黑曲霉菌种传代培养操作规程-推荐下载

1、目的与适用范围

建立黑曲霉菌种传代培养操作规程，规范菌种传代培养操作，确保菌种传代技术成功，保证产品质量的安全、稳定。

本规程适用于菌种的传代培养操作。

2、职责

菌种室人员对本规程实施负责。

3、内容

3.1 备料

3.1.1 菌种室人员根据接种菌株发育情况，待菌株发育良好，具备传代要求条件时，菌种室人员按照一次传代培养荃配方，填好领料单报总经理批准，送仓储部备料，仓储部不具备情况下，可派专人购买符合标准的培养荃。

3.2 传代培养操作前的准备工作

3.2.1 一次传代培养荃配方

原料名称数量规格原料名称数量规格蛋白胨0.5%药用K2HPO40.03%药用琼脂2%药用MgSO4·7H2O 0.01%药用CaCO34%药用葡萄糖3%药用(NH4)2HPO40.023%药用水1000mL纯化水3.2.2 一次传代培养荃的制备

按配1000ml的量，将上表中的配方原料精确称取，投入有刻度的1000ml三角烧瓶中加纯化水，使成1000ml，用玻璃棒搅拌均匀后，分别装入20支斜面培养荃试

管中。然后放入消毒罐中，加热至120℃保温灭菌半小时，取出冷却至室温，然后送入接种室进行无菌接种。

3.2.3 按规定进入万级洁净室一更后，脱鞋、戴帽、更衣，搞好人的清洁、消毒，搞好洁净室的清洁、消毒，并做好相关用具、洁具的准备工作。

3.3 传代接种操作。

操作人员进入二更，在100级层流操作台上，按无菌操作要求进行传代接种操作。操作人员将接种针在酒精灯火焰上消毒一分钟后，放冷，从恒温培养箱中取出已接种培养的菌种，用接种针分别刮下已生长发育的菌体，分别移植到20支装有一次传代培养荃的斜面培养荃试管中，用无菌药棉和经消毒的塞密闭试管，然后，放入25℃-28℃的恒温培养箱中培养。

3.4 接种毕，做好清洁卫生和清场工作，并做好接种操作记录。

3.5 待培养5天后，在洁净室内取出菌种，用1万级显微镜观察菌株发育情况，待发育良好时，再进行二次传代培养，并做好菌种发育观测记录。

3.6 菌种的二次至四次传代培养操作，按照一次传代培养荃的配方，将一次传代培养的菌种按一次传代培养操作，扩大10倍进行二次传代培养；同样，按一次传代培养荃的配方，将二次传代培养的菌种，按一次传代培养的接种操作，扩大10倍进行三次传代培养；同样，按一次传代培养荃的配方，按一次传代培养的接种操作，将三次传代培养的菌种扩大10倍进行四次传代培养。

不进行下一次传代培养的菌种，可将培养的菌种从25℃-28℃培养箱中取出，贮藏在5℃-10℃的冷藏箱中，控制其菌种的发育。

3.7 菌种的五次传代培养

3.7.1 备料

菌种室根据车间生产和五次传代培养菌种贮存数量情况，需做五次传代培养时，先按五次传代培养荃配方填好领料单，申报总经理直接批准，送仓储部领料，或提前告知供应部采购合格培养荃。

3.7.2 五次传代培养荃配方

原料名称数量规格

麸皮1000g食用

葡萄糖50g食用

碳酸钙10g药用

水1000ml纯化水

3.7.3 五次传代培养荃的制备

按上表配方比例，每次总量按1000ml配制，精确称取培养荃原料，加净化水，

使成1000ml培养荃，搅拌均匀，装入斜面扁形培养瓶中，然后将斜面扁形培养瓶放

进消毒罐，加热到120℃，保温灭菌半小时，冷却后取出放冷，送洁净室进行无菌接种。

3.7.4 五次传代接种操作

3.7.

4.1 按规定进入成绩级洁净室一更后，操作人员脱鞋、鞋帽、更衣，搞好人的清洁、消毒，搞好洁净室的清洁、消毒，并做好相关用具、洁具的准备工作。

3.7.

4.2 操作人员进入二更，在100级层流操作台上，按无菌操作要求进行五次传代接种操作。

将接种针放在酒精灯火焰上消毒1分钟后放冷，从恒温培养箱中取出四次传代

培养的菌种，视菌落发育情况，按扩大8-10倍的比例进行五次传代培养，用接种针

分别刮下已生长发育的菌体，分别移植到已装有五次传代培养荃的斜面扁形培养瓶中，用无菌药棉和已消毒的塞子将斜面扁形培养瓶口盖紧，密闭放入25℃-28℃的恒温培

养箱中培养。

3.7.

4.3 接种毕，做好清洁卫生和清场工作，并做好接种操作记录。

3.7.

4.4 待培养四天后逐日观察菌落发育情况，一般情况培养5天后进行检测，并做好菌种发育良好，即可投入车间放大培养，投入生产使用。

不投入车间生产的五次传代培养菌种，从培养箱中取出，放入5℃-10℃的恒温

冷藏箱中冷藏侍用。