丙二醛(MDA)含量的测定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
植物生理学实验课件
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的 产物之一。植物在逆境下遭受伤害与 活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密 切相关。
精品课件
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化 最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了 解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统 受损程度以及植物的抗逆性。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最 好使用低温离心机离心。
精品课件
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
精品课件
精品课件
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑
2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收
高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532 nm
的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶
性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸收峰，可 用双组分分光光度法加以排除。
3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中出
现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入 冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清液并 量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、 600 nm和450 nm处的消光值。
定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
精品课件
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
精品课件
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。
2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英 砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将 匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲 液，分三次冲洗研钵，合并提取液。
O
O
OH
HN 2
OO
+
10百度文库 O C HN
N
H
H
S NO H
HS N H
O HO N H
S
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
精品课件
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
精品课件
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有 吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、 高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要 时要排除可溶性糖的干扰。
• 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应， 当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最 终浓度为0.5 nmol · L-1）
精品课件
计算结果
M D A m m o lg -1 F W = 6 .4 5 2 D 5 3 2 D 6 0 0 0 .5 5 9 D 4 5 0 V s V tW
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）；
•
Vs：测定用提取液体积（ml）；
•
FW：样品鲜重（g）。
精品课件
注意事项
丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛是膜脂过氧化最重要的 产物之一。植物在逆境下遭受伤害与 活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密 切相关。
精品课件
原理
• 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性 氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关， 膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过 氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛 （MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化 最重要的产物之一，因此可通过测定MDA了 解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统 受损程度以及植物的抗逆性。
• 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最 好使用低温离心机离心。
精品课件
思考题
• 不同植物在同一逆境下，丙二醛含量变化 不同，说明了什么？
精品课件
精品课件
原理
丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸 （TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5´-三甲基恶唑
2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收
高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532 nm
的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶
性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸收峰，可 用双组分分光光度法加以排除。
3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中出
现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入 冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清液并 量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、 600 nm和450 nm处的消光值。
定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液，
pH 7.8。
精品课件
材料
• 正常生长的以及经逆境处理的小麦、玉米 或其他植物的叶片。
精品课件
方法与步骤
1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成 0.5 cm长的小段，混匀。
2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英 砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲液，研磨成匀浆。将 匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸缓冲 液，分三次冲洗研钵，合并提取液。
O
O
OH
HN 2
OO
+
10百度文库 O C HN
N
H
H
S NO H
HS N H
O HO N H
S
硫代巴比妥酸
丙二醛
3,5,5´-三甲基恶唑2,4-二酮
（三甲川）
精品课件
仪器设备
1. 分光光度计； 2. 研钵； 3. 剪刀； 4. 恒温水浴； 5. 试管：20 mL×4 6. 离心机。
精品课件
试剂
1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解
• 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有 吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、 高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要 时要排除可溶性糖的干扰。
• 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应， 当植物组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最 终浓度为0.5 nmol · L-1）
精品课件
计算结果
M D A m m o lg -1 F W = 6 .4 5 2 D 5 3 2 D 6 0 0 0 .5 5 9 D 4 5 0 V s V tW
• 式中，Vt：提取液总体积（mL）；
•
Vs：测定用提取液体积（ml）；
•
FW：样品鲜重（g）。
精品课件
注意事项