液移至新离心管中，加入等体积的三氯醋酸/磷酸氢二钾缓冲液（pH=7.4），混合均匀后加入1%氨基苯酚溶液，摇晃混匀后，在沸水中加热15分钟，之后冷却至室温。
3.检测丙二醛含量：加入冷却到室温的硫酸，甲醛，氨基苯酚混合液中，混合均匀后，在室温下放置30分钟，之后用丙酮-石油醚混合液提取反应液中的丙二醛。
4.测定丙二醛含量：用紫外分光光度计检测丙二醛含量，吸收波长为532nm，以硫酸/磷酸氢二钾缓冲液作为空白对照。
三、实验注意事项1.制备样品时，应采取快速操作，避免组织样品在高温、干燥等条件下发生氧化损伤。
2.反应液中的溶液准确测量。
3.注意保护自己的安全，如佩戴防护手套和眼镜，避免反应液溅出。
4.在测定过程中，确保光谱仪的本底值已经清除，否则会影响测试结果。
总之，通过此篇文章的描述，我们可以了解到测定植物组织中丙二醛含量的方法。
这种方法简单、快速、精确，可以广泛应用于植物生理生化领域中的实验研究。
丙二醛测量方法
硫代巴比妥酸法（丙二醛含量测定）一：原理丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。
二酮)，其最大吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的消光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1。
二：试剂1：质量分数为10％三氯乙酸(TCA)；2：质量分数0.6％硫代巴比妥酸：先加少量的氢氧化钠(1mol·L-1)溶解，再用10％的三氯乙酸定容；三：方法1：MDA的提取称取剪碎的试材1g，加入2mll0％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，再加8mlTCA研磨，匀浆在4000r·min-1离心10min，上清液为样品提取液。
2：显色反应和测定吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0．6％TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应15min，迅速冷却后再离心。
取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。
四：结果C1＝11.71D450C2＝{6.45(D532 - D600) - 0.56D450}NW-1C1——可溶性糖的浓度(mmol·L-1)C2——MDA的浓度（·umol·L-1）D450、0532、D600分别代表450、532和600nm波长下的消光度值。
丙二醛MDA含量的测定
06
丙二醛MDA含量测定的发展趋势和展 望
丙二醛MDA的简介
第一章
丙二醛的性质和作用
丙二醛是一种有机化合物，是衡量机体氧化应激水平的重要指标。 丙二醛在体内主要由脂质过氧化产生，可以反映机体细胞的氧化应激状况。 丙二醛可以与蛋白质、核酸等大分子物质发生交联，影响细胞的结构和功能。 丙二醛在某些条件下可以激活细胞的信号转导途径，参与细胞凋亡和坏死等过程。
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MDA含量的生物学意义
丙二醛（MDA）是生物体内自由基反应的 产物，可以反映细胞膜脂质过氧化的程度。
MDA含量可以作为评估氧化应激状态的指 标，对于研究抗氧化和抗衰老等领域具有 重要意义。
MDA含量的变化可以反映某些疾病的发生 和发展过程，例如糖尿病、动脉粥样硬化 等。
通过测定MDA含量，可以为临床诊断和 预防提供参考，例如通过抗氧化剂的补 充来降低MDA含量，从而延缓衰老和预 防疾病。
监测水体污染： 通过测定水体中 丙二醛MDA含量， 评估水体污染程 度和来源。
监测土壤污染： 通过测定土壤中 丙二醛MDA含量， 评估土壤污染状 况和来源。
监测大气污染： 通过测定大气中 丙二醛MDA含量， 评估大气污染状 况和来源。
监测生物体污染： 通过测定生物体 内丙二醛MDA含 量，评估生物体 受到的污染和危 害程度。
注意事项：丙二醛含量测定结果的解读需结合其他指标和临床表现进行综合分析，不能单纯依 靠丙二醛含量判断病情
异常值的原因及分析
仪器故障或操作 失误
试剂污染或失效
样本不均一或处 理不当
实验环境不佳， 如温度、湿度 等不稳定
结பைடு நூலகம்解读的注意事项
正确使用标准曲线 避免仪器故障和操作失误 考虑样品的代表性 注意样品的保存和运输
丙二醛含量测定
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石 英砂和2 mL 0.05 mol ·L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol ·L-1磷酸 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中 出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
O HN 2 S N H O O H O H HS N H O HO N H 100 C
O
O
OH N S
+
HN
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 研钵； 剪刀； 恒温水浴； 试管：20 mL×4 离心机。
试剂
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
丙二醛(MDA)的测定方法
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´ -三甲基恶唑 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸 收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其 532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化不同，说明了什么？
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物 之一。植物在逆境下遭受伤害与活性氧 积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧 化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化 物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde） 是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了解膜脂 过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， pH 7.8。
材料
正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪 成0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许 石英砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成 匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇 匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液 中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出 并放入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
丙二醛含量测定
植物组织中丙二醛含量测定方法一：一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA ）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA) 在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（ 3 、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm 。
但是测定植物组织中MDA 时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm 处，在532nm 处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm 波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在53 2、450nm 处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100 －300 μg·g－1Dw ，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe 3 ＋的终浓度为0.5nmol ·L－1 。
在532nm 、600nm 和450nm 波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml 、5ml ）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10 ％三氯乙酸；0.6 ％硫代巴比妥酸（TBA ）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml ，研磨至匀浆，再加8ml10 ％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min 离心10min ，其上清液为丙二醛提取液。
丙二醛含量测定
植物组织中丙二醛含量测定方法一：一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（ MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA) 在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（ 3、 5、5－三甲基恶唑 2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中 MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在 532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在532、 450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－ 300μ g· g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为 0.5nmol · L －1。
在 532nm、 600nm和 450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1.材料：植物叶片。
2.仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml 、 5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3.试剂： 10％三氯乙酸； 0.6 ％硫代巴比妥酸（ TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1.丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至匀浆，再加 8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以 4000r/min 离心 10min，其上清液为丙二醛提取液。
实验十一 植物组织中丙二醛含量测定
——比色法
植物生物学实验（二）
一，实验目的与要求
• 了解植物组织内MDA积累水平对植物生理状态的影 响； • 掌握比色法测定植物组织MDA含量的方法和步骤；
二，实验原理
• MDA是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产物之一。 逆境胁迫导致自由基（O ·2 、OH •等）积累，诱导细胞 膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化反应。
3，计算含量
• MDA的浓度： Ｃ(µ mol/L)＝6.45(A532-A600)-0.56A450 • MDA的含量 含量( µ mol/g FW) =C µ mol/L ×
V1(mL)× V (mL)
2 (mL) × W(g FW)
式中，V1为反应液总量（ml）；2mL为反应液中的提取液数
量；V为提取液总量（ml）； W为植物样品重量(g)。
• MDA的积累加剧对细胞的伤害。 MDA可与蛋白质、核酸等结合使之失去其活性, 从而进一 步破坏了生物膜及细胞内物质的结构与功能, 最终导致植物受 伤害, 甚至死亡。
• 在酸性和高温条件下，MDA可以与硫代巴比妥酸（TBA）反
应生成红棕色的三甲氚，在532nm处有最大光吸收，在
600nm处有最小光吸收 。
• 试剂 10%三氯乙酸（TCA）； 0.6%硫代巴比妥酸（TBA）。
四，实验步骤
1. MDA的提取：
0.5g植物叶片洗净、擦干、剪碎，臵于研钵中 加少许石英砂、5mLTCA（分次），研磨匀浆后转 移至离心管。4000 rpm离心10min，上清液即为样 品提取液。测量提取液体积V。
2，显色反应与测定 2mL提取液+2mL TBA，混匀，沸水浴15min，迅 速冷却。 另取２mLTCA+2mLTBA同样操作，为对照液。 反应液4000rpm离心15min，取上清液，测量体积 （Ｖ1），以对照液调零，测定532nm、600nm、 450nm处的光吸收值。
实验7-2 丙二醛含量测定
实验7-2 丙二醛（MDA）含量测定【实验目的】1、掌握植物组织中丙二醛含量测定的原理和方法。
2、了解丙二醛含量测定的意义。
【实验原理】植物器官在衰老或逆境胁迫时，会发生脂质过氧化作用，丙二醛（MDA）是其终产物之一，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。
在高温和酸性条件下，丙二醛与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-二酮（三甲川），在532nm处有最大吸收波长。
植物在胁迫条件下可溶性糖增加，而糖与硫代巴比妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最大吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙二醛含量时需排除可溶性糖的干扰。
采用双组分分光光度法可分别求出丙二醛和可溶性糖的含量。
蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙二醛与TBA反应产物在450 nm 和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出二元一次方程：A450=C1×85.4A532- A600=C1×7.4+ C2×155000解此方程得：C1（mmol/L）=11.71 A450C2（μmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度C2——丙二醛的浓度A450、A532、A600分别表示450、532和600nm波长下的吸光值。
【实验器材与试剂】1、实验材料受逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官、正常植物叶片或器官2、实验试剂10%的三氯乙酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏水稀释定容至100mL）、石英砂、0.6%的硫代巴比妥酸（称取0.6克硫代巴比妥酸先用少量1mol/L氢氧化钠溶解，再用10%三氯乙酸定容至100mL）3、实验仪器分光光度计、离心机、研钵、电炉、试管、量筒、天平、移液管等【实验步骤】1、MDA的提取称取材料1g，剪碎，先加入2mL10%的三氯乙酸和少量石英砂研磨，再加入8mL10%的三氯乙酸充分研磨后，4000r/min离心10min，上清液即为样品提取液。
MDA测定方法
丙二醛(MDA)的测定方法一、实验原理植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。
其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。
丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。
根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。
醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
二、仪器设备紫外可见分光光度计；离心机；电子天平；研钵；恒温水浴锅；试管；剪刀。
三、主要试剂1、10%三氯乙酸（TCA）2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；3、石英砂。
四、实验材料正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片五、实验步骤? ?1. 取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。
2. 称取叶片切断0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入2 ml 10％TCA和少量石英砂，研磨至匀浆，4. 然后在 4℃，12, 000 g 离心 15 min，取上清。
? 5. 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 ml 10％ TCA），加同体积 0.5% TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应30 min，迅速冷却后再离心。
6. 取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。
六、计算含量根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：MDA浓度(μmol L-1) = 6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450MDA含量(μmol/g FW）= (MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml)) / 植物组织鲜重(g)七、注意事项1. MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30 min之内。
植物组织中丙二醛含量的测定实验报告
植物组织中丙二醛含量的测定实验报告一、实验目的本实验旨在测定植物组织中丙二醛（MDA）的含量，以评估植物在逆境条件下膜脂过氧化的程度，从而了解植物的抗逆性。
二、实验原理丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终分解产物之一，其含量可以反映植物细胞膜脂过氧化的程度。
在酸性和高温条件下，MDA 可与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮），该物质在 532nm 波长处有最大吸收峰。
由于植物组织中的其他成分在该波长处也有吸收，因此需要同时测定 600nm 波长处的吸光度值进行校正。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的植物叶片（如菠菜、水稻等）2、实验试剂（1）05%硫代巴比妥酸（TBA）溶液：称取 05g TBA 溶于 100ml 20%三氯乙酸（TCA）溶液中。
（2）20%三氯乙酸（TCA）溶液3、实验仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）恒温水浴锅（4）研钵（5）移液器（6）容量瓶（7）刻度试管四、实验步骤1、提取称取05g 植物叶片，剪碎后放入研钵中，加入5ml 20% TCA 溶液，研磨成匀浆。
将匀浆转移至离心管中，在 4℃下以 10000r/min 离心10min，上清液即为 MDA 提取液。
2、反应吸取 2ml MDA 提取液于刻度试管中，加入 2ml 05% TBA 溶液，混合均匀。
将试管放入沸水浴中加热 15min，然后迅速冷却至室温。
3、测定以 20% TCA 溶液为空白对照，在分光光度计上分别测定 532nm 和600nm 波长处的吸光度值（A532 和 A600）。
五、实验结果计算根据以下公式计算 MDA 含量（μmol/g）：MDA 含量＝ 645×（A532 A600) × V ／（W × 1000)其中，645 为 MDA 与 TBA 反应产物在 532nm 处的消光系数；V 为提取液总体积（ml）；W 为植物组织鲜重（g）。
植物组织内丙二醛(MDA)含量的测定实验设计
实验设计（一）题目：植物组织内丙二醛（MDA）含量的测定——比色法组数：第七组组长：杨曼学校：南通大学年级：13级专业：生物工程131实验目的1，根据待测植物的抗逆生理，掌握对待测植物做逆境处理的方法2，比较同种胁迫逆境处理对待测植物不同部位生长的影响3，比较不同胁迫逆境处理对待测植物生长的影响4，了解植物组织内MDA积累水平对植物生理状态的影响5，掌握比色法测定植物组织内MDA含量的方法和步骤实验原理1，植物抗逆是植物对抗不良环境，比如抗旱、抗盐碱、抗涝、抗风、抗冻、抗病虫害等的能力.在自然界条件下，由于不同的地理位置和气候条件以及人类活动等多方面原因，造成了各种不良环境，超出了植物正常生长、发育所能忍受的范围，致使植物受到伤害甚至死亡。
这些对植物产生伤害的环境称为逆境（stress）或胁迫。
而植物对不良环境的适应性和抵抗力为抗逆性（stress resistance）或抗性.逆境的种类多种多样，包括物理的、化学的、生物因素等，可分为生物逆境和非生物逆境两大类。
对植物产生重要影响的非生物逆境主要有水分（干旱和淹涝）、温度（高、低温）、盐碱、环境污染等理化逆境，生物逆境主要包括病害、虫害、杂草等。
理化逆境之间通常是相互联系的；例如水分亏缺通常伴随着盐碱和高温逆境，水分胁迫、低温胁迫、病虫害和大气污染等都可引起活性氧伤害。
2，文献研究结果表明,随着盐度增加,米草株高呈下降趋势,在高盐度(50%)下,米草叶面积、叶长等指标与对照组相比明显下降,鲜重与低盐度组比较显著下降。
【1】提摩西草喜冷凉湿润气候。
越冬性好。
春季气温高于5℃时开始返青，秋季气温低于5℃停止生长。
较耐淹浸，不耐干旱。
在35℃以上的持续高温干燥条件下，不能安渡夏季。
要求中性及弱酸性土壤。
耐碱性较弱，在石灰质含量多的土壤上生长不良。
因此，根据待测植物护花米草和提摩西草的抗逆能力并且考虑可行性，对提摩西草分别做碱逆境处理和高温逆境处理，然后再测量其体内丙二醛含量的变化。
丙二醛MDA含量的测定
.
4
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸
溶解定容）； 3. 0.05 mol ·L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
.
5
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
.
6
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产 物之一。植物在逆境下遭受伤害与活 性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切 相关。
.
1
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
O
O
OH
HN 2
OO
+
10O 0 CHN
N
H
H
S NO H
HS N H
O HO N H
S
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
.
3
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
.
9
思考题
丙二醛含量测定
植物组织中丙二醛含量测定方法一：一、目的通过实验，掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。
二、原理丙二醛（MDA）是由于植物官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。
它的含量与植物衰老及逆境伤害有密切关系。
测定植物体内丙二醛含量，通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反应，生成红棕色的三甲川（3、5、5－三甲基恶唑2、4－二酮），三甲川最大的吸收波长在532nm。
但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与硫代巴比妥酸显色反应产物的最大吸收波长在450nm处，在532nm处也有吸收。
植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中丙二醛与硫代巴比妥酸反应产物含量时一定要排除可溶性糖的干扰。
此外在532nm波长处尚有非特异的背景吸收的影响也要加以排除。
低浓度的铁离子能显著增加硫代巴比妥酸与蔗糖或丙二醛显色反应物在53 2、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、丙二醛与硫代巴比妥酸显色反应中需要有一定的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为100－300μg·g－1Dw，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3＋的终浓度为0.5nmol·L－1。
在532nm、600nm和450nm波长处测定吸光度值，即可计算出丙二醛含量。
三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片。
2. 仪器设备：离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；试管；移液管（1ml、5ml）、试管架；移液管架；洗耳球；剪刀。
3. 试剂：10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液：石英砂。
四、实验步骤1. 丙二醛的提取称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2ml，研磨至匀浆，再加8ml10％三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。
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材料
正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 正常生长的以及经逆境处理的小麦、 或其他植物的叶片。 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 ．取小麦植株上不同叶位的叶片 片 洗净擦干， 0.5 cm长的小段，混匀。 长的小段， 长的小段 混匀。 2．称取叶片切段 ．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石 ，放入冰浴的研钵中， 英砂和2 磷酸缓冲液， 英砂和 mL 0.05 mol L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 磷酸缓冲液 研磨成匀浆。 将匀浆转移到试管中，再用3 将匀浆转移到试管中，再用 mL 0.05 mol L-1磷酸 磷酸 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 硫代巴比妥酸溶液， ．在提取液中加入5 硫代巴比妥酸溶液 摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸 ，（自试管内溶液中 ．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中 ，（ 出现小气泡开始计时）。到时间后， ）。到时间后 出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心 离心15 min，取上清 ．待试管内溶液冷却后， × 离心 ， 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 液并量其体积。 硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。 处的消光值。 、 和 处的消光值
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2 丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 ），该物质在 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收 处有较小光吸收。 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量 的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 可溶性糖对此反应有干扰， nm处有一 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
2
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川）
仪器设备
1. 2. 3. 4. 5. 6. 分光光度计； 分光光度计； 研钵； 研钵； 剪刀； 剪刀； 恒温水浴； 恒温水浴； 试管： 试管：20 mL×4 × 离心机。 离心机。
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 三氯醋酸； 三氯醋酸 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸 硫代巴比妥酸（ 硫代巴比妥酸 三氯醋酸 溶解定容）； 溶解定容）； 3. 0.05 mol L–1磷酸缓冲液， 磷酸缓冲液， 磷酸缓冲液 pH 7.8。 。
计算结果V MDA( mm来自l g FW) = 6.452×( D532 D600 ) 0.559×D450 × t V ×W s
-1
式中，Vt：提取液总体积（mL）； 式中， 提取液总体积（ ）； Vs：测定用提取液体积（ml）； 测定用提取液体积（ ）； FW：样品鲜重（g）。 ：样品鲜重（ ）。
思考题
不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同植物在同一逆境下， 不同，说明了什么？ 不同，说明了什么？
注意事项
1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在 ．可溶性糖与 显色反应的产物在532 nm 显色反应的产物在 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于 ），当植物处于 也有吸收（最大吸收在 ）， 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 必要时要排除可溶性糖的干扰。 必要时要排除可溶性糖的干扰。 2．低浓度的铁离子能增强 ．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反 与 的显色反 应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为 （最终浓度为0.5 nmol L-1） 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， ．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。 最好使用低温离心机离心。
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定 丙二醛（MDA）
丙二醛是膜脂过氧化最重要的产 物之一。 物之一。植物在逆境下遭受伤害与活 性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切 相关。 相关。
原理
植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 植物在逆境下遭受伤害（或衰老） 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂 ： ） 过氧化最重要的产物之一， 过氧化最重要的产物之一，因此可通过测 了解膜脂过氧化的程度， 定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测 了解膜脂过氧化的程度 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。 定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。