临床常见苛养菌的培养与鉴定
临床常见苛养菌的培养与鉴定共62页
细菌生长区
E test 塑料 条
256
128
椭圆形
细菌生长
抑制区
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
E-test法
第14页
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
1. 脑膜炎分离株，需尽快用可靠方法检 测和报告青霉素和头孢曲松(或头孢噻 肟或美罗培南)的MIC值
2. 对于非脑脊液标本中分离出的肺炎链 球菌，需同时使用脑膜炎和非脑膜炎 的折点来报告青霉素的敏感性
流感嗜血杆菌 H. influenzae
呼吸道及全 身感染
副流感 嗜血杆菌
H. parainfluenzae
口咽部定植
心内膜炎
嗜沫嗜血杆菌
H. aphrophilus
杜克嗜血杆菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱH. ducreyi
副嗜沫 嗜血杆菌
H. paraegyptius
亚急性心内膜炎
性病软下疳
第18页
2.1 流感嗜血杆菌-概述
(S) (R)
甲
型
Optochin试验: 敏感
溶 血 链
胆汁溶菌试验: 阳性 菊糖发酵试验: 阳性
球
荚膜肿胀试验：阳性
菌
触酶
：阴性
胆汁七叶甘 ：阴性
肺 炎 链 球 菌
第8页
1.3 肺炎链球菌-检测方法
标本类型：菌液
标本类型：尿液、脑脊液
科研
热点
第9页
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
纸片扩散法
试验条件
可能是青霉素结 果不可靠
预测β-内酰胺 类抗生素敏感
必须测定青霉 素的MIC
第12页
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
5 苛养菌的分离与鉴定
临床上常见的可养菌
1. 肺炎链球菌； 2. 卡他莫拉菌（非严格的苛养菌）； 3. “HACEK”细菌群 H代表嗜血杆菌属(Haemophilus) • A代表放线杆菌属(Actinobacillus) • C代表心杆菌属(Cardiobacterium) • E代表艾肯菌属(Eikenella) • K代表金氏菌属(Kingella) 4. 其它苛养性细菌：如淋球菌、脑膜炎球菌、 军团菌、巴斯德氏菌、布氏杆菌、鲍特氏 菌、念珠链杆菌、碳酸噬胞菌等。
二、嗜血杆菌的分离和鉴定
• 嗜血杆菌属（Haemophilus）属于巴斯德菌科， 是专性寄生的苛养性细菌。该属细菌主要寄生 在人的咽喉及口腔粘膜，少见于消化道和生殖 道。其中流感嗜血杆菌主要引起人类急性化脓 感染（急性咽炎、喉炎、气管炎、肺炎、中耳 炎、鼻窦炎、心内膜炎、败血症、脑膜炎等） 及严重的继发感染，杜克雷嗜血杆菌是引起软 性下疳的病原菌。本属细菌对营养要求严格， 生长时需血液中存在的生长因子，人工培养时 必须供给新鲜血液才能生长，故名“嗜血杆菌”。
（六）肺炎链球菌感染的治疗
• 青霉素G敏感均可直接用青霉素G进行治疗; • 青霉素G中度耐药株可用大剂量青霉素G进 行治疗； • 如重度耐药可选用三代头孢菌素加万古霉 素或利福平进行治疗。
总 结
• 1. 肺炎链球菌寄居于人的上呼吸道中，是条件 致病菌； • 2.肺炎链球菌对营养要求较高，在含有新鲜血液 的培养基中生长良好； • 3.以optochin 试验和胆汁溶菌试验将肺炎链球菌 与其他－溶血链球菌相区别； • 4. 血清学鉴定特异性高； • 5. 要注意对PRP和MDR的检测。
苛养菌的分离和鉴定
•
卫生部北京医院检验科 陈东科
•
概 述
苛养菌的分离培养ppt参考课件
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3.检验方法鉴定 直接涂片检查
a.淤血斑：刺破淤血斑做血膜片，干燥固定后 革兰染色阴性双球菌呈对排列，可初诊。
b.脑脊液：取脑脊液离心后沉淀物涂片同上 分离培养
将标本直接接种于血琼脂平板、巧克力平板，
置于5-10%co2,35度培养24小时后可见圆形、 湿润小菌落，经涂片证实G-双球菌
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病源菌根据不同的生化反应可分为6个生物 型：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ。致病者多为 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ型。根据荚膜多糖抗原性不 同，可将有荚膜菌分为a、b、c、d、e和f6个 血清型。b型致病力最强，其次为e和f。根 据细菌外膜蛋白（OMP）又可分为不同的亚 型。有荚膜者致病力大于无荚膜者。
22
3.致病性 链球菌广泛存在于自然界和人及动物粪便
和健康人鼻咽部，可引起人类多种疾患，A 族占90%以上，猩红热，丹毒，新生儿败血 症，脑膜炎，产引起各种化脓性炎症，褥 热以及链球菌变态反应性疾病等。
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D奈瑟氏菌
寄生的脑膜炎奈瑟氏球菌和淋病奈瑟氏球菌是 重要的致病菌，脑膜炎奈瑟氏菌是人类流行性 脑脊髓膜炎的病原菌，多数菌株在初分离时有 荚膜，一般通过呼吸道传播所引起，常在冬末 春初季节发病最为流行。淋病奈瑟氏菌可引起 急或慢性淋菌性尿道炎、阴道炎，主要通过性 接触传播。
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流感杆菌主要通过呼吸道在人与人之间传 播，也可通过孕妇产道感染。新生儿由于 有来自母体的被动免疫，故2个月内发病率 低，3个月至3岁儿童的血清抗体水平最低， 此期易产生感染
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杜克雷嗜血杆菌
杜克雷氏嗜血杆菌的形态特点是短而细小，呈短
临床常见苛养菌的培养与鉴定精品PPT课件
副嗜沫 嗜血杆菌
H. paraegyptius
亚急性心内膜炎
性病软下疳
18Hale Waihona Puke 2.1 流感嗜血杆菌-概述
1. 流感嗜血杆菌社区感染常见病原菌之一，常引
起急性化脓性感染，有荚膜的b型强毒株可以
A组 首选试验 并常规报
告
B组 首选试验 选择性报
告
肺炎链球菌
红霉素 青霉素 （苯唑西林纸片） 复方新诺明 *头孢吡肟 *头孢噻肟
诱导 实验
*头孢曲松 克林霉素 多西环素 吉米沙星 左氧氟沙星 莫西沙星 氧氟沙星 *美罗培南 泰利霉素
四环素 万古霉素
C组 补充试 验 选择 性报告
新 增
修 订
*阿莫西林
2. 以肺部感染为主，大叶性肺炎多见。同时会导致耳部及鼻 咽部的感染。严重时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血 症。
3. 常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、 穿刺液 。
4. 肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。
肺炎链球菌疫苗
易感人群：小于5岁及大于65岁
第5页
1.2 肺炎链球菌-生物学性状
*阿莫西林克拉维酸
*头孢呋辛 头孢洛林(非
脑膜炎)
氯霉素
*厄他培南 *亚胺培南
利奈唑胺
利第福10页平
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
用苯唑西林代替青霉素来进 行纸片扩散法检测
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1.4 肺炎链球菌-药敏分析
PRSP的筛选
常规工作中可以用苯唑西林的纸片扩散法来检测青霉素的敏感性。
此法仅适用于 无生命危险感 染的患者。
第17页
嗜血杆菌属（Haemophilus）
牙龈部定植
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定
《医学微生物学》临床常见病原菌的培养与鉴定病原菌的鉴定是将一个未知菌株按其生物学特征，经过与所有已知菌种进行比较后到一个已知菌种的分析过程。
根据感染特性选择合适的培养基，首先要明确被鉴定菌种已获得纯培养。
然后确定革兰氏染色性、形态，再按科、属、种逐步鉴定下来。
应该利用已具备的条件，尽可能地缩小鉴定范围，这是在作实验设计时必须想到的，要用最小数量的试验方法作出鉴定。
基于鉴定菌的特点，选用合适的鉴定体系，力求方法学简单，反应判断明确，价廉的方法。
血清学鉴定由于操作简便、快速、特异性高，给细菌学鉴定提供了快速诊断方法。
对培养困难的病原菌，可考虑应用基因水平的鉴定技术。
最后还要提示，对检测人员应把知识和经验运用到每一鉴定步骤。
【球菌】球菌主要引起化脓性炎症，故又称化脓性球菌。
包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌及淋病奈瑟菌等，根据革兰氏染色可将其分为两类，均无鞭毛和芽孢，少数可形成荚膜。
本实验要求了解化脓性球菌的形态特征及染色性、链球菌溶血素“O”试验；葡萄球菌、链球菌及奈瑟球菌的检验程序和主要的鉴定方法；肺炎链球菌Op—tochin敏感试验。
一、葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)的细菌常堆聚成葡萄串状。
能引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓性炎症，是最常见的化脓性球菌。
有的菌株还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征等，又是医院内交叉感染的重要传染源。
近年来，耐药性菌株逐年增多。
临床上首先要与其他革兰氏阳性球菌鉴别，然后再作属内种的鉴定及致病性的检测。
[材料]1．菌种：葡萄球菌培养物。
2．培养基：血琼脂平板，普通琼脂平板，甘露醇发酵管，氧化、发酵(OF)管，甲苯胺蓝核酸琼脂。
3．试剂：兔血浆、3％H2O2、致敏胶乳／红细胞制剂。
4．其他：革兰氏染液、玻片、一次性卡片。
[方法]1．形态学观察：取普通琼脂平板上葡萄球菌培养物少许，涂片，革兰氏染色，镜检。
可见到葡萄状排列的革兰氏阳性球菌。
胡方芳-临床微生物标本常见细菌培养和鉴定
（3）菌落溶血特征 α溶血/草绿色溶血： β溶血： γ溶血/不溶血：
链球菌的溶血现象
2 液体培养基 （1）均匀浑浊生长 （2）沉淀生长 （3）表面生长（菌膜）
（二） 涂片染色
• 染色：革兰染色：革兰阳性菌、革兰阴性菌 • 形态、大小和排列：球形、杆形、螺旋形，菌体
大小，单个、成双、葡萄状等
• 烧伤创面脓汁以铜绿假单胞菌最多见；其次为 金黄色葡萄球菌、变形杆菌、溶血性链球菌、 大肠埃希菌、产碱杆菌、霉菌等；还常见多种 细菌混合感染。
• 常居菌中某种细菌的数量占有优势，且机体抵 抗力低下时也可造成感染。
（六） 生殖道标本
• 涂片检查：革兰染色：可查出一般细菌，尤其淋 病奈瑟菌(需进一步培养证实)、杜克雷嗜血杆菌、 阴道加德纳菌、假丝酵母菌等。
（3）杆菌肽敏感试验（BC）：A群链球菌敏感（S）
（4）其他：嗜麦芽窄食单胞菌（IPM R）
+ 靛基质
+ 大肠杆菌 枸橼酸杆菌 产酸克雷伯
产气、阴沟 普罗菲登 枸橼酸杆菌
其他肠杆菌 其他克雷伯
流感嗜血杆菌 多形性 血平板 -
嗜血巧克力 + 普通 –
卫星现象 +
G- b
Hale Waihona Puke 乳糖-氧化酶
+
-
- 金属光泽 +
肠道标本（粪便）
白色念珠菌
类志贺邻单胞菌、小肠结肠耶尔森
菌、弯曲菌属
金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、嗜血杆
眼、耳、鼻、喉 β溶血性链球菌、白喉棒状杆菌、 菌属、莫拉菌属、白百咳鲍特菌、肠
标本
酵母样菌、丝状真菌
杆菌科菌种、假单胞菌属、产碱杆菌
苛养菌的药敏试验(一)
苛养菌的药敏试验（一）苛养菌是指一类需要特殊营养成分才能生长繁殖的细菌，如淋病奈瑟菌、嗜血杆菌及肺炎链球菌等。
1．淋病奈瑟菌的药敏试验可采用纸片扩散法和稀释法进行。
但需在含1%添加剂的淋病奈瑟菌GC平板上进行。
操作方法同纸片扩散法和稀释法。
在35℃5%C02孵育20～24小时后测量抑菌环直径。
可选用头孢克肟、头孢噻肟、头孢泊肟、头孢唑肟、头孢曲松等抗生素中的1～2种，头孢西丁、头孢呋辛、头孢替坦、环丙沙星或氧氟沙星、青霉素G、壮观霉素、四环素等进行测定。
对于分离的菌株可测定p内酰胺酶，阳性结果预示青霉素 G等耐药。
2．嗜血杆菌属的药敏试验以下抗菌药物：阿莫西林／克拉维酸、头孢克洛、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢地尼、头孢克肟、头孢泊肟、口服头孢呋辛酯、阿奇霉素和克拉霉素等对单一嗜血杆菌感染患者的治疗往往不需进行敏感试验，仅在耐药性监测或流行病学调查时才进行。
从脑膜炎、败血症、会厌炎和面部蜂窝炎等重危患者的血液和脑脊液中分离到的流感嗜血杆菌，应进行常规试验并报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素和美洛培南的药敏结果。
氨苄西林敏感试验测定的结果，可预报阿莫西林的活性；大多数耐氨苄西林和阿莫西林的流感嗜血杆菌分离株产生TEM型l3内酰胺酶。
从细菌性脑膜炎及败血症患者标本中分离的嗜血杆菌，应直接作l3内酰胺酶试验，以快速检出氨苄西林和阿莫西林耐药菌株。
可用纸片扩散法和稀释法进行药敏试验。
纸片扩散法使用嗜血杆菌专用HTM培养基，操作同纸片扩散法。
接种物制备按直接菌悬液法。
稀释法用HTM 肉汤。
可在常规条件下孵育20～24小时报告，而不一定在50/4COz的环境下。
3．肺炎链球菌的药敏试验在M-H琼脂中添加5%绵羊血，倾注平板用于肺炎链球菌的纸片扩散法试验，接种后置5%CO。
、35℃孵育20～24小时观察结果，其他操作同纸片扩散法。
大多数抗菌药物需要用含2%～5%(V／V)溶解马血的阳离子调节的M-H肉汤(AMHI3-LHB)作为基质，稀释抗菌药物，进行稀释法测定。
苛养菌及少见菌分离培养与鉴定
苛养菌及少见菌分离培养与鉴定苛养菌及少见菌分离培养与鉴定1苛养菌是指对营养要求苛刻，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌；体外培养需添加特殊因子或其它营养成分。
苛养菌的分离鉴定是衡量一个细菌室技术水平的重要标志。
流感嗜血杆菌肺炎链球菌苛养菌卡他莫拉菌淋病奈瑟菌（一）肺炎链球菌来源肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae）简称肺炎球菌（pneumococcus）。
1881年首次由巴斯德（LouisPasteur）及G.M.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液中分离出。
为革兰染色阳性，菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，5%～10%正常人上呼吸道中携带此菌。
临床意义肺炎链球菌(Streptococcuspneumoconia，SP)是儿童和成人肺炎的重要病原菌之一，存在于正常人口腔、鼻咽部，在机体抵抗力下降时致病。
它引起肺炎、中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、细菌性脑膜炎、败血症等疾病，尤其对婴幼儿构成严重威胁。
易感人群任何人，皆可被肺炎链球菌感染，但以下3类人士特别容易受到侵袭：65岁以上人士；5岁以下儿童，特别是2岁以下的幼童；高危人群，如长期病患者等。
以年龄层论，受肺炎链球菌侵袭，引致侵犯性肺炎链球菌疾病的最高危者，是5岁以下的小儿，特别是2岁以下的幼童。
一旦受到侵袭，死亡率最高的是年长的老人家及有长期病患的高危人群。
中国2011年妇幼卫生事业发展报告指出，肺炎位列中国五岁以下儿童死因的第二位，在重症肺炎中，约有50%是由肺炎链球菌引起的。
肺炎链球菌不仅是/doc/5345029.html小儿肺炎的主要“元凶”，也是引起肺炎死亡的重要病原。
婴儿从6月龄起母传抗体逐渐消失，因此6月龄到2岁是儿童侵袭性肺炎链球菌性疾病发病率最高的时期。
致病力肺炎链球菌的荚膜在细菌的侵袭力上起主要作用，有荚膜的SP有毒力，失去荚膜则独力减低或丧失。
还可产生溶血素、紫斑产生因子、杀细胞素、皮肤致死毒素等。
苛养菌的分离培养
淋球菌
1879年，奈瑟从35例急性尿道炎、阴道炎及新 生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分离出淋 病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝 固血清培养基上培养淋球菌获得成功
现在是30页\一共有65页\编辑于星期五
保温保湿及时送检，及时接种(30min内)，培养基 应孵热后再接种。标本取后应立即接种于培养基 中。国外常用的培养基有Thayer-Martin培养基及改 良的Stuart运送培养基。国内也已研制成国产培养 基，如加多粘菌素E(25μg/mL)的血液琼脂或巧克 力琼脂。初代分离时应用5%二氧化碳环境(烛缸)，培 养温度36℃为宜，相对湿度80%以上。培养24～48h
现在是26页\一共有65页\编辑于星期五
3.检验方法鉴定
直接涂片检查 a.淤血斑：刺破淤血斑做血膜片，干燥固定后革
兰染色阴性双球菌呈对排列，可初诊。 b.脑脊液：取脑脊液离心后沉淀物涂片同上
分离培养
将标本直接接种于血琼脂平板、巧克力平板，置于 5-10%co2,35度培养24小时后可见圆形、湿润小菌 落，经涂片证实G-双球菌
现在是18页\一共有65页\编辑于星期五
该菌的药敏实验平板为血MH平板，放CO2环境 **1ug苯唑西林纸片可用来筛选P耐药，但须认识到，当
OX>20mm时表明肺炎链球菌对P敏感，此菌往往也对其他B-内 酰胺（包括阿莫西林和多数头孢素）抗生素敏感；如果OX<19， 则需要重新检测青霉素、头孢霉素MIC，以确认该菌株是
现在是2页\一共有65页\编辑于星期五
血平板培养基
血平板培养基又叫血平板，主要用于链球菌及其他苛 养菌的分离、培养及溶血活性的检测。
主要成分：其中的蛋白胨和牛肉粉主要提供细菌生长所 需要的碳源、氮源、氨基酸及维生素。氯化钠维持培养 基中的渗透压，琼脂用做凝固剂。脱纤维羊血一方面提 供一些特殊的生长因子，另一方面用于观察溶血反应。
临床常见苛养菌的培养与鉴定62页PPT
51、山气日夕佳，飞鸟相与还。 52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。
53、富贵非吾愿，帝乡不可期。 54、雄发指危冠，猛气冲长缨。 55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美 池桑竹 之属， 阡陌交 通，鸡 犬相闻 。
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
苛养菌的分离培养
从病灶中或培养菌落中取材检查可见2个或2 个以上细菌连成锁状有如鱼群在游泳。故称 鱼群状。在淋巴腺组织切片中可见典型的连 锁杆菌。
第十三页，共65页
杜克雷嗜血杆菌对温度较敏感，43-44℃以上温 度则失去抵抗能力，20分钟即可死亡。对42℃抵 抗性稍强，但4小时死亡。在37℃中可活6-8天， 10-20℃之间7-10天后可死亡，在此温度中较大 肠菌、葡萄球菌抵抗力弱，较淋球菌强，对寒冷 抵抗力较强，5℃中可生存1周，冻干时可能生存 1年。对干燥的抵抗性弱。在人工培养中温度是 发育的重要因素。
第二十四页，共65页
1.形态与染色
本属细菌为革兰染色阴性，球形或球杆形。 球菌多呈双球菌状排列，相邻一侧扁平或略凹呈
肾状；杆菌则较短粗，长宽相比为2:1，无鞭毛。
脑膜炎奈瑟氏菌在患者脑脊液中，多位于中性粒
细胞内，形态典型。在孵育24h后的培养物中， 常呈现衰退形态，菌体大小较不一致，着色亦 深浅不匀。新分离菌株大多有荚膜和菌毛。
第五页，共65页
1.形态与染色 流感嗜血杆菌是一群无动力、无芽孢、呈球杆
状或多形态的革兰阴性小杆菌。菌落为圆形、无 色、透明。
2.培养特性
需氧或兼性厌氧，培养时需要X因子和V因子。
血液中因x子经加热可释放，故常用巧克力色培
养基分离培养。另外金黄色葡萄球菌生长时能产 生本菌需要的V因子，
第六页，共65页
第二十五页，共65页
2培养特性
营养要求较高，需在含有血清、血液等培养基中 方能生长，最常用的是巧克力培养基，专性需氧，
5%CO2条件下生长更佳，最适生长温度为37 度，低于30度不生长，孵育24小时后，形成直 径1.0—1.5mm的无色、圆形、光滑、透明，似露
苛养菌
❖ 培养与鉴定：
在血琼脂平板培养5-7天可形成灰色不溶血 菌落。在固体培养基上菌落为无色、半透明、 圆形、表明光滑、边缘整齐、中央稍凸起， 直径为2-3mm;有时可出现粘液样或干燥的硬 皮样菌落。液体培养基呈轻度浑浊有沉淀， 不形成菌膜。培养≥30天才能报告阴性。
❖ 生化特性：
菌种
触 氧化 酶酶
有氧时一般不生长。初次分离加5%CO2可促 进其生长。在血平板上形成灰白色或淡黄色
粗糙而不规则的菌落，不溶血。
❖ 生化反应：
H2O2试验阴性。 衣氏放线菌分解葡萄糖、木糖、棉子糖、 甘露糖和甘露醇产酸不产气，不分解淀粉， 能将硝酸盐还原成亚硝酸盐（80%阳性）。
牛放线菌在葡萄糖中产酸不产气，在木糖、 棉子糖、甘露糖和甘露醇中不产酸，水解淀 粉，不能将硝酸盐还原成亚硝酸盐。
❖ 抗生素敏感性试验不宜作为常规性检测。
3卡氏肺孢子虫
❖ 形态特征: 真核单细胞生物，其分类地位尚未明确, 其与真菌有着非常相似的包囊壁超微结构。生活史 中主要有两种型体，即滋养体和包囊。在姬氏染色 标本中，滋养体呈多态形，大小为2～5µm，胞质为 浅蓝色，胞核为深紫色。包囊呈圆形或椭圆形，直 径为4～6µm，略小于红细胞，经姬氏染色的标本， 囊壁不着色，透明似晕圈状或环状，成熟包囊内含 有8个香蕉形囊内小体(intracystic bodies)，各有1 个核。囊内小体的胞质为浅蓝色，核为紫红色。
4放线菌
❖ 放线菌在形态上分化为菌丝和孢子，在培养特征上与真 菌相似。然而，用近代分子生物学手段研究的结果表明，放 线菌是属于一类具有分支状菌丝体的细菌，革兰染色为阳性。 主要依据为：①同属原核微生物：细胞核无核膜、核仁和真 正的染色体；细胞质中缺乏线粒体、内质网等细胞器；核糖 体为70S；②细胞结构和化学组成相似：细胞具细胞壁，主 要成分为肽聚糖，并含有吡啶二羧酸 (DPA) ；放线菌菌丝直 径与细菌直径基本相同；③最适生长PH范围与细菌基本相 同，一般呈微碱性；④都对溶菌酶和抗生素敏感，对抗真菌 药物不敏感；⑤繁殖方式为无性繁殖，遗传特性与细菌相似。
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形成化脓性脑脊髓膜炎。
4. 人工培养物如不及时转种，超过48h常死亡。该菌能产生自溶酶 ，故采集时标本不宜放冰箱，应保温立即送检。 5. 根据脑膜炎奈瑟菌夹膜多糖抗原的不同， 可分为A、B、C等13 个血清群，我国主要是由A群和C群引起。
第27页
3.2 脑膜炎奈瑟氏菌-生物学性状
1. 培养条件：5%-10%的CO2 ,培养基：血平板和巧克力。 2. 菌落形态：光滑、凸起、半透明、湿润。 3. 涂片染色：革兰阴性球菌，肾形或咖啡豆状，凹面相对、
细菌
B定型为 有毒株
生长因子 X V ＋ + ＋ ＋ + + － ＋ － ＋
荚 膜
溶 血
吲 哚
脲 酶
触 酶
鸟 AA
流感嗜血杆菌：a～f型 未定型 副流感嗜血杆菌：三个型 未定型 溶血嗜血杆菌 副溶血嗜血杆菌 杜克氏嗜血杆菌 埃及嗜血杆菌 嗜沬嗜血杆菌 副嗜沬嗜血杆菌
＋ + － － + － ＋ + + －
抑菌环直径≥14mm为敏感
抑菌环直径≥18mm 确认
甲 型 溶 血 链 球 菌
Optochin试验: 敏感 胆汁溶菌试验: 阳性 菊糖发酵试验: 阳性 荚膜肿胀试验：阳性 触酶 ：阴性 胆汁七叶甘 ：阴性
肺 炎 链 球 菌
(S)
(R)
第8页
1.3 肺炎链球菌-检测方法
2 乳胶凝集法 3 免疫学方法
V因子 V因子 MH平板
血平板
金黄色葡 萄球菌
细菌种类
血平板
MH平板
需要因 子
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
+
+
+
X+V
V
2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
因子实验 V
X
V
X
X+ V
黄色区域表 示细菌生长
X+ V
流感嗜血杆菌
副流感嗜血杆菌
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MH平板
2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
未定型为 无荚膜株
嗜血杆菌属根据吲哚、 脲酶和鸟氨酸脱羧酶可 分为8个生物型。
诱导 实验
C组 补充试 验 选择 性报告
*头孢呋辛
*头孢曲松
头孢洛林(非 脑膜炎)
克林霉素
B组 首选试验 选择性报 告
多西环素 吉米沙星 左氧氟沙星 莫西沙星 氧氟沙星
*美罗培南
新 增
氯霉素
*厄他培南
修 订
*亚胺培南
泰利霉素 四环素 万古霉素
利奈唑胺
第10页 利福平
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
用苯唑西林代替青霉素来进 行纸片扩散法检测
1. 培养条件：CO2环境，哥伦比亚血平板。 2. 菌落形态：18-24h后血平板上形成草绿色
溶血、灰色、半透明、圆形、针尖样、表
面光滑（有些菌株可表现为粘液状）的菌 落;培养48h后，脐凹状菌落。 3. 涂片染色：G+球菌,矛头状 ,成双或链状排 列，尖端向外。
用放大镜观察
第6页
1.2 肺炎链球菌-生物学性状
患者：男，足月出生九天，因无明显诱因出现发热,拟 “新生儿感染”收住入院儿科NICU。 入院后： 1. 2. 3. 4. 血常规：WBC10.01*09/L。脑脊液常规:无色透明，潘氏(+)，细胞计数0.316×109/L。 1 血培养及脑脊液: 血培养阳性，脑脊液培养阴性。送至CDC确认为B群脑膜炎奈瑟菌。 咽拭子培养:3名密切接触者检出一株B群脑膜炎奈瑟菌株（系患者的外祖母）。 2 药敏试验：对头孢三嗪、 头孢噻肟、 利福平、 氨苄西林、四环素、 米诺霉素、环丙 沙星均敏感；而对磺胺甲基异噁唑、复方新诺明均耐药。 治疗过程：予以独立病房隔离治疗，头孢曲松、青霉素抗感染及物理降温后，病情平稳。 3 4
厄他培南
仅用于流感
氯霉素
亚胺培南 利福平 泰利霉素 第25页
美罗培南
四环素
3. 脑膜炎奈瑟氏菌
3.1 概述 3.2 生物学性状 3.3 鉴别要点
3.4 药敏分析
3.5 案例分析
第26页
3.1 脑膜炎奈瑟氏菌-概述
1. 脑膜炎奈瑟菌存在于携带者和脑膜炎患者的鼻咽部。 2. 通过飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。感染后多数患者呈 携带状态或隐性感染。 3. 少数出现呼吸道感染症状，仅极少数发展成败血症，累及脑膜，
第2页
目录
1.肺炎链球菌瑟氏菌 4. 淋病奈瑟氏菌 5.布鲁氏菌属 6.放线菌属 7.星形诺卡菌 8.溶血隐秘杆菌
第3页
1.肺炎链球菌
1.1 概述 1.2 生物学性状 1.3 检测方法
1.4 药敏分析
1.5 案例分析
第4页
1.1 肺炎链球菌-概述
1. 肺炎链球菌社区感染常见病原菌之一，定植在正常人的鼻
红霉素 青霉素 （苯唑西林纸片） 复方新诺明
*头孢吡肟 *头孢噻肟 *阿莫西林*阿莫西林
克拉维酸
纸片扩散法检测药敏建议报告抗生素种类： 青霉素类：苯唑西林 大环内酯类：红霉素 磺胺类：复方新诺明 喹诺酮类：左氧 四环素类：四环素 糖肽类：万古霉素 增加使用D-抑菌圈试验或肉汤微量稀释法 检测诱导型克林霉素耐药的信息。
1. 荚膜是肺炎链球菌的主要毒力因子之一。
2. 根据荚膜特异性多糖抗原性，分为近90个血清
型，成人致病以1--9型及12型最多，其中3型
毒力最强，常致严重肺炎。
3. 肺炎链球菌感染后，机体可建立较牢固的型特 异性免疫，同型病菌的再次感染少见。
第7页
1.3
1
肺炎链球菌-检测方法
传统手工法 干扰肺炎链球菌叶酸的合成 Optochin试验
第12页
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
β -内酰胺类抗生素 K-B法未给出标准,推荐用MIC法
第13页
1.4 肺炎链球菌-药敏分析
细菌生长区
E test 塑料 条
256 128
MIC法试验条件
方法 ：微量稀释法直接上机(GP-68）及E-test法 接种物：0.5麦氏标准 孵育 ：35±2℃，5%CO2 ；20-24h
临床常见苛养菌的鉴定与药敏
无锡市第二人民医院
第1页
苛养菌概述 1. 苛养菌的基本特征：
对营养要求较高，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌 体外培养需添加特殊因子或其他营养成分
2. 苛养菌分离和鉴定的基本要求：
采用 高营养 的培养基，延长培养时间 置于 CO2 或 微需氧 的环境，保持一定湿度 不能随意丢弃无法鉴定的细菌，极有可能是苛养菌及少见菌
卫星试验 卟啉试验
1
2 3 4 5
传统手工法 自动化方法 乳胶凝集法 免疫学方法
糖发酵试验
吲哚快速法试验 尿素酶试验
基因检测法
质谱检测法
6
第21页
2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
卫星试验
X因子 流感嗜血杆菌与金黄色葡 萄球菌在血琼脂培养基上共 同培养时可见卫星现象，因 葡萄球菌能合成V因子，使 其菌落周围生长的流感嗜血 杆菌菌落较大，远离者则较 小。
＋ － ＋ － － － － － － －
－ － － － ＋ + D － － －
D D － － D － － － － －
D D D D ＋ ＋ － ＋ － －
+ + ＋ ＋ ＋ D － ＋ － －
D D D D － D － － － －
2.4 流感嗜血杆菌-药敏分析
流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌 氨苄西林 阿奇霉素 克拉霉素 A组 首选 试验 并常 规报 告 阿莫西林 复方新诺明 氨曲南 阿莫西林-克拉维酸 头孢克罗2 头孢丙烯2 头孢克肟3 头孢泊肟3 氨苄西林 -舒巴坦 头孢呋辛2 B组 首选 试验 选择 性报 告 C组 补充 试验 选择 性报 告 头孢洛林 头孢呋辛（口服） 环丙沙星 左氧氟沙星 头孢噻肟 头孢他啶 头孢曲松 莫西沙星 氧氟沙星
1. 培养条件：需氧，CO2环境中，最适宜
的培养基是巧克力平板（加入万古霉
素和制霉菌素），不同嗜血杆菌对因 子的需求不同。血平板上有卫星现象。
2. 菌落形态：35℃，18～24h培养形成微
小、无色透明、不溶血，呈露滴样小 菌落。 3. 涂片染色：革兰阴性小杆菌，无芽胞。 粘液型菌株有荚膜。
第20页
2.3 流感嗜血杆菌-检测方法
5
第16页
2.流感嗜血杆菌
2.1 概述 2.2 生物学性状 2.3 检测方法
2.4 药敏分析
第17页
嗜血杆菌属（Haemophilus）
呼吸道及全 身感染
牙龈部定植
流感嗜血杆菌 H. influenzae
溶血性 嗜血杆菌
H. paraphrophilus
口咽部定植
副流感 嗜血杆菌
H. parainfluenzae
肺炎链球菌疫苗
咽部。 2. 以肺部感染为主，大叶性肺炎多见。同时会导致耳部及鼻 咽部的感染。严重时可继发胸膜炎、脓胸、脑膜炎和败血
症。
3. 常见送检标本类型有痰、咽拭子、尿液、脑脊液、血液、 穿刺液 。
易感人群：小于5岁及大于65岁
4. 肺炎球菌离开人体后很易死亡，痰培养分离率很低。
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1.2 肺炎链球菌-生物学性状
试验条件 培养基：纸片扩散法：嗜血杆菌试验培养基（HTM） 肉汤稀释法：HTM肉汤 接种物：直接菌落悬滴法，相当于0.5麦氏标准 孵育： 35±2℃，5%CO2 ；20-24h
1. 氨苄西林和阿莫西林是治疗流感嗜血杆菌的 首选药物。 2. β-内酰胺酶的检测可作为一种快速试验方便 地检出流感嗜血杆菌对氨苄西林和阿莫西林 的耐药性,常用的检测方法为显色头孢菌素法 -头孢硝噻吩法，我院目前阳性率在20%左右 。 3. 从脑脊液中分离的流感嗜血杆菌，常规中只 报告氨苄西林、一种三代头孢菌素、氯霉素 和美罗培南的试验结果。