检测氟喹诺酮类药物残留方法对比与分析
4-3 氟喹诺酮类药物残留的检测
※ 动物性食品中氟喹诺酮类药物的最高残留限量可查找农业部 235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》。
— 18 —
药物名
达氟沙星 Danofloxacin ADI：0-20
— 13 —
食品理化检验技术
氟喹诺酮类药物残留的检测
2
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喹诺酮类药物是一类化学合成抗菌药，由于具有抗菌谱广、
抗菌作用强、使用安全及易于制造等优点，发展迅速。
基本母核结构：6-氟-4-喹诺酮-3-羧酸
O
F
COOH
N
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常用药物结构
F
N HN
O COOH
N C2H5
诺氟沙星
O F
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兽药残留的危害
毒性：急性中毒、慢性中毒 三致：致癌、致畸、致突变 诱导耐药菌株： 过敏反应 激素样作用 污染环境、影响生态：
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中华人民共和国农业部公告 第235号
目的：为加强兽药残留监控工作，保证动物性食品卫生安全
A.不需要制定最高残留限量的药物：88 B.需要制定最高残留限量的药物：94
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规定了动物性食品中达氟沙星、恩诺 沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留 检测的制样和高效液相色谱测定方法
适用于猪的肌肉、脂 肪、肝脏和肾脏，鸡的肝 脏和肾脏组织中达氟沙星、 恩诺沙星、环丙沙星和沙 拉沙星药物残留量检测
测定原理
用磷酸盐缓冲溶液提取试样 中的药物，C18柱净化，流 动相洗脱。以磷酸-乙腈为流 动相，用高效液相色谱-荧光 检测法测定，外标法定量。
氟喹诺酮药物残留的检测方法研究进展
氟喹诺酮药物残留的检测方法研究进展189氟喹诺酮药物残留的检测方法研究进展刘荣利韩宁娟李亮(西安培华学院医学院陕西西安710125)摘要：氟喹诺酮是一种人工合成的广谱抗生素，在防治动物及人类的感染性疾病中具有重要应用。
由于抗 生素药物的不合理使用，导致在动物源性食品中残留超标，长期食用将严重危害人体健康，因此，对于动物源 性食品中氟喹诺酮残留检测具有重要的意义。
有关氟喹诺酮残留的检测方法大致可分为微生物法、免疫法、色谱法和光谱法等。
关键词：氟喹诺酮药物检测方法研究进展中图分类号：S859文献标识码：A文章编号：1009-5349 (2017) 09-0189-02一、 前言氟喹诺酮（fluoroquinolones，F Q S)是一系列由人工合 成的含有4-喹诺酮母核结构，母核6位C上被氟取代的一 类广谱抗菌药物，抗菌作用强，对革兰氏阳性菌与阴性菌 均有作用。
具有吸收快，体内分布广，血药浓度高，血浆 半衰期长，合成简便，药品价格低廉等特点，常用于动物 及人感染性疾病的治疗。
F Q S药物在家畜、家禽的饲养中应用广泛，抗生素的 不合理使用，导致其在动物性食品中的残留超标，如果人 体长时间摄人该类食物，不仅会引起人体对F Q S药物产生 耐药性，而且药物残留通过食物对人的中枢神经系统，胃肠道等器官危害较大，严重威胁人类健康。
关于乳、肉制 品中F Q S抗生素的残留全球都有严格规定。
因此，对于动 物源性食品中F Q S药物残留检测具有重要的意义。
现将F Q S药物残留的检测方法进行综述。
二、FQS药物的检测方法(一） 微生物法微生物检测利用F Q S药物对微生物生理代谢的抑制作 用，进行F Q S药物残留的测定。
该方法经济方便，但灵敏 度和特异性较低，难以进行药物残留的准确定性定量分析，适用于大量样品的筛选，可对药物残留进行初步检测。
邢 应寿[|]等建立了环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星三种药物 在肉鸡组织中残留的微生物检测法，结果发现24h后，环 丙沙星残留量较大。
浅析氟喹诺酮类兽药残留检测方法
３ 氟喹诺酮 类药物残 留的检测方法
目前 ，常用 于氟 喹诺酮 类药 物残 留 的检 测方 法 可分 为４ 液相色 谱法对 猪 肉组织 中恩诺沙 星和环 丙沙 星残 留量 进行 检 大类 ：微 生物法 、仪器分 析法 、化学发 光与 电化学发光 分析 测 ，结 果 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 的质量 浓度 在 ２ｇＬ～１ ０ ｇＬ ／ ０ ／ ｇｋ 。 法及免疫分析法。其中仪器分析法常见的有高效液相色谱法 范 围内呈线性关 系 ，它们 的最低定量限均为２／ｇ （ＰＣ Ｈ Ｌ ）、液一 质联用分析法 （ ＣＭ ）、高效毛细管电泳法 ３ ２ ２ 高效液相 色谱 一 Ｌ／Ｓ ．． 质谱联 用法 （ ｃ Ｍ ） 随着研究 的深 Ｌ— Ｓ （ Ｐ Ｅ）等 ；免疫 分析检测法包括 间接竞 争Ｅｉ 测定法 、免 入 和对食 品安全越 来越 高 的重 视 ，定 性准 确 ，灵 敏度更 高 的 ＨＣ ｌａ ｓ 疫传感器分析法 、免疫亲和色谱 （ＡＣ）分析法等【 。 Ｉ ｌ 液质联 用技 术渐渐 被人 们采纳 ，这种 技术不 仅可 以更精 确 的
兽 药 应 用
中国畜牧兽 医文摘
２ １年 ０１
２卷 ７
第３ 期
浅析氟喹诺酮 类兽药残 留检测方法
将 ，、 Ｊ武 ・
（ 南大 学荣昌校 区，重庆 西
４ ２６ ） ０ ４ ０
［ 要］ 解决兽 药残留监 控 问题是提 高动物源性食 品质 量，保障食品安全 的关键 性环节之一 ，因此在食 品检 验 中建立 一 摘 些 方便 快捷 的检测方 法显得 尤为重要 。本 丈以兽 药氟喹诺酮类为例 ，系统 阐述 了目前在临床检测 中 已经建立的有关 氟喹诺酮类 药物 残留的检 测技 术 ，以期能为其他药物残 留检测提供参考方 向。
兽药残留SPE方法
The determination of antibiotic and pesticide residues in foods： samplepreparation for LC-MS analysisAbstract: In this article, we will discuss SPE strategies prior to tandem LC/MS analysis for sub-ppb determination of chloramphenicol, nitrofuran antibiotic metabolites, and other related substances in animal tissues and in honey. Sample preparation for LC-MS analysis to determinate of antibiotic and pesticide residues in foods is reviewed and prospected .Key words: antibiotic and pesticide residues , food , sample preparation , LC-MS食品中抗生素和农药残留分析：用于LC－MS分析的SPE样品前处理方法Waters公司赵维国摘要：本文将讨论LC-MS分析之前，动物组织和蜂蜜中残留物质的样品前处理策略，其中包括ppb级氯霉素、喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的固相提取（SPE）方法。
对食品中抗生素和农药残留的LC－MS分析的SPE样品前处理方法进行综述和展望。
关键词：抗生素和农药残留，食品，样品前处理，LC-MS食品中抗生素和其它兽药残留目前正在全球范围内受到广泛的重视。
对于农药和兽药残留的分析而言，所需达到的要求通常取决于毒理学评估的结果，而所期望达到的定量限(LOQ)与合法注册的农业化学品的最大允许残留限量相关。
水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法的研究
水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法的研究摘要：氟哇诺酮类药物因其具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点，被广泛应用于兽药临床和水产养殖中。
水产品中氟喹诺酮类药物残留不仅会给动物性食品安全带来潜在隐患，也会对人类的健康及生存环境造成危害。
提供准确的水产品氟哇诺酮类药物多残留检测方法成为食品安全监测一项刻不容缓的任务。
本文对该类药物在水产品中的残留分析方法进行综述和合理的展望，旨在为进一步开展水产品中氟哇诺酮类药物残留研究和监测提供借鉴。
关键词：氟喹诺酮类药物残留；水产品；检测方法氟哇诺酮类（Fluoroquinofones，FFQs）是一类人工合成的广谱抗菌药，是第三代喹诺酮类药物，药物通过抑制细菌的DNA回旋酶，影响拓扑异构酶Ⅳ，干扰细菌的DNA复制而阻碍细菌DNA 合成，最终导致细菌死亡而抗菌。
此类药物属吡酮酸衍生物，喹啉环的C-6位上有氟原子，C-7位上连接哌嗪基或吡咯基，加入氟原子后增加了其脂溶性，增强了对组织细胞的穿透力，因而吸收好，组织中药物浓度高，半衰期长，大大增加了抗菌谱和杀菌效果。
FQs药物具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便、不良反应小，以及价格低廉等特点，20余年来已成为发展最快的化学合成抗菌药物，在临床上广泛用于人类和动物的各种感染性疾病的治疗[1]，其主要有诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、单诺沙星和达氟沙星等。
随着氟喹诺酮类药在兽医临床和水产养殖中的应用，其残留问题已引起了广泛的关注[2]。
本文就水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法简要综述。
1、水产品氟哇诺酮类使用现状随着我国水产养殖业的不断发展，抗生素在水产养殖业的应用越来越广泛，抗生素的应用有效地预防和控制了许多水产感染性疾病的发生、促进动物生长和提高饲料的利用率极大地促进了水产养殖业的发展。
氟哇诺酮类因抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点近年来在水产养殖中大量使用。
而违规使用兽用抗生素、不执行休药期规定等，最终导致氟哇诺酮类在水产品体内残留超标。
动物性食品中氟喹诺酮类兽药残留检测技术
动物性食品中氟喹诺酮类兽药残留检测技术
□ 曾 丽 谱尼测试集团深圳有限公司
摘 要：氟喹诺酮类药物以其良好的杀菌、抗感染功效在畜牧业养殖中得到了良好的普及。基于此，本文主要针对氟 喹诺酮类兽药残留的危害进行分析，并分别阐述免疫分析检测技术、高效液相色谱检测技术、微生物检测技术、毛细管电 泳检测技术以及液相色谱 - 质谱检测技术，在动物性食品中氟喹诺酮类兽药残留检测中的应用，以期为动物性食品食用安 全提供良好的保障。
1 氟喹诺酮类兽药残留的危害
作为一种常见的细菌 DNA 合成抑 制剂，氟喹诺酮类兽药（FGs）已被广 泛应用于牛、羊等的养殖管理中。随 着这类药物应用范围的扩大，其在动 物性食品中的残留问题逐渐引起了人 们的重视。动物性食品中氟喹诺酮类 兽药残留的危害主要体现在以下几方 面。第一，直接危害方面。当人们使 用残留一定量 FQs 的动物性食品后， 其中的残留剂量可进入人体消化系统， 并对相关器官造成损伤。第二，间接 危害方面。FQs 残留的间接危害在于： 当 人 们 长 期 摄 入 含 有 FQs 的 动 物 性 食品后，其中的残留药物成分可诱导 人体各类致病菌产生耐药性，进而为 FQs 在人类抗菌治疗中的应用产生阻 碍作用 [1]。
种氟喹诺酮类兽药。
到 目 前 为 止， 这 种 检 测 技 术 的 低
成本、检测效率高等优势已经得到了
良好的证实。但该技术在灵敏度方面
的缺陷限制了其在药物残留检测中的
全面普及。
2.4 毛细管电泳法
作为一种新型 FQs 残留检测技术，
毛细管电泳法的检测原理为：利用电
泳反应为人们提供动物性食品样本中
是否残留 FQs 的判断依据。这种检测
关键词：动物性食品；氟喹诺酮类兽药；免疫分析法
喹诺酮类药物残留分析技术测定方法(一)
喹诺酮类药物残留分析技术测定方法（一）11.1.4.2 测定办法国内外报道用于QNs残留分析的检测办法主要有高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳测定法(CE)等，也有报道用气相色谱法(GC)、高效薄层色谱法(HPTLC)、液相色谱-质谱联使用(LC-MS)、免疫分析办法(IA)等办法。
(1)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC) HPLC是最常用的分别办法，通常用法C18/C8等色谱柱，但有些状况下也引入苯基或氨基键合的固定相。
多数办法用法经端基封闭处理的色谱柱甚或高纯硅质柱，防止因为色谱柱填料残留的硅醇基(硅羟基)和金属杂质而导致的色谱峰拖尾。
也可以在流淌相中加入季铵盐、烷基硫酸钠或烷基磺酸钠等离子对试剂，它们可与质子化的待测物以及三乙胺(TEA)或季铵盐形成离子对，而TFA或季铵盐可与待测物竞争残留的活性硅醇基，能够获得更好的保留、洗脱，和更大程度的分别效果。
流淌相组成主要是乙腈-水，有时也用法乙腈--水、-(THF)-水或乙腈-二甲胺-水等，也有报道用法乙腈-甲醇-四氢呋喃-水四元溶剂体系，少数文献报道有用法甲醇-水为流淌相。
多残留分析常采纳梯度洗脱办法，为充实峰形常在流淌相中加入扫尾剂，可以削减硅醇基的电离，加入四氢呋喃(THF)，也可以削减拖尾峰。
缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、草酸缓冲液等常常用于将流淌相控制pH2～4，可以降低其与QNs阳离子之间的互相影响，获得较好的分别。
HPLC常用的检测器包括紫外检测器(ultraviolet detector，UVD)、二极管阵列检测器(diode-array detector，DAD)、荧光检测器(fluorescence detector，FLD)、电化学发光检测器(electrogenerated chemiluminescence detector，ECLD)，以及UVD和FLD联用等。
水体环境中氟喹诺酮类药物的污染现状及分析方法
五、结论
本研究表明，宠物源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的多药耐药性主要是由其自 身基因突变导致，而非外界药物选择压力所致。这一发现为临床合理使用抗生素 提供了参考依据，提示我们在治疗宠物感染时应注意抗生素的选择，避免滥用抗 生素。同时，这一研究结果也为进一步探讨宠物源大肠杆菌多药耐药性的传播机 制提供了重要线索。
三、研究方法
三、研究方法
本研究选取了氯霉素、氟喹诺酮两种典型抗生素，采用实验室模拟和野外调 查相结合的方式进行研究。首先，通过实验室模拟，研究了不同浓度腐殖酸、表 面活性剂对抗生素光降解的影响。随后，在野外调查中，收集了不同水域的水样， 测定了其中溶解性物质和抗生素的浓度，并运用相关统计方法分析两者之间的关 系。
分析方法
这些方法具有简便、快速、灵敏度高等优点，有望成为未来水体环境中氟喹 诺酮类药物的监测和预警方法。
未来研究方向
未来研究方向
未来对于水体环境中氟喹诺酮类药物污染的研究，应以下几个方面： 1、污染来源研究：深入调查和分析水体环境中氟喹诺酮类药物的来源，特别 耐药性细菌的产生和传播途径。
未来研究方向
2、危害程度研究：系统评价氟喹诺酮类药物对水生生物和人类健康的潜在危 害，以及这类药物对环境生态系统的影响。
未来研究方向
3、生物降解研究：研究氟喹诺酮类药物在自然环境中的降解过程和降解产物， 探讨这类药物的生态毒理效应。
未来研究方向
4、分析方法研究：进一步研发简便、快速、灵敏的检测方法，提高对水体环 境中氟喹诺酮类药物的监测能力。
四、实验结果与分析
四、实验结果与分析
实验室模拟结果表明，腐殖酸和表面活性剂均可促进抗生素的光降解。其中， 腐殖酸的促进作用较为显著，相比之下，表面活性剂的影响相对较小。此外，两 种抗生素对水中溶解性物质的响应存在差异，氯霉素在腐殖酸存在下的光降解速 率常数较高，而氟喹诺酮在表面活性剂存在下的光降解速率常数较高。
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展张运尚，杜加茹，王伟东，樊剑鸣*（郑州大学公共卫生学院，河南郑州 450001）摘 要：氟喹诺酮类药物（FQS）是第3代喹诺酮类抗生素，具有良好的生物利用度和耐受性，不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用，还具有抗真菌和抗病毒活性，因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染。
但当人类过多食用含有FQS残留的食品后，将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性，因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要。
本文综述了FQS残留的检测标准和常用的检测方法及优缺点，酶联免疫分析法（ELISA）具有灵敏度高、操作简便等优势，预测ELISA法在今后FQS残留检测中发挥重要作用。
关键词：氟喹诺酮类药物；药物残留限量；残留检测技术；酶联免疫分析法中图分类号：S816.7 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200516-05氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQS）是第3代喹诺酮药物，其化学结构是在喹啉环的6位上加入了氟原子，7位上连有哌嗪基的一类衍生物，此特点使得原本亲脂性的吡酮类药物增加了适度的亲水性，同时降低了蛋白结合率，提高生物利用度[1-2]。
该类药物通过抑制细菌的DNA和RNA合成从而达到抑菌作用[3]。
相比第1代及第2代喹诺酮药物，FQS的抗菌活性明显增加，抗菌谱显著扩大，对革兰氏阳性菌（金葡球菌、链球菌、肺炎球菌）和革兰氏阴性菌（肠杆菌科、流感杆菌和奈瑟菌属）[4]以及一些衣原体、支原体和螺旋体均有抗菌作用[5]，因此被广泛应用在临床上治疗细菌感染性疾病。
FQS代表药物主要包括恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）、诺氟沙星（Norfloxacin，NOR）、达氟沙星（Danofloxacin，DAN）、氟罗沙星（Flero xacin，FLE）、沙拉沙星（Saraflaxacin，SFX）、依诺沙星（Enoxacin，EX）等。
b浅谈喹诺酮类兽药在动物食品中的残留检测方法
ＦＱｓ结构中具有共轭双键，在紫外光区有紫外 吸收，因此可采用ｕＶ来检测ＦＱｓ的含量。Ａｍｉｎ利 用ＦＱｓ与一些显色剂如：ＢＣＧ、ＢＣＰ、ＢＰＢ等反应， 其产物能在紫外光区有吸收，建立电荷转移分光光 度法检测加替沙星的含量（Ａｌ姐Ｓ
Ａｍｉｎａ，２００７
（胡晓苗，２００９）。微生物法操作简便、成本低、
检测快速、重现性好，但该法的缺点是灵敏度不高、 特异性差。
２色谱法 ＨＰＬＣ检测器分为紫外检测器和荧光检测器 均可用以检测动物食品中ＦＱｓ的残留量。采用紫外 检测器检测鱼肉中５种喹诺酮类药物残留量，该方
２００９）。
４光谱分析法 ４．１紫外分光光度法（ｕｖ）
１．８６、１．０７
法的检出限为１１吵ｇ，ｋｇ～５１斗ｇｍｇ，平均加标回收 率８１％一９６％，具有快速、灵敏的特点（陈辉华， ２００８）。林玲建立了一种同时测定禽蛋中４种氟喹
诺酮类药物的高效液相色谱荧光检测法。该方法的
检出限为５．０斗ｇ／ｋｇ和１．０斗ｇ／ｋｇ，平均回收率为 ９０％．９５％（林玲，２０１０）。该方法符合现行ＦＱｓ残留 分析的要求。
．ｆ圈艘熙Ｉ安全用药
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浅谈喹诺酮类兽药在动物食品中的 残留检测方法
魏宏 （西南大学药学院重庆４００７１６） 喹诺酮类抗生素是一类人工合成含有氟原子 的抗生素药类，常称这类药为氟乙酰苯醌（ＦＱｓ）。 ＦＱｓ具有抗菌谱广、疗效显著、低毒、廉价等特 点，已将其广泛应用于预防与治疗动物疾病。 近年来，滥用抗生素导致动物体内抗生素残留 量过高的问题日益突出，严重影响人类的健 康。因此建立一些简便、有效、灵敏度高的方法 对ＦＱｓ残留进行检测和监控，以确保人们对动 物食品的食用安全，具有十分重要的意义。采用微 生物法、色谱法、免疫分析法、光谱分析法等方法 对动物食品中残留的ＦＱｓ进行分析检测的发展 比较快速，本文归纳了该研究进展情况，并提出 展望。 ３免疫分析法（ＩＡｓ） ３．１酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ） ＥＬＩＳＡ一般以多残留试剂盒为基础，建立可检 测ＦＱｓ在动物食晶中的残留量。以制备的多抗血清 为基础，建立了三种ＦＱｓ的多残留间接竞争酶免 疫吸附测定法。该方法的检测限分别为１．６２、 １微生物法 微生物法是一种利用对ＦＱｓ药物敏感的微生 物的抑菌效果来达到快速检测ＦＱｓ残留的方法。 以金黄色葡萄球菌为工作菌，用杯碟法测定氧 氟沙星（０ＦＬ）在畜禽粪便中的残留，最低检测 限为０．１５６“ｇ／ｇ，回收率为７９．４９％一８７．９２％
鸡肉中氟喹诺酮类残留液质检测方法比对
福建畜牧兽医第44卷第5期2022年鸡肉中氟喹诺酮类残留液质检测方法比对周伟靓福建省农产品质量安全检验检测中心福州350003摘要对国标法液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中氟喹诺酮类残留进行前处理步骤优化,比较验证两种前处理方法的测定结果。
经优化后的方法,试验操作过程简单,结果灵敏度和准确度均在良好线性范围,是较为理想的快速筛查检测方法。
关键词氟喹诺酮液相色谱-串联质谱方法比对文献标识码:A文章编号:1003-4331(2022)05-0053-02C om pari s on of l i qui d chrom at ography-m as s s pect rom et ry f or det erm i nat i on of f l uoroqui nol ones res i dues i n chi ckenZhou W ei j i ng(Fuj i an I nspect i on and Tes t i ng Cent r e f or A gr i cul t ur alPr oductQ ual i t y and Saf et y,Fuzhou350003)A bst ract The pr et r eat m ents t eps f or t he det er m i nat i on off l uor oqui nol ones r es i dues i n chi cken by l i qui d chr om at ogr aphy-t andem m as s s pect r om et r y(LC-M S/M S)wer e opt i m i z ed,and t he exper i m ent al r es ul t s of t w o pr et r eat m ent m et hods wer e com par ed by m et hod ver i f i⁃cat i on.The opt i m i z ed m et hod i s si m pl e,and t he s ens i t i vi t y and accur acy of t he t es tr es ul t s ar e i n a good l i near r ange,whi ch i s an i de⁃alr api d scr eeni ng and det ect i on m et hod.K ey w ords Fl uor oqui nol one LC-M S-M S M et hod com par i s on氟喹诺酮(Fl uor oqui nol ones,FQ s)又称新喹诺酮,是一种新型的喹诺酮类(Q ui nol one,Q N s)衍生物,具有吸收性好、抗菌谱广、抗菌作用强、半衰期长、使用方便、价格低廉等优点,在防治动物各类型感染性疾病中被广泛使用。
高效液相色谱法检测六种氟喹诺酮类兽药残留前处理的优化
收稿日期:2010-07-01;修订日期:2010-09-10作者简介:潘 媛(1982-),女,工程师;E -m ai:l me i m e-i 82909@163.co m高效液相色谱法检测六种氟喹诺酮类兽药残留前处理的优化潘 媛*,牛 华,程晓云,祝红昆,申南玉,李 波,冯 雷,珠 娜,牛之瑞(云南省产品质量监督检验研究院;昆明650223)摘 要:建立了一个检测动物源性食品中6种氟喹诺酮类药物残留的高效液相色谱方法。
不同基质的样品前处理对检测影响较大:鱼、肉及肝脏等样品需经过乙腈-011m o l/L KH 2PO 4缓冲液提取,乙腈饱和的正己烷洗涤去除油脂;蛋及乳制品样品用正己烷饱和的乙腈提取,乙腈饱和的正己烷去脂。
目标化合物采用高效液相色谱-荧光检测器检测,外标法定量。
对市售鸡肉、猪肉、鸡蛋进行检测,添加10、20、50、100L g /kg 浓度水平时,回收率在82%~105%之间,相对标准偏差在4%~12%之间,方法的检出限诺氟沙星、环丙沙星、沙拉沙星及单诺沙星为510L g /Kg ,恩诺沙星、达氟沙星为310L g /Kg 。
关键词:氟喹诺酮;高效液相色谱法;荧光检测器;动源性食品中图分类号:O65717 文献标识码:A 文章编号:1000-0720(2011)05-069-04氟喹诺酮类(Fluoroqu i n o l o nes)抗生素进入我国仅仅20多年,耐药率已经达60%~70%。
目前,有近10种氟喹诺酮类药物应用于畜、禽、水产养殖业,而FQs 残留的检测方法未有食品检测国家标准,且仅有农业部无公害类产品对环丙沙星(C I P [011m g /Kg)和恩诺沙星(ENR [011mg /Kg)有限量要求。
所采用的检测方法一般有高效液相色谱-紫外检测法[1]、高效液相色谱-荧光检测法[2]、液相色谱-串联质谱法、气相色谱-质谱法、微生物法[3]等。
利用高效液相色谱荧光检测器对动物源食品中FQs 药物残留进行检测,不仅成本较低,经改进,前处理简单易行,可满足我国现行兽药残留检测分析的要求。
氟喹诺酮类药物残留检测方法研究进展
ａ ｕ ｔ ｅｅ ｒ ｈ ｓＯ ｈ ｅ ｉｕ ａｙ ｉ ｏ ｕ ｒｑ ｉ ｏｏ ｅ ｅ ｅｃ ｒ ｅ ｕ ｏｈ ａ ｏ ｎ ｂ ｏ ｄ Ｄｅｅ ｔ ｎｍｅ ｈ ｄ ｉｈ ｈ ｄ ｂ ｅ ｍｏ ｎ ｒ ｓ ａｃ ｅ ｎ ｔ ｅｒｓｄ ｅ ａ ｌ ｓｓ ｆ ｏｏ ｕ ｎ ｌｎ ｓｗ ｒ ａｒ ｄ ｏ ｔ ｔ ｔｈ ｍｅ ａ ｄａ ｒ ａ ． ｔｃｉ ｔ ｏ ｓ ｆ ｏ ｎ ｆ ｌ ｉ ｂ ｏ ｗｈｃ ａ ｅ ｎ ｅ ｔｂ ｉ ｅ ｏ ｕ ｒｑ ｉｏｏ ｅ ｎ ｌ ｄ ｄ ｍｉ ｏ ｉｌｇｃ ｅｅｍｉ ａｉｎ ｍｅｈ ｄ Ｃ ｓ ｌ ｈ ｄ ｆｒｆ ｏ ｏ ｕｎ ｌｎ ｓ ｉ ｃｕ ｅ ｃ ｂｏｏ ｉａ ｄ ｔ ｒ ｎ ｔ ｔｏ 。Ｌ ，ＨＰ Ｃ ａ ｓ ｌ ｒ ｌ ｏ Ｌ ，ＨＰ Ｅ Ｃ＿ ，Ｉ ｄ Ｉ ，ｗ ｉｈ ｗ ｒ ｌ Ｃ ，Ｌ ＭＳ Ａ ａ ＡＣ ｈｃ ｅ ｅ ａ ｎ ｌ
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安徽 农业 科学 ， ｕ ａｏ ｎｕ Ａ ．ｃ．０ ７３ （７ ：２０ ５４ Ｊ ｒｌ ｆ ｈ ｉ Ｓｉ２０ ，５ １ ）５４ —２ ２ ｏｎ Ａ
责任 编辑 王丽 莉 责 任校 对 王 森
氟喹诺酮类药物残留检测方法研究进展
潘 孝成 － ， 赵瑞宏－ ， 祁克宗２ 强 朱良
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对食品中氟喹诺酮类药物残留色谱检测方法的思考
Technology 科技 分析与检测
对食品中氟喹诺酮类药物残留色谱检测方法的思考
□ 岳鹏 王安 中证检测科技（天津）有限公司
摘 要：近年来，食品中氟喹诺酮类药物检测工作得到了人们的高度关注，利用色谱检测方法分析药物残留，能够提 高检测准确性。本文首先对氟喹诺酮类药物进行简要介绍，然后具体分析了色谱检测方法，有利于促进氟喹诺酮类药物残 留检测工作的持续开展。
[1] 崔惠娟 . 鸡肉中氟喹诺酮类药 物残留高效液相色谱法检测方法的改进 [J]. 云南畜牧兽医 ,2017(2):17-19.
[2] 杨 勇 , 罗 奕 , 吴 琳 琳 . 薄 层 色 谱 法 测 定 牛 奶、 蜂 蜜 中 6 种 氟 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 [J]. 江 苏 农 业 科 学 ,2015(10):380-383.
留药物，并对其进行定量分析，这也 是 HPCE 应用优势的具体体现。 2.3 高效免疫亲和色谱法
高效免疫亲和色谱法（HPIAC）， 具有一定特异性，应用差速迁移理论 能够完成免疫物质的拆分和抗原结合， 西方学者探究短时间内检测牛血清氟 喹诺酮类药物的方法，主要通过沙拉 沙星完成氟喹诺酮类药物的有效吸附， 并对其进行 FLD 检测。观察检测结果 可知，最终得到的免疫亲和色谱柱能 够有效回收药物，同时，还能提高检 测便捷性、准确性，总结 HPIAC 现有 应用状况可知，由于特异性抗体获取 难度较大，进而使 HPIAC 应用存在一 定阻力，这也使技术推广受到了限制。 2.4 液相色谱——质谱法
畜禽肉制品中氟喹诺酮类药物残留检验检测方法的研究进展
畜禽肉制品中氟喹诺酮类药物残留检验检测方法的研究进展摘要：氟喹诺酮类药物在畜牧、水产等养殖业应用广泛，但由于其给药过程中仅有一部分药物能被生物体吸收转化，并以代谢产物的形式排除体外，大部分的药物则以原型药物的形式经生物体进入自然环境，因此对各类畜、禽产品氟喹酮类抗生素残留量的检测越来越受到监管部门和检测机构的重视。
本文将综述氟喹诺酮药物残留的重要检测方法,并阐述我院关于肉类食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展。
关键词：氟喹诺酮类药物；联用技术；固相萃取1 氟喹诺酮类药物介绍氟喹诺酮类药物是上个世纪80年代开发出来的第三代喹诺酮类抗菌药物，代表产品有诺氟沙星（Norfloxacin hydrochloride）、氧氟沙星（Ofloxacin）、环丙沙星（Ciprofloxacin）、恩诺沙星（Enrofloxacin）、盐酸沙拉沙星（Sarafloxacin hydrochloride）、加替沙星（Gatifloxacin）、巴洛沙星（Balofloxacin）等。
氟喹诺酮类药物因为其有结构相似、取代位点多、抗菌谱广、药物活性高等特性而受到广泛的应用。
上述常见的氟喹诺酮类药物结构式如图1所示，这类药物的作用机理是可直接作用于细菌的细胞核，通过抑制细菌的DNA旋转酶，使旋转酶不能在DNA的双链上引入切口，进而从分子机制上破坏细菌的代谢和增殖，如此既能杀灭细菌也能抑制细菌繁殖。
图1 几种常见氟喹诺酮药物的分子式欧盟自1999年开始对动物的肌肉、肝和肾中氟喹诺酮类兽药残留量规定限值；在中国加入WTO后，对我国出口的动物源性食品中氟喹诺酮类抗生素的残留量实施监测，将检测残留限量控制在0.05mg/kg以内。
联合国粮农组织FAO规定氟喹诺酮类抗生素在牛、猪、禽等可食用肌肉组织中的允许残留量为0.2mg/kg。
我国虽然对喹诺酮类药物开发应用研究较晚，但目前氟喹诺酮类药物经过药监局批准的已经有十余种，其中主要有诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星等。
ELISA方法检测含油食品中氟喹诺酮类药物残留
ELISA方法检测含油食品中氟喹诺酮类药物残留于金玲，宫小明，董静，丁葵英，王洪涛（潍坊出入境检验检疫局，山东潍坊261041）摘要：建立宠物食品及油炸食品中4种氟喹诺酮类药物（诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星）E L I SA检测方法，采用氟喹诺酮类检测试剂盒，样品用乙腈-NaO H（84+16）溶液提取,再用二氯甲烷反提取目标物。
并根据日常检测中积累的一些经验，对宠物食品及油炸食品中的杂质和脂类物质进行适当的去除，取得了满意的结果。
检测波长450 nm，回收率平均为90.95 %，相对标准偏差小于6.07 %。
该方法快速，操作简单，灵敏度高，特异性强，检测限可达0.03 mg/kg，能够满足欧盟及日本、美国等地区和国家氟喹诺酮类药物筛选检测的要求。
关键词：E L I SA；宠物食品；油炸食品；氟喹诺酮类药物；检测限Detec ting Quinolones Residues in Pets Foods and Deep-Fried FoodsYU Jin-lin g，GONG Xiao-ming，DONG Jin g，D I NG Ku i-yin g，WA NG Hon g-ta o （Weifan g Entry-Exit I nspec tion and Qua rantine Bu reau of China，Weifang 261041，S h a ndon g，Ch in a）Abstract：A meth od was de velope d for de term ina tion of Quin olone s re sidue s （Nor floxa c in，Cipr ofloxac in hydroc hloride，Da n ofloxa cin m e syla te，En rofloxac in）in p ets foods and dee p－fried foods by ELI S A．T he samp le was e xtrac ted w ith ace ton itrile－Na O H（84＋16）and back－extrac ted with Dichlor ome than e．We took a satisfie d re sult by acc umu latin g e xperien ce at routine w ork an d w iped off im purity an d fa t su bstanc e prope rly in pe ts foods and deep－fried food s．Th e wave len gth of dete ction wa s 450n m．Th e ave rage rec overy wa s 90．95％，an d the re lative stan dard devia tion wa s less tha n 6．07％．T his meth od is fa st，e a sy，high sen sitivity a nd strong sp ecificity．The detection limit was eve n 0．03m g/kg，a nd it can be satisfied w ith e xport dem and s．Key words：ELISA；pets foods；deep－fr ie d foods；Qu in olone s；de tec tion limit氟喹诺酮类药物又叫沙星类药物，是近30年来迅速发展起来的新一代高效、广谱抗菌药物，它可以抑制细菌DNA旋转酶，组织穿透力强,主要用来预防和治疗动物疾病，在兽医临床方面被广泛使用，有些已经成为畜禽水产专用的抗菌药，如恩诺沙星、环丙沙星、达氟沙星和诺氟沙星。
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检测氟喹诺酮类药物残留方法对比与分析作者：李琳文学忠钟雯姜力来源：《农业与技术》2015年第21期摘要：氟喹诺酮类药物是一类广谱抗菌药物，在兽医临床和水产养殖中大量使用，产生了一定量的药物残留，鉴于其对人类健康和环境的影响，作者详细的对比分析了氟喹诺酮类药物残留检测方法包括微生物法（MIA）、色谱法、色谱-质谱联用法、高效毛细管电泳法和免疫学检测方法等，并提出了目前合理的检测方法，希望对今后检测氟喹诺酮类药物残留提供帮助。
关键词：检测；动物组织；氟喹诺酮类；对比与分析中图分类号：TQ450.263 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20151132003随着社会工业化的发展，环境致病因素，如大气、水和食品污染，对人们健康的影响日益显著，而食品的化学污染一直受到广泛关注。
目前已知的外源性化学物质达500万种以上，其中至少6万种已经进入人们的生产和生活，如医药、农药、化妆品、生物毒素和各种工业原料等。
这些化学物质通过食品原材料的生产、加工、烹饪、包装、贮存和运输等环节进入食品引起食品污染。
食品污染对机体的损害一般呈慢性的蓄积过程，危害性质严重、范围广影响深远。
兽药残留指给动物使用药物后蓄积或贮存在细胞、组织或器官内的药物原形、代谢产物和药物杂质。
由于兽药残留与公众的健康息息相关，所以其已经成为一个影响广泛和颇具争议的问题。
氟喹诺酮类药物，亦称为6-氟喹诺酮类（fluoroquinolones，FQs），是一类十分重要的广谱抗生素，是第三代喹诺酮类药物（QNs）。
目前国内外已批准用于动物的FQs 包括诺氟沙星（又称氟哌酸，即norfloxacin，NOR）、恩诺沙星（enrofloxacin ，ENR）、沙拉沙星（sarafloxacin，SAR）、单诺沙星（danofloxacin，DAN）、环丙沙星（ciprofloxacin，CIP或CIF）、双氟沙星（difloxacin，DIF）、氧氟沙星（ofloxacin，OFL）和麻保沙星（marbofloxacin，MAR）等[1]。
FQs系化学合成药物，价格低廉，故在医学和兽医学中得到广泛的应用。
但由于致病菌产生耐药性和某些FQs的潜在致癌性质，其残留问题已经引起了广泛关注。
本文就FQs残留及分析方法作一对比分析。
1 氟喹诺酮类药物的残留FQs类抗菌药是人兽共用药，动物体内的药物残留通过食物链进入人体，对人体健康直接产生危害，可以导致细菌耐药性产生，并有潜在致癌的危险。
因此，世界各国对FQs类抗菌药在动物源性食品中的残留制定了最高残留限量标准（maximum residue limits，简缩MRLs）（10-1900ug/Kg）。
世界卫生组织也对FQs的残留做出限量推荐值，其中恩诺沙星限量是40 ug/Kg，欧盟规定各种组织中ENR的MRLs为30 ug/Kg（标准残留物：ENR+CIP），粮农组织/世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会（Joint FAO/WHO Expert Committeeon Food Additives，缩写JECFA）推荐鸡肝组织SAR的MRL为80 ug/Kg，猪肝组织中DAN的MRL 为50 ug/Kg。
氟喹诺酮类药物的残留危害早在1997年，美国已经严格限定了FQs的使用剂量和使用范围，其法律禁止在使用动物中使用FQs。
新西兰和澳大利亚的相关法律规则要求食品中不得检出FQs。
目前在加拿大，只有恩诺沙星和达氟沙星被允许用于临床上治疗牛呼吸道相关疾病，其限量标准为肾脏0.4 ug/g，肌肉0.02 ug/g。
目前我国农业部仅规定了达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星在不同动物性食品中的最高残留限量。
2 氟喹诺酮类药物残留检测方法[3、4、6]目前用于FQs残留的检测方法主要有微生物法（microbiological assays，简缩MIA）、色谱法（chromatography）、色谱-质谱联用法、高效毛细管电泳法和免疫学检测方法等。
2.1 微生物法借助抗菌药物的抗微生物流动性，在特定的介质中与已知微生物接种，经过一定阶段的培养，依据培养微生物的生长状况，进而对抗菌药物进行评价，这一方法称为微生物法。
该方法主要检测组织抗生素其优点是成本较低，且操作简单，无需精密昂贵的仪器。
但也存在缺点，即对FQs药物的检测不敏感和有选择性。
2.2 色谱法[2]色谱法或称层析法是一种物理或物理化学的分离分析方法。
该法是利用被分离组分在流动相和固定相中的分配系数差异，使不同组分在其中的差速迁移快慢不同而达到分离的目的。
色谱法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）和超临界流体色谱法（SFC），检测FQs药物残留常用的色谱法及优缺点详见下表。
2.3 色/质联用分析法[5]色/质联用分析法的选择性和灵敏性均很高，在FQs残留的确证分析中应用较多。
早期使用GC/MS，待测物需经“还原-脱羧”衍生化后测定，操作复杂。
近年来LC/MS，特别是电喷雾（TSP）LC/MS/MS开始用于FQs分析，操作简便，分析效能高，检测限可低于1ug/kg。
2.3.1 气/质联用分析法气相色谱/质谱联用（GC/MS）分析法是应用气相色谱法的高效、高速分离能力并结合质谱的结构鉴定能力，使之成为复杂混合物中痕量组分定性和定量的一种联用技术。
在此，质谱仪实际上被作为GC的一种质量选择检测器（MSD）。
典型的GC/MS系统包括色谱单元、接口装置和质谱单元。
组分经过色谱进行分离后，通过接口进入质谱进行检测。
2.3.2 液/质联用分析法液相色谱/质谱（LC/MS）是除GC/MS之外，又一种集高效分离和多组分定性、定量于一体的系统。
LC/MS对高沸点、不挥发和热不稳定的化合物的分离和鉴定具有独特的优势。
液/质联用分析法理论上是相当完善的技术，选择性、灵敏度都很高。
色/质联用分析法需要用专门的检测仪器，操作人员需要具备专门的技能，整个检测花费时间较长，且目前检测价格昂贵，在兽医学领域，仅在兴奋剂、磺胺类药物和抗体中应用，在FQs药物残留确证分析中未见报道。
2.4 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法（high-perform ance capillary electrophoresis，HPCE）是一种新发展起来的技术，常用的一种药物残留检测手段，与HPLC相比，HPCE具有操作简单、色谱柱不受样品污染、分析速度快、分离效率高、样品用量少、运行成本低等优点，有利于实际样品的分析。
但是HPCE迁移重线性、进样准确性和检测灵敏度方面不及HPLC，在药物残留分析应用中受到了一定的限制。
2.5 免疫分析法免疫分析（immunoanalysis）是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术。
作为一种分析手段，免疫学技术已渗透到残留分析的各个环节，包括提取、净化、分离和检测。
其高度的选择性和灵敏度使分析过程大大简化。
在免疫分析中，其核心试剂是抗体，一旦制备出特异性抗体，免疫分析就会有很多模式供选择。
药物残留免疫分析方法的建立包括以下内容：待测物选择、免疫半抗原合成、结合抗原合成、抗原制备、测定方法、样品前处理和方法评阶。
通常情况下免疫半抗原的合成是关键步骤。
目前应用的残留免疫分析技术可分为免疫测定法（IAs）和免疫净化法，具体详见下表。
3 小结氟喹诺酮类药物自20世纪80年代出现以来，以其抗菌谱更广、抗菌作用更强，受到了养殖户及养殖企业的欢迎，但我国养殖普遍存在滥用抗生素和过量使用抗生素的问题，这使得动物体内药物残留超标，对人类及环境造成了慢性、长期和累积性的危害。
人们追求检测药物残留分析的主要发展方向是更高的灵敏度/更低检测限；高选择性；联用分析；高分析速度；智能化/自动化；多残留分析；活体分析；现场快速分析；分析仪器的微型化、集成化和便携化。
微生物法样品处理简单，能筛选出大量的样品，但不能对药物残留进行准确的定性和定量分析，只能对药物残留进行初步的检测；色谱法多用于多组分混合物分离分析；色/质联用分析法虽然灵敏度和特异性高，但设备昂贵，对实验室操作人员的技术要求高，且实验前样品处理繁琐不易推广。
氟喹诺酮类药物，抗菌谱分子量均低于 1kD，属于小分子半抗原，因此不能作为抗原直接免疫动物，使其产生针对小分子的特异性抗体。
通常把小分子药物与一些蛋白质、多糖或多肽形成复合体，用其免疫动物时，该动物能产生针对该复合体的抗体，从中筛查出针对小分子药物的抗体。
针对氟喹诺酮类药物的自身特点、检测方法的难易程度、灵敏性、特异性、检出率高及仪器使用情况等，特别是仅检测氟喹诺酮类一类药物，所以综上所述建议检测氟喹诺酮类药物残留采用免疫分析方法中的酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
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