畜肉中氟喹诺酮类药物残留操作指南
畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术
2016年第9期（下半月）农民致富之友 Nong Min Zhi Fu Zhi You276财经◎畜牧兽医畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术穆伟峰（新乡市畜产品质量监测检验中心，河南新乡 450003）[摘 要] 目的改善畜产品中氟喹诺酮类药物残留检测。
方法样品经过磷酸盐缓冲液提取，过HLB固相萃取柱，用适当乙腈比例的流动相进行分离。
结果鸡肉、鸡蛋、猪肉样品回收在85%—95%之间。
结论操作简单，回收稳定。
[关键词] 畜产品 氟喹诺酮 药物残留 高效液相色谱法[中图分类号] S826 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650(2016)09-0276-011 材料与方法1.1 仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪，15厘米C 18粒径5um 液相色谱柱，WatersHLB 固相萃取柱（30mg ），安捷伦1200荧光检测器，高速离心机，高速振荡匀浆器。
恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达氟沙星标准品，色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，其他试剂均为分析纯。
1.2 工作试剂配制5.0mol/L 氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和溶液28mL 加水稀释至100mL 。
0.03mol/L 氢氧化钠溶液：取5.0mol/L 氢氧化钠溶液0.6mL 加水稀释至100mL 。
0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液：取浓磷酸3.4mL 用水稀释至1000mL ，用三乙胺调pH 至2.4。
30%乙腈缓冲液：取30mL 乙腈和70mL0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液混合。
磷酸盐提取液：取磷酸二氢钾6.5g 加水稀释至500mL ，用5.0mol/L 氢氧化钠溶液调pH 至7.0。
洗脱液：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液2比8配制。
流动相：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液14比86配制。
1.3 标准溶液配制准确称取恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星约25.00mg ，达氟沙星5.00mg ，用0.03M 氢氧化钠溶液定容于25mL 容量瓶中，制成标准储备液，根据称量量和标准品浓度计算标准溶储备液浓度，分别约为1mg/mL 和0.2mg/mL 。
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测
学术研究doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2014.05.007氟喹诺酮类药物属第3代喹诺酮类抗菌药，适应于敏感病原菌所致的呼吸道、胃肠道等感染，具有吸收好、组织浓度高、半衰期长、抗菌谱广等优点，已成为兽医临床的常用药。
但随着临床用量的不断增长，因不合理用药或滥用药而导致的畜产品质量安全问题时有发生，并越来越引起社会的广泛关注。
本文在运用“农业部1025号公告-14-2008”标准[1]的基础上，结合本实验室的工作实际，随机选取8名本实验室的化验员，同时并独立完成猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测工作，得出检测回收率，分析和判断测定结果的准确性。
1仪器与试药1.1仪器天平，感应0.01g；分析天平，感应0.00001g；Aglient1200高效液相色谱仪-配荧光检测器；振荡器；组织匀浆机；离心机；Varian BondElut C18柱（100mg/mL）固相萃取柱；0.45μm微孔滤膜。
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测张漫1,李娜2,高木珍1,张宁1,刘晓辉1,王辉1（1.天津市兽药饲料监察所天津300402；2.天津市农产品质量监督检验测试中心天津300381）摘要：随机选取本实验室内的8名化验员，分别测定猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留量，通过对结果数据的分析，得出本实验室测定结果的准确程度。
通过磷酸盐缓冲溶液提取猪肉组织中的氟喹诺酮类药物残留，经C18柱净化后，用高效液相色谱法测定含量。
环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，批内变异系数均≤14%，批间变异系数均≤6%。
结果数据满足标准要求，证明本实验室能准确开展此项检测活动。
关键词：氟喹诺酮类药物；达氟沙星；恩诺沙星；环丙沙星；沙拉沙星；残留检测Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork TissueZhang Man1,Li Na2,Gao Muzhen1,Zhang Ning1,Liu Xiaohui1,Wang Hui1（1.Tianjin Institute of Veterinary Drugs and Feed Control,Tianjin,300402.2.Tianjin supervision and Testing Center of Agricultural Product Quality,Tianjin,300384）Abstract:We selecting8technicians in our laboratory randomly,letting they determine fluoroquinolonesresidues in pork tissues separately.Based on the analysis of the experimental data,we concluded the accuracy ofmy determination results.The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution,cleaned byC18SPE cartridge,then content was determined by HPLC.The average recoveries of four components were95.6%,86.9%,89.3%,95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below14%,intra-assay were below6%.The results meet requirements,so we can carry out the test.Key word:fluoroquinolones;danofloxacin;enrofloxacin;ciprofloxacin;sarafloxacin;residues determination. All Rights Reserved.学术研究1.2药品与试剂达氟沙星，批号10301，含量93.5%,Dr.Ehren-storfer Gmbh公司；恩诺沙星，批号H0081206，含量99.9%,中国兽医药品监察所；环丙沙星，批号130451-201203，含量84.2%,中国食品药品检定研究所；沙拉沙星，批号20629，含量95.0%,Dr. Ehrenstorfer Gmbh公司。
喹诺酮类药物残留量的测定 标准
喹诺酮类药物残留量的测定标准一、引言喹诺酮类药物是一类常用的抗菌药物，被广泛应用于畜禽养殖业和养殖水产业中，以预防和治疗动物植物的感染疾病。
然而，由于长期和滥用使用，喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量问题日益严重，给食品安全带来了一定的挑战。
为了保障消费者的健康和食品安全，加强对喹诺酮类药物残留量的测定标准显得尤为重要。
二、国内外对喹诺酮类药物残留量的测定标准1. 国际标准在国际上，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准，主要是由国际食品安全标准委员会（Codex Alimentarius Commission）和世界卫生组织（WHO）制定并发布的《动物兽药残留限量国际标准》。
在该标准中，对不同种类的喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量都有详细的规定和限定，以确保产品的安全合格。
2. 国内标准在我国，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准主要由国家食品安全标准委员会负责制定和管理。
国家食品安全标准委员会及其下属的各专业委员会，根据国家食品安全相关法律法规的要求，不断进行标准的修订和完善，以适应国内外食品安全形势的发展和变化。
三、喹诺酮类药物残留量的测定方法1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前国际上常用的一种喹诺酮类药物残留量测定方法。
该方法准确、灵敏度高，并且可对多种喹诺酮类药物进行同时测定，适用于不同类型的畜禽产品。
2. 超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）超高效液相色谱-串联质谱法是一种新型的分析技术，具有分辨率高、灵敏度高和分析速度快的特点。
该方法适用于对喹诺酮类药物残留量进行快速准确的测定，是当前国内外研究和应用的热点之一。
四、个人观点和理解在我看来，喹诺酮类药物残留量的测定标准是食品安全监管中的重要环节，它不仅关乎着畜禽产品的质量和安全，更关系着广大消费者的身体健康和生命安全。
当前，我国在食品安全监管方面已取得了一定的成绩，但也面临着一些挑战和问题，如标准的实施和监管不到位等。
浅析氟喹诺酮类兽药残留检测方法
３ 氟喹诺酮 类药物残 留的检测方法
目前 ，常用 于氟 喹诺酮 类药 物残 留 的检 测方 法 可分 为４ 液相色 谱法对 猪 肉组织 中恩诺沙 星和环 丙沙 星残 留量 进行 检 大类 ：微 生物法 、仪器分 析法 、化学发 光与 电化学发光 分析 测 ，结 果 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 的质量 浓度 在 ２ｇＬ～１ ０ ｇＬ ／ ０ ／ ｇｋ 。 法及免疫分析法。其中仪器分析法常见的有高效液相色谱法 范 围内呈线性关 系 ，它们 的最低定量限均为２／ｇ （ＰＣ Ｈ Ｌ ）、液一 质联用分析法 （ ＣＭ ）、高效毛细管电泳法 ３ ２ ２ 高效液相 色谱 一 Ｌ／Ｓ ．． 质谱联 用法 （ ｃ Ｍ ） 随着研究 的深 Ｌ— Ｓ （ Ｐ Ｅ）等 ；免疫 分析检测法包括 间接竞 争Ｅｉ 测定法 、免 入 和对食 品安全越 来越 高 的重 视 ，定 性准 确 ，灵 敏度更 高 的 ＨＣ ｌａ ｓ 疫传感器分析法 、免疫亲和色谱 （ＡＣ）分析法等【 。 Ｉ ｌ 液质联 用技 术渐渐 被人 们采纳 ，这种 技术不 仅可 以更精 确 的
兽 药 应 用
中国畜牧兽 医文摘
２ １年 ０１
２卷 ７
第３ 期
浅析氟喹诺酮 类兽药残 留检测方法
将 ，、 Ｊ武 ・
（ 南大 学荣昌校 区，重庆 西
４ ２６ ） ０ ４ ０
［ 要］ 解决兽 药残留监 控 问题是提 高动物源性食 品质 量，保障食品安全 的关键 性环节之一 ，因此在食 品检 验 中建立 一 摘 些 方便 快捷 的检测方 法显得 尤为重要 。本 丈以兽 药氟喹诺酮类为例 ，系统 阐述 了目前在临床检测 中 已经建立的有关 氟喹诺酮类 药物 残留的检 测技 术 ，以期能为其他药物残 留检测提供参考方 向。
兽药残留SPE方法
The determination of antibiotic and pesticide residues in foods： samplepreparation for LC-MS analysisAbstract: In this article, we will discuss SPE strategies prior to tandem LC/MS analysis for sub-ppb determination of chloramphenicol, nitrofuran antibiotic metabolites, and other related substances in animal tissues and in honey. Sample preparation for LC-MS analysis to determinate of antibiotic and pesticide residues in foods is reviewed and prospected .Key words: antibiotic and pesticide residues , food , sample preparation , LC-MS食品中抗生素和农药残留分析：用于LC－MS分析的SPE样品前处理方法Waters公司赵维国摘要：本文将讨论LC-MS分析之前，动物组织和蜂蜜中残留物质的样品前处理策略，其中包括ppb级氯霉素、喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的固相提取（SPE）方法。
对食品中抗生素和农药残留的LC－MS分析的SPE样品前处理方法进行综述和展望。
关键词：抗生素和农药残留，食品，样品前处理，LC-MS食品中抗生素和其它兽药残留目前正在全球范围内受到广泛的重视。
对于农药和兽药残留的分析而言，所需达到的要求通常取决于毒理学评估的结果，而所期望达到的定量限(LOQ)与合法注册的农业化学品的最大允许残留限量相关。
DB13T1006-2009鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留
（１）
Ｃ＝望二生塑立丝Ｘ１０００ ＡＳ ｘ ｍ
式 中：
ｃ— 样品中氧氛沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留量，Ｗｇ／ｇ； Ａ — 样品溶 液中氧氟沙星 、诺氟沙星 、环 丙沙 星、恩诺沙星的峰面积 Ａｏ一一一空白实验被测物的色谱 峰面积或 峰高
Ａｓ — 标准工作溶翔液中氧氟沙 星、诺氟沙星、环丙 沙星 、恩诺沙星的峰面积 Ｃｓ
６ 色谱条件
６．１ 色谱柱：ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－ＡＱ ４．６Ｘ２５０ ｍｍ， ５ ５ｍ或相当者。 ６．２ 流动相：０．０１ ｍｏｌ／Ｌ四Ｔ基澳化钱 （ｐＨ＝３．０）＋乙睛＝（９７．５＋２．５， ＶＮ）ｏ ６．３ 流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎｏ ６．４ 检测波长：激发波长２８０ ｎｍ，发射波长４５０ ｒａｎ， ６．５ 柱温：４０ｃＣ ６．６ 进样量：２０ ｐＬｏ
Ｄ Ｂ １ ３／ Ｔ １ ００ ６ － ２０ ０ ９
８．３ 空白试验与空白添加回收试验 每个试验批次的样品中至少必须 同 时 做 空白样品和空白添加样品 （实际加人值为已知）。空白鸡肉
添加样品的实际加人值水平可选在等于最大残留限量１０ ｇｇ／ｋｇ，或方法检测限２ ｐ ｇ／ｋｇ或略高的实际加 人值水平上操作 ；空 白样品和空 白添加样品的测定按步骤７操作。本试验用于计算试验的回收率Ｒｃ，试 验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Ｒ滋 公式 （１）计算。
７ 样 品 处理
７．１ 样品制备 取待检胸 肉 （或 腿 肉）样品，弃去筋 、皮 、骨和脂肪 ，切成小块后 ，用搅 肉机搅碎 。
７．２ 提 取
准确称 取 绞 碎 鸡肉样品５ｇ（精确至０．０１ ｇ）于５０ ｍＬ塑料离心管，加人１０ ｇ无水硫酸钠，加２５ ｍＬ 乙睛，用高速组织均质器于１５ ０００ ｒｐｍ高速均质０．８ ｍｉｎ＇ｖ １．５ ｍｉｎ后 ，３ ５００ ｒｐｍ离心１０ ｍｉｎ，移取上清 液转移到另一个５０ ｍＬ塑料离心管中，残渣用１５ ｍＬ乙睛重复提取一次 ，合并上清液。
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于人类及动物医药领域的抗菌药物，包括诸如氟苯尼考、氟哌酸、氟氧氟嗪等。
在兽药的使用中，为了保证食品中不残留过多的药物，国家制定了一系列的标准和方法来检测氟喹诺酮类药物的残留。
国标是指国家发布的关于特定物品或行为的规范和标准，是行业内进行质量控制和监督的重要依据。
对于氟喹诺酮类药物残留检测而言，国标主要涉及以下几个方面的内容：1. 检测方法：国标要求制定适用于氟喹诺酮类药物残留检测的方法，包括样品的采集、处理、提取、分离和定量等方面的技术要求。
这些方法通常采用高效液相色谱仪（HPLC）或质谱仪（MS）等仪器设备进行分析，以确保准确度和可靠性。
2. 检测限值：国标规定了氟喹诺酮类药物在食品中的残留限值，即食品中允许存在的最大药物残留浓度。
这些限值根据食品的种类、人们对该食品的摄入量以及药物的毒性等因素来确定，旨在保证食品的安全性和合规性。
3. 样品类型：国标规定了适用于氟喹诺酮类药物残留检测的样品类型，包括肉类、乳制品、水产品、蔬菜等。
针对不同的样品类型，可能需要不同的样品处理和预处理方法，以确保药物残留的有效提取和准确测定。
4. 检测设备和操作要求：国标还规定了氟喹诺酮类药物残留检测所需的设备和操作要求，包括仪器的性能指标、试剂的选择和使用、流程的标准化等。
这些要求有助于确保检测结果的准确性和可比性。
氟喹诺酮类药物残留的检测国标的制定和执行，对保障食品安全、合规经营和消费者权益具有重要意义。
遵循国标的要求进行药物残留检测，可以有效监控食品中的氟喹诺酮类药物残留情况，减少潜在的食品安全风险，保障公众健康。
同时，对于相关行业从业人员而言，了解并遵守国标的要求也是履行职责、提升专业素养的必要条件。
猪肉中氟喹诺酮类药物检测
依据 GB /T 22388-2008
1. 前处理（以猪肉为例）
预处理：
准确称取2g 猪肉样品，加入10mL 磷酸盐提取液（pH=7），水平振荡5min，10000g 离心 5min，吸取上层液，重复提取一次，合并上层液，上层液中加入10mL 正己烷，涡旋1min， 10000g 离心5min，吸取下层液体，待净化。
净化：
固相萃取小柱：
InertSep Pharma 3ml/60mg 货号5010-27101（品牌：岛津技迩）
活化、平衡：3ml 甲醇、3mL 磷酸盐提取液
上样：取预处理的5ml 下层液体过柱
淋洗：3ml 水
抽干
洗脱：2mL 流动相 0.05M 磷酸三乙胺：乙腈=18：82
过滤上机
2. 色谱分析
色谱柱：C18 , 250×4.6mm（i.d.）, 5μm
流动相：A:0.05M 磷酸三乙胺+B:乙腈=18+82，等度洗脱
柱温：35℃
检测波长：Ex:280nm; Em450nm
3. 基质加标回收率结果
三次平行实验结果的回收率（基质加标浓度均为0.05mg/kg）：
4. 结论
在此实验条件下，将固相萃取小柱InertSep Pharma 3ml/60mg 应用于猪肉中氟喹诺酮类残留前处理，基质去除效果好，回收率完全满足要求。
畜禽肉中兽药残留的测定(精)
《技能训练库》综合技能实训指导书实训项目名称畜禽肉中兽药残留的测定学时6学时实训目的1.熟练掌握高效液相色谱仪的使用方法。
2.学会NY/T 1025-14-2008测定动物性食品中氟喹诺酮类药物残留的方法。
一、原理用磷酸盐缓冲溶液提取试样中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。
以磷酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
二、仪器、物品分析天平，高效液相色谱仪（配荧光检测器），组织匀浆机，旋涡混合器，离心机，固相萃取柱，离心管，移液管。
牛肉。
试剂：1.5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液28mL，加水稀释至100mL。
2.0.03mol/L氢氧化钠溶液：取 5.0mol/L氢氧化钠液0.6mL，加水稀释至100mL。
3.0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液：取浓磷酸 3.4mL，用水稀释至1000mL。
用三乙胺调pH至2.4。
4.磷酸盐缓冲溶液：取磷酸二氢钾 6.8g，加水溶解稀释至500mL，用5.0mol/L氢氧化钠调节pH至7.0。
5.达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星标准工作液：准确量取适量标准储备液，用乙腈稀释成适宜浓度的标准工作液。
置2～8℃冰箱中保存，有效期1周。
三、操作步骤（一）称样准确称取3份牛肉样品（事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据。
（二）提取准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
（三）净化将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取 3.0mL共6.0mL的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取 3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液 5.0mL过柱；用水 2.0mL清洗，挤干；用流动相 2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μｍ有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
实验九 荧光分析法测定肉类食品中诺氟沙星的残留
实验九 荧光分析法测定肉类食品中诺氟沙星的残留一、实验背景：诺氟沙星（Norfloxacin, NFLX ）又名氟哌酸，为第三代喹诺酮类抗菌药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强，毒副作用低和临床疗效高的特点，是临床应用最广泛的喹诺酮类药物之一。
诺氟沙星系化学合成药物，合成容易，价格低廉，故也是动物和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，然而由于滥用现象严重，导致药物残留，给食品安全带来严重的威胁。
该类药物的残留除其本身的毒副作用对人体造成直接危害外，更为严重的是人类长期食用含较低浓度药物的动物源性食品，容易诱导人类致病菌产生耐药性，从而影响该类药物的临床疗效。
二、实验目的：使用荧光分析法方法简单、快速、灵敏、准确地测定肉类食品中诺氟沙星含量。
学习荧光分光光度计的使用方法和分析手段。
三、实验原理：Al 3+与诺氟沙星配位增强荧光强度，下图是诺氟沙星的分子结构式。
NO OH O FN HN图1 诺氟沙星的分子结构式四、实验药品和仪器1. 诺氟沙星（中国药品生物制品检定所，99.2%），标准溶液质量浓度为100 g/mL ，Al 3+标准溶液是用Al(NO 3)3（国药集团化学试剂有限公司，分析纯）配成浓度为0.1 mol/L ，实验所需的各种肉类食品为市场上随意购买，其他所用试剂均为分析纯，水为去离子水。
2. Fluoromax-4荧光分光光度计（法国JY 公司）；超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；万分之一电子天平（上海恒平科学仪器有限公司）；离心机（上海手术器械厂），pHS-3C 酸度计（上海精密科学仪器公司）。
五、实验步骤1. 样品前处理方法取2g 经绞碎的各种肉类食品，每次加入10 mL pH = 4的盐酸溶液超声提取三次，每次10 min ，各离心10 min （3000r/min ），合并三次上清液，加入1mL 的Al 3+标准溶液，定容至50 mL ，待测．2. 测定方法于5 mL 的具塞刻度试管中配制NFLX-Al 3+的最佳体系溶液，使体系溶液中C Al3+ = 2.0mmol/L、pH=4，静置5 min，取试液置于1 cm×1 cm石英液池中，设置激发和发射单色仪狭缝宽度均为5 nm，利用荧光分析法测定。
磺胺甲恶唑(SMZ)快速检测试剂盒使用说明书
氟喹诺酮快速检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12036f检测范围：156-10000 ng/ml最低检测限：动物组织、肌肉、饲料：100 ng/ml；尿液、牛奶：50 ng/ml特异性：本试剂盒可用于快速检测样本中残留的氟喹诺酮。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定动物组织、肌肉、饲料、尿液和牛奶等样品中的氟喹诺酮残留。
回收率：牛奶95.3%饲料94.8%动物组织99.2%尿液101.6%交叉反应率：恩诺沙星100%环丙沙星100%达氟沙星90%氟哌酸45%氟啶酸36%吡哌酸31%氧氟沙星21%氟甲喹8%噁喹酸7%说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原与酶标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。
经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。
显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.已包被兔抗氟喹诺酮抗体的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2×250ul/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×20ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记氟喹诺酮结合物（HRP-Sulfamethoxazole）：1×100ul/瓶（1：100）。
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于人类和动物医疗领域的抗生素药物。
由于其广泛使用以及潜在的药物残留问题，对氟喹诺酮类药物残留进行检测和监管变得尤为重要。
为此，国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法和限量要求进行了规定。
国家标准对氟喹诺酮类药物残留的检测方法主要包括色谱法和质谱法。
色谱法是一种常用的分析方法，通过分离样品中的药物成分，再进行定量分析。
常用的色谱法包括高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）。
质谱法则是一种能够识别和定量药物成分的高灵敏度分析方法，包括气相质谱法（GC-MS）和液相质谱法（LC-MS）。
这些分析方法能够快速准确地检测氟喹诺酮类药物残留。
国家标准还规定了氟喹诺酮类药物残留的限量要求。
限量是指在食品、饲料和水产品中，允许的最高残留量。
这些限量值是根据对药物的毒理学评估和风险评估结果确定的。
国家标准对不同食品和饲料中氟喹诺酮类药物的限量值进行了详细的规定，以确保人类和动物食品的安全。
氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于药物残留监管机构、食品和饲料生产企业、检验检测机构以及消费者都具有重要意义。
对于药物残留监管机构来说，国家标准的解读能够帮助他们制定监管政策和规范，确保食品和饲料中的氟喹诺酮类药物残留不超过限量要求。
对于食品和饲料生产企业来说，国家标准的解读可以帮助他们确保产品符合法规要求，提高产品质量和竞争力。
对于检验检测机构来说，国家标准的解读则是他们进行检测和评估的基础，确保检测结果准确可靠。
对于消费者来说，国家标准的解读能够提供关于食品和饲料安全的信息，保护消费者权益。
总之，氟喹诺酮类药物残留检测国标的解读对于保障食品和饲料安全、规范药物残留监管具有重要意义。
各相关方应根据国家标准的要求，加强对氟喹诺酮类药物残留的监管和控制，以确保公众的健康和安全。
畜禽肉蛋及水产中4种氟喹诺酮类药物残留的快速测定_张鑫
*
药物名称 环丙沙星 恩诺沙星 沙拉沙星 达氟沙星 图1 四种氟喹诺酮类药物混合对照品谱图 收实验
* 冻干鱼粉加 4 倍重量的纯水溶胀 10 min，再进行添加回
— 51 —
第 28 卷增刊 2009 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
药物名称 环丙沙星
药物名称 环丙沙星 达氟沙星 恩诺沙星 沙拉沙星
鸡蛋中添加四种氟喹诺酮类药物回收率 添加浓度 w / （ ng / g） 平均回收率 / % 10 ， 20 10 ， 20 10 ， 20 2， 4 83. 6 ， 86. 5 92. 7 ， 92. 2 87. 9 ， 90. 2 88. 3 ， 89. 6
表1 四种氟喹诺酮类药物标准曲线方程及相关系数 保留时间 / min 8. 387 10. 023 11. 622 18. 256 线性方程 相关 系数 表3
氟喹诺酮类检测卡说明书(完整版)
氟喹诺酮类快速检测卡使用说明书【产品简介】本产品为氟喹诺酮类药物胶体金快速检测卡，用于定性检测包括乳制品、鸡、猪等禽肉类以及鱼、虾、蟹等水产品中氟喹诺酮类药物残留。
整个检测过程只需要3-5分钟。
【测定原理】本试剂运用抗原抗体的特异性反应以及侧向层析和胶体金技术进行组织中氟喹诺酮类的快速定性检测。
用BSA偶联的氟喹诺酮类分子与胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将氟喹诺酮类抗体和BSA抗体分别包被在检测区（T）和质控区(C)。
当组织样本加样后，样本中的氟喹诺酮类分子与氟喹诺酮类-BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与氟喹诺酮类抗体结合，剩余的氟喹诺酮类-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。
因此，当样本中的氟喹诺酮类浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与氟喹诺酮类抗体结合，因此，当样本中的氟喹诺酮类浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与氟喹诺酮类抗体结合，此时检测区不出现紫红色线条；当样本中氟喹诺酮类浓度低于一定值或样本中没有氟喹诺酮类时，胶体金偶联物就与氟喹诺酮类抗体结合，从而在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有氟喹诺酮类分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
【样品检出限】药物名称检出限药物名称检出限环丙沙星10 ppb 恩诺沙星10 ppb诺氟沙星15 ppb 单诺沙星10 ppb司帕沙星10ppb 伊诺沙星30 ppb氧氟沙星15ppb 培氟沙星30 ppb洛美沙星15 ppb 噁喹酸30 ppb氟甲喹30 ppb 氨氟沙星30 ppb麻保沙星30 ppb【产品组成】氟喹诺酮类免疫胶体金快速检测卡(40份/盒)滴管（40支）干燥剂（40片）一次性手套（5只）【样品前处理步骤】组织样本（鸡肉/肝、猪肉/肝、虾、鱼等）1．鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等去皮、脂肪，用均质器均质样本，取0.5g去脂肪组织样本，加入到配套的15ml 离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
畜禽肉中兽药残留的测定(精)
将固相萃取柱在固相萃取仪上安装好，用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL
的甲醇活化，再用5mL的刻度吸管分两次、每次吸取3.0mL共6.0mL的水进一步活化；取离心所得上清液5.0mL过柱；用水2.0mL清洗，挤干；用流动相2.0mL洗脱；并用5mL试管收集洗脱液；用2mL的一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22μm有机系膜，直接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
三、操作步骤
（一）称样
准确称取3份牛肉样品（事先粉碎成肉糜）2±0.05g于50mL具塞离心管中，记录数据。
（二）提取
准确移取20.0mL磷酸盐缓冲液在每份已称量好的牛肉样品中；将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min；用空离心管和纯化水在托盘天平上进行配平，然后高速离心（10000r，5min）；将上清液倒入25mL烧杯中，以备过柱用。
四、注意事项
1.计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。
2.空白试验：除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
二、仪器、物品
分析天平，高效液相色谱仪（配荧光检测器），组织匀浆机，旋涡混合器，离心机，固相萃取柱，离心管，移液管。牛肉。
试剂：
1.5.0mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液28mL，加水稀释至100mL。
2.0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5.0mol/L氢氧化钠液0.6mL，加水稀释至100mL。
（五）结果计算
式中X——试样中被测兽药残留量，ng/g；
Cs——对照溶液中相应药物的浓度，ng/mL；
A——试样溶液中相应药物的峰面积；
As——对照溶液中相应药物的峰面积；
m——试样质量，g；
动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法
动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法1 范围本标准适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测。
2测定方法方法提要或原理用磷酸盐缓冲溶液提取试料中的药物，C18柱净化，流动相洗脱。
以磷酸—乙腈为流动相。
用高效液相色谱—荧光检测法测定，外标法定量。
试剂和材料5mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和液14mL，加水稀释至50mL。
0.03mol/L氢氧化钠溶液：取5mol/L氢氧化钠溶液0.6 mL，加水稀释至100 mL。
0.05mol/L磷酸—三乙胺溶液：取浓磷酸3.4 mL，用水稀释至1000 mL。
用三乙胺调节pH值至2.4（以配4L溶液为例，取浓磷酸3.4 mL×4=13.6 mL，加水使成4000 mL，用三乙胺调pH值至2.4）。
磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，用5mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）：取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500 mL，pH值为4.0~5.0。
标准储备液：分别取达氟沙星对照品约10mg,恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星对照品各约50mg,精密称定，用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为0.2mg/mL(达氟沙星)和1 mg/mL（恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星）的标准工作液。
置2℃~8℃冰箱中保存，有效期为1周。
对照品溶液稀释步骤（1）对照品储备液浓度：1 mg/mL（2）最大残留限量（100μg/kg→100ng/g）上机浓度为0.05μg/kg：1 mg/mL×1mL50 →20μg/mL20μg/mL ×0.5mL200→0.05μg/kg（此浓度对应最大残留限量浓度，因为20mL提取液只有5mL上柱）（3）阳性添加（100μg/kg→100ng/g 样品/2g→200ng/2g）20μg/mL×0.5mL10mL →1μg/mL1μg/mL×0.2mL →200ng注：甲磺酸达氟沙星（C19H20FN3O3▪CH4O3S）：C19H20FN3O3= 357.39 =78.81%C19H20FN3O3▪CH4O3S 453.49盐酸环丙沙星（C17H18FN3O3▪Hcl）：C17H18FN3O3= 331.35 = 90.09%C17H18FN3O3▪Hcl 367.81测定步骤试料的制备绞碎后的供试样品、空白样品、空白添加试料样品提取取（2±0.05g）试料，置50mL离心管中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，10000r/min 匀浆1min。
畜产品中喹诺酮类药物检测技术
畜产品中喹诺酮类药物检测技术随着畜牧业的发展和畜产品的广泛消费，药物残留成为食品安全领域的一个重要问题。
喹诺酮类药物是一类常用的抗生素，被广泛用于畜禽养殖以预防和治疗疾病。
喹诺酮类药物在畜产品中的残留问题一直备受关注，因为其残留会对人体健康造成影响。
开发和应用高效、灵敏、快速的畜产品中喹诺酮类药物检测技术成为当前的研究热点之一。
喹诺酮类药物包括氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星等多种成员，它们广泛用于家禽、家畜以及水产养殖中。
目前，常用的检测方法包括高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）、酶联免疫吸附法（ELISA）、光学传感技术等。
这些技术在喹诺酮类药物残留检测中起着至关重要的作用。
HPLC-MS/MS技术是一种高效的色谱质谱联用技术，它结合了高效液相色谱和质谱的优势，具有灵敏度高、选择性好、分析速度快等优点。
该方法可以对畜产品中喹诺酮类药物进行准确、快速的定量分析，同时可以对多种样品进行高通量分析，适用于大规模的畜产品安全监测和检测需求。
由于其高效性和可靠性，HPLC-MS/MS技术已成为目前喹诺酮类药物残留检测的主流方法之一。
除了HPLC-MS/MS技术外，酶联免疫吸附法（ELISA）也是一种常用的喹诺酮类药物残留检测技术。
ELISA技术基于抗体与抗原的特异性结合原理，通过对反应的光学信号进行测量来定量检测样品中的药物残留。
ELISA技术具有操作简便、分析周期短、灵敏度高等优点，适用于实验室内的小样品分析和初步筛查。
与HPLC-MS/MS技术相比，ELISA技术的特异性和准确性稍显不足，因此在实际应用中通常需要结合其他检测技术来验证结果。
光学传感技术也是一种新兴的畜产品中喹诺酮类药物残留检测方法。
该技术利用光学传感器对样品中的特定化合物进行实时监测和分析，具有实时性强、操作简便、成本低廉等特点。
光学传感技术在喹诺酮类药物残留检测中具有较大的应用潜力，尤其适用于快速筛查和现场监测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第六届河南省高职院校技能大赛暨
2013年河南省高职组农产品质量安全检测技能大赛
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留检测现场考核操作指南
选手编号__________ 本项目操作规程在参照《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》（农业部1025号公告-14-2008）基础上，考虑到竞赛的时间要求以及公平公正的原则，考核内容略有改动。
操作规程中每位选手做两个平行样。
样品预处理完成后，由组委会统一提供数据，计算样品中氟喹诺酮类药物含量、回收率、RSD值。
组委会为每个选手提供的玻璃器皿均洁净干燥，无需洗涤。
1采样
准确称取2份鸡肉样品（已由组委会事先粉碎成肉糜） 2 （±0.05）g于具塞
离心管中，记录数据；由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液100 k。
2提取
2.1准确移取20.0mL磷酸缓冲溶液在每份已称量好的鸡肉样品中，搅匀；
2.2中速振荡5min;
2.3 离心（4000r，7min）;
2.4将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用。
3净化
3.1安装固相萃取柱，分别用2.0mL甲醇、再用2.0mL磷酸缓冲溶液活化；
3.2将活化好的固相萃取柱安装在固相萃取仪上，取离心所得上清液 5.0mL 过柱；
3.3用水2.0mL清洗，挤干；
3.4用流动相2.0mL洗脱，挤干；并用5mL试管收集洗脱液；
3.5用一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22 m有机膜，直
接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
4分析
依据给定条件进行残留量、回收率和RSD的数据分析。
备注：本赛项有几个检测关键点，需举手示意裁判。
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测结果分析
选手编号__________
环丙沙星残留量计算公式：
= ACSVV3
X
=ASV2M
式中：
X—试样中环丙沙星的残留量（ng/g）；
A—试样溶液中环丙沙星的峰面积；
As—对照溶液中环丙沙星的峰面积；
Cs—对照溶液中环丙沙星的浓度（n g/mL）
V i—提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积（mL
V2 —过C8固相萃取柱所用备用液体积（mL）
V3 —洗脱用流动相的体积（mL）
M—供试试样的质量（g）
已知：平行样1峰面积值：A —120；平行样2峰面积值：A— 122；对照溶液峰面积值：As-220；对照溶液中环丙沙星的浓度：Cs —10ng/mL,裁判加入0.5血/mL环丙沙星100］。
其余数据根据实验数据取得。
要求：计算试样中环丙沙星的残留量、回收率、RSD计算结果保留到小数点后3位。
注：鸡肉样品环丙沙星未检出。