血凝的基本知识

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PT衍算法不准确1，估算值，国外已淘汰
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选择Fib的要点
标准曲线的相关性：
r>0.995
开平后试剂的稳定型：
长岛液体Fib试剂：37℃，稳定20天以上；
其他国产Fib冻干粉试剂：37 ℃，稳定24小 时。
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Fib检测的注意点
尽量不用衍算法，不准确；
原理
TT试剂（凝血酶）
纤维蛋白原（血浆）
纤维蛋白
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TT检测临床应用
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选择TT试剂的要点
开平后的稳定型 长岛液体TT试剂，37℃稳定30天以上
建议使用长岛液体试剂， 无需复溶，使用方便，测值稳定
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TT检测的结果评估
没有国际标准
生产厂家根据自己的试剂给出一个正常范围 值
各个厂家不同试剂的正常范 围值均不相同；
评价时，应以超过正常对照 的10秒视为异常。
总允许误 （Tea）
靶值 ±15%
精密度（CV％）
批内变异
<3
同一天
<3
批间变异
天间变异
<3
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凝血酶时间测定Thrombin Time （TT）
Thrombin Time （TT）测定原理
识真实ISI值（1.8)，试剂不能被市场接受。
※后果： ★误导用药，引起医疗事故。
※建议： ★对目前使用的国产PT试剂的ISI值进行简单的
鉴别。
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鉴别PT试剂ISI值的简单方法
用异常质控血浆鉴别PT试 剂真实ISI值的简便方法
PT的ISI值 1.0-1.2 1.2-1.4
正常质控血浆 10.5-13.5(秒） 10.5-13.5(秒）
病人
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病人
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PST试剂ISI值正确标识的重要性
国内有些试剂生产厂商，生产的PT试剂试剂ISI值只有1.8左 右，甚至2.0以上，但他们提供给客户的ISI值却是1.22。
举例：国内某公司生产的血凝试剂，正常人PT平均测值为 12秒，测得口服抗凝药病人血浆PT＝22秒，标示的ISI值为 1.22，而实际ISI却为1.8。
1.4-1.6 1.6以上
10.5-13.5(秒） 10.5-13.5(秒)
异常质控血浆 30.0-44.0(秒） 26.0-30.0(秒）
22.0-26.0(秒） 18.0-22.0(秒）
敏感性 高 较高
中 低
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选择PT试剂的要点（1）
※（敏感度）（ISI值）：
ISI＝1.0-1.2 最好
维蛋白凝块。
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血凝试剂的基本原理及临床应用
凝血功能的一些检测手段
➢ 常规筛选检测(检测凝血功能是否正常） ➢ PT——凝血酶原时间测定。 ➢ APTT——活化部分凝血活酶时间测定。 ➢ TT——凝血酶时间测定。 ●特殊物质检测（检测引起凝血功能异常的原因）
➢ 纤维蛋白原测定 ➢ 纤维蛋白降解产物 ➢ D－二聚体 ➢ 凝血因子检测 ➢ 发色底物测定（如蛋白C，蛋白S，等）
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各种ISI值的PT试剂
ISI值 ISI值1.0-1.2
试剂敏感度 敏感
ISI值1.2-1.4 ISI值1.6以上
比较敏感 不敏感
建议使用试剂
如长岛液体PT试剂 太平洋PT试剂
Dade Behring PT试剂 如库尔特PT试剂 StagoPT试剂
不建议使用
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不同ISI值的PT试剂的INR计算举例
标本中纤维蛋白原含量如超出所用所用试剂 的线性范围，必须作适当的稀释后再进行测
定，不然对结果影响较大。
当血浆中有肝素或纤维蛋白降解产物（FDP） 时，会导致测值偏低。
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Fib检测的结果评估
美国CLIA-88提出Fib指标的允许误差
为血凝四项检测中的定量检 测；
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标本的原因
抗凝剂与血液比例不对，如大于1：9； 抗凝剂配制错误，如枸橼酸钠含2个结晶水仍按3.8%配制； 抗凝剂应用枸橼酸钠溶液，不能用干燥品，或其他抗凝剂； 抗凝剂与血浆混合时摇匀过于剧烈，使凝血因子被破坏； 血细胞比容积大于55%，抗凝剂比例没变（仍按1:9）； 标本陈旧，超过2小时甚至更长； 口服抗凝药或凝血因子异常； 采血不顺利，有郁滞现象； 标本运输未加盖，致使CO2升高PH升高； 血浆分离应3000rpm，10分钟； 临产妇FBG含量较高，可能会超过正常值； 质控标本2-8℃超过8小时或失效;
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血凝常规四项检测
PT---凝血酶原时间测定 APTT---活化部分凝血活酶时间测定 TT---凝血酶时间测定 FBG---纤维蛋白原测定
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PT测定
PT试剂中主要含组织因子（TF）和ca离子，试剂 中加入血浆后，TF和ca离子与血浆中Ⅶ因子，形成 TF－Ⅶ－ca离子复合物，启动外源性凝血途径；
剂量增加或减少，会引起出血或凝血； 口服抗凝药治疗病人的治疗剂量，治疗时间
由PT检测决定，一般要控制在INR2.0-3.0之 间。
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INR－国际标准化比值
INR＝（ 正常人血浆PT平均值—每一实验室取20个以
上正常人血浆测得的PT秒数平均值。
不能用质控血浆或参值作为正常人比血浆PT血浆PT平均值—不准确
检测时，试剂与血浆的比例，不同厂家，所 加比例有所不同，正常值范围也不同，应以 说明书为准
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纤维蛋白原测定Fibrinogen
纤维蛋白原含量测定（Fib）的原理
原理
过量凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
凝固
其凝固时间的长短与纤维蛋白原量 呈反比关系
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纤维蛋白原含量测定（Fib）－直接法
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有关PT衍算Fib
应避免的误解：
误区一：PT衍算Fib是通过PT结果“算”出来的。 实际上是依据不同量Fib凝块光密度不同，而测定出 来的。
误区二：衍算时PT结果一定与法Fib含量相关。其 实有的样本PT正常但Fib可能不正常，或者Fib正常 的标本PT有可能不正常。
误区三：PT衍算Fib方法简简便，准确。实际上， 超过正常Fib含量的标本，误差很大。
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复溶用蒸馏水及材料的原因
复溶蒸馏水质量差；
未用塑料或硅化玻璃管；
实验器材污染；
血凝的基本知识
倍赛血凝事业部
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血凝的基本知识
血液凝固（凝血）： 形态：血液由液体状态——凝胶状态。 本质：纤维蛋白原——纤维蛋白。 基本学说——凝血瀑布学说。
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凝血瀑布学说
血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程； 每个凝血因子都被其前一因子所激活； 最后激活凝血酶原生成凝血酶 凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，生成纤
最后使凝血酶原形成凝血酶，凝血酶可使血浆中的 纤维蛋白原转变成纤维蛋白。
纤维蛋白的交联，聚合成凝胶状态；
血浆从流动状态变成凝固状态这个过程短时间内完 成，可用仪器检测。这段时间即为凝血酶原时间PT， 一般以秒表示。
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PT检测临床应用（2）
监控口服抗凝药病人的凝血功能
口服抗凝药治疗时间比较长，治疗过程需要 监控；
计算：INR（标本值）＝ INR（标本值）＝
☆PT结果不准确，会导致异常的病人有可能被认为正常； ☆误导口服抗凝药病人用药，严重的会引起出血。实际INR》
3.0应减少用药，但按标识的ISI值计算结果永远《3.0.
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部分厂商提供不真实ISI值的原因
※原因： ★技术水平达不到生产ISI<1.6的PT试剂，如标
APTT的值应控制在1.5-2.5 x基础秒数 基础秒数---肝素治疗前的APTT秒数；
不同的APTT试剂，对肝素敏感性不同，建议使用 对肝素敏感的APTT—白陶土试剂。
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国内APTT白陶土试剂现状
※国内市场（除长岛能提供液体型APTT白陶土试剂外） 尚无稳定的APTT白陶土试剂。
ISI＝1.2-1.4 一般
ISI>1.6
建议不予使用
※对枸橼酸浓度不敏感（3.2%或3.8%）
※对凝血因子的敏感
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选择PT试剂的要点（2）
◆试剂的成分来源： 重组组织因子（基因工程方法）最好 如长岛液体PT试剂、Dade Behring PT 试剂（Inovin) 人胚胎组织：如Dade Behring PT试剂 新鲜兔脑粉：如库尔特PT试剂、StagoPT试剂 陈旧兔脑粉：大多数国产的PT冻干试剂（ISI>1.6)
同一种标本，同一仪器，用不同ISI值试剂测定，INR值应相同。
ISI值：1.02
在库尔特仪器上正常人 平均值=11.8秒 长岛 液体 PT 异常病人标本测得PT值 试剂 ＝39秒
ISI值：1.36
在库尔特仪器上正常人 ACL 平均PT值＝12秒 库尔特 原装 异常病人标本测得PT值 PT ＝29.8秒 试剂
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纤维蛋白原含量测定（Fib)--衍算法
PT衍算Fib也称间接法测定Fib(Derived)。具体方法是，对标 本进行PT测定的同时，即能得出Fib的含量。测定时不需用 Fib的试剂（凝血酶试剂），只用PT试剂。
PT衍算Fib在测定前也需先定标，一般是用Fib含量准确性的 质控血浆，用生理盐水进行稀释（如100%,75%，50%， 25%）得到不同浓度的Fib的标准系列，再对其进行PT的凝 固时间测定及△E（光密度变化）测定，然后把Fib浓度含量 降低，其凝固的OD值也会降低，并呈线性相关，以此达到 Fib定量的目的。
开瓶后的稳定性
长岛液体型APTT白陶土试剂：37℃，30天以上；
库尔特APTT试剂：
37℃，3天左右；
StagoAPTT试剂：
37℃， 3天左右。
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APTT检测的结果评估
美国CLIA-88提出APTT指标的允许误差
没有国际标准；
APTT
生产厂家根据自己的试剂给 出一个正常范围值；
同一个标本用不同试剂，在 同 一仪器上检测，INR值应相 同。
PT
总允许误
靶值
（Tea）
±15%
精密度（CV％)
批内变异
<2
同一天
<3
批间变异
天间变异
<4
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APTT检测临床应用（2）
监控静脉滴注肝素抗凝治疗的病人的凝血功能 临床上对静脉滴注肝素抗凝治疗的病人必须进行
APTT检测以便监控。
有国际标准： WHO标准品98/612； 可追溯性 正常值范围：2-4g/L； 美国临床实验室改进修正案 CLIA-88允许误差范围为
20%。
Fib
总允许误
靶值
（Tea）
±15%
精密度（CV％）
批内变异
<2
同一天
Βιβλιοθήκη Baidu
<3
批间变异
天间变异
<4
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血凝试剂常见的问题
APTT、PT延长及缩短 TT延长 Fib含量过高及过低
标准曲线制备
取已知靶值纤维蛋白原参比血浆，用缓冲液稀释成 不同浓度，测定各浓度的凝固时间。然后在双对数 纸上作图，横坐标为浓度，纵坐标为凝固时间，应 为一直线。
样品测定
1/10稀释血浆（1份血浆＋九份缓冲液）测得凝固时 间，在曲线上从纵坐标上找出凝固时间，从此点画 一平行于横坐标的直线与曲线相交，此交点垂直于 横坐标的交点，此即为该样的Fib浓度。
ISI－国际敏感指数
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PT的ISI值
ISI——国际敏感指数
ISI值是生产厂商生产的PT试剂与国际标准 PT试剂测值相比的值，凡出厂的PT试剂必须 标明其正确的ISI值。 若ISI＝1则表示该试剂敏感度与国际标准 试剂值一致
若ISI值越大，则表明该试剂越不敏感。
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◆开瓶后的稳定性： 长岛液体PT试剂：开瓶后，37℃，稳定30天以上。 其他PT试剂：开瓶后，37 ℃,稳定8小时。
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PT检测的结果评估
美国CLIA-88提出PT指标的允许误差
有国际标准，以INR表示;
不同厂家根据自己的试剂给 出一个正常范围，一般正常 范围为：10.5-14.5秒；
※长岛液体型APTT白陶土优势：
对肝素敏感； 非常稳定：常温保存，稳定30天以上； 技术国际领先。
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不同APTT试剂，对肝素敏感性不同
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选择APTT试剂的要点
对肝素的敏感性，对肝素越敏感越好－APTT白陶土首选；
对凝血因子的敏感性；
对LA－抗凝物的敏感性