外泌体提取试剂盒解决方案
exosomes外泌体实验方案
外泌体分离提纯草案By 朱旭峰一、以超高速离心的方法来分离外泌体（细胞上清）1.1细胞培养液(CM)是来自无菌的80%-90%的培植细胞，并用浓度比1:1.000的蛋白酶抑制剂混合。
（sigma）1.2快速地将CM用0.22μm 的过滤筛(Millipore)过滤，来分离完整地细胞和残渣。
超速离心于120,000_g (Sorvall WX ULTRA SERIES, rotorA-641) 4 ℃. 2 小时1.3用1mL 冷的PBS 重悬和清洗小囊泡，再次超速离心120,000_g(Sorvall WX ULTRA SERIES, rotor A-641) 4 ℃. 2 小时1.4再用100μL 冷的PBS 重悬后转移到低粘附的管中1.5快速地使用或置于-80℃中待用为检测外泌体的蛋白浓度，取2μL的样品置于卡上，用Direct Detect™(Millipore)2材料a)细胞培养液b)蛋白酶抑制（Sigma）c)过滤筛(Millipore)d)冷的PBSe)低粘附的管f)Direct Detect™(Millipore)二、以超高速离心的方法来分离外泌体（人血浆）1.1在提取外泌体之前应该向血浆里添加1;500浓度比的蛋白酶抑制剂(Sigma)1.2将上清液移至一个新的管中离心200*g 20分钟4℃1.3小心地再将上清液移至新的管中离心10000*g 30分钟于4℃来去除较大的囊泡、1.4此阶段的样品可以1.5将样品用0.22μm的注射器滤筛(Millipore)过滤并且离心110000g(Sorvall WX ULTRA SERIES, rotor F65L) 2小时4℃1.6用冷的PBS重悬后再次超速离心(110,000g, 1 h, 4 ℃).，1.7将外泌体小心干燥并且用冷的PBS重悬1.8外泌体应该立即使用或-80摄氏度冷藏2.材料a)蛋白酶抑制（Sigma）b)过滤筛(Millipore)c)冷的PBSd)低粘附的管e)Direct Detect™(Millipore)三、ExoQuick TM化学沉淀法1.1ExoQuick TM的使用要按照厂家提供的说明书来实行1.2该试剂盒可以简单地提取CM,人血浆，和血清里的外泌体，只需用倒相管按照所指示的量来加入ExoQuick TM试剂盒里的溶液1.3溶液孵化过夜，在4℃温和的摇晃1.4在流式细胞仪缓冲液中洗涤1.5试剂盒里的带荧光的免疫磁珠已经被绑定，用流式细胞仪鉴定即可(BD Biosciences) 配合使用CellQuest 的软件。
外泌体提取试剂盒解决方案
外泌体提取试剂盒解决方案外泌体（Extracellular vesicles, EVs）是一类直径在30-1000纳米的细胞外小泡，它们由双层脂质膜包裹，包含有丰富的蛋白质、核酸和脂类等生物分子。
外泌体存在于多种体液中，如血浆、尿液和唾液等，其含有的生物信息负载物可以为相关疾病的早期诊断、治疗及监测提供重要的参考依据。
因此，外泌体提取试剂盒是进行外泌体的分离与富集的重要工具，下面将介绍一种外泌体提取试剂盒的解决方案。
该外泌体提取试剂盒的解决方案包括以下几个步骤：1.样本采集与处理：首先，采集外周血、尿液或唾液等样本，使用无菌管进行收集，并进行预处理。
预处理步骤包括去除细胞残骸、噪声和大颗粒物等，常见的方法有离心、过滤或加入蛋白酶抑制剂等。
2.外泌体富集：将经过预处理的样本加入试剂盒提供的外泌体富集材料，混匀后进行离心。
离心时间和速度的选择因应用而异，一般需要几千到一万倍重力的离心条件。
离心后，外泌体会在沉淀物中富集。
3.沉淀物洗涤：将离心后的沉淀物重新悬浮于缓冲液中，并进行洗涤。
洗涤过程可以去除非特异性的污染物，提高外泌体的纯度。
4.外泌体提取：使用试剂盒提供的提取试剂将洗涤后的沉淀物进行裂解，释放内含物。
提取试剂中通常包含有蛋白酶、剪切酶和离子络合剂等，它们可以有效地破坏外泌体的脂质膜，释放内含物。
5.提取液清除：经过裂解后，提取液中可能会含有外泌体的碎片、核酸或蛋白酶等污染物。
为了降低这些污染物对实验结果的影响，可以通过离心或滤膜等方式对提取液进行进一步的清除处理。
6.提取液浓缩：为了提高提取液中外泌体内含物的浓度，可以使用浓缩装置（如离心浓缩管或超滤管）对提取液进行浓缩处理。
7. 实验应用：浓缩后的提取液中可以包含丰富的外泌体内含物，如蛋白质、核酸（miRNA、mRNA和DNA等）和脂类等。
这些内含物可以通过各种实验方法进行分析，如Western blot、质谱、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和高通量测序等。
一个试剂盒搞定外泌体研究：磁珠法纯化，流式分析
一个试剂盒搞定外泌体研究：磁珠法纯化，流式分析外泌体Exosome外泌体（Exosome），是由多种类型的细胞，如T、B、NK细胞、以及肿瘤细胞等分泌的一种囊泡状结构，直径在30-100nm之间，又称膜外小体（Extracellular Vesicles, EVs）。
外泌体常携带其起源细胞的多种生物分子，包括蛋白质、脂类和核酸，因此，外泌体参与了多种生物学过程，包括免疫监控、血液凝固、神经传递、干细胞维护和组织修复等。
图1：外泌体形成和作用方式示意图。
Difficult：外泌体研究外泌体纯化：难调查发现，约有56%的实验室采用超速离心法分离外泌体，但该方法有其局限性：•耗时耗力：需8-30个小时•处理样本少：每次最多处理6个样品•需要大量的起始材料•产量不高外泌体分析：难由于外泌体体积小（直径30-100nm），流式检测也是一大难题。
图2：由于外泌体体积小，很难用流式检测到单个的外泌体。
检测到的颗粒更像是外泌体群或聚集体。
遇到困难不用怕，超人小旎来帮忙！美天旎为外泌体研究而专门研发了相应的试剂盒，Exosome isolation kit和MACSPlex Exosome Kit，分别用于外泌体的富集和分析。
外泌体磁珠纯化基于美天旎的MACS技术，利用外泌体表面常见的四次跨膜蛋白CD9、CD63和CD81，分别研发了四款磁珠试剂盒，用于阳性分选外泌体，简单三步（磁珠孵育、磁场分离、洗脱，如图3），省时省力，无需进行超速离心，且样本体积最小可至0.5mL。
图3：利用美天旎Exosome isolation kit，简单三步（磁珠孵育、磁场分离、洗脱），1.5h内完成外泌体的纯化。
外泌体流式分析分析外泌体蛋白的传统方法有western blot、质谱分析、扫描电镜和流式分析。
由于外泌体的直径太小（30-100nm），很难通过标准的流式检测方法对其进行分析。
为此，美天旎研发了MACSPlex Exosome Kit, human（#130-108-813）试剂盒，用于简单、快速的分析外泌体表面37种潜在蛋白。
干货外泌体的提取储存、临床应用和给药途径
干货外泌体的提取储存、临床应用和给药途径摘要：外泌体是细胞分泌的纳米级细胞外小囊泡，携带核酸、蛋白质、脂质等生物活性物质，在机体的生理病理过程中发挥作用。
与脂质体、纳米颗粒等合成载体相比，外泌体的内源性和异质性使其在疾病诊断和治疗领域具有广泛而独特的优势。
直径约 40-100nm 的外泌体是由细胞分泌的生物纳米级球形脂质双层囊泡，以 1.13-1.19 g ∙ mL-1 的密度漂浮在梯度溶液中。
1981 年，科学家Trams 等将质膜来源的囊泡统称为外泌体，并首次提出了“外泌体”的概念，将其视为具有5'-核苷酸酶活性的膜囊泡，可能具有生理功能，起源于各种细胞系培养物的分泌物。
外泌体 Exosomes目前定义的外泌体（40-100nm）于1983年首次在绵羊网织红细胞中发现，科学家Johnstone 等人追踪了网织红细胞成熟过程中的转铁蛋白受体，发现外泌体的形成是成熟红细胞中转铁蛋白受体丢失的机制细胞。
为了将它们与其他类型的细胞外囊泡(EV) 区分开来，它们被命名为外泌体。
然而，值得注意的是，根据ISEV 2018 指南，“外泌体”一词即使被广泛使用，也被建议替换为“小细胞外囊泡(sEVs)”一词，由于分离方法上的困难。
研究发现，外泌体含有核酸、蛋白质、脂质、细胞因子、转录因子受体等生物活性物质。
其中，外泌体蛋白成分主要分为两类，一类是公共成分，参与这一过程囊泡的形成和分泌，即外泌体无处不在，包括膜转运和融合相关蛋白（如Rab、GTPases）、热休克蛋白（如HSP70、HSP90）、四跨膜蛋白超家族（如CD63、CD81）、 ESCRT 复合物相关蛋白（如 Tsg101、Alix）、整合素等；另一种是特异性成分，与其祖细胞密切相关，即细胞特异性，如抗原呈递细胞来源的CD45和MHC-II。
随着外泌体研究的深入，其应用越来越广泛。
外泌体可以在生理和病理过程中发挥作用，充当细胞间通讯和物质交换的介质。
润基 外泌体 RNA 分离试剂盒 说明书
产品使用说明书外泌体RNA 分离试剂盒Exosome RNA Isolation KitCat.#辽宁润基生物科技有限公司Liaoning Rengen Biosciences Co.,Ltd.Version 2.001/01/2020EXORNA50C-1EXORNA30C-1目录保存和应用 (2)产品介绍 (3)试剂盒组成和说明 (3)操作方法 (4)相关产品信息 (6)常见问题 (7)技术支持 (8)保存与应用【保存条件】本试剂盒低温下运输，室温或2-8℃下保存至少一年（按照试剂盒不同成分分别保存），使用前请详细阅读说明书。
【应用范围】本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。
产品介绍外泌体（Exosome）是由不同细胞分泌的直径30-150nm的胞外膜性囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）。
外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富，包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的发生、发展、治疗及预后密切相关。
研究表明，胞外膜性囊泡（包括外泌体）内容物中富含不同类型RNA（mRNA、microRNA、LncRNA、CircRNA等）。
microRNA（miRNA）在基因转录和转录后调节方面起重要作用，与疾病的发生、发展密切相关，因此，某些外泌体miRNA （exo-miRNA)可以作为疾病的新的治疗靶标和诊断生物标记物。
外泌体RNA分离试剂盒（Exosome RNA Isolation Kit）采用酚/胍盐方法提取已分离的外泌体中总RNA（含有miRNA），这里外泌体分离方法可以包括超速离心、化学沉淀、免疫捕获和分子大小排阻等，接下来采用核酸特异吸附柱（Spin Columns），可方便、快捷地纯化和洗脱外泌体RNA，可直接用于下游应用，如RT-qPCR，Northern blot，芯片表达谱，NGS测序等。
Exoquick外泌体抽提试剂盒使用常见问题回答
Exoquick外泌体抽提试剂盒使用常见问题回答
【SBI】Exosome抽提试剂——ExoQuick常见问题回答
Exosome抽提试剂
Exosome抽提辅助试剂
问:ExoQuick或ExoQuick-TC产品，我应该选择哪一款？
答:ExoQuick试剂适合于富含exosomes的体液样本，如血清、血浆或者是腹水等；
ExoQuick-TC试剂适合于exosomes含量相对较少的体液，如细胞培养上清，尿液及脑脊液(CSF)等。
问:在使用ExoQuick前，生物体液样本可以是冻存样本吗?
答:冰冻的生物体液样本只能在冰上融解一次，并使用ExoQuick标准protocol
操作。
问:不同体液样本中exosome量、以及exosome蛋白和RNAs量是多少？
答:不同样本的量各不相同，请参考以下表格：.
问:使用ExoQuick处理样本后，得到了较多不溶解沉淀，难以进行下游实验，应该怎么办？
答一般来说，这种情况会发生在血清或者血浆样本中。
在血浆样本中，包含许多纤维蛋白和纤维蛋白原，这些物质也可被ExoQuick沉淀下来。
建议在使用Exoquick处理样本之前，按照操作说明书使用凝血活素D（Thromboplastin D）预处理样本。
在血清样本中，很有可能是ExoQuick处理血清后孵育时间过长，或者是离心时间过长，请参考以下建议：
问:如何重悬富集得到的exosome沉淀?
答:这取决于exoosome下游实验，请参考以下建议：。
外泌体DNA RNA提取试剂盒如何便捷有效地提取外泌体DNA RNA
外泌体DNA/RNA提取试剂盒如何便捷有效地提取外泌体DNA/RNA？外泌体（exosome）是细胞经过"内吞-融合-外排"等一系列调控过程而形成的直径在3 0～100 nm的圆形单层膜结构的细胞外小囊泡。
外泌体由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中，可以携带蛋白、运送RNA、在细胞间物质和信息转导中起重要作用。
以microRNA miR-451为例，肿瘤疯狂地释放miR-451，并将其装入囊泡。
当周围的细胞获得这些囊泡，它们就收到了一堆转录本，使得细胞状态更有利于肿瘤生长和血管生成，从而促进了肿瘤的发展。
而这仅仅是一个分子。
从整体上看，细胞中也有一个社交网络，它们不断交换囊泡，交流大量的信息。
外泌体可能通过调控免疫功能，促进肿瘤血管新生和肿瘤转移，以及直接作用于肿瘤细胞等途径，影响肿瘤的进展。
而外泌体携带的DNA，RNA（miRNA + mRNAs）在以上功能的发挥起到了至关重要的作用。
如何便捷有效地提取外泌体DNA /RNA？全球生命科学公司领导者-Biovision公司给出了专业的答案，针对不同样本来源的样品以及不同的分离方法，Biovision提供多种提取试剂产品，而且是市场上唯一一个提供外泌体标准品的品牌：·Exosome DNA Extraction KitsExosome DNA Extraction Kits：基于化学沉淀的原理，一步法快速分离提取外泌体，随后利用经过优化的DNA提取配方，提取出高纯度的外泌体DNA，可用于下游分析系列包括：PCR, RT-PCR, qRT-PCR 以及microarrays。
（1小时45分钟完成实验）BasicExoRNA™ Basic RNA extraction kit 预分离的外泌体K1222TotalExoRNA™ Overall Exosome immunocapture and RNA extraction kit 生物液体&细胞培养基K1220。
大鼠外泌体(Exosome)ELISA试剂盒技术指导
大鼠外泌体(Exosome）ELISA试剂盒技术指导大鼠外泌体(Exosome）ELISA试剂盒操作说明大鼠外泌体(Exosome）ELISA试剂盒实验原理大鼠外泌体(Exosome）ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被大鼠外泌体(Exosome）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠外泌体(Exosome）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
外泌体提取试剂盒原理
外泌体提取试剂盒原理外泌体（Extracellular Vesicles，EVs）是一类由细胞分泌的脂质双层包裹的小颗粒，直径一般在30-150纳米之间。
外泌体内含有丰富的生物分子，如蛋白质、核酸和代谢产物，这些分子具有重要的生物学功能。
因此，外泌体在许多生物学过程中起着重要的作用，包括细胞间通讯、疾病发生发展等。
外泌体提取试剂盒是一种用于从生物样本中快速、高效地提取外泌体的工具。
其原理主要基于外泌体的生物学特性以及膜蛋白和外泌体特异性标记物的相互作用。
外泌体提取试剂盒使用了一种特殊的高亲和力材料，例如磁珠或硅胶材料，这些材料具有特异性结合外泌体膜蛋白的能力。
当样本与试剂盒中的这些材料接触时，外泌体膜蛋白与材料发生结合，形成复合物。
接下来，通过磁力或离心的方式，将复合物从样本中分离出来。
在磁力分离的方法中，磁珠表面的外泌体膜蛋白结合复合物可以通过磁力吸附到磁珠上，然后用磁力将磁珠与其他非目标物质分离开来。
而在离心分离的方法中，复合物会在高速离心的作用下沉降，从而与上清液分离。
经过洗涤步骤，除去非特异性结合的杂质，得到纯化的外泌体。
外泌体提取试剂盒的原理基于外泌体膜蛋白与特定材料的结合，通过磁力或离心的方式将复合物与非目标物质分离，最终得到纯化的外泌体。
这一提取过程可以在较短的时间内完成，且操作简便，能够从各种生物样本中提取外泌体，包括血液、尿液、唾液、组织培养上清液等。
外泌体提取试剂盒的应用十分广泛。
例如，在临床医学中，外泌体作为一种潜在的生物标志物，可以用于疾病的诊断和预后评估。
通过提取患者体液中的外泌体，可以获得有关疾病发生发展的重要信息，为疾病治疗和监测提供依据。
此外，外泌体还可以用于药物传递系统的研发，通过包裹药物并通过循环系统传递到特定的靶位点，实现精准治疗。
外泌体提取试剂盒通过特殊材料与外泌体膜蛋白的结合和分离纯化的方法，实现了外泌体的快速提取。
该试剂盒在各个领域的应用前景广阔，有望为研究人员和临床医生提供更多关于外泌体的有价值信息，推动相关研究的进展。
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外泌体是大多数细胞分泌的40 - 150nm的膜泡，存在于细胞培养基、血浆、血清、唾液、尿液、羊水和恶性腹水等生物液体中。
越来越多的证据表明，这些囊泡充当细胞信使，将信息
传递给身体内的细胞和组织。
外泌体包含细胞特异性蛋白、脂质和RNA，它们被运输到其他细胞，并改变其他细胞的功能或生理作用。
这些外泌体可能在介导对感染性病原体和肿瘤的
适应性免疫反应、组织修复、神经通讯和病原蛋白转移方面发挥作用。
如何提取各种样本类型中的外泌体呢？艾美捷科技作为专业的生命科学领域解决方案供应商，为您推荐Norgen Biotek品牌的外泌体提取试剂盒：
1.血浆/血清外泌体提取试剂盒：（Plasma/Serum Exosome Purification Midi Kit；57500）。
使用血浆/血清外泌体提取试剂盒从1 mL和10 mL血浆中纯化的完整外泌体，使用NanoSight®LM10仪器观察如下图：
【血浆/血清外泌体提取试剂盒-各品牌横向对比】
Norgen的试剂盒分离出55 nm外泌体，回收率为每毫升血浆9.64 x 1013颗粒。
另外与其他两种竞争对手相比，从1mL血浆中纯化的外泌体覆盖50nm-150nm的更宽尺寸范围，血浆浓度更高。
2.尿液外泌体提取试剂盒（Urine Exosome Purification Midi Kit；57800）：
图4使用尿液外泌体提取试剂盒从10 mL尿液中纯化的完整外泌体与使用超速离心发相比，使用NanoSight®LM10仪器观察如下图：
经过Norgen的试剂盒纯化的外泌体大小从65nm到195nm，总回收率为7.63×108个颗粒/ mL。
【尿液外泌体提取试剂盒-各品牌横向对比】
Norgen的试剂盒分离出115 nm外泌体，回收率为每毫升尿液8.36 x 109颗粒。
另外与其他两种竞争对手相比，从5mL尿液中纯化的外泌体覆盖75nm-250nm的更宽尺寸范围，尿液浓度
更高。
3.细胞培养基外泌体提取试剂盒（Cell Culture Media Exosome Purification Mini Kit；60500）：纯化和富集的完整血浆/血清，尿液和细胞培养基中外泌体的可用于功能研究；特色如下∙样本输入量多样；
∙无需耗时的超速离心，过滤或特殊注射器；
∙无需沉淀试剂，也无需过夜培养；
∙无需蛋白酶处理；
∙适用于多种物种；
∙外泌体被纯化并且不含任何其他RNA结合蛋白；
∙可以使用NanoSight®或电子显微镜分析纯化的外泌体，以评估近似外泌体大小范围和浓度。