厌氧菌讲义

（五）厌氧菌的鉴定
1.API鉴定系统：挑取菌落于API 20 A培养基，制 成3McF的菌悬液，移至API 20 A的试条中，放 厌氧环境中培养24小时，加相应的试剂，判读 结果。 2.ATB快速鉴定系统：挑取菌落于悬浮培养基，制 成4McF的菌悬液，移至Rapid ID 20A的鉴定试 条，于普通培养箱37度培养4小时，加相应的 试剂，仪器判读结果。 3.Vitek鉴定系统：挑取菌落于一定浓度的盐水缓冲 液，制成3McF的菌悬液，准备Vitek厌氧菌鉴 定卡，充填，封口，取出卡片放于普通37度培 养箱内，卡槽向上，培养4小时，判读结果。
革兰阳性无芽胞厌氧杆菌
一大群定植于人类和动物皮肤与消化道黏 膜表面的厌氧菌。 双歧杆菌属¡ 肠道正常菌群，维持微生态 真杆菌属¡ 毒力弱，混合感染（心内膜炎） 丙酸杆菌属¡ 皮肤痤疮，介入性感染 乳酸杆菌属¡ 肠道、生殖道正常菌群，龉齿 放线杆菌属¡ 放线菌病（皮下结缔组织炎症） 蛛网杆菌属¡ 皮下结缔组织感染
厌氧菌感染及其实验诊断
李
琦
一、前言
临床细菌室开展厌氧菌培养的必要性 临床细菌室开展厌氧菌培养现状 影响国内开展厌氧菌检验的主要因素
（一）临床细菌室开展厌氧细菌培养的 必要性
1．厌氧菌感染的广泛性：厌氧细菌学是研究微 观生态平衡、失调和调整的重要部分，在消化 道菌群中，99.9%以上为厌氧菌，在生物拮抗、 营养、免疫等方面具有不可估量的生理意义。 厌氧菌感染是一种内源性感染，病种遍及临床 各科，人体的各个部位，各种器官均可发生厌 氧菌感染。据广献报道。在菌血症中有10%可 检出厌氧菌，在牙源性口面部感染病例中有 94%，在吸入性肺炎及肺脓肿时有93%，在妇 产科各种感染性疾病中有100%，直肠周围脓肿 有77%可检出厌氧菌，而且有相当一部分病例 是单一的厌氧菌感染。
（四）种 类
厌氧菌的种类很多，1994年统计有41 个属，近300个种。到目前为止，又增加 了33个新属，几十个新菌种。 有无芽胞: 芽胞菌（梭菌） 无芽胞厌氧菌 染色性和形态:革兰阴性厌氧球菌 革兰阴性厌氧杆菌 革兰阳性厌氧球菌 革兰阳性厌氧杆菌
厌氧芽胞杆菌-梭状芽孢杆菌
称梭菌（Clostridium），厌氧或 微需氧，革兰阳性粗大杆菌，芽胞，菌 体碰膨大呈梭状。130个种，少数产毒菌 株产外毒素和侵袭酶。 产气荚膜梭菌、诺氏梭菌、索氏梭菌 ¡ 气性坏疽 破伤风梭菌¡ 破伤风 肉毒梭菌¡ 食物中毒 艰难梭菌¡ 伪膜性肠炎
（二）临床表现
厌氧菌感染的临床表现 1.厌氧菌感染的一般症状 2.厌氧菌感染的特征。
（二）临床表现
1.厌氧菌感染的一般症状 全身症状： 发热（低热） 局部症状： 红、肿、热、痛 实验室检查：白细胞总数和中 性粒细胞数升高
（二）临床表现
2.厌氧菌感染的特征。 感染局部有气体产生,造成组织肿胀 和坏死,皮下有捻发音 分泌物有恶臭、带血或呈黑色，并在 紫外光下发出红色荧光 发生在粘膜表面的感染 长期应用抗生素继发的感染 细菌学特征: 常规培养阴性，但直接 涂片有细菌，且细菌染色不均、形态 各异、明显的多形性
二、厌氧菌的基本概念
（一）细菌分类(根椐对氧分子的需求）
专性需氧菌：结核分枝杆菌，星状诺卡
菌 兼性厌氧菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆 菌 微需氧菌： 空肠弯曲菌、幽门螺杆菌 专性厌氧菌：产气荚膜梭菌、脆弱拟杆 菌
（二）定 义
厌氧菌（Anaerobic bacteia）是一大类不 能利用分子氧作为终末电子受体、在大 气环境中不能生长、只能在低氧分压和/ 或低氧化还原电势（Eh）条件下生长的 细菌的统称。
(3)血标本厌氧培养：无菌手续抽血后，立即注 入THIO培养基或商品厌氧血培养瓶内送检。
(4)组织块厌氧培养：自感染深部取活体组织块 后，立即用无菌拭子将组织块插入运送培基深 部送检。
标本送到实验室后，最迟2h内处理完毕。可将 标本置室温保存。同时观察记录标本的性状。
（二）厌氧菌的分离培养
1. 接种标本的前处理 检查标本来源是否符合要求。 检查运送是否符合要求。 核实标本采集的时间。 观察标本的性状，有无恶臭味、血 液、黑色、气泡和硫磺颗粒双及在 紫外线下有无荧光等，并记录。
（三）影响国内开展厌氧菌检验的主 要因素
1.临床医生对其认识不足、重视不够，以经验治
疗代替了厌氧菌培养。 2.厌氧菌生长速度慢，实验室报告结果时间较长， 对临床及时指导不够，这是临床医生不愿送标 本的主要原因。
3.临床微生物实验室对开展厌氧菌检验态度不够
积极，主要由于：培养庆氧菌所需要的条件比
较高，操作程序繁琐,花费的成本高，效益低。
2．厌氧菌感染在诊断和治疗上的特殊性：检出 厌氧菌须具备必要的条件，如有特殊的厌氧培 养系列，包括特殊采样方式、培养基、鉴定试 剂及设备等。一旦确诊厌氧菌感染，在治疗也 有其特殊性。
（二）临床细菌室开展厌氧菌培养现状
1.根据有关调查，我国100家医院临床细菌室开展 厌氧菌培养的情况，从未开展厌氧菌培养的占 77%，未作为常规项目的占10%，不规范开展的 占8%，能作为常规项目，并规范开展的仅占5%。 2.我国厌氧菌培养设备现状：约95%以上的细菌 室没有厌氧手套箱，在能开展厌氧菌培养的实 验室中约98%实验室用厌氧罐(盒）作为厌氧检 测设备。极个别的实验室具备用气相色谱仪鉴 定菌种。少数临床细菌室开展厌氧菌药敏试验。
（六）厌氧菌的药敏试验
1.厌氧菌感染以经验用药为主：
多数厌氧菌对抗菌药物的敏感性预测性较高， 且大多数情况下经验治疗是满意的。因此对分 离的厌氧病原菌，按常规都做药敏试验是不必 要的。
2.厌氧菌药敏试验指征：
严重感染，如心内膜炎、脑脓肿、骨髓 炎治疗时期长，观察药物敏感性变化。 慢性感染 经验用药无效 对新药评价 耐药监测
革兰阴性厌氧球菌
三个菌属 韦荣球菌¡ 口腔、肠道、生殖道正常菌 群，牙周牙髓感染 氨基酸球菌¡ 口腔正常菌群，很少感染 巨球菌属¡ 肠道正常菌群，很少感染
革兰阳性厌氧球菌
种类很多，根据对气体的要求，分为 非专性厌氧球菌： 葡萄球菌属 链球菌属 专性厌氧球菌： 消化链球菌属¡ 口腔、肠道正常菌群， 混合感染 消化球菌¡ 女性生殖道寄生，混合感染 孪生球菌属 瘤胃球菌属¡ 肠道正常菌群，很少感染
（四）耐氧试验
1.第一次耐氧试验
初始标本需氧和厌氧对照,发现 可疑菌落(需氧环境不生长菌落)。
2.第二次耐氧试验
多个可疑菌落分别接种需氧和 厌氧平皿,分别置35℃作需氧和厌 氧培养。
3.第三次耐氧试验
取仅厌氧环境生长菌落分别在 35℃厌氧和需氧环境培养,如分离 的菌落仅在厌氧环境生长,可确定该 菌为厌氧菌.
染色镜检
厌氧菌标本染色镜检，重要、必要。
提示有无细菌感染和有无厌氧菌感染。若镜 下有细菌存在，而普通细菌培养无细菌生长 ，则提示有厌氧菌感染的可能。 大致判断标本中的细菌含量。 根据细菌的形态、染色性和排列方式，以及 有无多形性、有无各种厌氧菌的特殊形态， 为鉴定厌氧菌提供参考与依据。 芽胞、荚膜等特殊结构，为鉴定革兰阳性芽 胞杆菌提供参考。
采集标本时的要求：
（1）标本绝对不可被正常菌群污染；
（2）尽量缩短与空气接触时间，一般不宜
超过30分钟，对氧敏感菌不宜超过10分
钟。
2.厌氧菌标本的运送 床边（直接）接种 针筒运送法：主要针对各种液体标本， 抽取标本后应排除筒内空气。 无菌小瓶运送法：小瓶内装入厌氧菌液 体培养基，除去瓶内氧气。 组织块运送法：将组织块放在厌氧罐内 送检。
四、厌氧菌的培养与鉴定
（一）标本采集与运送
1.厌氧菌标本的采集 采集原则：体表及其与外界相通的腔 道，即有正常菌群寄生的部位的标本 ，不宜作厌氧菌检查。 采集方法：针筒穿刺抽取，严格无菌 操作，尽量避免接触空气。
原则上只有在正常情况下无菌的部 位采取的标本(如血、胸腔抽出液、心包 液、腹腔液、关节液、胆汁、外科手术 取出的脓、深部脓肿抽出物、膀胱穿刺 抽出的尿)适于做厌氧培养。被正常菌群 污染的标本(如大便、自行排出的尿、直 接咳出的痰、胃和十二指肠引流液、前 列腺分泌物、支气管镜冲洗液等)不宜做 厌氧培养
（五）分 布
厌氧菌是人和动物体内正常菌群的主 要组成成分，主要分布在口腔、上呼吸道、 消化道和女性生殖道等部位。 部分厌氧菌以芽胞形式存在于体外。
三、厌氧菌感染
（一）分 布
厌氧菌的感染率很高，约占总感染率的60 ％以上。 菌血症或败血症:10%-20%， 肺部厌氧菌:41.1%-84.2%， 牙周炎和牙根管炎:96.67%-100％。 其中一部分感染为单纯厌氧菌感染， 但大部分感染是与需氧菌或兼性厌氧菌混 合感染(82.23%）。
2.培养基的选择 非选择性分离培养基 强化血琼脂平板、硫乙醇酸钠肉汤 增菌培养基和厌氧菌血液培养瓶等 。 选择性分离培养基 羊血苯乙醇(PEA)琼脂平板、卡那 －万古霉素冻融血琼脂平板(KVLB) 、七叶甙胆汁（BBE）琼脂平板
（三）常用的厌氧菌培养方法
1.烛缸二氧化碳培养法 2.简易厌氧袋培养法 3.厌氧罐（盒）培养法 4.厌氧手套箱培养法
具体标本运Байду номын сангаас：
(1)少量(1m1以下)的粘稠标本(如中耳炎、鼻窦 炎、脑脓肿、宫内感染等感染部位的脓汁或分 泌物)的运送法：用拭子自脓或分泌物深部取 标本后，迅速插入运送培养基最深处(无色部
位)，塞严管口，立即送检。
(2)大量(1ml以上)的液体标本，如胸腹水、
心包液、胆汁、脑脊液、关节液、稀脓 等)运送法：用无菌注射器抽取后，排尽 气体，立即将针头插入无菌橡皮塞与空 气隔绝送检，或立即注入硫乙醇酸盐培 养基(THIO)或厌氧血液培养瓶内送检。
（三）分 类
对氧极端敏感的厌氧菌：0.5%氧分压或暴
露空气10min内即死亡。月形单胞菌，丁
酸弧菌
中度厌氧菌：在2～8％氧分压或暴露空气
60～90min仍能分离出。产气荚膜梭菌、 脆弱拟杆菌。 耐氧厌氧菌：在无氧条件下生长最好，在 有氧条件下也能生长，但生长不佳。第三
梭菌，溶组织梭菌。
3.药敏试验方法 ATB ANA厌氧菌药敏实验：挑取菌落于 API 20 A培养基，制成3McF的菌悬液， 吸取200uL 至ATB S 培养基接种试条，厌 氧环境下培养24-48 小时，仪器或手工判 读结果。 其它方法：琼脂稀释法、肉汤稀释法和E test 法。
谢谢大家！
破伤风梭菌
产气荚膜梭菌
汹涌发酵
双溶血环
革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
临床最常见的厌氧菌，大多为人体正常 菌群的组成成分，部分为条件致病菌。 拟杆菌属¡ 最常见，条件致病菌 普雷沃菌属¡ 口腔寄生，牙周感染 卟啉单胞菌属¡ 牙周、泌尿道感染 梭杆菌属¡ 口腔、肺部、泌尿道感染 二氧化碳噬纤维菌属¡ 牙周炎 纤毛菌属¡ 牙周牙髓感染 沃廉菌属¡ 牙周牙根感染