土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate Reductase,S-NR)试剂盒使用说明

土壤硝酸还原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）试剂盒使用说明

分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC3100

规格：50管/24样

产品内容：

试剂一：液体10mL×1瓶，-20℃保存。

试剂二：液体4mL×1瓶，-20℃保存。

试剂三：液体12.5mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60度水浴溶解后使用）。

试剂四：液体12.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：标准品储备液1mL，-20℃保存。

0.1μmol/mL标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取0.1ml加蒸馏水定

容至10ml。

产品说明：

S-NR催化土壤中硝酸盐还原为亚硝酸盐，是土壤硝态氮还原的关键酶。研究S-NR的活性对合理施肥，降低氮素的损失具有重要意义。

S-NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ+NADH+H＋→NO2ˉ+NAD＋+H2O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α-萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定操作

1mL带盖离心管

试剂名称

测定管对照管标准管空白管风干土样（g）0.10.1

0.1μmol/mL标准液（μL）100

蒸馏水（μL）500600试剂一（μL）375375

试剂二（μL）125125

混匀后，盖盖后37℃水浴60min，8000g25℃离心10min，取上清液。

上清液（μL）400400400400试剂三（μL）250250250250试剂四（μL）250250250250混匀，显色20min后，4000g，25℃离心10min，用蒸馏水调零，540nm下读取各管吸光值。标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

注意事项

1、试剂一、试剂二和试剂五在冰上放置，用完立即放回-20℃。

2、标准管和空白管只需测一次。每个测定管设一个对照管。

S-NR活性计算：

单位的定义：24h每g土样中产生1μmol NO2ˉ的量为一个S-NR活力单位。

S-NR（U/g）=标准品浓度（0.1μmol/ml）×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）÷反应时间（1/24h）×反应总体积（0.5mL）÷样本质量（0.1g）=12×（A测定管-A对照管）÷（A标准管-A空白管）