淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二B细胞功培训课件

生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功
能。
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（三）T细胞介导的细胞毒试验
1.原理：
靶细胞抗原
T细胞 靶细胞
致敏CTL
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观察杀伤活力 淋巴细胞的功能检测一T细胞功能检测二 B细胞功
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2.方法
➢ 形态学方法：淋巴细胞+肿瘤细胞 计数残留肿瘤细胞 ➢ 同位素法 ：淋巴细胞（CTL）+含51Cr 的肿瘤细胞
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3．临床应用与评价
➢溶血空斑试验主要用于测定药物和 手术等因素对体液免疫功能的影响 ➢评价免疫治疗或免疫重建后机体产 生抗体的能力。
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(三) B细胞抗体形成功能的检测 ——酶联免疫斑点法
1.原理：
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DNA合成期 + 3HTdR掺入
母细胞化
收集细胞
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检测β射线 淋巴细胞的功能B检细测胞一功T细胞功测能检定测二细胞内的3H－TdR9
（1）形态学检查法
转化率
转化的淋巴细胞数 10% 0
转化和未转化的胞淋数巴细
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方法学评价：
➢优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观
性强，重复性好。
➢缺点：但需一定设备条件，同时还存在
放射性核素污染问题。
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(二) T细胞分泌功能测定
体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激
后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生
物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、
➢优点：形态学方法简便易行，普通光 学显微镜便能观察结果，适于基层实验 室应用。 ➢缺点：是依靠肉眼观察形态学变化， 判断结果易受主观因素影响，重复性和 准确性较差。
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（2）3H-TdR掺入法
试验孔A均值
SI对照
570nm
孔A均值
570nm
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第一节 淋巴细胞的功能检测
淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴 细胞分泌产物的测定
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2．应用与方法学评价：
➢该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检
测抗体分泌量。
➢优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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(四) 体内试验
➢体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 ➢将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
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（一）T淋巴细胞增殖试验
1. 原理：
淋巴细胞
刺激物
DNA合成
分化
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母细胞
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细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏6 松
未转化和转化淋巴细胞的形态特征
转化的淋巴细胞
形态学
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3H－TdR掺入 法
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(二) 溶血空斑试验 1. 原理：
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2. 方法学：
➢ 经典溶血空斑形成试验 ➢ 被动溶血空斑试验
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淋巴母细胞 过渡型
细胞大小(直径μm) 12～20
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4Hale Waihona Puke Baidu 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
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有或无
有或无
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未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
第二节 吞噬细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测
第三节 免疫细胞功能检测的临床应用
思考题 小结
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对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬 细胞、树突状细胞等功能测定可以 有效评价机体特异性和非特异性免 疫功能。
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2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原
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3. 检测方法
形态法：刺激物 淋巴细胞（4-6天） 同位素法：PHA 淋巴细胞（54h）
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淋巴细胞
➢T细胞（负责细胞免疫功能） ➢B细胞（执行体液免疫功能） ➢NK和K细胞（非特异性免疫作用）
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一、T细胞功能的检测
➢T细胞增殖试验 ➢T细胞分泌功能测定 ➢T细胞介导的细胞毒试验 ➢体内试验
肿瘤细胞破坏 51Cr 释放 测定γ射线
意义：
肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力
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图15-淋2巴细T胞细的功胞能检细测胞一T细毒胞试功能验检测示二 意图 B细胞功
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(四) 体内试验
➢特异性抗原皮肤试验 ➢PHA皮肤试验
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二、B细胞功能检测
➢B细胞增殖能力的试验 ➢溶血空斑试验 ➢B细胞抗体形成功能的检测 ➢体内试验
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(一)B细胞增殖能力的试验
抗IgM 细菌脂多糖 SAC的SPA
B细胞增殖