丙二醛含量测定讲解学习
实验7-2丙二醛含量测定
实验7-2丙⼆醛含量测定实验7-2 丙⼆醛（MDA）含量测定【实验⽬的】1、掌握植物组织中丙⼆醛含量测定的原理和⽅法。
2、了解丙⼆醛含量测定的意义。
【实验原理】植物器官在衰⽼或逆境胁迫时，会发⽣脂质过氧化作⽤，丙⼆醛（MDA）是其终产物之⼀，其含量可以反映脂类过氧化程度和植物遭受逆境伤害的程度。
在⾼温和酸性条件下，丙⼆醛与硫代巴⽐妥酸（TBA）反应，⽣成红棕⾊的3，5，5-三甲基恶唑-2，4-⼆酮（三甲川），在532nm处有最⼤吸收波长。
植物在胁迫条件下可溶性糖增加，⽽糖与硫代巴⽐妥酸的反应产物在532nm也有吸收（最⼤吸收波长为450nm），因此测定植物组织中丙⼆醛含量时需排除可溶性糖的⼲扰。
采⽤双组分分光光度法可分别求出丙⼆醛和可溶性糖的含量。
蔗糖与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为85.40和7.40；丙⼆醛与TBA反应产物在450 nm和532nm的摩尔吸收系数分别为0和155000，根据Lambert-Beer定律，列出⼆元⼀次⽅程：A450=C1×85.4A532- A600=C1×7.4+ C2×155000解此⽅程得：C1（mmol/L）=11.71 A450C2（µmol/L）=6.45（A532- A600）-0.56 A450 （1）其中：C1——可溶性糖的浓度C2——丙⼆醛的浓度A450、 A532、A600分别表⽰450、532和600nm波长下的吸光值。
【实验器材与试剂】1、实验材料受逆境胁迫的植物叶⽚或衰⽼的植物器官、正常植物叶⽚或器官2、实验试剂 10%的三氯⼄酸（TCA）（称取10克TCA蒸馏⽔稀释定容⾄100mL）、⽯英砂、0.6%的硫代巴⽐妥酸（称取0.6克硫代巴⽐妥酸先⽤少量1mol/L氢氧化钠溶解，再⽤10%三氯⼄酸定容⾄100mL）3、实验仪器分光光度计、离⼼机、研钵、电炉、试管、量筒、天平、移液管等【实验步骤】1、MDA的提取称取材料1g，剪碎，先加⼊2mL10%的三氯⼄酸和少量⽯英砂研磨，再加⼊8mL10%的三氯⼄酸充分研磨后，4000r/min离⼼10min，上清液即为样品提取液。
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织中丙二醛含量的测定植物组织中的丙二醛（malondialdehyde, MDA）是一种重要的生物指示物，它是脂质过氧化反应生成的副产物，被广泛用于评估植物在环境胁迫下的氧化损伤程度。
本文旨在介绍植物组织中丙二醛含量的测定方法。
一、实验原理脂质过氧化反应是指脂质分子在产生自由基的作用下和氧分子反应产生的一系列复杂化学反应，其中丙二醛是其主要生成产物之一。
丙二醛含量可用氨基苯酚反应法进行测定，方法如下：二、实验步骤1.制备样品：将植物组织样品取出后，立即放入液氮中快速冷冻，然后在-80℃条件下保存。
制备样品时最好避免使用任何金属仪器或操作工具。
2.提取组织丙二醛：取出冰冻样品，加入10%四氢吡啶，用离心机离心5分钟，将上清液移至新离心管中，加入等体积的三氯醋酸/磷酸氢二钾缓冲液（pH=7.4），混合均匀后加入1%氨基苯酚溶液，摇晃混匀后，在沸水中加热15分钟，之后冷却至室温。
3.检测丙二醛含量：加入冷却到室温的硫酸，甲醛，氨基苯酚混合液中，混合均匀后，在室温下放置30分钟，之后用丙酮-石油醚混合液提取反应液中的丙二醛。
4.测定丙二醛含量：用紫外分光光度计检测丙二醛含量，吸收波长为532nm，以硫酸/磷酸氢二钾缓冲液作为空白对照。
三、实验注意事项1.制备样品时，应采取快速操作，避免组织样品在高温、干燥等条件下发生氧化损伤。
2.反应液中的溶液准确测量。
3.注意保护自己的安全，如佩戴防护手套和眼镜，避免反应液溅出。
4.在测定过程中，确保光谱仪的本底值已经清除，否则会影响测试结果。
总之，通过此篇文章的描述，我们可以了解到测定植物组织中丙二醛含量的方法。
这种方法简单、快速、精确，可以广泛应用于植物生理生化领域中的实验研究。
丙二醛(MDA)含量的测定ppt课件
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶 唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一 吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据 其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。 醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一 吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
计算结果
1
V t M D A m m o l g F W = 6 . 4 5 2 D D 0 . 5 5 9 D 5 3 2 6 0 0 4 5 0 V W s
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）； • Vs：测定用提取液体积（ml）； • FW：样品鲜重（g）。
注意事项
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm 也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于 干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高， 必要时要排除可溶性糖的干扰。 • 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反 应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol · L-1） • 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间， 最好使用低温离心机离心。
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石 英砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸 缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中 出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放 入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清 液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测 532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。
植物生理学实验：实验五 丙二醛含量测定
实验原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（ TBA）反应产生红棕色的三甲基复合物（3,5,5´-三 甲基恶唑2,4-二酮），该物质的吸光系数为 155mmol/(L·cm)，在532 nm处有最大吸收峰， 并且在600nm处有最小光吸收。
O
O
OH
HN 2
+
S NO H
硫代巴比妥酸
OO
100 OC
HN
N
H
H
丙二醛
HS
N H
O HO
N H
S
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
实验原理
可溶性糖对此反应有干扰，为消除这种干扰可使用以 下公式算出MDA浓度（μmol/L），并进一步算出单 位质量组织中MDA含量（μmol/g）。
C（μmol/L）=6.45（A532-A600）-0.56A450 A450、A532和A600分别表示在三种波长处的吸光度值
1. 取0.5g叶片材料，加2mL5%TCA研磨后将匀浆转入离 心管，再用3mL5%TCA洗涤研钵后转入离心管。将匀 浆在3000r/min下离心10min。
2. 取上清液2mL，加0.67%TBA2mL，混合后在100℃水 浴上煮沸30min，冷却后再离心一次。
3. 分别测定上清液在450nm，532nm和600nm处的吸光 度值（以0.67 %硫代巴比妥酸溶液为空白），按公式 计算MDA浓度
实验目的；实验材料、仪器设备与试剂
目的：学习和掌握丙二醛法测定植物叶片中过氧化脂质 含量的原理和方法。
仪器 分光光度计、离心机、电炉； 研钵、天平、试管架、离管、移液管、滤纸等。
试剂 5%三氯乙酸（TCA）；0.67%硫代巴比妥酸（用 10%TCA配制）；石英砂。
植物组织中丙二醛含量的测定
实验1植物组织中丙二醛含量的测定1. MDA 的提取称取植物材料1g ，剪碎，加入50mmol/L的磷酸缓冲液（PH7.8）,研磨,4℃,10000g离心10min,上清液定容为10ml为样品提取液.(取部分上清液立即分装于4℃保存,用于POD和蛋白质含量的测定.)2. 丙二醛含量测定: 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 mL 蒸馏水），加入2.5ml 0.5% TBA 溶液，摇匀。
将试管放入沸水浴中煮沸30 min （自试管内溶液中出现小气泡开始计时），取出试管并冷却，4000g 离心10 min ，取上清液测定532 nm 、600 nm 和450 nm 处的吸光度值。
3.结果计算:MDA的浓度: C（μmol/L）= 6.45×（A 532 － A 600 ）－0.56× A 450 MDA 含量( μmol/g)= [MDA浓度（umol/L）×提取液体积（mL）]/[样品重量（g）×1000]实验2 过氧化物酶活性(POD)的测定（比色法）反应混合液：100 mmol ／L 磷酸缓冲液（pH6.0 ）50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入30 % 过氧化氢19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。
1.POD的制备:上一实验中提取并分装的上清液1ml (若浓度高用磷酸缓冲液稀释)2. 酶活性的测定：取反应混合液3 mL 和上述酶液1mL，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长470 nm 下吸光度值，每隔1min 读数一次,共记录5次。
以反应混合液3 mL 和磷酸缓冲液1mL为对照。
3.以没加酶液的反应体系混合液为对照，于分光光度计上测量波长470nm 下吸光度值，每隔1min 读数一次，立即开启秒表记录时间）3．结果计算也可以用每min 内 A 470 变化0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（u ）表示。
【精品】植物组织或器官中丙二醛含量的测定
【精品】植物组织或器官中丙二醛含量的测定一、实验目的1. 了解研究植物中丙二醛的重要性以及丙二醛浓度与氧化应激的相关性。
2. 掌握植物中丙二醛的测定方法。
二、实验原理丙二醛（MDA）是脂质过氧化物分解的产物，是氧化应激的指标之一。
在植物中，氧化应激是由各种内外因素引起的，例如病毒感染、冷热伤害、营养缺乏、病理性衰老等。
氧化应激可导致膜脂质过氧化反应，氧化膜脂产生丙二醛。
因此，测量植物中丙二醛的浓度可以作为研究植物抗氧化性的指标之一。
本实验采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定植物中丙二醛含量，原理是TBA可以与丙二醛反应生成红色的丙二醛- TBA复合物，其吸收峰位在532 nm处，可以用分光光度计测定光密度确定丙二醛的含量。
三、实验步骤1. 植物材料的获取和制备（1）选择植物组织或器官（如叶片、根、果实等）。
（2）将所选植物材料切碎，称取10g左右的样品，加入10 mL 10%三氯乙酸（TCA）的全氟烷提取液中（三氯乙酸毒性较大，操作时要带口罩）。
（3）用搅拌器将植物样品匀浆，放在冰箱中冷藏30分钟，使样品中的丙二醛充分释放。
（4）离心样品15分钟，取出上清液，加入等体积的2.5% TBA溶液，混合均匀。
（5）将混合液热浴在90°C温水中加热15分钟。
加热后，将混合液立即置于冰水中降温至室温。
2. 分光光度计测定丙二醛含量（1）将混合液用橡胶头香瓶移至1cm宽光程量筒中，用2.5% TBA溶液作对照。
（2）用分光光度计在532 nm处读取混合液和对照的吸收值。
计算混合液中丙二醛的含量，单位为nmol/g FW（新鲜重）。
四、实验注意事项1. 操作时要戴手套和口罩，避免皮肤直接接触样品和有毒化学品。
2. 混合液必须热浴到90℃，加热时间必须精确，否则可能会影响实验结果。
3. 混合液的pH值一定要保持在酸性范围内。
4. 取样时尽量避免样品接触金属器皿，以免产生误差。
5. 实验前要彻底清洗实验仪器和玻璃器皿，避免污染样品。
脂质过氧化产物——丙二醛的简便测定
丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是脂质过氧化的产物，测定其含量可以反映体内脂质过氧化的程度，间接评价细胞损伤的程度。
以下是测定丙二醛的简便方法：
1. 试剂配制：0.6%硫代巴比妥、5%三氯乙酸、0.05%考马斯亮蓝。
2. 步骤：取血清或组织液，加入5%三氯乙酸200ul，混匀后于4℃冰箱静置1小时，离心取上清液；在上清液中加入0.6%硫代巴比妥200ul，摇匀后置40℃水浴30分钟，此时溶液由无色变为红色；再加入0.05%考马斯亮蓝200ul，摇匀后置室温15分钟，此时溶液由红色变为蓝紫色，于530nm波长处比色，记录OD值。
3. 计算：OD值=测定管OD值-空白管OD值；丙二醛浓度(umol/L)=(OD值/斜率)x25；脂质过氧化物浓度(umol/L)=丙二醛浓度(umol/L)x2。
请注意，此方法仅供参考，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。
同时，为了确保结果的准确性，建议进行适当的质控。
如有需要，可以寻求专业人员的帮助。
植物组织中丙二醛含量的测定
植物组织中丙二醛含量的测定一、植物组织中丙二醛的作用植物体内的丙二醛是一种重要的生物活性物质，它在植物的生长发育、抗氧化防御和环境胁迫响应等方面发挥着重要作用。
丙二醛作为一种氧化应激指示物质，可以反映植物的生理状态和适应能力，因此对于植物丙二醛含量的测定具有重要的科学意义和应用价值。
二、丙二醛的产生和调控机制在植物体内，丙二醛的产生主要来源于脂质过氧化和其他生物氧化反应。
脂质过氧化是植物体受到逆境胁迫时的常见代谢途径，同时也是氧化应激过程中产生丙二醛的重要来源。
植物体内还存在一系列丙二醛代谢酶和抗氧化酶系统，可以对丙二醛进行调控和代谢，从而保持细胞内丙二醛的稳态平衡。
三、丙二醛含量的测定方法1. 色谱法：通过高效液相色谱或气相色谱技术，可以对植物样品中的丙二醛进行快速、灵敏的检测。
2. 光谱法：利用紫外-可见光谱或荧光光谱技术，可以对植物组织中丙二醛的含量进行准确测定。
3. 生化方法：通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或其他生化分析技术，可以对植物组织中丙二醛含量进行定量检测。
四、丙二醛含量的生理意义和应用前景植物组织中丙二醛含量的测定不仅可以反映植物体内氧化应激水平和抗氧化能力，还可以为植物生理生态研究、环境胁迫评估、新品种选育等提供重要参考。
未来，随着测定技术的不断发展和完善，植物丙二醛含量的研究将更加深入，为植物生长发育机制和环境适应策略的探索提供更多有益信息。
五、个人观点和总结在植物生理研究中，丙二醛作为一种重要的氧化应激指示物质，其含量测定对于了解植物的生长发育过程和抗逆性能具有重要意义。
丙二醛的测定方法和应用前景也在不断拓展和完善，为植物科学研究和农业生产提供了更多可能。
我对于植物组织中丙二醛含量的研究充满信心，相信未来一定会有更多的突破和发展。
丙二醛是一种重要的有机化合物，它在植物组织中的含量对于植物生长发育、逆境环境的胁迫反应和抗氧化防御起着重要的作用。
丙二醛的产生主要与氧化应激过程有关，这是一种对植物组织造成伤害的生理过程，由此可见丙二醛在植物生理中的重要性。
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丙二醛含量测定
实验六、植物组织丙二醛含量测定
植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。
这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。
近来大量研究表明，植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。
活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。
活性氧包括含氧自由基。
自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。
生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢（H2O2）、单线态氧（O21）等。
植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶，抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。
丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。
因此，丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度，也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。
所以在植物衰老生理和抗性生理研究中，丙二醛含量是一个常用指标。
[原理]
植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应，反应产物为粉红色的3，5，5一三甲基恶唑2，4一二酮(Trimet—nine)。
该物质在539nm波长下有吸收峰。
由
于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应，并在该波长处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，在丙二醛含量测定时，同时测定600nm下的吸光度，利用539nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。
[材料、仪器、药品]
1．材料：植物抗逆性鉴定实验中的四种菠菜样品，即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。
2．仪器：(1) 分光光度计；(2) 离心机；（3）水浴锅：(4) 天平；(5) 研钵；(6) 剪刀；(7) 5ml刻度离心管；(9) 刻度试管(10ml)；(10) 镊子；(11) 移液管(5ml、2ml、1ml)；（12）冰箱。
3．药品：
(1) 0.05mol/L pH7.8磷酸钠缓冲液；
(2) 石英砂；
(3) 5％三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸，先用少量蒸馏水溶解，然后定容到100ml；
(4) 0.5％硫代巴比妥酸溶液：称取0.5g硫代巴比妥酸，用5％三氯乙酸溶解，定容至100ml，即为0.5％硫代巴比妥酸的5％三氯乙酸溶液。
[方法]
1．丙二醛的提取：取0.5g样品，加入2ml预冷的0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液，加入少量石英砂，在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆，转移到5ml刻度离心试管，将研钵用缓冲液洗净，清洗也移
入离心管中，最后用缓冲液定容至5ml。
在4500转/min离心10min。
上清液即为丙二醛提取液。
2．丙二醛含量测定：吸取 2 ml的提取液于刻度试管中，加入0.5％硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液3ml，于沸水浴上加热10min，迅速冷却。
于4500转/min离心10min。
取上清液于532、600nm波长下，以蒸馏水为空白调透光率100%，测定吸光度。
3．结果计算：
(A532—A600) ×V1×V
丙二醛含量（nmol/g）= 1.55×10-1×W×V2
式中：A为吸光度；V1为反应液总量(5m1)；V为提取液总量(5ml)；V2为反应液中的提取液数量(2ml)；W为植物样品重量(0.5g)；1.55×10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数（在1升溶液中含有1µmol丙二醛时的吸光度）。
4．注意事项：
(1) 0.1~0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；
(2) MDA—TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10~15min之间。
时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降；
(3) 如用MDA作为植物衰老指标，首先应检验被测试材料提取液是否能与TBA反应形成532nm处的吸收峰。
否则只测定532、600nm两处A值，计算结果与实际情况不符，测得的高A值是一个假象；
(4) 在有糖类物质干扰条件下(如深度衰老时)，吸光度的增大，不再
是由于脂质过氧化产物MDA含量的升高，而是水溶性碳水化合物的增加，由此改变了提取液成分，不能再用532nm、600nm两处A值计算MDA含量，可测定510、532、560nm处的A值，用A532一(A510—A560)/2的值来代表丙二醛与TBA反应液的吸光值。
[实验结果记录]
[实验前思考题]
（1）通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？
（2）什么时候植物会发生严重的膜脂过氧化作用？简述其过氧化作用过程。
（3）说明膜脂过氧化作用的对植物的效应。
（4）TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？
（5）提取液与TBA的混合液为什么要加热？为什么加热时间又不能过长？
（6）为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？
（7）在计算公式中，为什么吸光系数的单位是微摩尔，而最后的含量单位却是毫微摩尔？
（8）写出实验时间按排和操作流程图。
（9）写出抗逆性鉴定和丙二醛含量测定实验统一的时间按排和操作流程图。
[实验后思考题]
（1）如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？
（2）丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？。