病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书

病毒基因组DNA 提取试剂盒

Virus Genomic DNA Kit

(目录号：HS0307)

产品包装

自备试剂

无水乙醇

储存条件

蛋白酶K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）

产品简介

本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒DNA 。无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与DNA 分离，在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒DNA 选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒DNA 从吸附柱膜上洗脱下来。

本试剂盒操作简单、快速，所得病毒DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR 、RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。

产品特点

1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒基因组DNA 。

2.无需有机溶剂抽提，使用安全。

3.重复性好，产量高。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

4.所得病毒DNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。

注意事项

1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的DNA片段小，提取量下降。

2.如缓冲液Buffer GB、Buffer GD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。

3.所有离心步骤均为室温下操作。

操作步骤

1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteinase K溶液。

2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 sec。（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自备）补足。2、为确保样本有效裂解，加入Buffer GB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。）

3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

4. 加入250 ul无水乙醇，涡旋震荡15 sec，室温放置5 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。

(注意：如果环境温度超过25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。)

5．将一个Spin Columns CG*放入Collection Tubes(2 ml)中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中的废液。

6. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer GD，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。（注意：Buffer GD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer PW，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。（注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7一次。Buffer PW中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）

8．向吸附柱中加入500 ul无水乙醇，10 000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9．室温12 000 rpm离心3 min，甩干残留液体。

（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）

10. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3 min，使吸附膜完全变干。加入30 ~ 100 ul的洗脱液，室温放置2 ~ 5 min。12 000 rpm

离心1 min，离心管底溶液即病毒DNA。

（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在50 ~ 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 ~ 8.5之间，为了增加DNA回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）