微生物检验 第十一章 厌氧菌
第十一章 厌氧性细菌
( 一 ) 生物学性状
1.革兰染色阳性。 菌体细长,有周鞭毛、无荚膜。 ※芽胞呈正圆形,比菌体粗,位于菌体顶端,使 细菌呈鼓槌状,为本菌典型特征。
2.专性厌氧。血平板上，有β溶血。
3.芽胞对外界抵抗力强,能耐煮沸1h,在干燥的 土壤和尘埃中可存活数十年。
( 二 ) 致病性与免疫性
1.致病物质 致病作用主要依赖于病菌所 产生的外毒素。
二、产气荚膜梭菌
（C.perfringens）
( 一 ) 生物学性状
1.形态与染色 革兰染色阳性。 菌体粗大呈杆状,无鞭毛，在 体内可形成明显的荚膜。芽胞呈椭 圆形,比菌体细,位于次极端。
2.培养特性
厌 氧 血平板：双层溶血环 内环完全溶血-θ毒素 外环不完全溶血- α毒素 蛋黄琼脂平板：Nagler反应
(2)食物中毒
1）主要因食入被A型产气荚膜梭菌大量污染 的食物(主要为肉类食品)而引起。
2）潜伏期约 10h 3）临床表现为腹痛、腹胀、水样腹泻; 无发热、无恶心呕吐。 1-2天后自愈。 如不进行细菌学检查常难确诊。
(3)坏死性肠炎
由 C 型产气荚膜梭菌产生的β毒 素而引起。
( 三 ) 微生物学检查法
(2)破伤风溶血毒素 (tetanolysin)
在致破伤风中的作用尚不 清楚。
2.所致疾病
※（1）感染的重要条件--伤口形成厌氧微环
境： 1)伤口窄而深,有泥土或异物污染 ; 2)大面积创伤,坏死组织多,局部组织缺 血 ; 3)同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染 的伤口。
（2）疾
病
1）传播途径--经伤口感染人体。 2）潜伏期--可从几天至几周,与原 发感染部位距离中枢神经系统的远 近有关。 3）引起破伤风
第十一章厌氧菌鉴定
第二节 革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
三、不解糖紫单胞菌
不解糖紫单胞菌主要分布于人类口
腔、泌尿生殖道和肠道，在正常人体的检
出率较低。主要引起人类牙周炎、牙髓炎
、根尖周炎，也可引起胸膜炎、阑尾炎和
细菌性阴道炎，尚可引起头、颈部和下呼
吸道感染
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第三节 革兰阳性 无芽胞厌氧杆菌和放线菌属
一、生物学特性
本群共同特点为革兰阳性，菌体与类棒状杆菌相似，两 端可粗大，排列不规则，多呈“X”、“Y”、“人”、“川” 等形状，大小不一、长短不等，有的出现分枝或分叉状，多 形性明显。pH6．5～7．8生长良好，但乳杆菌属最适pH5．5 左右、甚至pH3亦能生长。各菌生化反应不一，多数能发酵 葡萄糖，触酶试验阴性，吲哚试验阴性
热100℃ 1h以上，干热180℃ 2h高压蒸汽 灭菌30min芽胞可被杀死。肉毒毒素不耐 热，经56℃ 30min可灭活
第一节 梭状芽胞杆菌属
（二）微生物学检验
1．标本 及时采取可疑食品、早期患者的 呕吐物、胃液、粪便及血清等，从患者血 清中检出毒素是最直接最有效的方法。
2．鉴定 （1）直接涂片 （2）厌氧培养
第三节 革兰阳性 无芽胞厌氧杆菌和放线菌属
二、微生物学检验
发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露
醇，产酸产气。明胶液化试验阳性，H2S
产生试验阳性，吲哚试验在乳阴糖性蛋黄，牛奶卵血磷琼脂脂上酶分
阳性
解乳糖，有双层溶血环
第一节 梭状芽胞杆菌属
（二）微生物学检验
1．标本 采集标本时严格避免正常厌氧菌 群的污染和接触氧气
2．鉴定 （1）直接涂片 （2）厌氧培养
第一节 梭状芽胞杆菌属
第一节 梭状芽胞杆菌属
医学微生物学--厌氧菌
蚌埠医学院微生物学教研室 高淑娴
厌氧性细菌（anaerobic bacteira）： 生长和代谢不需要氧气，利用发酵而获取 能量的一群细菌，培养需在低氧分压下， 在含10%CO2的空气中，不能在固体培 养基表面生长； 厌氧芽孢梭菌细菌 无芽孢厌氧菌
厌氧芽孢梭菌
G+,形成芽孢的大杆菌;芽孢直径大，菌 体呈梭状；157种，分布在土壤、人和 动物肠道；少数为致病菌，产生外毒素。 主要疾病：破伤风，气性坏疽，肉毒中 毒
肉毒梭菌
生物学特性 G+ ，粗短杆菌，椭圆形芽孢，次极端，形 似网球拍，鞭毛，严格厌氧，
根据遗传特性分为四组，根据毒素抗原性分 A~G 7 个型，大多数菌株只产生一种型别毒 素，各型毒素只能被同型抗毒素中和。 Ⅰ 、 Ⅱ 组可引起人类疾病， Ⅰ 组多见，最主 要的为 A 、 B 、 E 型， F 型偶见。我国报告 大多为 A 型。 Ⅱ 组包括 E 、 B 、 F 型毒素 的一些产生菌株。 Ⅲ 组包括产生 C 、 D 型毒 素的菌株，主要引起鸟类肉毒病。 Ⅳ 组为产 生 G 型毒素的菌株。所知毒素中毒性最强的 为 C 型，所有毒素均不耐热。
破伤风梭菌
• 芽孢：正圆，较宽，菌体顶端，鼓槌状； G+；严格厌氧；
致病性与免疫性
感染条件：伤口窄而深，伴有泥土或异 物的厌氧微环境 致病物质:破伤风溶血毒素；破伤风痉挛 毒素（脊髓前角细胞和脑干神经细胞） 症状：苦面笑、角弓反张
致病机制
微生物学检查： 根据症状和病史可做诊断 防治原则： 清创扩创，防治厌氧微环境 百白破三联疫苗的基础免疫 注射破伤风抗毒素
所致疾病 气性坏疽 60~80% 由 A 型引起。局部组织 坏死、 肿胀，伴有毒血症、休克，死亡率高。 食物中毒 主要由 A 型菌 污染的食物（多为肉类食 品）而引起。腹痛、腹胀、水样腹泻， 无热、无恶心呕吐。 1~2d 后自愈 。 坏死性肠炎 由 C 型菌污染食物而引起。
微生物学检验厌氧性细菌及检验
莫氏立克次体 鼠蚤 地方性斑疹伤寒
恙虫病立克次体 恙螨
恙虫病
普氏立克次体
所致疾病：流行性斑疹伤寒
传染源：病人
传播媒介：人虱
人虱
传播方式：
人
人
人虱
流行性斑疹伤寒传播方式
莫氏立克次体
所致疾病：地方性斑疹伤寒
传染源：鼠等
传播媒介：鼠蚤
鼠
传播方式：
鼠蚤 鼠虱
鼠蚤
人
鼠
地方性斑疹伤寒传播方式
免疫性
以细胞免疫为主 病后免疫力牢固
艰难梭菌
革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无 荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性 粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值
革兰阴性无芽孢厌氧菌
类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒
测验7
菌体细长，两端尖细，中间膨大，菌体 中常有紫色颗粒（革兰染色），可能的 细菌是 A 产气荚膜梭菌 B 具核梭杆菌 C 放线菌 D 双歧杆菌 E 脆弱类杆菌
Nagler反应
在卵黄琼脂平上，产气荚膜梭菌产生的 卵磷脂酶分解卵磷脂，菌落周围出现白 色混浊圈；若培养基中加入相应抗体， 则不出现混浊。此现象成为Nagler反应。
破伤风芽孢梭菌－－检查方法
显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验：
毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验：
毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状
《医学微生物学》教学课件：11 厌氧菌
经伤口而入
伤口深，盲端，有泥土杂物污染 其他杂菌共同感染
厌养环境
2016/5/9
Anaerobic Bacteria-Junqi's Lecture
10
芽胞出芽
形成
繁殖体
释放破伤风痉挛毒素
沿神经纤维 间隙
血流
淋巴液
2016/5/9
Anaerobic Bacteria-Junqi's Lecture
（二）培养特性和生化反应 严格厌氧 血平板上，有β溶血 不发酵糖类，不分解蛋白质
2016/5/9
Anaerobic Bacteria-Junqi's Lecture
7
致病性与免疫性
病例讨论
男：54岁，农民，入院前五天撒猪粪时不慎，左手 掌被竹签刺入，当时无特殊处理，伤口表面慢慢 结痂，但稍有肿胀三天后患者自觉乏力，张口进 食有些阻力，头颈活动稍受限制。
轻链发挥毒性作用，阻止 抑制性神经介质γ-氨基 丁酸的释放，使肌肉活动 的兴奋与抑制失调，造成 强直性痉挛。
2.内在化作用
小泡从外周神经末稍沿神经轴突逆行向上，到 达运动神经元胞体，进入传入神经末稍，最终 进入中枢神经系统。
2016/5/9
Anaerobic Bacteria-Junqi's Lecture
21
3.膜的转位
通过重链N端的介导产生 膜的转位，使轻链进入胞 质溶胶。
4.胞质溶胶中作用靶的改 变
分子量约150 kDa；B链（重链）是与神经节苷脂 结合的单位；A链（轻链）具有毒性作用（锌内肽 酶）,轻链和重链之间由二硫键连结。
2016/5/9
Anaerobic Bacteria-Junqi's Lecture
厌氧菌的检验课件
厌氧产气袋法：操作简便，不需要特殊 实验条件，适合临床常规操作。但应注 意厌氧产气袋产热导致细菌死亡，造成 假阴性的产生。
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
培养及鉴定
1.培养：标本应迅速接种，然后放厌氧环 境，一般培养48小时;特殊的可以延长。
2.鉴定：首先做耐氧试验，耐氧试验阳性 的做革兰染色等染色方法，再做生化鉴 定。
在临床是有重要意义的主要有： 消化球菌 消化链球菌 韦荣球菌
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
革兰阴性无芽胞厌氧杆菌
类杆菌：是临床上分离最多的厌氧菌
厌氧菌的检验课件
厌氧菌的检验课件
梭状芽胞杆菌属
为一大群厌氧或微需氧的粗大芽胞杆菌， 革兰阳性，均具有芽胞，故名。临床上 有致病性的主要有以下几种：
破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 艰难梭菌
厌氧菌的检验课件
破伤风梭菌
可引起破伤风，故名。 形态特征：本菌细长，革兰阳性，动力
阳性，芽胞正圆形，比菌体大，位于菌 体顶端，使菌体呈“鼓槌状”，为该菌 的特征。
厌氧菌的检验课件
微生物检验：根据临床表现可作出诊断， 一般不作细菌学检查，若临床需要可按 下列方法进行。
1、直接涂片 2、厌氧培养 3、毒力试验 4、鉴定
厌氧菌的检验课件
产气荚膜梭菌
是引起气性坏疽的主要病原菌，或产生 外毒素和多种侵袭性酶类。
形态特征： 革兰阳性粗短大杆菌，两端纯圆，呈单
或双排列，芽胞体于菌体中央或次极端， 不大于菌体，镜下不易观察到。动力阴 性。
厌氧菌的检验课件
培养特性：不严格厌氧，在血平板上， 多数菌株呈双层溶血环，内环为β 溶血， 外环为不完全溶血。
厌氧菌的检验课件
《厌氧菌的检验》课件
01
03
厌氧菌的生长繁殖速度较慢，且对环境条件敏感，容 易发生变异。
04
厌氧菌具有多种糖发酵途径，其中以乳酸发酵为主。
02
厌氧菌的检验方法
形态学检查
革兰染色
通过革兰染色可以将厌氧 菌染成紫色，与其他细菌 进行区分。
芽孢染色
观察芽孢的存在与否，有 助于判断厌氧菌的种类。
鞭毛染色
某些厌氧菌具有鞭毛，鞭 毛染色有助于厌氧菌的鉴 别。
耐氧厌氧菌
可在有氧参与的情况下利 用某些有机物生长繁殖， 且其无氧呼吸受抑制，如 反硝化细菌。
厌氧菌的生理特性
厌氧菌多为非运动型，其细胞壁缺乏环状肽链，因此 其细胞壁不完整，缺乏有效的渗透屏障，且通透性较
大，易发生细胞壁缺陷或某些细胞器缺失。
输标02入题
厌氧菌的呼吸链不完整，缺乏氧化酶类，因此其代谢 过程中产生的能量较少。
基因芯片技术
利用芯片上固化的探针与样品中的DNA或RNA进行杂交，通过检 测杂交信号确定是否存在相应的厌氧菌。
03
厌氧菌感染的临床表现
局部感染
01
02
03
04
局部红肿热痛
厌氧菌感染常引起局部炎症反 应，表现为红肿、热痛等症状
。
化脓性分泌物
感染部位可能产生大量脓性分 泌物，这是厌氧菌繁殖的结果
。
组织坏死
对疑似感染病例进行流行病学调查，追踪感 染源和传播途径。
抗菌药物使用
合理使用抗菌药物，避免滥用导致耐药性产 生。
05
厌氧菌检验的未来发展
新技术的研发
基因测序技术
01Leabharlann 随着基因测序技术的不断进步，未来厌氧菌的检测将更加快速
、准确，能够更早地发现和诊断疾病。
厌氧性细菌 PPT课件
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（二）致病性
致病物质：产气荚膜梭菌能产生10余种外毒素和侵袭性酶。
α毒素-----5型细菌均能产生，以A型产生量最大。能分解细胞膜上磷脂和 蛋白形成的复合物，造成红细胞、白细胞、血小板和内皮细胞溶解，引起 血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损，在气性坏疽 的形成中起主要作用。 β、ε、ι(iota)毒素-----引起坏死损伤和血管通透性增加 肠毒素------主要作用于回肠，其次为空肠。其作用机制是肠毒素肽链嵌入 细胞膜，破坏膜离子运输功能，改变膜的通透性，而引起腹泻。
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所致疾病 （1）气性坏疽：60%~80%由A型引起。该病多见于战伤， 但也见于平时的工伤、车祸、地震等。致病条件与破伤风梭 菌相同。气性坏疽潜伏期短，一般仅为8~48小时，使该病发 展迅速，病情险恶。如不及时治疗，死亡率高达40%~100%。 临床表面为局部剧痛、组织水肿、气肿，触摸有捻发感，伴 组织坏死、分泌物恶臭。病菌产生的毒素和组织坏死的毒性 产物被吸收入血，引起毒血症、休克。
厌氧培养，但不十分严格。在血 琼脂平板上，多数菌株有双层溶 血环。
本菌代谢十分活跃，可分解多种 常见的糖类，产酸产气。在牛奶 培养基中能分解乳糖产酸，使其 中酪蛋白凝固，同时产生大量气 体，可将凝固的酪蛋白冲成蜂窝 状，气势凶猛，称“汹涌发酵”。
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双层溶血环
内环是由θ毒素引起的狭窄的完全溶血，外环是由α毒素引起的不完全溶血。
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20
21
（2）食物中毒：A型产气荚膜梭菌的某些菌株 可产生肠毒素引发食物中毒。因食入被本菌大 量污染的食物（主要为肉类食品）而引起，潜 伏期8~24小时，临床表现为剧烈腹痛、腹胀、 水样腹泻、便血。一般1~2天后自愈，但年老 体弱者可致死亡。
《医学微生物学》第十一章弧菌属和第十三章厌氧性细菌复习题及答案
《医学微生物学》第十一章弧菌属和第十三章厌氧性细菌复习题及答案第十一章弧菌属一、单项选择题1.霍乱弧菌的主要致病物质不包括：A.鞭毛B. 菌毛C. 毒素共调菌毛D. 外毒素E. 内毒素2.关于霍乱弧菌的生物学性状，错误的是：A.碱性蛋白胨水可作为选择增菌培养基B.霍乱弧菌耐碱不耐酸C.在霍乱病人粪便悬滴标本中，可见“鱼群样穿梭”现象D.ELTor 生物型霍乱弧菌抵抗力强，是因为有芽胞形成E.革兰染色阴性3. 关于霍乱肠毒素，错误的是：A. A亚单位是毒性亚单位B. B亚单位是结合亚单位C.由一个A亚单位和4~6个B亚单位组成D. 其受体是糖蛋白E.是霍乱弧菌的主要致病物质4.霍乱肠毒素：A.为耐热外毒素B. 为不耐热内毒素C. B亚单位与肠上皮细胞受体结合后，使毒素分子变构D. A2肽链活化后，使肠上皮细胞ATP转化为cAMP，促进肠粘膜细胞的分泌功能E.A1肽链与B亚单位结合，协助A亚单位进入细胞5.关于霍乱，错误是：A.属于烈性传染病B.人类是霍乱弧菌的唯一易感者C.病愈后，少数病人可长期带菌D.病后的免疫力短暂E.接种霍乱死菌苗可增强人群的特异性免疫力6.与慢性胃炎和消化性溃疡有密切关系的病原菌为：A.空肠弯曲菌B. 幽门螺旋杆菌C.胎儿弯曲菌D.鼠伤寒沙门菌E. 副溶血性弧菌7. 哪种疾病不能由弯曲菌引起：A.食物中毒B.心内膜炎C.婴幼儿急性肠炎D.败血症E.肾小球肾炎8.分离霍乱弧菌常用的培养基是：A.SS培养基B.碱性培养基C.血琼脂培养基D.亚碲酸钾血琼脂培养基E.巧克力色平板9.关于副溶血性弧菌的叙述错误的是：A.呈多形性，革兰阴性B.有鞭毛，运动活泼C.生长最适pH为7.7D.需用无盐或低盐培养基培养E.能产生耐热性溶血毒素10.典型霍乱患者，发病后最先出现的常见症状是：A.畏寒.发热B.声音嘶哑C.剧烈腹泻.呕吐D.腹部绞痛E.腓肠肌痉挛二、多项选择题1.霍乱弧菌所致的霍乱有其特点：A.潜伏期较短B.发病急C.传播迅速D.严重的呕吐和腹泻E.病后获得免疫力不强，并以细胞免疫为主2.霍乱弧菌的生物学特性：A.菌体典型的呈弧状B.单根鞭毛位于菌体一端C.革兰氏阴性D.无菌毛E.兼性厌氧3.霍乱弧菌的感染过程是：A.病菌经口侵入B.病菌在肠粘膜表面生长繁殖C.病菌进一步侵入血流D.病菌在生长繁殖过程中产生肠毒素E.肠毒素进入细胞内发挥毒性作用致病4.副溶血性弧菌是：A.一种嗜盐性弧菌B.呈杆状C.有周鞭毛，运动活泼D.革兰氏阴性E.含15%食盐培养基生长得最好5.关于副溶血性弧菌的致病性，下述正确的是：A.该菌是引起食物中毒的常见病原菌之一B.常因食入未煮熟的海产品而感染C.主要症状为腹痛.腹泻.呕吐.发热D.致病物质有耐热溶血素等E.病后可获得牢固免三、问答题1.请简述霍乱弧菌的致病过程。
临床医学检验考试辅导《微生物检验》厌氧性细菌及检验讲义
厌氧性细菌及检验● 考点概念及分类分布与临床意义厌氧菌标本的采集与送检分离与鉴定常见厌氧性细菌【内容讲解】一、厌氧菌概述概念：一大群专性厌氧，必须在无氧环境中才能生长的细菌。
分类：二、厌氧菌感染（一）厌氧菌在正常人体的分布及感染类型1.厌氧菌在正常人体的分布正常人的肠道、口腔、阴道等处均有大量的厌氧菌寄居。
厌氧菌与需氧菌和兼性厌氧菌共同组成人体的正常菌群，其中绝大多数为无芽胞厌氧菌。
其中肠道中的厌氧菌数量是大肠埃希菌的1000～10000倍。
表5-22-2 重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布--------------------------------------------------------------------------厌氧菌皮肤上呼吸道口腔肠道尿道阴道--------------------------------------------------------------------------一、芽胞菌革兰阳性杆菌梭状芽胞杆菌属0 0 ±＋＋±±二、无芽胞菌（一）革兰阳性杆菌乳杆菌属0 0 ＋＋＋±＋＋双歧杆菌属0 0 ＋＋＋0 ±优杆菌属±±＋＋＋0 ±丙酸杆菌属＋＋＋＋＋＋？±放线菌属0 ±＋＋＋ 0 0（二）革兰阴性杆菌类杆菌属0 ＋＋＋＋＋梭杆菌属0 ＋＋＋＋＋±普雷沃菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋紫单胞菌属0 ＋＋＋＋＋＋＋（三）革兰阳性球菌消化球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋消化链球菌属＋＋＋＋＋＋±＋＋（四）革兰阴性球菌韦荣菌属 0 ＋＋＋±＋--------------------------------------------------------------------------2.外源性感染梭状芽胞杆菌属引起的感染，其细菌及芽胞来源于土壤、粪便和其他外界环境。
医学微生物学――第十一章 厌氧性细菌
医学微生物学――第十一章厌氧性细菌1．厌氧芽胞梭菌与无芽胞厌氧菌具有的共性是____________。
a．形态染色性b．专性厌氧c．在人体的分布d．致病性e．对人体的危害2．厌氧芽胞梭菌能耐受恶劣环境条件是因为有____________。
a．菌毛b．鞭毛c．荚膜d．芽胞e．内毒素3．破伤风梭菌除致破伤风外还能引起____________。
a．菌血症b．食物中毒c．组织坏死d．坏死性肠炎e．以上都不是4．关于破伤风梭菌的致病性，叙述正确的是____________。
a．该菌污染意外创伤部位或手术伤口而感染b．该菌及其产生的毒素入血引起脓毒血症c．毒素入血产生全身中毒症状d．毒素通过神经、淋巴液、血液到达中枢与周围神经系统e．毒素通过重链与脊髓及脑干组织细胞表面受体结合，通过轻链毒性作用而使肌肉痉挛5．破伤风痉挛毒素作用于____________。
a．神经细胞b．红细胞c．粒细胞d．巨噬细胞e．成纤维细胞6．破伤风梭菌感染的重要条件是____________。
a．该菌芽胞污染伤口b．菌群失调c．伤口厌氧微环境d．该菌的繁殖体污染伤口e．机体无免疫力7．关于破伤风痉挛毒素的特性，叙述正确的是____________。
a．属神经毒素b．属肠毒素c．属细胞毒素d．仅作用于外周神经e．毒性不强8．当一民工因铁钉深刺足底送医院急诊时，医生应首先考虑注射____ ________。
a．破伤风类毒素b．破伤风抗毒素c．白百破三联疫苗d．丙种球蛋白e．破伤风菌苗9．用破伤风抗毒素治疗破伤风，其目的是____________。
a．抑制破伤风梭菌的生长b．阻止细菌产生毒素c．中和结合神经细胞上的外毒素d．中和游离在神经细胞外的外毒素e．中和进入血液中的外毒素10．产气荚膜梭菌可分为多个血清型，对人致病的主要为___________ _。
a．E型b．D型c．C型d．B型e．A型11．产气荚膜梭菌除可引起气性坏疽外，还可引起____________。
医学微生物学课件：10 厌氧菌
抵抗力
芽胞抵抗力很强 100℃ 1.5小时可完全被破坏 在干燥的土壤和尘埃中可存活数年
致病性与免疫性
致病条件
伤口需形成厌氧微环境 伤口窄而深（如刺伤），伴有泥土或异物污染。 伤口有组织缺血和坏死 伤口混有需氧菌或兼性厌氧菌感染
致病物质
破伤风溶血毒素
破伤风痉挛毒素 引起破伤风的主要致病物质 属神经毒素，毒性极强，仅次于肉毒毒素。 为蛋白质，不耐热；亦可被肠道中存在的蛋 白酶所破坏。
免疫性
由于破伤风痉挛毒素毒性极强，微量毒素即 可致病，而此微量毒素尚不足以引起机体的 免疫应答，故病愈后免疫力不强。仍应进行 类毒素注射，使其获得有效免疫力。
微生物学检查法
一般不进行涂片镜检和分离培养 典型的症状和病史即可作出诊断
防治原则
（一） 一般性预防
1.正确处理伤口及清创扩创，防止创口厌氧微 环境的形成。 2.无菌接生，消毒脐带断端。
完全溶血，外环由α毒素引起的不完全溶血）。 蛋黄琼脂平板上，菌落周围出现乳白色浑浊圈（α
毒素分解蛋黄中的卵磷脂所致）。 牛乳培养基中，可出现“汹涌发酵”现象。
牛乳培养基中“汹涌发酵”现象
分解牛乳培养基中乳糖: 产酸→酪蛋白凝固 产气→凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上 的凡士林向上推挤，气势汹猛。
局部伤口中产生的破伤风 痉挛毒素，经淋巴、血流或外 周神经末稍沿轴索逆行向上， 到达脊髓前角和脑干。
破伤风痉挛毒素
破伤风痉挛毒素
结构 菌体内：一条多肽链
抑制性神经元
破伤风痉挛毒素
γ-氨基丁酸 甘氨酸
正常
肌纤维收缩
肌纤维松弛
释出菌体：轻链（A链）与重链（B链）
A链：毒性作用
B链：神经节苷脂结合的单位
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学习要点
• 厌氧菌感染的条件、临床特征和微 生物学检验
• 厌氧球菌、无芽孢厌氧杆菌的种类 和临床意义
• 梭状芽孢杆菌的种类、致病机制和 微生物学检验
第一节 概述
• 一大群在有氧条件下不能生长，必须在无 氧或低氧条件下才能生长的细菌
• 有芽胞的G+梭菌，只有一个属，即梭菌属， 共有130个种，以芽胞形式存于体外
• 通常寄居在人的体表和与外界相通的腔道 中，是人体正常菌群，在临床上可引起人 体各部组织和器官的感染，常与其他细菌 混合感染，如腹腔感染、肝脓肿等
微生物学检验
• G+，菌体圆形，直径0.3-1.3 μm，单个、 成双、短链或成堆排列，无芽胞，无荚膜
微生物学检验
• 生长缓慢，厌氧培养2-4d才形成黑色不溶 血的小菌落，接触空气后颜色变浅，传代 后黑色消失，通过庖肉培养后又可产生黑 色素
厌氧菌感染的微生物学检验
• 快速鉴定：其原理是依据细菌在代谢过程中所 产生的胞外酶与少量生化基质迅速反应，能在 4小时观察结果，无需在厌氧环境下培养，只 需用浓菌液即可，自动化程度高
• 其他
• 耐氧试验：当在厌氧平板上有菌生长时，为确定 是否为厌氧菌，必须做耐氧试验
• 药物鉴定试验 ：用于鉴定厌氧菌的抗生素有卡那 霉素和灭滴灵。卡那霉素的敏感性将梭杆菌属与 类杆菌属区分开，大多数类杆菌对卡那霉素耐药； 灭滴灵纸片在鉴别厌氧菌(敏感)与非厌氧菌(不敏 感)有重要意义
• 分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下 发出红色荧光
• 分泌物涂片镜检有细菌，而常规培养阴性者； 或在培养基深部长的细菌
• 长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效病例
第二节厌氧菌检验
• 标本采集
• 临床在进行厌氧菌培养前应与实验室联系，以便实 验室做好接种培养的准备
• 不能被正常菌群污染；应尽量避免接触空气。最理 想是能取得组织标本
• 无芽胞厌氧菌在临床厌氧菌标本检出 率中约占90％，分布广泛，多为条件 致病菌
• 无芽胞厌氧菌同需氧菌与兼性厌氧菌 共同构成机体的正常菌群，其中厌氧 菌占有绝对优势，例如肠道菌群占 99.9％
两类厌氧菌感染的不同点
────────────ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ─────────────────
项目
有芽胞厌氧菌感染
• 菌体细长，两端尖, 为梭形的G-杆菌，有紫色 颗粒沿菌体长轴排列，成双排列尖端相对，并 有丁酸臭味者，常是具核梭杆菌
• 菌体高度多形性，长短不一，菌体中部肿胀或 呈圆球者，可能是坏死梭杆菌
厌氧菌感染的微生物学检验
• 直接镜检
• 如两端钝圆着色深，中间着色浅不均匀，且有 空泡，长短不一的革兰阴性杆菌常脆弱类杆菌
厌氧菌感染的微生物学检验
• 其他
• 基因探针：如用地高辛标记脆弱类杆菌的基因 探针，检测标本中的脆弱类杆菌其敏感性为89 ％，特异性为91．7％，检测灵敏度为 10pgDNA，故其特异性强，敏感性和灵敏度均 高，并具有快速简便的优点
厌氧菌感染的微生物学检验
• 检验结果分析与报告
• 根据革兰染色镜检，菌落性状、耐氧试验及药 敏试验若发现厌氧菌可初步报告：“检出厌氧 菌，形似x x x菌”
很少且变形破碎，标本来自战伤或肢体严重肿 胀者，大多是产气荚膜梭菌 • G+杆菌，有芽胞，并有异丁酸或异戊酸等气味， 标本来自抗生素相关性肠炎者，大多是艰难梭 菌
厌氧菌感染的微生物学检验
• 根据镜检结果选择合适的培养基，常用的 有非选择性和选择性培养基两种
• 非选择培养基
• 强化血琼脂平板(BAP)：即布氏琼脂或牛心、 牛脑浸出液琼脂为基础培养基，补加酵母浸膏 （0.5％）、动物血（5％-10％）、维生素K1 （0.1μg/ml）和氯化血红素(5μg/ml)，是一种 非选择性培养基，几乎能培养出所有的厌氧菌
• 无芽胞的G+及G-杆菌与球菌，包括40多个 属，300 多个菌种和亚种
• 厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合 感染；对氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲 硝唑(灭滴灵)普遍敏感
厌氧菌
无芽胞菌
有芽孢菌
G+杆菌
G-杆菌
G+球菌
G-球菌
G+杆菌
丙酸杆菌属
类杆菌属
消化球菌属
韦荣球菌属
梭状芽孢杆 菌属
双歧杆菌属
普雷沃菌属
消化链球菌 属
乳杆菌属
卟啉单胞菌 属
优杆菌属 梭杆菌属
放线菌属
• 正常情况下菌群之间保持着微生态平衡， 厌氧菌代谢产生的乙酸、乳酸等能抑制病 原菌生长
• 如长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制 剂等，在发生菌群失调或机体免疫力下降 或细菌进人非正常寄居部位时，这些厌氧 菌即可作为条件致病菌而导致内源性感染
• 菌落性状：不同厌氧菌其菌落形状和性质不同。 梭菌的菌落特点是形状不规则，而无芽胞厌氧 菌多呈单个的圆形小菌落
• 色素：产黑色素普鲁沃菌产生黑褐色或黑色色素。 龋齿放线菌产生粉红色色素。奈氏放线菌产生黄褐 色色素
• 溶血：产气荚膜梭菌在新鲜血琼脂平板形成双溶血 圈
• 荧光：产黑色素普鲁沃菌在紫外线灯下，显示砖红 色荧光；梭杆菌常发生黄绿色荧光；艰难梭菌发生 绿色荧光
厌氧菌感染的微生物学检验
• 厌氧培养方法
• 气袋法：原理相同，只是将厌氧罐用无毒、透 明的塑料袋代替
• 厌氧手套箱培养法：厌氧手套箱公认的培养厌 氧菌最佳仪器。它是密闭的大型金属箱，前面 有透明面板，板上装两个手套，可通过手套在 箱内进行操作。适用于在无氧环境中连续进行 标本接种、培养和鉴定等全部工作
• 局部组织的氧化还原电势降低：如血管损伤、 烧伤、动脉硬化、肿瘤压迫、组织坏死等，可 造成局部组织的缺血、缺氧等
• 皮肤黏膜屏障被破坏：如大面积外伤伴有需氧 菌感染，为厌氧菌感染提供了条件
厌氧菌感染的条件
• 机体免疫功能下降：如接受免疫抑制剂、放疗 或化疗的患者；糖尿病、慢性肝、肾疾病及老 人、婴幼儿、早产儿等
保存菌种
分类鉴定
药物敏感试验
形态与染色 菌落特性 生化反应 药敏性鉴定 气液相色谱
第三节 厌氧球菌（Anaerobic cocci）
• 在临床标本中检出的厌氧菌大约有25％为 厌氧性球菌
• G+消化球菌和消化链球菌属 • G-韦荣球菌属
一、消化球菌属（Peptococcus）
临床意义
• 黑色消化球菌（P. niger）是消化球菌属中 唯一的菌种
• 选择培养基
• 卵黄平板（EYA）和兔血平板：用于选择产气 荚膜梭菌，标本接种兔血平板，见有双溶血环， 内环是与菌落一样大小的透明溶血，外环是宽 的甲型溶血，放半小时后菌落变绿色或褐色， 同时可接种卵黄平板，以进行卵磷脂酶试验鉴 定产气荚膜梭菌
• FS培养基 梭杆菌选择培养基 • VS培养基 韦荣球菌选择培养基 • CCFA培养基 艰难梭菌选择培养基
• 再根据生化反应及终末代谢产物作最终报告： “分离鉴定出x x x菌”及“药物敏感试验： x x x结果”
• 有条件的单位可采用基因探针或PCR技术，快 速准确的检测厌氧菌
临床标本
肉眼观察 及直接镜检
需氧培养
分离培养
厌氧培养
2-7d
确定厌养培养
增菌培养 厌氧培养
生长
无生长
生长
兼性厌氧菌
专性厌氧菌
厌氧菌感染的微生物学检验
• 培养基
• 七叶苷胆汁平板（BBE）：本培养基含20％胆 汁，1 g/l七叶苷和100 μg/ml的庆大霉素。抑制 需氧菌，胆汁抑制对之敏感的厌氧菌。只有耐 胆汁的脆弱类杆菌与可变梭杆菌和死亡梭杆菌 不被抑制，反被刺激菌落较大，还能水解七叶 苷，菌落周围有棕黑色的晕
厌氧菌感染的微生物学检验
• 厌氧工作站
厌氧菌感染的微生物学检验
• 鉴定试验：据厌氧菌的菌体形态、染色反 应、菌落性状以及对某些抗生素的敏感性 等作出初步鉴定。最后鉴定则要进行生化 反应及终末代谢产物等项检查
• 形态与染色：不仅能反映各种厌氧菌的特殊形 态，同时也为鉴定厌氧菌提供参考依据 ；可用 拉丝实验协助判定染色结果
厌氧菌感染的微生物学检验
厌氧菌感染的微生物学检验
• 直接镜检
• 结合标本来源，性状与气味，可提供许 多有用的信息,对估计标本中含菌量、细 菌种类和选择培养基等都有意义
• 除血液外，各种标本均须直接涂片作革 兰染色镜检，标本发臭，镜检发现细菌 染色不均，形态奇特者常是厌氧菌的表 现
厌氧菌感染的微生物学检验
• 直接镜检
• 标本呈琥珀酸味，带血性或用紫外灯照射发红 色荧光，涂片镜检为G-球杆菌，间或有长短不 一的多形性，并有恶臭者，常为产黑色素普雷 沃菌
厌氧菌感染的微生物学检验
• 厌氧培养方法
• 厌氧罐培养法：应用物理或化学方法造成无氧 环境。如冷触媒法：利用气体发生器产生氢及 二氧化碳，产生的氢在触媒作用下，与罐内的 氧结合成水，将氧消耗掉，造成无氧环境。产 生的二氧化碳约为10％，也适宜厌氧菌生长。 方法为：先将触媒(金属钯或铂)及美蓝指示剂 放入罐内，然后将已接种的平板置于罐内，将 气体发生袋的指定角剪开，加入10 ml水，立即 放入罐内，封闭厌氧罐即可
厌氧菌感染的微生物学检验
• 其他
• 气液相色谱技术（GLC）： 应用GLC分析厌氧 菌的终末代谢产物，因各种厌氧菌的代谢产物 不同，故已成为鉴定厌氧菌及其分类的比较可 靠的方法．可在数十分钟至数小时即可作出诊 断
• PCR：如采用PCR方法检测抗生素相关性腹泻 病人粪便中艰难梭菌的毒素基因阳性率高达 82．8％，明显高于厌氧培养法的检出率19.2 ％，且与厌氧培养法的一致性为 100％
• 极小的G-球菌，可能是韦荣球菌 • G+无芽胞杆菌，呈乳酸气味者，可能是乳酸杆