实验二 微生物基因组DNA提取和鉴定

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四、实验步骤
2、DNA电泳检测 （1）1%琼脂糖凝胶：称取0.2g琼脂糖，加入20mL 1×TAE 缓冲液，在微波炉中加热，反复加热、振荡 2-3 次，使琼 脂糖充分融化。待凝胶冷却至60℃左右，倒入插入梳子的 凝胶板中（避免产Fra Baidu bibliotek气泡），让凝胶自然凝固。 （ 2）待凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免前后左右摇晃， 以免破坏胶面及加样孔，小心将凝胶和胶床放入电泳槽中， 加样孔靠近阴极的一端。
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （1）将10mL过夜培养的大肠杆菌DH5α装入15mL离心管中， 4000r/min离心15min，弃上清。 （2）加入 560μL TE缓冲液，将菌体重悬后转移至 1.5mL离 心管中。 （3）加入30μL 100g/LSDS溶液和30μL 2mg/mL蛋白酶K溶 液，混匀后，37℃水浴放置30min。 （4）加入100μL 5mol/LNaCl溶液，充分混匀。 （ 5 ）加入 80μL 50g/LCTAB-0.5mol/LNaCl 溶液，混匀后， 65℃水浴放置10min。
实验二 微生物基因组DNA的提取和鉴定
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一、实验目的
学习并掌握从微生物中提取基因组DNA方
法及其原理。
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二、实验原理
（1）微生物破碎细胞方法：溶菌酶、SDS裂解。 （2）破碎抽提核酸除去杂质： ①首先使脱氧核糖核蛋白、核糖体、病毒的核蛋白与 其它成分分离； ②使核酸与蛋白质分离； ③除去脂类； ④多糖的除去。 在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞， 随后用氯仿/异戊醇抽提，可以得到微生物基因组DNA。
三、仪器和试剂
1、仪器： 低速离心机、高速冷冻离心机、恒温摇床、稳压电源、 水平电泳槽、凝胶成像系统。 2、材料与试剂： 过夜培养的大肠杆菌DH5α、TE缓冲液、100g/LSDS、 2mg/mL蛋白酶K、5mol/L NaCl、50g/LCTAB-0.5 mol/L NaCl、氯仿/异戊醇=24:1（V/V）、异丙醇、1×TAE、 琼脂糖、上样缓冲液。
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四、实验步骤
2、DNA电泳检测 （ 3）上样电泳：将 20μLDNA 样品溶液和 5μL上样缓冲液混 匀后，上样，100V稳压电泳检查，根据指示剂迁移的位置， 判断是否中止电泳。切断电源后，再取出凝胶。 （4）照胶、拍照：将凝胶泡在EB溶液（注意：EB溶液为剧 毒物，需带上一次性手套拿取凝胶）中10min左右，进入暗 室，使用凝胶成像系统照胶并拍照。
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五、实验结果与分析
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图1 微生物组织基因组DNA提取结果
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四、实验步骤
1、DNA的提取 （ 6 ） 加 入 600μL 氯 仿 / 异 戊 醇 ， 上 下 颠 倒 混 匀 后 ， 12000r/min离心5min，将上清吸入新离心管中。 （ 7 ） 加 入 预 冷 的 异 丙 醇 ， 上 下 颠 倒 混 匀 后 ， -20 ℃ 沉 淀 30min。 （8）12000r/min离心10min，弃上清。 （9）加入1mL 75%乙醇溶液，充分混匀。 （10）12000r/min离心10min，弃上清。 （11）加入20μL TE缓冲液，混匀后，即为DNA溶液。